IPI-504通过LINC00312/let-7b-5p/EBF1轴抑制胰腺癌细胞的增殖和迁移

目的探讨IPI-504诱导的LINC00312对胰腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间质转化的抑制作用,并阐明其作用机制。方法通过生物信息学分析预测let-7b-5p与LINC00312、EBF1 mRNA的潜在结合位点,应用双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系。将PANC-1细胞分为对照组、IPI-504组、IPI-504+敲减对照组、IPI-504+敲减LINC00312组、IPI-504+NC mimics组、IPI-504+let-7b-5p mimics组和IPI-504+敲减EBF1组,实时荧光定量PCR检测细胞LINC00312和let-7b-5p的表达,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell检测细胞迁移能力,Western blotting检测细胞EBF1蛋白表达。结果let-7b-5p与LINC00312、EBF1 mRNA结合,敲减LINC00312、转染let-7b-5p模拟物和敲减EBF1均降低经IPI-504处理的PANC-1细胞中EBF1蛋白表达,促进细胞增殖和迁移。结论IPI-504上调胰腺癌细胞LINC00312表达,LINC00312通过海绵化let-7b-5p上调EBF1表达,从而抑制胰腺癌细胞的增殖和迁移。

LincRNA 00312调节SOSTDC1介导的BMP-Smads轴对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)00312调控靶向含硬化蛋白域蛋白1(SOSTDC1)介导BMP-smads轴对卵巢癌(OC)细胞恶性生物学行为的影响。方法:收集2021年9月至2022年12月收治于运城市中心医院的15例接受卵巢癌根治术患者的癌组织及癌旁组织,另选取人正常卵巢上皮细胞IOSE80和OC细胞(SKOV3和OVCAR)作为靶细胞;qRT-PCR法分析OC癌和癌旁组织以及SKOV3和OVCAR中LincRNA 00312表达;将SKOV3细胞分为si-NC组、si-LincRNA 00312组、si-LincRNA 00312+si-SOSTDC1组、OE-NC组和OE-SOSTDC1组。KEGG分析LincRNA 00312下游可能通路;Western blot检测OC组织和各组SKOV3细胞中SOSTDC1和BMP-smads通路相关蛋白表达;集落形成实验、划痕实验和Transwell实验检测各组SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭;生物信息学预测、双荧光素酶报告基因和RNA-蛋白pull-down实验检测LincRNA 00312和SOSTDC1的靶向作用。结果:OC癌组织中LincRNA 00312表达高于癌旁组织(t=7.288,P<0.05);与IOSE80细胞比较,SKOV3和OVCAR3细胞中LincRNA 00312表达增多(t=27.805、8.860,均P<0.05)。KEGG通路分析显示,LincRNA 00312主要与BMP-smads信号通路、肿瘤中转录失调和MAPK信号通路等显著相关;生物信息学分析发现,LincRNA 00312与SOSTDC1的mRNA序列之间存在可能的结合位点。与癌旁组织相比,癌组织中SOSTDC1的mRNA和蛋白表达降低(t=23.653、27.498,均P<0.05),BMP2、BMP4、BMP7、SAMD1/5/9和p-SAMD1/5/9蛋白表达水平升高(t=5.952、7.322、8.024、7.094和5.512,均P<0.05)。与si-NC组相比,si-LincRNA 00312组SKOV3细胞的集落形成数、划痕愈合面积占比和侵袭细胞数均降低(t=6.914、4.729、11.321,均P<0.05)。双荧光素酶报告基因发现,OE-SOSTDC1组SKOV3细胞pGL3-SOSTDC1-WT荧光素酶活性低于OE-NC组(t=19.744,P<0.05);RNA-蛋白pull-down实验发现,转染Bio-LincRNA 00312-WT细胞中SOSTDC1富集倍数高于转染Bio-LincRNA 00312-MUT细胞(t=36.374,P<0.05)。与OE-NC组相比,OE-SOSTDC1组SKOV3细胞的SOSTDC1蛋白表达升高(t=39.491,P<0.05),BMP2、BMP4、BMP7、SAMD1/5/9和p-SAMD1/5/9蛋白表达降低(t=19.696、19.752、14.203、45.928和21.637,均P<0.05)。与si-LincRNA 00312组相比,si-LincRNA 00312+si-SOSTDC1组SKOV3细胞的集落形成数、迁移率和侵袭细胞数以及BMP2、BMP4、BMP7、smad1/5/9和p-smad1/5/9蛋白表达均增加(t=8.911、8.193、8.873、14.203、12.222、20.821、19.365和31.225,均P<0.05)。结论:LincRNA 00312在OC组织中表达上调,可能通过调节SOSTDC1介导的BMP-smads信号通路,促进癌细胞增殖、迁移和侵袭。

长链非编码LINC00312通过内质网IRE1-JNK途径促进病理性瘢痕成纤维细胞凋亡

目的探讨长链非编码RNA LINC00312(LncRNA LINC00312)对人病理性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响及其可能机制。方法体外分离培养人病理性瘢痕成纤维细胞,并采用LINC00312 shRNA慢病毒和阴性对照慢病毒感染细胞,qRT-PCR法检测感染前后细胞中LINC00312的表达水平。根据实验需求,将细胞分为4组:空白对照组(Blank)、阴性对照慢病毒组(NC-shRNA)、LINC00312 shRNA慢病毒组(LINC00312-shRNA)及IRE1α特异性抑制剂组(LINC00312-shRNA+KIRA6)。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况;Hoechst染色法观察各组细胞形态变化;Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-2以及内质网应激相关蛋白GRP78、IRE1、p-IRE1、JNK、p-JNK的表达水平。结果LINC00312 shRNA慢病毒感染后细胞中LINC00312的表达水平显著降低(P<0.05);与Blank组和NC-shRNA组比较,LINC00312-shRNA组细胞增殖活性明显降低,细胞核呈大量碎块致密浓染,凋亡水平明显升高,cleaved Caspase-3、Bax、GRP78、p-IRE1、p-JNK等蛋白表达水平明显升高,Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与LINC00312-shRNA组比较,LINC00312-shRNA+KIRA6组细胞增殖活性明显升高,细胞核的碎块致密浓染数量减少,凋亡水平明显降低,cleaved Caspase-3、Bax、GRP78、p-IRE1、p-JNK蛋白表达水平明显降低,而Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论沉默LINC00312可能通过激活内质网IRE1-JNK介导的凋亡途径,并诱导人病理性瘢痕成纤维细胞凋亡。