甾体衍生物02F04通过非核受体上调PAM212细胞胸腺基质淋巴细胞生成素的研究

目的:探索02F04诱导TSLP表达是否通过核受体介导。方法:一系列浓度的6种核受体,包括视黄酸受体(RAR)、维甲酸X受体(RXR)、过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR)、维生素D受体(VDR)、糖皮质激素受体(GR)和肝X受体(LXR)的激动剂和抑制剂,单用或者与10 μmol/L 02F04联合刺激PAM212细胞24 h后,ELISA法测定培养上清中TSLP的蛋白水平,MTT法检测PAM212细胞的存活率。10 μmol/L 02F04刺激PAM212细胞4、8、12或24 h,实时荧光定量PCR 反应测定细胞中相应核受体靶向基因的表达。结果: VDR激动剂不能增加PAM212细胞中TSLP的表达。02F04不能诱导RAR、RXR和PPAR靶向基因的表达,且RARα、PPARγ和PPARδ的激动剂及抑制剂单用或与02F04合用后均不影响TSLP的产生;RARγ、RXR和GR激动剂可抑制细胞基本水平及02F04诱导水平的TSLP产生,而抑制剂未呈现出相反的结果。02F04可激活LXR并增加靶向基因ABCA1的表达,但LXR激动剂不能诱导TSLP产生,LXR抑制剂也不能抑制02F04诱导的TSLP表达。结论: 02F04具有甾体结构,但诱导TSLP的产生不能通过核受体作用而介导。

不同细胞培养基对PAM212细胞产生TSLP的影响

比较MEMα、RPMI1640、DMEM和EMEM 4种细胞培养基中PAM212细胞产生胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的不同,为研究PAM212细胞产生TSLP的作用机制提供适宜的细胞培养基。采用ELISA法测定培养上清中TSLP的蛋白水平,MTT法检测PAM212细胞的存活率。无刺激时,PAM212细胞在培养基DMEM和EMEM中产生的TSLP是MEMα和RPMI1640中的5～6倍,但是药物刺激后TSLP的增加倍率在MEMα和RPMI1640中更高。同样,细胞生存率基本不变时,02F04、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)或12-邻-14-烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)刺激PAM212后虽然能在DMEM中产生更多的TSLP,但是在MEMα中诱导的TSLP增加倍率更高。PAM212细胞产生TSLP的水平与其从播种开始使用的培养基直接相关,而与复苏及播种前使用的培养基关系不大;刺激前无论哪个时间点停止添加10%FBS于细胞培养液中,PAM212细胞产生的TSLP均显著减少,且停止添加FBS的时间越长,细胞存活率降低越多。总之,PAM212在不同细胞培养基中产生TSLP的水平不同。如果想无刺激时PAM212细胞能产生较高水平的TSLP,选用DMEM培养基较为适宜;如果想研究药物诱导TSLP产生的作用机制,选用刺激后TSLP增加倍率高的MEMα培养基较为适宜。