牛支原体0580基因C端截短体的原核表达及生物学功能初步分析

旨在初步分析牛支原体(Mycoplasma bovis)PG45菌株0580基因的生物学功能。前期测试发现牛支原体PG45菌株、08M菌株、07801菌株都有溶解鼠红细胞的现象,根据NCBI中对PG45菌株的基因注释,筛选到1个假定与溶血素相关的基因MBOVPG45_0580。该基因编码的蛋白经预测具有4个跨膜区,全长表达困难,故构建了不含跨膜区的C端截短体原核表达载体Pcold III-0580-C,进行诱导表达以及纯化,并在小鼠中制备0580-C端重组蛋白的多克隆抗体,对0580-C重组蛋白溶红细胞能力、多克隆抗体效价及特异性、是否影响菌株黏附细胞的能力进行了探究。PG45菌株中假定的与溶血素相关的蛋白0580在牛支原体中的相似性高达100%,去除4个跨膜区的重组蛋白0580-C能在大肠杆菌中表达,相对分子质量约为37 ku;鼠红细胞溶血试验发现0580-C重组蛋白没有溶血活性,但黏附及黏附阻断试验发现该蛋白有助于提高牛支原体黏附EBL细胞的效率,0580-C蛋白鼠源多抗能有效阻断牛支原体对EBL细胞的黏附。制备的0580-C蛋白鼠源多克隆抗体效价达211,且能识别到3株牛支原体菌株(PG45、08M、07801)天然表达的0580蛋白,表明制备的0580-C蛋白鼠源多克隆抗体特异性较好。牛支原体中假定的与溶血素相关蛋白0580可能是一种新的黏附相关分子,为解析牛支原体MBOVPG45_0580基因的生物学功能以及牛支原体致病机制提供了新的见解。

重组pEGFP-C2-FOXC1-C真核表达质粒的构建与表达

目的:将人FOXC1-C基因定向连入pEGFP-C2质粒,使FOXC1-C蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,为进一步研究FOXC1-C蛋白的功能及定位奠定实验基础。方法:采用EcoR I和NotI双酶切方法,从pcDNA3.1(+)-FOXC1-C质粒中获得FOXC1-C蛋白的cDNA羧基末端;连入pEGFP-C2质粒的C端。将构建成功的pEGFP-C2-FOXC1-C质粒转染入HeLa细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。结果:(1)将该质粒进行双酶切鉴定可见FOXC1-C片段;(2)转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达。结论:(1)FOXC1-C cDNA羧基末端成功连入pEGFP-C2质粒(;2)FOXC1-C蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达。

加用rhEPO对重型颅脑损伤伴昏迷患者抢救及预后效果的影响

目的研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)治疗重型颅脑损伤伴昏迷患者的抢救效果。方法选取收治的重型颅脑损伤伴昏迷患者92例,分为对照组和观察组各46例。对照组患者接受常规治疗,同时静脉滴注纳洛酮治疗;在此基础上,观察组患者皮下注射rhEPO。比较2组患者的抢救效果,同时比较治疗前后白介素-10(IL-10)、超敏-C反应蛋白(hs-CRP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、梗死面积、格拉斯哥昏迷评分(GCS)和格拉斯哥预后评分(GOS)情况。结果观察组的抢救总有效率(80.43%)明显高于对照组(65.21%)(P<0.05);观察组的清醒时间明显低于对照组(P<0.05);治疗后,观察组的血清NSE和hs-CRP水平明显低于对照组(P<0.05),血清IL-10水平和GCS评分明显高于对照组(P<0.05);治疗后6个月观察组的梗死面积明显低于对照组(P<0.05),GOS评分明显高于对照组(P<0.05)。结论 rhEPO抢救重型颅脑损伤伴昏迷患者的效果显著,能够有效抑制IL-10、hs-CRP及NSE表达,促进神经功能恢复及预后,值得在临床推广。