长链非编码RNA LINC00963在喉鳞状细胞癌中的表达及其对Hep-2细胞增殖及凋亡的影响

目的检测基因间长链非编码RNA 00963(LINC00963)在喉鳞状细胞癌组织及喉癌细胞Hep-2中的表达及其对Hep-2细胞增殖及凋亡的影响。方法聚合酶链式反应和免疫组化检测喉鳞状细胞癌组织及Hep-2细胞中LINC00963的表达水平;CCK-8及流式细胞术体外水平检测沉默LINC00963表达对细胞增殖及细胞凋亡的影响;荷瘤裸鼠实验检测LINC00963对肿瘤生长的影响;Ki-67及TUNEL染色体内水平检测LINC00963对Hep-2细胞增殖及凋亡的影响。结果41例喉鳞状细胞癌组织中LINC00963的表达水平高于癌旁组织。LINC00963在Hep-2细胞中的表达也明显高于永生化鼻咽上皮NP-69细胞。沉默Hep-2细胞中LINC00963的表达后,细胞增殖速度下降,凋亡细胞比例增高(P<0.05)。此外,与LINC00963 NC组相比,LINC00963 shRNA组细胞荷瘤裸鼠肿瘤生长明显受到抑制、Ki-67阳性细胞比例降低、TUNEL阳性细胞比例增高(P<0.05)。结论LINC00963在喉鳞状细胞癌组织及细胞中异常高表达,并可在体内及体外水平促进Hep-2细胞增殖、抑制细胞凋亡。

LINC00963通过miR-146a-5p/NFE2L1轴调控胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

背景长基因间非编码RNA 00963(long intergene non-coding RNA 00963,LINC00963)在肿瘤表达上调,但LINC00963在胃癌中的功能和作用机制并未阐明.Starbase预测显示微小RNA(microRNA,miR)-146a-5p可能是LINC00963的靶基因,核因子类红细胞2相关因子1(nuclear factor erythroid-2 like 1,NFE2L1)可能是miR-146a-5p的靶基因.本研究假设LINC00963可能通过调控miR-146a-5p/NFE2L1轴表达影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭.目的探讨LINC00963对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制.方法选取42例胃癌患者的癌组织及癌旁组织,实时定量PCR(RT-qPCR)检测胃癌组织中LINC00963表达水平;RT-qPCR检测胃癌细胞系SNU-1、AGS、HS-746T中LINC00963、miR-146a-5p和NFE2L1 mRNA的表达水平;将胃癌细胞SNU-1分为正常对照(NC)组、si-LINC00963组、si-NFE2L1组、si-NC组、miR-146a-5p组、miR-NC组、si-LINC00963+pcDNA-NC组、si-LINC00963+pcDNA-NFE2L1组;CCK-8检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测LINC00963、miR-146a-5p、NFE2L1之间的靶向关系.结果胃癌组织及胃癌细胞系SNU-1、AGS、HS-746T中LINC00963表达水平升高,胃癌细胞系中miR-146a-5p表达水平降低,NFE2L1 mRNA表达水平升高(P<0.05).LINC00963、NFE2L1低表达或miR-146a-5p高表达,胃癌细胞SNU-1的活性降低,细胞迁移和侵袭数量减少(P<0.05).高表达NFE2L1可以逆转LINC00963低表达对SNU-1细胞的作用.LINC00963靶向调控miR-146a-5p;miR-146a-5p靶向调控NFE2L1.结论LINC00963低表达通过调控miR-146a-5p/NFE2L1轴抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭.

长链基因间非编码RNA 00963通过靶向微小RNA-148b-3p对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链基因间非编码RNA00963(LINC00963)对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制。方法本研究于2018年8月至2019年5月进行;正常结直黏膜上皮细胞NCM460以及结直肠癌细胞系HT29、SW480、SW1116购自中国科学院上海细胞库,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)和LINC00963的表达水平;双荧光素酶报告实验检测miR-148b-3p和LINC00963的靶向关系。将HT29细胞分为miR-NC组、miR-148b-3p组、si-NC组、si-LINC00963组、si-LINC00963+anti-miR-NC组、si-LINC00963+anti-miR-148b-3p组;蛋白质印迹法(Western Blotting)检测蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭。结果与NCM460细胞相比,HT29、SW480、SW1116细胞中miR-148b-3p的表达水平显著降低[(0.32±0.04)、(0.48±0.04)、(0.39±0.04)比(1.03±0.09)],LINC00963的表达水平显著升高[(3.13±0.31)、(2.76±0.27)、(2.91±0.28)比(1.00±0.09)],差异有统计学意义(P<0.05)。LINC00963靶向调控miR-148b-3p的表达。干扰LINC00963后,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平降低,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)表达水平升高,HT29细胞活性[48 h为(0.43±0.04)比(0.65±0.06),72 h为(0.56±0.05)比(1.05±0.09)]降低,及迁移数量减少[(39.65±3.42)个比(81.24±8.06)个],侵袭数量减少[(32.14±3.28)个比(69.54±6.27)个],差异有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-148b-3p后,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达水平降低,p21表达水平升高,HT29细胞活性[48 h为(0.49±0.04)比(0.67±0.06),72 h为(0.62±0.06)比(1.06±0.09)]降低,及迁移数量减少[(45.32±4.28)个比(86.27±8.25)个],侵袭数量减少[(39.54±4.03)个比(73.65±7.24)个],差异有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-148b-3p表达可逆转干扰LINC00963对HT29细胞的作用。结论干扰LINC00963可通过上调miR-148b-3p抑制结直肠癌HT29细胞的增殖、迁移和侵袭。

LINC00963靶向miR-144-5p调控脑胶质瘤细胞凋亡及放射敏感性

目的探讨LINC00963靶向miR-144-5p对脑胶质瘤细胞凋亡及放射敏感性的影响。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脑胶质瘤组织和与正常脑组织中LINC00963和miR-144-5p的表达水平。利用StarBase在线预测、荧光素酶报告基因实验及RT-qPCR验证LINC00963和miR-144-5p的靶向关系。干扰LINC00963表达、过表达miR-144-5p后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印记(Western blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase3)蛋白的表达,克隆形成实验检测细胞存活分数,并绘制单击多靶模型拟合曲线。结果与正常脑组织比较,脑胶质瘤组织中LINC00963的表达显著升高,miR-144-5p的表达显著降低(P<0.05)。LINC00963靶向负性调控miR-144-5p表达。沉默LINC00963或过表达miR-144-5p后,Bcl-2的表达显著降低,Bax和cleaved-caspase3的表达显著升高,细胞凋亡率和放射敏感性显著增加(P<0.05)。抑制miR-144-5p表达逆转干扰LINC00963表达对脑胶质瘤U251细胞凋亡和放射敏感性的影响(P<0.05)。结论干扰LINC00963通过上调miR-144-5p进而促进脑胶质瘤细胞凋亡并增加其放射敏感性。

LINC00963靶向miR-525-5p调控LPS诱导的牙周膜细胞损伤的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA LINC00963是否通过靶向miR-525-5p调控LPS诱导的牙周膜细胞损伤。方法:分离培养牙周膜细胞,分别转染si-LINC00963、miR-525-5p和anti-miR-525-5p,用LPS处理形成炎性损伤细胞模型。采用RT-qPCR、ELISA、流式细胞术、Western blot检测牙周膜细胞中LINC00963、miR-525-5p表达、炎症因子TNF-α、IL-1β水平、细胞凋亡率。双荧光素酶报告实验分析LINC00963对miR-525-5p的靶向调控。结果:转染si-LINC00963或miR-525-5p过表达降低了LPS诱导的牙周膜细胞中TNF-α、IL-1β水平、凋亡率、Bax蛋白水平,提高了Bcl-2蛋白水平(P<0.05)。LINC00963靶向调控miR-525-5p的表达。下调miR-525-5p表达逆转了si-LINC00963表达对LPS诱导的牙周膜细胞损伤的作用。结论:干扰LINC00963通过靶向miR-525-5p,抑制LPS诱导的牙周膜细胞凋亡和炎症因子表达。

LINC00963通过miR-214-5p/SEMA4C调控结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨基因间长链非编码RNA00963(LINC00963)对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法:通过LncBase Predicted v.2预测LINC00963和miR-214-5p的调控关系并通过双荧光素酶实验进行验证,StarBase v3.0预测LINC00963和SEMA4C相关性。常规培养结直肠癌细胞系HCT116、SW480,将结直肠癌细胞分为si-nc组、si-LINC00963组、miR-nc组、miR-214-5p mimic组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测LINC00963、miR-214-5p和SEMA4C的表达水平,细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖,划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。Western blot法检测细胞中SEMA4C蛋白表达水平。结果:通过LncBase Predicted v.2预测发现LINC00963和miR-214-5p存在结合位点,StarBase v3.0显示LINC00963和SEMA4C呈正相关,双荧光素酶报告实验显示LINC00963与miR-214-5p存在相互作用。在HCT116、SW480细胞转染24 h后,与si-nc组比较,si-LINC00963组结直肠癌细胞增殖活力、划痕愈合力和侵袭细胞的数量均减弱,细胞中miR-214-5p表达增高,SEMA4C的mRNA和蛋白表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);将miR-214-5p mimic同样转染至HCT116、SW480细胞24 h后,与miR-nc组比较,miR-214-5p mimic组miR-214-5p表达增高,SEMA4C的mRNA和蛋白表达水平显著下降,结直肠癌细胞增殖活力、划痕愈合力和侵袭细胞的数量均减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:LINC00963在结直肠癌中呈现高表达,下调其表达可增加miR-214-5p的表达,降低SEMA4C的表达,从而抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。

基因间长链非编码RNA00963通过靶向miRNA-511-3p调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的探讨基因间长链非编码RNA00963(LINC00963)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法常规培养正常胰腺上皮细胞h TERT-HPNE和胰腺癌细胞系Capan-1、SW1990、Pa Tu8988,将Capan-1细胞分为NC组、si-NC组、si-LINC00963组、pc DNA-NC组、pc DNA-LINC00963组、mi RNA-NC组、mi RNA-511-3p组、anti-mi RNA-NC组、anti-mi RNA-511-3p组、si-LINC00963+anti-mi RNA-NC组、si-LINC00963+anti-mi RNA-511-3p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测LINC00963和mi RNA-511-3p的表达水平,蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9的表达水平,细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,双荧光素酶报告实验检测LINC00963和mi RNA-511-3p的靶向调控关系。结果与正常胰腺上皮细胞h TERT-HPNE比较,胰腺癌细胞系Capan-1、SW1990、PaTu8988中LINC00963相对表达量均升高,mi RNA-511-3p相对表达量均降低(P﹤0.05)。与si-NC组比较,siLINC00963组中cyclin D1、MMP2、MMP9相对表达量均降低,细胞活性降低,细胞迁移和侵袭数目均减少(P﹤0.05);与mi RNA-NC组比较,mi RNA-511-3p组中cyclin D1、MMP2、MMP9相对表达量均明显降低,细胞活性明显降低,细胞迁移和侵袭数目均明显减少(P﹤0.01)。mi RNA-511-3p与LINC00963野生型报告质粒共转染后Capan-1细胞的荧光素酶活性明显低于mi RNA-NC与LINC00963野生型报告质粒共转染后的细胞(P﹤0.01)。与si-LINC00963+anti-mi RNA-NC组比较,si-LINC00963+anti-mi RNA-511-3p组中cyclin D1、MMP2、MMP9相对表达量均升高,细胞活性升高,细胞迁移和侵袭数目均增加(P﹤0.05)。结论低表达LINC00963可通过靶向上调miRNA-511-3p的表达抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

LINC00963靶向miR-1224-5p调控乳腺癌细胞增殖及放射敏感性的分子机制研究

这项研究探讨长基因间非编码RNA 00963(long intergene noncoding RNA00963,LINC00963)通过靶向miR-1224-5p调控乳腺癌细胞增殖及放射敏感性的分子机制。使用qRT-PCR检测乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MDA-MB-468、MCF-7)中LINC00963和miR-1224-5p的相对表达情况。将MDA-MB-231细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-LINC00963组(转染si-LINC00963)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-1224-5p组(转染miR-1224-5p)、siLINC00963+anti-miR-NC组(共转染si-LINC00963和anti-miR-NC)、si-LINC00963+anti-miR-1224-5p组(共转染si-LINC00963和anti-miR-1224-5p)。MTT检测细胞增殖情况;Western blot检测细胞周期素D1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达情况;克隆实验检测细胞放射敏感性;双荧光素酶报告实验检测LINC00963和miR-1224-5p的靶向关系。在乳腺癌细胞中LINC00963相对表达量明显增加,miR-1224-5p相对表达量显著降低;抑制LINC00963及过表达miR-1224-5p降低乳腺癌细胞增殖活性和细胞存活分数,并下调CyclinD1、PCNA蛋白表达水平。LINC00963靶向调控miR-1224-5p,干扰miR-1224-5p可逆转抑制LINC00963表达对乳腺癌细胞增殖和放射敏感性的影响。LINC00963通过靶向抑制miR-1224-5p增加乳腺癌细胞放射敏感性,并抑制细胞增殖。

长链非编码RNA LINC00963对垂体腺瘤细胞恶性表型的影响

目的探究长链非编码RNA LINC00963(LncRNA)对垂体腺瘤细胞恶性表型的影响。方法取大鼠垂体腺瘤细胞GH3,将其随机分为空白组、第一转染组和第二转染组。第一和第二转染组分别转染阴性对照片段和LINC00963小干扰RNA(siRNA)干扰序列,空白组细胞不做任何处理。以Trannswell法检测垂体腺瘤细胞GH3侵袭能力,以划痕实验检测垂体腺瘤细胞GH3迁移能力,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测垂体腺瘤细胞GH3的增殖抑制率,以原位末端标记(TUNEL)法检测垂体腺瘤细胞GH3凋亡情况。结果空白组、第一转染组和第二转染组侵袭数分别为(93.37±8.86),(91.04±8.71)和(68.71±6.65)个;迁移率分别为(69.27±6.67)%,(63.35±5.94)%和(41.37±3.92)%;增殖抑制率分别为(6.12±0.47)%,(6.43±0.51)%和(19.23±1.78)%;凋亡率分别为(5.14±0.47)%,(3.05±0.29)%和(17.28±1.65)%。第一转染组与空白组相比较,细胞侵袭数、迁移率、增殖率和凋亡率差异均无统计学意义(P>0.05);第二转染组与第一转染组相比较,细胞侵袭数、迁移率、增殖率和凋亡率差异均有统计学意义(P<0.05)。结论长链非编码RNA LINC00963可促进垂体腺瘤细胞侵袭、迁移和增殖能力,并减少细胞凋亡。

长基因间非编码RNA963不同可变剪接体在胃癌细胞系中的表达和作用

目的探讨长基因间非编码RNA963(LINC 00963)不同可变剪接体(V)在胃癌(GC)细胞系中的表达和作用。方法取对数生长期的GC细胞系AGS、MKN45、HGC-27、MGC803及胃正常黏膜细胞系GES-1,采用常规聚合酶链式反应(PCR)扩增LINC 00963、扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和克隆测序验证LINC 00963存在于GC中的多个可变剪接体,采用荧光定量PCR检测上述细胞中LINC 00963 V表达量、5′cDNA末端快速扩增技术(5′RACE)分析LINC 00963 V的转录起始位点、美国国家生物技术信息中心(NCBI)开放阅读框查找器初步分析不同V蛋白编码能力;取对数生长期GC HGC-27细胞,采用基因沉默技术敲低LINC 00963-V1,设对照(si-NC)组和敲低组(si-V1-a、si-V1-b及si-V1-a+b),免疫印迹分析各组HGC-27细胞中BCL2相关X凋亡调节因子(Bax)、BCL2凋亡调节因子(Bcl-2)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达。结果克隆测序及琼脂糖凝胶电泳明确LINC 00963基因至少存在3个未见报道的V,分别命名为LINC 00963-V1、V2及V3;实时荧光定量PCR结果显示,与GES-1细胞系相比,LINC 00963-V1、V2在HGC-27细胞系中高表达(P<0.05);5′RACE探寻到多个转录起始位点,开放阅读框分析显示新发现的V蛋白编码能力较弱;与si-NC组相比,si-V1-a、si-V1-b及si-V1-a+b组HGC-27细胞Caspase-3表达增高、Bcl-2表达降低,si-V1-a组和si-V1-b组Bax表达增高(P<0.05)。结论LINC 00963存在3个及以上未见报道的V,其中V1在GC细胞系中高表达且有抑制肿瘤细胞凋亡相关基因表达的作用。