维生素K_2对骨髓增生异常综合征细胞株MDS-JSN04生长抑制作用及其机理研究

为了探讨维生素K2(VK2)对骨髓增生异常综合征细胞株MDSJSN04生长的抑制作用及其作用机制,采用细胞形态学方法观察VK2处理后细胞形态的改变;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测VK2对细胞生长的抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡、细胞周期变化和髓系分化抗原CD11b、CD13的表达情况;RTPCR技术检测抗凋亡基因bcl2、survivin和促凋亡基因bax的表达;用发光比色法检测caspase3活性。结果表明:VK2作用细胞株72小时后,细胞呈现典型的凋亡细胞的形态特征;细胞的凋亡率随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增高,经统计学处理与对照组比较有显著性差异(P<0.01);S期和G2期细胞随着药物浓度的增加而逐渐减少,G0/G1期细胞逐渐增多,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),细胞被阻滞在G0/G1期,而且在G0/G1期前出现明显的亚G1期细胞即凋亡峰;抗凋亡基因bcl2、survivin表达随着VK2浓度的增高而明显下调((P<0.05),而促凋亡基因bax表达无明显变化((P>0.05),caspase3的活性随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强。结论:VK2主要是通过激活caspase3途径诱导MDSJSN04细胞发生凋亡,同时抗凋亡基因bcl2和survivin也参与了凋亡调控过程。

1950MHz射频电磁场对SRA01/04细胞周期和凋亡的影响

目的:研究显示射频电磁场与白内障的发生关系密切,为了评价晶状体上皮细胞在射频电磁场诱导的白内障发生中的作用,本实验探讨了1950 MHz射频电磁场暴露对人眼晶状体上皮细胞株(SRA01/04)细胞周期与凋亡的影响。方法:将处于对数生长期的SRA01/04细胞暴露或假暴露于频率为1950 MHz,比吸收率(SAR)为2.79 W/kg的射频电磁场中,每天暴露1 h,每周暴露5天,连续暴露4周。暴露结束后立即收集细胞,显微镜下观察细胞形态变化,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活力,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期与凋亡。结果:与假辐照组相比,暴露组细胞形态未见明显变化;细胞存活力、细胞周期分布及细胞凋亡率亦无显著改变(P>0.05)。结论:1950 MHz射频电磁场暴露4周对SRA01/04细胞的形态、活力、周期以及凋亡均无明显影响,提示在本实验条件下1950 MHz射频电磁场不会诱发白内障的发生。

采用噬血细胞综合征-04方案治疗噬血细胞综合征5例

目的 观察噬血细胞综合征（HLH）-04方案治疗儿童HLH5例的早期疗效。方法 回顾性分析确诊为HLH患儿5例的临床特点，总结其对以鬼臼乙叉甙（VP16）为基础的免疫化学方案治疗的反应及转归。结果 HLH患儿5例中4例在早期治疗阶段完全缓解（CR），CR时间17～22d（平均18．8d）；另1例规则采用VP16治疗84d未CR，改用鬼臼甲叉甙（VM26）于d130CR；病例均存活9～11个月，目前仍CR。1例治疗14d时出现手足震颤，怀疑为环孢素（CSA）不良反应，改用骁悉替代后手足震颤消失。结论 儿童HLH可通过采用HLH-04方案的免疫化学治疗，早期得以有效控制。

2型糖尿病大血管病变患者人类白细胞抗原-DRB1*04等位基因多态性分析

目的分析2型糖尿病(DM)及其大血管病变患者人类白细胞抗原(HLA)-DRB1*04亚型的遗传多态性,探索糖尿病大血管病变的发病机制。方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerasechainreaction-sequencespecificprimer,PCR-SSP)技术对合并/未合并大血管病变的北方汉族2型DM患者的HLA-DRB1*04亚型等位基因进行检测。结果东北地区汉族2型DM患者中共检出9种HLA-DRB1*04亚型。2型DM伴大血管病变组DRB1*0404等位基因频率较2型DM无并发症组显著增高;但DRB1*0403等位基因频率较无并发症组显著减少。结论1型DM与2型DM可能具有相似的HLA遗传背景。DRB1*0404单倍型可能是2型DM患者发生大血管病变的易患基因,DRB1*0403单倍型可能是2型DM患者发生大血管病变的保护性基因。HLA-DRB1*0404等位基因是患免疫相关性疾病患者发生血管内皮功能失调,尤其是大血管病变的预测因子。

急性氧化应激状态下人晶状体上皮细胞株SRA01/04中衰老标记蛋白30、Caspase-3、Ca2+-ATP表达的变化

目的:探讨在急性氧化应激状态下人晶状体上皮细胞株SRA01/04内衰老标记蛋白30(SMP30)、Caspase-3、Ca^2+-ATP表达的变化。方法:通过慢病毒转染建立SMP30过表达(OE)组、过表达空载对照(NC-OE)组、SMP30沉默(KD)组及沉默空载(NC-KD)组SRA01/04细胞,RT-PCR和Western blotting检测SMP30含量鉴定细胞是否转染成功;用300μmol/L H2O2 作用2 h,构建急性氧化应激状态时,PCR检测各组细胞SMP30基因的表达情况,Western blotting检测各组细胞SMP30、Caspase-30和Ca^2+-ATP蛋白的表达量。结果:在正常状态时,OE组SMP30基因及其蛋白表达量高于NC-OE组(P<0.05),KD组的SMP30基因及其蛋白表达量低于NC-KD组(P<0.05)。OE组及KD组细胞SMP30基因表达量均出现增加(P<0.05),与正常状态时相比,急性氧化应激状态时OE组细胞SMP30蛋白表达上调(P<0.05);正常状态时,OE组Caspase-3蛋白表达量低于NC-OE组,KD组Caspase-3蛋白表达量高于NC-KD组(P<0.05)。急性氧化应激状态时,OE组Caspase-3蛋白表达量低于NC-OE组,KD组Caspase-3蛋白表达量低于NC-KD组(P<0.05)。在急性氧化应激状态时OE组Caspase-3蛋白表达量低于正常状态时;KD组的Caspase-3蛋白表达量高于正常状态时KD组(P<0.05)。在正常状态时,OE组Ca^2+-ATP蛋白表达量高于NC-OE组,KD组Ca^2+-ATP蛋白表达量低于NC-KD组(P<0.05)。在急性氧化应激状态时,OE组Ca^2+-ATP蛋白表达量高于NC-OE组,KD组Ca^2+-ATP蛋白表达量低于NC-KD组(P<0.05)。在急性氧化应激状态时OE组的Ca^2+-ATP蛋白表达量高于正常状态时(P<0.05)。结论:在急性氧化应激状态时,SMP30含量出现反应性增加,过表达SMP30可能对人晶状体上皮细胞株SRA01/04具有抗氧化、抗凋亡、增加钙调节活性的作用。

环境雌激素对卵巢癌细胞PEO4凋亡的影响

目的探讨膳食中的环境雌激素大豆异黄酮(genistein,GS)及玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对卵巢癌细胞PEO4凋亡的影响。方法将PEO4细胞在DMEM培养液(含10%小牛血清)中采用开放式单层贴壁培养,开始试验前将培养细胞用磷酸盐缓冲溶液洗涤后改为在无酚红DMEM培养液(含5%CDT-FBS)中继续培养5d,其目的是耗尽细胞内储存的雌激素。实验设溶剂对照、雌激素对照、抗雌激素对照及2个试验组。观察指标包括亚二倍体细胞的峰高及位置,DNA断裂片段及凋亡小体的形成情况。结果雌激素耗尽能够明显诱导PEO4细胞发生凋亡,在这时候往培养液中分别加入32×10-9mol/L及96×10-9mol/L的ZEA可抑制细胞的凋亡作用;而分别加入32×10-6mol/L及96×10-6mol/LGS对细胞处理72h可加重细胞的凋亡现象。结论ZEA具有雌激素效应,可模拟雌二醇抑制细胞的凋亡作用;GS具有抗雌激素效应,在较大剂量范围内可促进细胞的凋亡。

非生长因子依赖的MDS细胞系的建立及其生物学特性研究

本研究的目的是从骨髓增生异常综合征-慢性粒-单核细胞白血病(MDS-CMML)病人获取骨髓细胞,建立 非生长因子依赖的细胞株。该细胞株在不添加任何生长因子的含15％胎牛血清的RPMI 1640和DMEM混合培养 液中进行了培养,并分别从细胞株的形态、细胞表面抗原分子、细胞增殖、分化、凋亡等方面检测其生物学特性。结 果表明:在不添加任何生长因子的培养条件下该细胞株可以长期存活和生长,并能向单核及巨核细胞分化。结论: 成功建立了一株非生长因子依赖的MDS-JSN04(MDS-江苏南京04)细胞株,并阐明了其部分生物学特性。

松果菊苷固体脂质纳米粒的表征及体外细胞摄取评价

[目的]对本实验室前期处方优化的松果菊苷固体脂质纳米粒(ECH-SLN)的物理性质和体外细胞摄取情况进行评价,为今后眼部制剂的改进奠定基础。[方法]根据本实验室前期优化的处方,采用乳化-固化法制备ECH-SLN,运用差示扫描量热法(DSC)及X射线衍射法(XRD)表征其物理性质,并选取人角膜上皮HCEpiC细胞与人晶状体上皮SRA01/04细胞,对罗丹明123固体脂质纳米粒(Rhodamine123-SLN,Rh123-SLN)进行体外细胞毒性评价及细胞摄取研究。[结果]DSC结果显示仅松果菊苷和物理混合物(空白SLN∶松果菊苷=5∶1)在150℃出现松果菊苷的熔化吸热特征峰,空白SLN、ECH-SLN和物理混合物在110℃和230℃均出现SLN的两个熔化吸热特征峰;XRD结果显示松果菊苷和物理混合物在20°时出现明显的松果菊苷特征峰,空白SLN,ECH-SLN和物理混合物在20°~25°范围均显示SLN的范围特征峰;结果均表明松果菊苷作为药物以分子分散状态被包裹在固体脂质纳米粒(SLN)中;细胞活力影响实验结果显示Rh123-SLN浓度为5.13μg/mL和10.25μg/mL时对两种细胞均无明显毒性,与对照组相比无显著性差异;细胞摄取实验结果表明Rh123溶液不能被细胞所摄取,而Rh123-SLN的细胞摄取量与药物浓度和孵育时间呈正相关。[结论]ECH-SLN能够将松果菊苷递送到眼细胞,这可能为氧化性白内障的治疗提供一种有效的药物递送系统。

湖南地区携带HLA-B*27꞉04等位基因人群与强直性脊柱炎的易感性具有强相关性

目的:人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)B27是强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)的易感等位基因,HLA-B27抗原分型是临床诊断AS的重要指标,但目前的分型方法如序列特异引物聚合酶链反应技术(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)等仍存在一定的缺陷。因此,本研究旨在应用高分辨率聚合酶链反应直接测序分型法(polymerase chain reaction-sequence-based typing,PCR-SBT)分析B27亚型与湖南地区强直性脊柱炎易感性的相关性。方法:收集2020年1至12月在湘雅二医院门诊就医的116例疑似AS患者(疑似AS组)和121名健康志愿者(对照组)的外周血,采用PCR-SBT进行HLA-B基因分型。在疑似AS组患者中,23名患者最终被确诊为AS(AS确诊组),其余的93名未能确诊的患者为非AS确诊组。采用PCR-SBT和PCR-SSP检测116例疑似AS患者的HLA-B27分型,并比较2种方法的检测结果。结果:疑似AS组HLA-B27等位基因频率显著高于对照组[11.63%vs 2.48%;P<0.001,优势比(odds ratio,OR)=5.18,95%置信区间(confidence interval,CI)2.097~12.795]。疑似AS组和对照组均检出B*27:04、B*27:05、B*27:06、B*27:07。疑似AS组B*27:04等位基因频率明显高于对照组[9.48%vs 1.24%;P<0.001,OR=8.346,95%CI 2.463~28.282]。疑似AS组和AS确诊组B27阳性率(B27+/+和B27+/-)均显著高于对照组(分别χ^(2)=16.579,P<0.001;χ^(2)=94.582,P<0.001)。在AS确诊组中,21例为HLA-B27携带者,AS确诊组B27阳性率为91.3%。PCR-SBT方法可对HLA-B基因位点进行高分辨分型,其敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度均高于PCR-SSP法。结论:应用PCR-SBT检测出HLA-B*27:04与湖南地区AS具有强相关性。PCR-SBT可作为临床AS辅助诊断的优选方案。

氟18-成纤维细胞激活蛋白抑制剂-04与氟18-氟脱氧葡萄糖在胃中低分化腺癌患者显像中的对比研究

目的比较氟18-成纤维细胞激活蛋白抑制剂-04(^(18)F-FAPI-04)与氟18-氟脱氧葡萄糖(^(18)F-FDG)正电子发射断层扫描(PET)显像在胃中低分化腺癌患者的生物分布和诊断价值。方法选取2022年9月至2023年12月就诊于兰州大学第二医院核医学科的10例胃中低分化腺癌患者为研究对象。患者10 d内采用^(18)F-FDG和^(18)F-FAPI-04 PET/CT扫描,比较肿瘤组织和正常组织摄取两种显像剂的最大标准化摄取值(SUV_(max))和肿瘤与背景比(TBR),评估其生物分布和诊断价值。结果^(18)F-FAPI-04 PET/CT显像对恶性病灶的检出率较^(18)F-FDG PET/CT增加41%。给药60 min后,脑、甲状腺、心肌、血池、骨骼肌、肝、胰腺、脾、肾、结肠、前列腺、转移病灶和所有恶性病灶摄取^(18)F-FAPI-04和^(18)F-FDG的SUV_(max)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。转移性淋巴结和肝转移灶摄取^(18)F-FAPI-04和^(18)F-FDG的SUV_(max)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。^(18)F-FAPI-04与^(18)F-FDG显像肿瘤原发灶以瘤周正常组织、纵隔血池为背景的TBR比较,差异有统计学意义(P<0.05)。^(18)F-FAPI-04与^(18)F-FDG显像以纵隔血池为背景的转移性淋巴结、以肝实质为背景的肝转移灶、以脂肪组织为背景的腹膜转移灶、以骨组织为背景的骨转移灶、以肺实质为背景的肺转移灶的TBR比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论^(18)F-FAPI-04对胃中低分化腺癌显示出比^(18)F-FDG更优越的诊断性能。

牛轮状病毒的分离及其RT-PCR鉴定

采用MA104细胞从疑似轮状病毒腹泻犊牛粪样中进行轮状病毒分离,盲传4代后接种细胞出现明显细胞病变(CPE),对分离病毒进行核酸聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳条带为4∶2∶3∶2型,具备典型A群轮状病毒特征。依据NCBI等登录的牛轮状病毒的VP1基因序列设计一对引物,对其VP1基因进行克隆及序列分析,结果分离毒与国外牛轮状病毒分离株RF的核苷酸同源性为98.9%,与UK的核苷酸同源性为91.5%,证明分离毒株是一株牛轮状病毒。

噬血细胞综合征-04方案治疗小儿EB病毒相关性噬血细胞综合征

目的观察以噬血细胞综合征(hemophagocytic lymphohistiocytosis,HLH)-04方案为基础治疗儿童EB病毒(epstein-barr virus)相关性噬血细胞综合征(epstein-barr virus hemophagocytic lymphohistiocytosis,EBV-HLH)的疗效。方法采用回顾性分析法分析2005年4月至2008年4月本科12例确诊为儿童EB病毒相关性噬血细胞综合征患儿的临床特点,总结其治疗结果及转归情况。EB病毒感染的诊断,根据EB病毒血清抗体和(或)EB病毒-DNA呈阳性确诊。噬血细胞综合征的诊断依据噬血细胞综合征-04方案。噬血细胞综合征的治疗方法按噬血细胞综合征-04方案,遇效果不佳或有药物不良反应时适当改良,如以表鬼臼毒噻吩甲基苷(VM26)代替噬血细胞综合征-04方案中的鬼臼乙叉苷(VP16),以吗替麦考酚酯(cellcept,骁悉)代替环胞素A(CsA),吗替麦考酚酯+环胞素A代替鬼臼乙叉苷等。结果①临床表现:12例EB病毒相关性噬血细胞综合征患儿均表现为持续高热、脾大、血细胞减少;1例出现抽搐:8例患儿血清铁蛋白≥500 mg/L;6例三酰甘油≥3.0 mmol/L;5例纤维蛋白原≤1.5 g/L;8例外周血自然杀伤(natural killer,NK)细胞数量降低;所有患儿骨髓细胞涂片,均可见噬血细胞现象。②治疗反应:所有患儿中,1例确诊后放弃治疗;对接受治疗的11例患儿的中位随访时间为17个月(10～36个月)。治疗早期阶段:11例患儿完全缓解(complete remission,CR),平均中位随访时间为21 d。其中,10例患儿的完全缓解时间为14 d～42 d。1例采用规则鬼臼乙叉苷治疗后,反复复发,至治疗后的第112天,仍未缓解,改用表鬼臼毒噻吩甲基苷+吗替麦考酚治疗后,于治疗后的第118天完全缓解,其后一直持续缓解(continue complete remission,CCR)。维持治疗阶段:1例于治疗后第11个月复发,后失访;1例完成全部治疗停药后第11个月复发,现仍在治疗中。迄今,其余9例患儿的持续缓解时间为9～32个月。其中,8例患儿已停药观察,停药时间达1～19个月。结论儿童EB病毒相关性噬血细胞综合征大多可通过采用噬血细胞综合征-04方案的免疫化学治疗有效控制,对于使用鬼臼乙叉苷效果不佳的患儿,可改用表鬼臼毒噻吩甲基苷,表鬼臼毒噻吩甲基苷+吗替麦考酚替代,对于不能耐受环胞素A或疗效不佳者是另一可行的选择。

基于诊疗一体化放射性药物合成的全自动金属多功能卡套式模块设计及测试研究

目的:设计和测试一款国产全自动金属多功能卡套式模块,实现应用于肿瘤诊疗一体化的放射性药物安全、高效和稳定生产。方法:采用机械钣金和结构设计软件UG和Soidworks完成模块零部件设计及模拟装配后组装模块主机;基于C语言进行模块上位机控制程序编程设计。根据机电一体化思路,以“上位机-可编程逻辑控制器(PLC)-模块主机”交互方式,实现全自动化控制。在上位机控制软件中设置“镓68(^(68)Ga)-成纤维细胞活化蛋白抑制剂-04(^(68)Ga-FAPI-04)工艺程序”,进行^(68)Ga-FAPI-04的放射性自动合成。标记产物分别用放射性高效液相色谱仪(Radio-HPLC)和放射性薄层色谱扫描仪(Radio-iTLC)进行质量控制分析,并用于人胰腺癌细胞Panc-1异位移植瘤模型的微型正电子发射断层扫描(microPET)技术扫描显像动物实验。结果:经各冷实验进行功能测试,显示模块达到预设目标。该模块自动合成^(68)Ga-FAPI-04的合成效率为(72±3)%(10次实验),产物的放射化学纯度>99%,microPET结果中该标记探针在Panc-1荷瘤鼠肿瘤区域有明显的放射性摄取(4次实验)。结论:全自动金属多功能卡套式模块安全可行,可减少放射化学师的辐射暴露,其标记产物质量可靠,动物实验结果符合预期,该模块可保障放射性药物的稳定生产。

HLA-DRBl＊04等位基因多态性与乙型肝炎病毒感染结局关联分析

目的从分子遗传学角度探讨乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBv）感染结局与GLA—DRBl＊04等位基因的相关性。方法采用聚合酶链反应一序列特异性引物（polymerase chain reaction-sequence specific primers，PCR-SSP）技术检测HLA-DRBl＊04等位基因，并比较106例无症状HBV携带者（HBV携带组），93例慢性乙型肝炎患者、77例乙肝肝硬化者、102例HBV感染后自然恢复者（对照组）HIA-DRBl＊04等位基因频率及HBV不同复制状态下HLA-DRBl＊04等位基因频率。结果HBV携带组、慢性乙肝组、乙肝肝硬化组HLA-DRBl＊04等位基因频率高于对照组（分别为25．94％、26．34％、27．92％和14．22％，P〈0．01）；HLA—DRBl＊0401基因频率高于对照组（分别为20．91％、24．49％、22．09％和8．62％，P均〈0．05）；HLA-DRBl＊0405基因频率较对照组低（3．64％、2．04％、3．49％和15．52％，P〈0．01、0．01、0．05）。各病例组之间HLA—DRBl＊04等位基因频率差异无统计学意义（P〉0．05）。HBV不同复制状态HLA-DRBl＊04等位基因频率差异无统计学意义（P〉O．05）。结论HLA-DRBl＊04是决定HBV感染结局的因素之一，但不影响HBV在体内复制。

纳米级灵芝子实体粉末和破壁灵芝孢子粉体外抗肿瘤活性研究

对纳米级灵芝子实体粉末及破壁灵芝孢子粉石油醚提取物(PE)、氯仿提取物(CE)、丙酮(AE)、甲醇提取物(ME)、水提取物(WE)与灵芝子实体及灵芝孢子提取量进行对比,利用GC-MS联用仪对石油醚提取物进行了成分分析鉴定,对水提物中总糖进行了含量测定,并利用宫颈癌细胞Hela和晶体上皮细胞SRA01/04进行了体外增殖作用和剂量效应关系研究,为灵芝资源的保护及进一步开发利用提供理论基础。结果表明,纳米化灵芝子实体及破壁灵芝孢子不同溶剂提取量显著增加,纳米级灵芝子实体粉末水提取物具有抑制宫颈癌细胞Hela和晶体上皮细胞SRA01/04增殖的作用。破壁灵芝孢子各溶剂提取物对宫颈癌细胞Hela和晶体上皮细胞SRA01/04没有明显的增殖抑制作用。

5种新型四氢喹啉衍生物的合成及其体外抗肿瘤活性评价

目的:设计并合成5种新型的由不同基团取代的吡喃或呋喃并四氢喹啉衍生物,并研究其体外抗肿瘤活性。方法:以对氟硝基苯为原料,经乌尔曼反应、钯碳还原、氮杂-双烯合成反应等方法合成了四氢喹啉8位上分别由2-甲氧基苯基、5-甲基吡啶-2-胺、N-5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氢萘-2-胺、N-丙基-N-5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氢萘-2-胺、咪唑取代的5种呋喃或吡喃并四氢喹啉衍生物,即目标化合物1、2、3、4、5。采用磺酰罗丹明B比色法,分别考察5种目标化合物对人肝癌细胞HepG2、人白血病细胞Leu02、人肺癌细胞Lu-04的体外抗肿瘤活性。结果:经质谱(MS)及核磁共振(1H-NMR)表征确证成功合成了目标化合物1、2、3、4、5,收率分别为43%、32%、33%、35%、62%。其作用后细胞的生长率分别为HepG2:97.00%、114.52%、96.54%、112.23%、99.70%;Leu02:93.44%、98.95%、70.56%、99.45%、85.93%;Lu-04:104.24%、107.63%、79.96%、104.32%、96.25%。结论:合成了5种新型四氢喹啉衍生物,其中化合物3对Leu02、Lu-04细胞有一定的体外抑制作用。