长链非编码RNA LINC00261在Barrett食管、食管腺癌组织中的表达及其作用

目的探讨长链非编码RNA LINC00261在Barrett食管、食管腺癌组织中的表达及其可能作用机制。方法利用qRT-PCR检测LINC00261在中国人群正常食管鳞状上皮、Barrett食管及食管腺癌组织标本中的表达水平变化。并建立了以人胚胎干细胞为细胞模型。结果在Barrett食管及食管腺癌组织标本中,LINC00261表达较正常食管鳞状上皮组织均显著上调(P<0.01);酸暴露及胆酸可诱导人胚胎干细胞LINC00261表达显著上调并抑制FOXA2蛋白表达水平(P<0.05),而LINC00261慢病毒载体转染亦可诱导FOXA2蛋白表达水平下调;上调FOXA2表达可阻断人胚胎干细胞在酸暴露及胆酸诱导下CDX2表达及细胞分化表型(柱状上皮标志物MUC2表达)的变化。结论 LINC00261在Barrett食管的发生过程中发挥关键作用,其可能通过抑制FOXA2表达参与相关调控。

Linc00261调控miR-139-3p对子宫内膜异位症小鼠异位内膜细胞黏附、侵袭和凋亡的影响

目的:探究长链非编码RNA Linc00261调控miR-139-3p对子宫内膜异位症(EMs)小鼠异位内膜细胞黏附、侵袭和凋亡的影响。方法:构建EMs小鼠模型,假手术组(Sham)作为对照。干预小鼠体内Linc00261和miR-139-3p的表达,并将EMs小鼠分组:pcDNA组(尾静脉注射pcDNA)、pcDNA-Linc00261组(尾静脉注射pcDNA-Linc00261)、miR-NC组(尾静脉注射miR-139-3p mimic阴性对照)、miR-139-3p mimic组(尾静脉注射miR-139-3p mimic)、mimic+pcDNA-Linc00261组(尾静脉注射miR-139-3p mimic和pcDNA-Linc00261)。qPCR检测EMs小鼠异位组织以及Sham组小鼠在位子宫内膜组织中Linc00261和miR-139-3p的表达;验证Linc00261和miR-139-3p之间的靶向关系;Western blotting检测各组侵袭转移相关因子(MMP2、MMP9)、细胞黏附相关因子(VCAM-1、ICAM-1)以及凋亡相关因子(Bax、Bcl-2)的表达;Tunel荧光染色检测各组异位内膜细胞凋亡情况。结果:相对于Sham小鼠,EMs小鼠组织中Linc00261表达明显降低,而miR-139-3p表达明显增高(均P<0.05)。Linc00261和miR-139-3p具有靶向关系。相对于pcDNA组,pcDNA-Linc00261组异位内膜细胞侵袭转移和黏附被抑制,细胞凋亡被诱导(均P<0.05)。相对于miR-NC组,miR-139-3p mimic组细胞侵袭转移和黏附被诱导,凋亡被抑制(均P<0.05)。Linc00261对EMs小鼠异位内膜细胞黏附、侵袭和凋亡的影响能够被miR-139-3p mimic逆转。结论:Linc00261能够通过调控miR-139-3p进而抑制EMs异位内膜细胞黏附和侵袭转移,促进细胞凋亡。

长链非编码RNA LINC00261在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00261在结直肠癌中的表达及其临床意义。方法选取86例结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织石蜡标本,应用原位杂交技术检测结直肠癌组织及癌旁组织中LINC00261的表达,比较LINC00261在结直肠癌组织及相应癌旁组织中的表达情况,分析其与临床特征的关系。结果LINC00261在结直肠癌组织中阳性表达率为62.79%(54/86),明显高于癌旁组织的8.14%(7/86),差异有统计学意义(P﹤0.01)。不同分化程度、TNM分期、是否发生淋巴结转移的结直肠癌患者结直肠癌组织中LINC00261阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);不同年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤直径的结直肠癌患者结直肠癌组织中LINC00261阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论LINC00261在结直肠癌组织中的表达明显升高,与结直肠癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关,其有可能成为结直肠癌潜在的诊断标志物。

基于PET/CT扫描后老年卵巢癌患者中LINC00261表达及其对卵巢癌细胞存活率、侵袭、迁移和周期的影响

目的探讨基于正电子发射计算机断层显像/电子计算机断层(PET/CT)扫描后的老年卵巢癌患者中长基因间非编码RNA00261(LINC00261)表达及其对卵巢癌细胞存活率、侵袭、迁移和周期的影响。方法PET-CT扫描检测卵巢癌术后患者影像;将pcDNA、pcDNA-LINC00261、si-con、si-LINC00261、anti-miR-con、anti-miR-1270转染至ES-2细胞中,分别记为pcDNA组、pcDNA-LINC00261组、si-con组、si-LINC00261组、anti-miR-con组、anti-miR-1270组;正常培养的细胞作为对照组;将pcDNA-LINC00261与miR-con、miR-1270分别共转染至ES-2细胞中,记为pcDNA-LINC00261+miR-con组、pcDNA-LINC00261+miR-1270组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LINC00261和miR-1270表达;Western印迹法检测细胞增殖核抗原(Ki-67)、基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期;Transwell检测细胞迁移和侵袭;细胞划痕实验检测细胞划痕愈合率;荧光素酶报告实验检测LINC00261和miR-1270的靶向关系。结果术后肿瘤转移患者血清及卵巢癌细胞中LINC00261表达显著降低,miR-1270表达显著升高(P<0.05)。过表达LINC00261和抑制miR-1270表达,Ki-67、MMP-2表达水平显著降低,细胞迁移和侵袭数显著降低,细胞划痕愈合率显著降低,细胞活性显著降低,G0/G1期和G2/M期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著升高(P<0.05)。LINC00261靶向调控miR-1270,过表达miR-1270部分逆转了LINC00261对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论过表达LINC00261抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭,阻滞细胞于S期,其机制可能与miR-1270有关。

长链非编码RNA linc00261在肝细胞癌中的表达及意义

目的研究长链非编码RNA linc00261在肝细胞癌(HCC)中的表达、功能及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测linc00261在74例肝癌、癌旁肝组织中的表达;采用卡方检验分析其表达量与临床病理指标的相关性;应用COX回归模型分析其表达水平与肝癌患者术后预后的关系;qRT-PCR检测linc00261在5株肝癌细胞株中的表达;在肝癌细胞株MHCC-LM3和SNU-449中采用siRNA(si-linc00261-1,si-linc00261-2,si-NC和空白对照组)和Lipofectamine3000进行转染敲低linc00261,活细胞计数(CCK8)、Transwell实验分别研究linc00261对肝癌细胞增殖,侵袭迁移能力的影响。结果 HCC组织中linc00261的表达水平与肝癌患者术前血清AFP(P=0.032)、肿瘤大小(P=0.007)、有无微血管癌栓(P=0.01)、TNM分期(P=0.02)显著相关;HCC组织中linc00261的低表达与患者的不良预后相关,其术后无瘤生存期明显缩短(P<0.05),是影响HCC患者术后无瘤生存期的一个独立危险因素;下调linc00261的表达可促进肝癌细胞株MHCC-LM3(P<0.01)和SNU-449(P<0.001)的迁移和侵袭能力,对细胞增殖无明显影响(P>0.05)。结论 Linc00261有望成为肝癌切除术后的一种新的预后指标。

过表达LncRNA LINC00261通过靶向miR-362-5p调控前列腺癌细胞增殖、凋亡的机制

目的探讨长链非编码RNA LINC00261(LncRNA LINC00261)调控微小RNA-362-5p(miR-362-5p)表达影响前列腺癌细胞增殖及凋亡的机制。方法实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测LINC00261和miR-362-5p在前列腺癌细胞系中的表达情况。双荧光素酶报告基因检测LINC00261与miR-362-5p的相互作用。噻唑蓝(MTT)法检测LINC00261过表达与抑制miR-362-5p表达后前列腺癌细胞增殖能力的变化。细胞凋亡实验检测LINC00261过表达与抑制miR-362-5p表达后前列腺癌细胞凋亡行为的变化。Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p27、B淋巴细胞瘤(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3蛋白表达。结果前列腺癌细胞中LINC00261的表达水平明显低于正常前列腺上皮细胞(P<0.05),而miR-362-5p的表达水平明显高于正常前列腺上皮细胞(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实LINC00261可靶向结合miR-362-5p,并可负向调控miR-362-5p表达;LINC00261过表达或抑制miR-362-5p表达后前列腺癌细胞增殖活性明显低于阴性对照组(P<0.05),细胞凋亡率明显增高(P<0.05),促进p21、p27、Bax、酶切caspase-3表达(P<0.05),而明显抑制CyclinD1、Bcl-2表达(P<0.05);miR-362-5p过表达可逆转LINC00261过表达对前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的作用。结论LINC00261过表达可通过下调miR-362-5p表达进而调控前列腺癌细胞增殖及凋亡过程。

长链非编码RNA linc00261在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)linc00261在卵巢癌中的表达及其在卵巢癌发生发展中的可能作用机制。方法应用qRT-PCR检测60例原发性卵巢癌患者的卵巢癌组织及癌旁组织中LncRNA linc00261的表达,并分析其表达与卵巢癌患者临床病理特征的相关性。通过设计合成LncRNA linc00261表达质粒和对照质粒,转染SKOV3细胞,qRT-PCR检测转染细胞中LncRNA linc00261的表达水平,MTT法检测细胞增殖活性,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力。结果 qRT-PCR检测结果显示,卵巢癌组织中LncRNA linc00261的平均相对表达量(2.47±0.93)明显低于癌旁组织(6.82±1.56),差异具有统计学意义(t=5.153,P<0.05)。卵巢癌组织中LncRNA linc00261的表达与患者的年龄、是否绝经、病理类型无关(均P>0.05),但与患者的肿瘤组织分化程度、临床分期、有无淋巴结转移、有无腹水等有关(均P<0.05)。转染SKOV3细胞后,LncRNA linc00261表达质粒组的LncRNA linc00261表达水平显著高于对照质粒组和空载体组(均P<0.05);MTT检测结果显示,转染48、72、96 h后,LncRNA linc00261表达质粒组SKOV3细胞增殖能力显著低于对照质粒组和空载体组(均P<0.05);划痕实验显示,LncRNA linc00261表达质粒组细胞迁移能力显著低于对照质粒组和空载体组(均P<0.05);侵袭实验的结果显示,LncRNA linc00261表达质粒组穿膜细胞数显著低于对照质粒组和空载体组(均P<0.05)。结论 LncRNA linc00261在卵巢癌患者癌组织中表达下调,其表达水平与卵巢癌患者的恶性程度有关,上调LncRNA linc00261表达可抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖、迁移和侵袭能力,其可能成为卵巢癌早期诊断的潜在标志物和治疗新靶点。

LINC00261和miR-31在结直肠癌组织中的表达及与临床病理特征的相关性

目的探讨长链非编码RNA00261(LINC00261)和miR-31在结直肠癌组织中的表达及与临床病理特征的相关性。方法选取2019年6月—2020年5月行手术治疗的结直肠癌30例,采集其结直肠癌组织和正常结直肠组织标本30对,应用生物信息学分析LINC00261在结直肠癌和正常结直肠组织中的表达及相关miRNA,采用qRT-PCR检测LINC00261和miR-31在结直肠癌和正常结直肠组织及细胞中表达,分析结直肠癌组织LINC00261和miR-31表达与结直肠癌患者临床病理特征的相关性,探讨结直肠癌组织LINC00261和miR-31表达的相关性。结果生物信息学分析结果显示,LINC00261在结直肠癌组织中表达低于正常结直肠组织,预测LINC00261与miR-31具有结合位点。qRT-PCR检测结果显示,LINC00261在结直肠癌组织中表达低于正常结直肠组织,miR-31在结直肠癌组织中表达高于正常结直肠组织。LINC00261在结直肠癌细胞株中表达低于正常结直肠上皮细胞,miR-31在结直肠癌细胞株中表达高于正常结直肠上皮细胞(P<0.05)。结直肠癌组织中LINC00261表达肿瘤直径>5 cm、血管神经浸润阳性、TNM分期Ⅲ或Ⅳ期和低分化程度结直肠癌患者低于肿瘤直径≤5 cm、血管神经浸润阴性、TNM分期Ⅰ或Ⅱ期和高中分化程度结直肠癌患者;miR-31表达肿瘤直径>5 cm和TNM分期Ⅲ或Ⅳ期结直肠癌患者高于肿瘤直径≤5 cm和TNM分期Ⅰ或Ⅱ期结直肠癌患者(P<0.05或P<0.01)。Pearson相关性分析结果显示,结直肠癌组织LINC00261和miR-31表达呈负相关(P<0.01)。结论结直肠癌组织中LINC00261低表达,miR-31高表达,二者具有相关性及靶向结合位点,并且与结直肠癌患者临床病理特征具有相关性。

LncRNA LINC00261靶向miR-182-5p对脑胶质瘤细胞替莫唑胺耐药性的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)LINC00261对替莫唑胺(TMZ)耐药脑胶质瘤细胞耐药性的影响机制。方法实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常脑组织、胶质瘤组织、胶质瘤细胞U251、TMZ耐药胶质瘤细胞U251/TMZ中LINC00261、miR-182-5p的表达;用脂质体法将TMZ+pcDNA组(转染pcDNA)、TMZ+pcDNA-LINC00261组(转染pcDNA-LINC00261)、TMZ+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、TMZ+anti-miR-182-5p组(转染anti-miR-182-5p)、TMZ+pcDNA-LINC00261+miR-NC组(共转染pcDNA-LINC00261和miR-NC)、TMZ+pcDNA-LINC00261+miR-182-5p组(共转染pcDNA-LINC00261和miR-182-5p mimics)转染至U251/TMZ细胞,并用10μg/ml TMZ处理,将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-182-5p组(转染miR-182-5p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC00261组(转染si-LINC00261)转染至U251细胞。四甲基偶氮唑盐(MTT)法、迁移实验(Transwell小室)法、Western印迹检测细胞的抑制率、迁移侵袭和细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、p21的蛋白表达。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中LINC00261表达显著降低,miR-182-5p表达显著升高(P<0.05)。与U251相比,U251/TMZ中LINC00261表达显著降低,miR-182-5p表达显著升高,并且TMZ呈浓度依赖性明显提高细胞的抑制率,并显著上调细胞的IC50值(P<0.05)。过表达LINC00261联合TMZ后,细胞的抑制明显提高,迁移侵袭能力明显降低,明显下调CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达,上调p21蛋白表达,且抑制miR-182-5p联合TMZ,具有相同的作用。miR-182-5p明显的抑制野生型LINC00261细胞的荧光活性。过表达miR-182-5p明显减弱了INC00261对U251/TMZ细胞TMZ耐药的作用。结论LncRNA LINC00261调控TMZ耐药胶质瘤细胞的耐药性,其机制与LINC00261靶向调控miR-182-5p相关,将可为耐药脑胶质瘤的治疗提供新靶点。

LINC00261和miR-522-3p在结直肠癌中的表达及其与患者预后的关系

目的检测长链非编码RNA LINC00261、微小RNA-522-3p(miR-522-3p)在结直肠癌组织中的表达水平,并探讨两者的相关性及其与患者预后的关系。方法收集2013年1月至2014年12月在该院行手术切除治疗的68例结直肠癌组织及其配对的癌旁组织,应用实时荧光定量PCR检测结直肠癌和癌旁组织中LINC00261、miR-522-3p的表达水平;分析LINC00261、miR-522-3p的表达与结直肠癌患者临床病理参数的关系;Kaplan-Meier生存模型分析LINC00261、miR-522-3p表达对结直肠癌患者生存率的影响;多因素Cox回归分析影响结直肠癌患者预后的独立危险因素;Pearson相关分析检测LINC00261与miR-522-3p在结直肠癌组织中表达水平的相关性。结果LINC00261在结直肠癌组织中表达水平低于其在癌旁组织中的表达水平(P<0.05),miR-522-3p在结直肠癌组织中表达水平高于其在癌旁组织中的表达水平(P<0.05)。LINC00261在结直肠癌组织中的表达水平与分化程度、临床分期和淋巴结转移情况相关(P<0.05),miR-522-3p在结直肠癌组织中的表达水平与临床分期和淋巴结转移情况相关(P<0.05)。LINC00261低表达组的预后比LINC00261高表达组预后更差(P<0.05),miR-522-3p高表达组的预后比miR-522-3p低表达组的预后更差(P<0.05)。高临床分期、低分化程度、淋巴结转移、LINC00261低表达和miR-522-3p高表达是结直肠癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结直肠癌组织中LINC00261与miR-522-3p的表达呈负相关(P<0.05)。结论结直肠癌组织中LINC00261表达下调、miR-522-3p表达上调,二者表达呈负相关,且均与结直肠癌患者的不良病理参数和预后相关。LINC00261、miR-522-3p可能是结直肠癌潜在的预后标志物和治疗靶标。

长链非编码RNA linc 00261通过竞争性结合微小RNA-182调控RND3基因参与卵巢癌癌细胞的生物学行为研究

目的探讨长链非编码RNA linc 00261通过竞争性结合微小RNA-182(miR-182)调控RND3基因参与卵巢癌癌细胞生物学行为研究及其作用机制。方法选取人卵巢表面上皮细胞系IOSE80和4株卵巢癌细胞系SKOV3、HO8910、A2780和OVCAR。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测linc 00261、miR-182和RND3 mRNA的表达;双荧光素酶实验验证linc00261和miR-182结合,miR-182靶向调控RND3;RIP验证linc 00261和AGO2结合;RNA pull down结果证明linc 00261和miR-182结合;CCK8检测细胞的生长能力;Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力;细胞流式术检测细胞凋亡率;蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)检测RND3和凋亡相关因子Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果与人卵巢表面上皮细胞株IOSE80(1.00±0.11)相比,4株卵巢癌细胞SKOV3(0.25±0.04)、HO8910(0.71±0.08)、A2780(0.53±0.07)和OVCAR(0.36±0.05)中linc 00261的表达显著降低(P<0.05),而miR-182的表达在SKOV3(3.46±0.42)、HO8910(2.07±0.21)、A2780(2.79±0.31)和OVCAR(2.98±0.32)中均显著增加(均P<0.05),其中SKOV3中linc 00261的表达最低。双荧光素酶实验验证linc 00261能与miR-182结合,RIP实验验证AGO2蛋白与linc 00261结合,RNA pull down实验证明linc 00261与miR-182特异性结合,且miR-182能够靶向调控RND3的表达。过表达linc 00261或沉默miR-182可以抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进其凋亡,凋亡相关因子Bax表达上调,而抗凋亡相关因子Bcl-2表达下降,而过表达miR-182或沉默RND3可以逆转linc 00261过表达对卵巢癌细胞生物学活性的抑制作用。结论长链非编码RNA linc 00261通过竞争性结合miR-182,从而上调RND3基因,进而抑制卵巢癌癌细胞增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡。

长链非编码RNA LINC00261在喉鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:探讨长链非编码RNA LINC00261在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义。方法:利用实时荧光定量PCR技术检测喉鳞状细胞癌组织及癌旁正常组织中LINC00261的表达情况,分析LINC00261的表达与喉鳞状细胞癌的临床分期、病理类型、组织学分级及淋巴结转移等临床病理参数之间的关系。结果:①与癌旁正常组织相比,喉癌组织中LINC00261的表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);②在临床分型中,喉癌声门上型、声门型、声门下型3组中LINC00261的表达水平均差异无统计学意义(P>0.05);在组织学分型中,LINC00261表达量在低分化喉癌组织中与高、中分化喉癌组织中差异无统计学意义(P>0.05);在T分期分组中,LINC00261在T_1+T_2组的表达显著高于T_3+T_4组(P<0.05);在有无淋巴结转移分组中,无淋巴结转移的喉癌组织中LINC00261的表达明显高于有淋巴结转移组织(P<0.05)。结论:LINC00261表达下调可能与喉癌的发生有关,LINC00261表达量可能与喉癌的T分期及淋巴结转移相关。

长链非编码RNALINC00261在人胃癌组织的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA LINC00261在人胃癌组织中的表达及临床意义。 方法收集72对人胃癌和配对正常胃黏膜组织，采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法检测组织中LINC00261表达水平，分析其表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、组织分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期、脉管内有无癌栓及5年存活率等临床病理特征的相关性。 结果与配对正常组织比较，LINC00261呈低表达。在72例胃癌组织中LINC00261低表达率为76.38%（55/72），而正常胃组织LINC00261低表达率为2.78%（2/72），两者差异有统计学意义（χ2＝81.568，P＝0.000）。LINC00261低表达与患者性别（χ2＝0.066，P＝0.936）、年龄（χ2＝0.000，P＝0.988）、肿瘤位置（χ2＝1.332，P＝0.722）、肿瘤直径（χ2＝2.037，P＝0.154）、组织分化程度（χ2＝0.701，P＝0.704）及远处转移（χ2＝0.003，P＝0.955）均无明显相关，但与肿瘤浸润深度（χ2＝9.519，P＝0.023）、淋巴结转移（χ2＝9.577，P＝0.023）、TNM分期（χ2＝13.299，P＝0.004）、脉管内有无癌栓（χ2＝5.318，P＝0.021）及5年存活率（χ2＝6.237，P＝0.013）均显著相关。 结论LINC00261可能是胃癌基因诊断和治疗中重要靶点之一。

长链非编码核糖核酸LINC00261通过miR-148b-3p/PTEN途径对高糖环境中HK-2细胞的保护作用

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00261在糖尿病肾病中的表达,及其可能通过微小核糖核酸miR-148b-3p/PTEN途径对高糖环境中HK-2细胞的保护作用。方法选择2016年3月至2018年5月本院的19例糖尿病肾病患者和23例健康对照者,采集血样,通过实时定量PCR(qRT-PCR)测定LINC00261和miR-148b-3p的表达。在细胞实验中,将HK-2肾小管上皮细胞分为7组:正常葡萄糖组(5.5 mmol/L培养,NG组)、高葡萄糖糖组(30.0 mmol/L培养,HG组)、其余5组也均为高葡萄糖培养:空质粒转染pcDNA(HG+pcDNA组)、转染LINC00261(HG+pcDNA-LINC00261组)、转染阴性对照anti-miR-NC(HG+anti-miR-NC组)、转染抑制剂anti-miR-148b-3p(HG+anti-miR-148b-3p组)、LncRNA和miRNA同时转染(HG+pcDNA-LINC0026+miR-148b-3p组)。应用Western印迹、细胞计数试剂盒8和流式细胞术分别检测PTEN蛋白表达、细胞增殖与凋亡。测超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒和丙二醛(MDA)试剂盒分别检测SOD活性和MDA含量。双荧光素酶报告实验用于LINC00261、miR-148b-3p、PTEN的相互关系鉴定。结果与健康对照者比较,糖尿病肾病患者的LINC00261表达明显降低,而miR-148b-3p表达则明显增高(P<0.05)。过表达LINC00261或抑制miR-148b-3p后,高糖环境中HK-2细胞的miR-148b-3p表达、细胞凋亡及MDA含量均下降,而PTEN蛋白表达、细胞增殖及SOD活性均增高(P<0.05)。结论LINC00261可能通过调控miR-148b-3p/PTEN途径,促进高糖环境中HK-2肾小管上皮细胞增殖、降低氧化应激、减少细胞凋亡。

LncRNA LINC00261下调miR-620表达调控鼻咽癌放射敏感性实验研究

目的探讨LINC00261对鼻咽癌放射敏感性影响及其作用机制。方法用qRT-PCR检测放射敏感、放射抵抗鼻咽癌组织中miR-620和LINC00261的相对表达水平。采用0、2、4、6、8 Gy 60Coγ射线照射鼻咽癌细胞系6-10B、HNE-3细胞后,qRT-PCR法检测miR-620和LINC00261的相对表达水平。LINC00261过表达或沉默LINC00261表达、抑制miR-620表达后,使用X线照射4 Gy。克隆形成实验检测鼻咽癌细胞放射敏感性;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹检测Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9蛋白表达水平;荧光素酶报告实验检测LINC00261和miR-620的靶向关系;裸鼠移植瘤实验检测细胞成瘤变化。结果相较于放射敏感组织,放射抵抗组织中LINC00261下调表达,miR-620上调表达(P<0.05)。6-10B、HNE-3细胞经不同剂量照射后LINC00261下调表达,miR-620上调表达(P<0.05)。过表达LINC00261和干扰miR-620表达后,6-10B、HNE-3细胞中Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9表达水平升高,细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞存活分数增大(P<0.05)。LINC00261靶向调控miR-620;过表达miR-620表达可减弱LINC00261过表达对鼻咽癌细胞的放射增敏及促凋亡作用。LINC00261过表达可降低裸鼠鼻咽癌成瘤重量(P<0.05)。结论过表达LINC00261可提高鼻咽癌细胞的放射敏感性,其可能通过靶向调控miR-620发挥作用。

长链非编码RNA linc00261在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)linc00261在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义。方法纳入中南大学湘雅医学院附属海口医院2017年2月至2018年9月收治的100例NSCLC患者,采用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测患者癌组织及对应癌旁组织中lncRNA linc00261的表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系。通过设计合成lncRNA linc00261表达质粒,转染A549细胞,采用qRT-PCR检测转染细胞中lncRNA linc00261表达水平,使用MTT法检测转染细胞的增殖情况,使用流式细胞术检测转染细胞的凋亡情况。结果qRT-PCR检测结果显示,100例NSCLC患者癌组织中lncRNA linc00261的平均相对表达量(0.15±0.06)明显低于癌旁组织(1.19±0.23),差异有统计学意义(t=7.753,P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤直径及病理组织类型的NSCLC患者癌组织中lncRNA linc00261相对表达量比较差异均无统计学意义(P值均>0.05),但不同组织分化程度、临床分期及有无淋巴结转移患者癌组织中lncRNA linc00261相对表达量差异均有统计学意义(P值均<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,转染lncRNA linc00261表达质粒的A549细胞中lncRNA linc00261的表达量显著高于转染空载体的阴性对照组及空白对照组(F=5.196,P<0.001)。MTT检测结果显示,转染24 h后,3组之间细胞增殖能力差异无统计学意义(F=0.183,P>0.05);转染48、72、96 h后,转染lncRNA linc00261表达质粒的A549细胞的细胞增殖能力显著低于转染空载体的阴性对照组及空白对照组(t=3.187、5.549,P值均<0.05)。流式细胞书检测结果显示,转染48 h后,转染lncRNA linc00261表达质粒的A549细胞的凋亡比例显著高于转染空载体的阴性对照组及空白对照组(χ^2=4.175、6.093,P值均<0.05)。结论lncRNA linc00261在NSCLC患者癌组织中表达下调,并与NSCLC的发生发展有关,其在NSCLC中可能发挥抑癌基因作用,过表达lncRNA linc0026可抑制NSCLC细胞增殖并诱导凋亡,有可能成为NSCLC潜在的治疗靶点。

LINC00261/miR-182-5p/PFN1对乙肝病毒相关性肝细胞癌HepG2.2.5细胞放疗抵抗的影响

[目的]探讨LINC00261调控miR-182-5p/PFN1轴对乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌HepG2.2.15细胞放疗抵抗的作用机制。[方法]用1 Gy的X射线处理HepG2.2.15细胞得放疗抵抗细胞HepG2.2.15/R,RT-qPCR检测LINC00261和miR-182-5p表达,Western Blot检测PFN1的表达,CCK-8检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,彗星实验检测DNA损伤情况;双荧光素酶报告基因实验验证miR-182-5p和LINC00261或PFN1的靶向关系。[结果]LINC00261在HepG2.2.15细胞中低表达(P<0.01),且在其放疗抵抗细胞HepG2.2.15/R中表达更低(P<0.01)。过表达LINC00261抑制HepG2.2.15/R细胞增殖(P<0.01),诱导细胞凋亡(P<0.05)和DNA双链断裂(P<0.01);6 Gy X射线处理可上调过表达LINC00261对HepG2.2.15/R细胞凋亡(P<0.05)和DNA损伤的促进作用(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-182-5p与LINC00261或PFN1的靶向关系。过表达LINC00261或过表达PFN1可下调过表达miR-182-5p对HepG2.2.15/R细胞增殖的促进作用(P<0.05)以及对凋亡和DNA损伤的抑制作用(P<0.05)。[结论]过表达LINC00261靶向下调miR-182-5p,促进PFN1表达,促进HepG2.2.15细胞放疗抵抗。