山羊口疮病毒四川株007基因克隆及其编码蛋白分析

为确定1株山羊口疮病毒(ORFV)四川分离株007基因(dUTPase)的分子特征及其编码蛋白的结构和功能,本研究提取山羊口疮病毒四川分离株(SC-LZ1)的DNA,采用PCR方法对该分离株的007基因进行扩增,然后将007基因连接至pET-32a(+)表达载体上,构建pET-32a(+)-007重组质粒并测序。结果表明,山羊口疮病毒四川分离株007基因大小为483 bp,编码161个氨基酸,该基因及其所编码蛋白较其他ORFV毒株有一定变异;二级结构预测显示007蛋白含有大量的无规卷曲、伸展链及小部分α螺旋,三级结构预测显示其与模板3ehw.1.A氨基酸序列的相似性为70.21%,属于dUTP焦磷酸酶。

Mamu-B* 007:03及其剪切异构体Mamu-B* 007:03-sv1基因的表达与细胞内定位

目的 Mamu-B*007:03-sv1是中国恒河猴主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)I类分子的一种剪切异构体,其α3结构域缺失。本实验初步获得其在细胞内的表达和定位信息,并与全长的Mamu-B*007:03基因的表达情况进行比较。方法分别构建Mamu-B*007:03-sv1-myc-pEGFPN3和Mamu-B*007:03-myc-pEGFPN3的真核表达载体,并将这两种重组质粒分别转染293T细胞。利用Western-blot免疫印迹实验检测这两种基因在细胞内的表达情况,并利用激光共聚焦显微镜技术分别分析这两种基因在细胞内的表达定位。结果 Mamu-B*007:03-sv1和Mamu-B*007:03基因均能在293T细胞内正常表达。Mamu-B*007:03-sv1发生了糖基化的修饰,Mamu-B*007:03基因在细胞膜上表达,Mamu-B*007:03-sv1基因在细胞内表达。结论 Mamu-B*007:03-sv1基因的α3结构域缺失,其细胞内的表达和定位与全长Mamu-B*007:03基因有明显差异,其功能有待于进一步探索。