circ_0072088通过调控miR-545-3p/STAT3轴促进非小细胞肺癌细胞的恶性生物学行为

目的:探究环状RNA(circular RNA,circRNA)0072088在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞中的生物学功能及其作用机制。方法:在公共基因芯片数据库Gene Expression Omnibus(GEO)中下载GSE101684数据集,通过GEO2R分析得到差异基因。通过qPCR检测NSCLC细胞H165、H358、H460、H226和A549细胞中circ0072088的表达水平,随后采用CCK-8法和Transwell小室法分别检测circ0072088对NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭的作用。通过CircInteractome和TargetScan数据库预测circ0072088与miR-545-3p、miR-545-3p与STAT3之间的靶向关系,并通过双荧光素酶报告基因实验和RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)实验验证circ0072088、miR-545-3p与STAT3之间的靶向关系。结果:circ0072088在NSCLC细胞系中的表达均显著上调(均P<0.05)。过表达circ0072088促进了NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移(均P<0.05);敲低circ0072088抑制了NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移(均P<0.05)。miR-545-3p是circ0072088的下游靶点,可以被circ0072088吸附;STAT3是miR-545-3p的靶基因,可以被circ0072088间接正向调控。结论:Circ0072088通过调节miR-545-3p/STAT3轴促进NSCLC细胞的增殖和转移。

circ_0072088通过调控miR-532-3p/WEE1轴促进甲状腺癌IHH4细胞的恶性生物学行为

目的:探讨circ_0072088对甲状腺癌IHH4细胞恶性生物学行为的影响及其可能的机制。方法:选取2015年4月至2019年3月于青海大学附属医院就诊的确诊为甲状腺癌后接受切除手术且术前未进行任何治疗的48例甲状腺癌患者的甲状腺癌组织及其对应癌旁组织。根据GEO数据集(GSE93522)分析鉴定甲状腺乳头状癌中差异表达的circRNA。用qPCR法检测circ_0072088在甲状腺癌组织和细胞中的表达水平。采用CCK-8法和Transwell法检测circ_0072088和miR-532-3p过表达对甲状腺癌IHH4细胞增殖、迁移和侵袭的影响。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验验证甲状腺癌细胞中circ_0072088与miR-532-3p、miR-532-3p和WEE1基因之间的关系。结果:circ_0072088在甲状腺癌组织和细胞中呈高表达(P<0.05或P<0.01)。circ_0072088过表达促进了甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05或P<0.01),而转染miR-532-3p模拟物能够减弱这种作用(P<0.05或P<0.01)。此外,机制研究表明,circ_0072088可以与miR-532-3p靶向结合,且WEE1是miR-532-3p的下游靶基因。结论:circ_0072088通过调控miR-532-3p/WEE1轴促进IHH4细胞的增殖、迁移和侵袭。

Circ_0072088通过靶向miR-223-3p/PFN2轴促进乳腺癌细胞的生长

目的探究环状RNA(circular RNA,circRNA)0072088在乳腺癌(breast cancer,BC)细胞中的生物学功能及其作用机制。方法在公共基因芯片数据库Gene Expression Omnibus(GEO)中下载GSE101123数据集,通过GEO2R分析得到差异基因。通过实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测BC细胞中circ_0072088的表达水平。采用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测circ_0072088对BC细胞增殖、迁移和侵袭的作用。通过CircInteractome和TargetScan数据库预测circ_0072088与微小RNA223-3p(micro RNA-223-3p,miR-223-3p)、miR-223-3p与肌动蛋白结合蛋白profilin 2(PFN2)之间的靶向关系,并通过双荧光素酶报告基因实验和RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)实验验证circ_0072088、miR-223-3p与PFN2之间的靶向关系。结果circ_0072088在BC细胞系中的表达均显著上调。过表达circ_0072088促进BC细胞的增殖、侵袭和迁移,而上调miR-223-3p可削弱此作用。miR-223-3p是circ_0072088的下游靶点,可以被circ_0072088吸附;PFN2是miR-223-3p的靶基因,可以被circ_0072088间接正向调控。结论circ_0072088通过调节miR-223-3p/PFN2轴促进BC细胞的增殖和转移。

环状RNA hsa_circ_0072088过表达对胶质母细胞瘤增殖、迁移的抑制及凋亡的促进作用

目的探讨环状RNA hsa_circ_0072088在胶质母细胞瘤恶性增殖机制中的作用。方法搜集5例原发异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)野生型胶质母细胞瘤新鲜组织和4例因外伤需要接受颅内减压手术的脑挫伤组织,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定瘤组织和挫伤脑组织中hsa_circ_0072088各自表达含量。胶质母细胞瘤细胞系(U251和U87细胞系)中进行CCK-8细胞增殖实验、Transwell实验和细胞凋亡实验,探讨hsa_circ_0072088在胶质母细胞瘤细胞增殖中的作用。数据分析采用独立样本t检验和方差分析。结果RT-PCR结果显示胶质母细胞瘤组织中hsa_circ_0072088的表达水平较脑挫伤组织标本中明显降低(P<0.001)。体外细胞功能实验显示hsa_circ_0072088的过表达可显著抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁移和侵袭;与空表达载体对照相比,瘤细胞的凋亡速率明显增加(P<0.05)。结论环状RNA hsa_circ_0072088可抑制胶质母细胞瘤的进展,促进其凋亡,有望成为治疗胶质母细胞瘤的有效干预靶点。

Circ_0072088靶向miR⁃377促进肝癌细胞进展的机制研究

目的研究环状RNA 0072088(circ_0072088)在肝癌细胞及异种移植瘤模型中的生物学功能,并探讨其参与调控肝细胞癌(HCC)发生进展的关键机制。方法培养人正常肝细胞(THLE⁃2)和HCC细胞系(Huh⁃7、Hep G2、Hep 3B),采用RT⁃qPCR方法检测circ_0072088、miR⁃377和含三方基序23基因(TRIM23)mRNA表达水平;Western blot检测TRIM23蛋白表达水平。取Hep G2细胞分为sh⁃NC组、sh⁃circ_0072088组、mimic NC组、miR⁃377 mimic组,Huh⁃7细胞分为mimic NC组、miR⁃377 mimic组和circ_0072088+miR⁃377 mimic组。分别采用CCK8法、克隆形成试验测定各组细胞的增殖能力变化情况;Transwell实验检测迁移能力变化情况;根据circ_0072088与miR⁃377的结合位点设计并合成了circ_0072088⁃WT和circ_0072088⁃MT双荧光素酶报告质粒,并分别与miR⁃377 mimic或mimic NC共转染Hep G2细胞后使用双荧光素酶报告试剂盒测量荧光素酶活性;RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)测定Ago2或IgG RIP复合物中circ_0072088和miR⁃377的富集水平。在异种移植瘤裸鼠模型中探讨circ_0072088的体内功能。结果circ_0072088在HCC中较瘤旁组织表达上调。与THLE⁃2细胞比较,HCC细胞系(Huh⁃7、Hep G2、Hep 3B)circ_0072088的mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(t=13.77、30.11、33.27,P均<0.001)。与sh⁃NC组比较,Hep G2转染sh⁃circ_0072088后细胞中circ_0072088 mRNA表达降低,差异有统计学意义(t=23.31,P均<0.001),细胞增殖活力(48、72 h)、克隆形成能力和迁移能力降低,差异均有统计学意义(t=11.78、8.42、12.64,P均<0.01),TRIM23蛋白表达水平明显降低。RIP检测结果显示,相对于lgG,circ_0072088(t=60.59)和miR⁃377(t=35.68)在Ago2免疫沉淀中富集,差异均有统计学意义(P均<0.001)。双荧光素酶检测结果显示,与转染mimic⁃NC组比较,转染miR⁃377 mimic组含有circ_0072088⁃WT质粒细胞的荧光素酶活性降低,差异有统计学意义(t=21.88,P<0.001)。RT⁃qPCR及Western blot结果显示,与mimic NC组相比,miR⁃377 mimic组中TRIM23 mRNA(t=8.45,P<0.001)和蛋白表达水平明显降低。在异种移植瘤裸鼠模型中,与sh⁃NC组相比,sh⁃circ_0072088组移植的肿瘤体积减小,肿瘤组织中circ_0072088和TRIM23 mRNA表达降低,而miR⁃377 mRNA表达升高,差异有统计学意义(t=8.63、5.56、5.52、11.97,P均<0.001),TRIM23的蛋白水平下降。结论circ_0072088通过结合miR⁃377,间接上调TRIM23的表达,从而促进HCC细胞的增殖和迁移。

circ_0072088靶向miR-578促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和转移的机制研究

目的:探讨circ_0072088对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和转移的影响及其对miR-578的调控作用。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测正常滑膜组织、类风湿关节炎患者滑膜组织中circ_0072088和miR-578的表达量;原代分离培养类风湿关节炎滑膜成纤维细胞,将细胞分为si-NC组、si-circ_0072088组、miR-NC组、miR-578组、si-circ_0072088+anti-miR-NC组、si-circ_0072088+anti-miR-578组;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、平板克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测circ_0072088与miR-578的相互作用。结果:与正常滑膜组织比较,类风湿关节炎患者滑膜组织中circ_0072088的表达水平升高(P<0.05),miR-578的表达水平降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-circ_0072088组细胞活力降低(P<0.05),克隆形成数及侵袭细胞数减少(P<0.05),划痕愈合率降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果显示circ_0072088与miR-578特异性结合,并可调控miR-578的表达活性;与miR-NC组比较,miR-578组细胞活力降低(P<0.05),克隆形成数及侵袭细胞数均明显减少(P<0.05),划痕愈合率降低(P<0.05);与si-circ_0072088+anti-miR-NC组比较,si-circ_0072088+anti-miR-578组细胞活力升高(P<0.05),克隆形成数及侵袭细胞数均明显增多(P<0.05),划痕愈合率升高(P<0.05)。结论:抑制circ_0072088表达可通过靶向miR-578而降低类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力。