特定序列寡核苷酸MT01对牙龈卟啉单胞菌感染的成骨细胞的增殖、细胞周期及凋亡的影响

目的通过观察MT01对感染状态下成骨细胞细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,探讨MT01对牙周致病菌感染的成骨细胞生物学性能的影响。方法以人成骨细胞MG63为目的细胞,分别与PBS、MT01、Cp G ODN、甲硝唑和庆大霉素共培养3 h后,按感染复数100∶1的比例加入牙周致病菌牙龈卟啉单胞菌共培养,检测培养24 h和48 h后MG63细胞的增殖、细胞周期及凋亡,以PBS作为空白对照,以牙龈卟啉单胞菌和PBS共培养作为阴性对照。结果 MT01+牙龈卟啉单胞菌组细胞增殖高于空白对照组(P<0.05),G1期细胞百分比低于阴性对照组,而S期细胞百分比高于阴性对照组(P<0.05),细胞早期凋亡率低于阴性对照组(P<0.05)。结论 MT01可促进感染状态下成骨细胞的细胞增殖,降低G1期细胞百分比,促使细胞进入S期并抑制细胞早期凋亡。

MT01对Pg感染的成骨细胞MG63特异性成骨相关因子表达的影响

目的:通过检测MT01对牙周致病菌Pg感染的成骨细胞MG63细胞内特异性成骨相关因子基因表达水平,探讨MT01对感染状态下成骨细胞成骨分化作用的影响。方法:选取生长状态稳定的人成骨样细胞MG63接种于6孔板,分别加入质量浓度1mg/L的特定序列寡核苷酸MT01和等体积PBS,共孵育3h后,加入感染复数MOI=100∶1的Pg菌悬液(对照组加等体积PBS)。即实验分为:MT01+Pg、MT01、Pg和空白对照4组,Realtime PCR检测2、4、6、8、12、24h特异性成骨相关因子Runx2,SP7mRNA的表达。结果:在有无Pg感染的状态下,MT01均可上调成骨细胞MG63细胞内成骨相关因子Runx2,SP7mRNA的表达,但在不同时间点,MT01调控Runx2,SP7mRNA表达上调的能力存在差异。结论:MT01可以促进牙周致病菌感染下的成骨细胞的成骨向分化。

MT01对感染状态人成骨样细胞内ALP活性及mRNA表达的影响

目的:通过检测MT01对牙龈卟啉单胞菌感染的人成骨样细胞内特异性成骨相关因子ALP活性及mRNA表达水平的改变,探讨MT01对感染状态下人成骨样细胞成骨向分化的影响。方法:选取状态良好的MG63细胞接种于6孔板内,2个MT01组加入质量浓度为1mg/L的MT01,共孵育3h后,相应组加入感染复数为100∶1的Pg菌悬液。实验分为:空白对照、MT01、Pg和MT01+Pg4组,碱性磷酸酶测试盒测定24h后上清液及细胞内ALP活性。Real-time PCR检测2、4、6、8、12、24h特异性成骨相关因子ALP mRNA的表达。结果:在感染与非感染情况下,MT01均可促进ALP活性,且上调MG63细胞内成骨相关因子ALP mRNA表达,其表达上调呈时间依赖性。结论:MT01可促进感染及非感染状态下MG63内ALP基因表达水平,提高ALP活力。

MT01对实验性牙移动大鼠牙周组织中TLR9、TRAF6和IL-6表达水平的影响

目的:探讨Toll样受体9(TLR9)及其下游炎症因子白细胞介素6(IL-6)在实验性大鼠牙移动过程中牙周组织中表达水平的变化,以及MT01对牙周组织TLR9、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和IL-6表达水平的影响,阐明其相关机制。方法:30只雄性Wistar大鼠分为无MT01干预组(n=24)和MT01干预组(n=6)。其中,无MT01干预大鼠右侧加力为实验组,左侧不加力为对照组;MT01干预大鼠左侧上颌第一磨牙颊侧黏膜注射MT01+加力为实验组,右侧上颌第一磨牙颊侧黏膜注射PBS+加力作为对照组。0.49N力近中移动大鼠上颌第一磨牙,无MT01干预大鼠于加力后第3、7、14和21天处死,MT01干预组于加力后第7天处死。分别获取各组大鼠上颌第一磨牙近远中侧牙槽骨,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测张力侧和压力侧牙周组织中TLR9、TRAF6和IL-6mRNA的表达水平。结果:无MT01干预大鼠中,实验组张力侧和压力侧牙周组织中IL-6和TLR9表达水平均明显高于对照组(P<0.05),且加力7d后两者表达水平达高峰;MT01干预大鼠中,加力7d后实验组张力侧及压力侧牙周组织中TLR9表达水平较对照组降低(P<0.01),实验组压力侧牙周组织中TRAF6表达水平较对照组降低(P<0.01)。结论:MT01能够抑制实验性牙移动大鼠牙周组织中TLR9及下游相关因子TRAF6的表达,进而产生抑制牙移动过程中牙周组织炎症反应的作用。

基于互连网络系统故障的新型自适应诊断算法

互连网络的故障诊断是网络系统可靠性分析的重要内容。PMC模型是一种重要的网络故障模型。针对具有哈密顿环的互连网络(也称做哈密顿网络),利用分治回环思想,提出了一种新的基于PMC故障模型自适应的诊断算法。其核心思想是,对哈密顿网络进行序列划分,然后对得到的每个01序列的结节进行回环诊断,最后利用回环诊断的结果对非01序列的节点进行诊断。对于一个具有多个01序列的互连网络,该算法通过有限次轮回的测试,能准确地定位系统中的故障节点,对于正确节点的诊断可靠度能无限接近100%。当系统中存在的回测边越多时,该算法的诊断效果越好。

牛冠状病毒BCV-Aks-01新疆南疆株全基因组序列测定及其分子特征分析

为掌握牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)BCV-Aks-01新疆南疆株的全基因组序列、分子结构特征及遗传变异情况。本研究以新疆南疆某牛场BCV-Aks-01阳性样本为基础,以GenBank中BCoV参考株设计扩增引物和测序引物,提取样本中病毒核酸,对BCV-Aks-01株进行全基因组扩增、测序、构建系统发生树及序列分析。结果表明,BCV-Aks-01新疆南疆株为BCoV,其全基因组长为30 975bp,与GenBank收录的参考株比较,核苷酸同源性高达98.8%,属于β类冠状病毒2a亚类,具有β类冠状病毒共同结构特征。首次获得BCV-Aks-01新疆南疆株全基因组序列并阐明了其基因组分子结构特征。

牙周炎患者自身组织核酸刺激小鼠巨噬细胞后对破骨相关因子mRNA表达的影响

目的检测牙周炎患者自身组织核酸刺激巨噬细胞后破骨相关因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-12(IL-12)p35、IL-12p40、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、活化T细胞核因子1(NFATc1)、核激活因子κB受体(RANK)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达,观察牙周炎患者自身组织核酸对巨噬细胞向破骨细胞分化的影响作用。方法采集翻瓣术中慢性牙周炎患者炎症牙周组织及正畸患者健康牙拔除术获取的健康牙周组织,提取组织总RNA逆转录cDNA。培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,加入质量浓度1μg·mL-1的特定序列寡核苷酸MT01共孵育3 h后(以1μg·mL-1的PBS作为对照),加入已提取的炎症牙周组织及健康牙周组织cDNA(质量浓度为1μg·mL-1)。实验分4组:健康组织cDNA,炎症组织cDNA,MT01+健康组织cDNA,MT01+炎症组织cDNA。4组细胞分别孵育3、6、12、24 h,采用实时定量聚合酶链反应法检测破骨相关因子IL-6、IL-12p35、IL-12p40、MMP-9、NFATc1、RANK及TNF-αmRNA的表达,进行两两组间比较。结果牙周炎患者自身组织核酸可上调RAW264.7破骨相关因子IL-6、IL-12p35、IL-12p40、MMP-9、NFATc1、RANK及TNF-αmRNA的表达;在免疫抑制剂MT01的作用下,牙周炎患者自身组织核酸上调RAW264.7内破骨相关因子mRNA的表达状况受到抑制。结论牙周炎患者自身组织核酸可以影响小鼠巨噬细胞向破骨细胞的分化。