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山羊痘病毒非必需基因区gp024基因的鉴定
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作者 雷震 王芳 +4 位作者 马文戈 黄炯 符子华 于力 冉多良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期842-845,共4页
为筛选山羊痘病毒(GTPV)的外源基因插入区,本研究以GTPV Pellor株为模板,设计2对引物,PCR扩增AV41株GTPV_gp024基因相邻上下游长度约1.1kb的同源重组片段,分别插入质粒pGPT-EGFP中。插入部位在痘病毒双向启动子p11~p7.5启动的报告基因E... 为筛选山羊痘病毒(GTPV)的外源基因插入区,本研究以GTPV Pellor株为模板,设计2对引物,PCR扩增AV41株GTPV_gp024基因相邻上下游长度约1.1kb的同源重组片段,分别插入质粒pGPT-EGFP中。插入部位在痘病毒双向启动子p11~p7.5启动的报告基因EGFP-GPT上下游,构建转移载体pEG024,并转染已感染GTPV AV41病毒的LT细胞,经GPT加压筛选7代后得到重组病毒。结果显示,重组病毒稳定表达报告基因EGFP,从而表明GTPV_gp024基因能够作为外源基因的插入区。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 GTPV_gp024基因 重组病毒
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羊口疮024基因的表达、多抗制备及亚细胞定位 被引量:2
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作者 苏莉 俞赵荣 +7 位作者 杨侃侃 王元红 钟灵毓 崔佣楸 张高峰 张谦 王勇 李永东 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2018年第10期1117-1121,共5页
目的克隆表达羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)024基因,制备多克隆抗体,检测其免疫原性,并对其进行亚细胞定位分析。方法根据GenBank中羊口疮病毒024基因序列设计引物,进行PCR扩增。将其亚克隆至表达载体,构建原核重组质粒pGEX-6P-1-024以及... 目的克隆表达羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)024基因,制备多克隆抗体,检测其免疫原性,并对其进行亚细胞定位分析。方法根据GenBank中羊口疮病毒024基因序列设计引物,进行PCR扩增。将其亚克隆至表达载体,构建原核重组质粒pGEX-6P-1-024以及真核重组质粒pEGFP-N1-024。将原核重组质粒转化Rosetta (DE3)细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定024蛋白的表达情况。纯化后的024蛋白免疫BALB/c雌鼠,获得血清并制备多克隆抗体,进行Western-blot分析。将构建的真核质粒转染MDBK细胞,24h后通过免疫荧光观察其在细胞中的表达及亚细胞定位。结果 SDS-PAGE结果表明,羊口疮病毒024基因在Rosetta (DE3)细胞中正确表达,大小为59kDa。Western-blot结果表明024蛋白能与制备的多抗发生特异性反应,具有良好的反应原性。荧光显微镜下结果表明024蛋白转染MDBK细胞后主要在细胞质中表达。结论本实验为后续深入研究ORFV 024基因功能和致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 024基因 表达 多克隆抗体 亚细胞定位
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牛结节性皮肤病病毒Cycleave PCR检测方法的建立 被引量:2
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作者 南文龙 巩明霞 +7 位作者 陆游 李金明 王永杰 哈达 李林 杜秋明 陈义平 吴晓东 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1145-1148,1174,共5页
将GenBank中牛结节性皮肤病病毒与同属的山羊痘病毒和绵羊痘病毒全基因组进行比较,筛选设计特异性引物和探针,建立Cycleave PCR检测方法。结果显示,建立的方法在40 min内即可特异性地检出牛结节性皮肤病病毒核酸,与山羊痘病毒、绵羊痘... 将GenBank中牛结节性皮肤病病毒与同属的山羊痘病毒和绵羊痘病毒全基因组进行比较,筛选设计特异性引物和探针,建立Cycleave PCR检测方法。结果显示,建立的方法在40 min内即可特异性地检出牛结节性皮肤病病毒核酸,与山羊痘病毒、绵羊痘病毒、口蹄疫病毒、牛病毒性腹泻/黏膜病病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、蓝舌病病毒均无交叉反应,该方法的最低检出限为1.13拷贝/μL。平行检测89份临床样本,与国标荧光定量PCR方法相比,本方法敏感性100.0%,特异性90.0%,总符合率为95.5%。结果表明,本试验建立的Cycleave PCR检测方法敏感、特异且操作简便,适用于牛结节性皮肤病病毒的高通量、快速检测。 展开更多
关键词 牛结节性皮肤病病毒 Cycleave PCR ORF024基因
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