草鱼呼肠孤病毒JX-0901株FQ-PCR检测方法的建立及其在定量分析中的应用

根据GCRV JX-0901株S7基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针,建立了针对GCRV JX-0901株病毒的TaqMan实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并利用FQ-PCR方法对该毒株在不同鱼类细胞中的增殖情况和不同温度条件下的稳定性进行了定量分析。结果显示,建立的FQ-PCR方法的Ct值与标准品在1.0×101～1.0×108拷贝/μL浓度范围呈良好的线性关系,R2高达0.999;该方法有较好的敏感性和特异性,最低模板检出量为10个拷贝,只能特异地检测出GCRV JX-0901,不能检出其他鱼类常见病毒。该毒株能在10种常见鱼类细胞中增殖,其中在L8824细胞中的增殖量最大,含量达到4.1933×107拷贝/μL;此外,该毒株对温度敏感性较弱,病毒在48、56℃条件下放置96 h后才失去对CIK细胞感染性,而在4、15、28、37℃条件下放置32d,-20℃条件下储存2年仍具有较高的含量和较强的感染性。

播期与播量对小麦新品种皖垦麦0901产量及构成因素的影响

为探讨小麦新品种皖垦麦0901的配套栽培技术,在沿淮淮北地区的安徽省龙亢农场采用裂区试验研究了播期和播量对皖垦麦0901产量及构成因素的影响。结果表明,不同播期和播量对皖垦麦0901产量构成因素及农艺性状影响显著,推迟播期降低了皖垦麦0901的成穗数、穗粒数和千粒重,降低了产量;增加播量能提高成穗数和产量,降低穗粒数和千粒重。根据试验结果,建议皖垦麦0901在沿淮淮北地区10月下旬播种以225 kg/hm2的播量、晚播条件下以300 kg/hm2的播量有助于提高其产量。

采用基因打靶技术构建结核分枝杆菌新基因Rv0901缺失株的研究

目的 :利用基因打靶技术构建基因打靶载体和基因缺失株 ,用于结核分枝杆菌基因Rv0 90 1功能的研究。方法 :结核分枝杆菌标准株H37Rv体外培养 ,对其Rv0 90 1基因及两侧序列进行体外扩增 ,连接载体及目的片段 ,切除目的基因 ,再引入筛选标志构建重组自杀质粒 ,分别用酶切及PCR鉴定 ;用电穿孔法将重组自杀质粒转入结核杆菌H37Rv株 ,用PCR鉴定。结果 :经鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符 ,且为所需目的基因片段 ,成功切除靶片段 ;蓝白斑筛选证实标记基因插入片段插入方向正确 ;Rv0 90 1基因缺失株用PCR鉴定成功缺失了目的基因片段 2 5kb。结论 :成功构建了用于结核分枝杆菌基因打靶的置换型载体和Rv0 90 1新基因缺失株 ,为Rv0 90

小鼠巨噬细胞转染Rv0901基因后活性的改变

目的将重组结核分枝杆菌Rv0901基因的重组质粒pcDNA3.1-Rv0901转染小鼠腹腔巨噬细胞,研究结核分枝杆菌Rv0901基因在结核分枝杆菌感染巨噬细胞的过程中所起的作用。方法制备小鼠腹腔巨噬细胞,分别将pcDNA3.1、pcDNA3.1-Rv0901质粒DNA与绿色荧光蛋白(GFP)的质粒DNA混合,以脂质体转染的方式共转染小鼠腹腔巨噬细胞。转染后72h,分别收集细胞用流式细胞仪检测GFP的表达和细胞凋亡的发生情况,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测质粒的转染情况。收集转染72h后的细胞培养液上清,检测细胞NO、IFN-γ的释放水平。结果pcDNA3.1和pcDNA3.1-Rv0901转染的巨噬细胞中均检测到了GFP的表达,转染后的巨噬细胞RT-PCR能扩增出Rv0901的目的片段,pcDNA3.1-Rv0901转染巨噬细胞后细胞的凋亡率高于空载体对照组(56.4±2.0)%vs(19.9±1.5)%,P<0.05,pcDNA3.1-Rv0901转染巨噬细胞后细胞培养液上清中NO和IFN-γ的释放量高于空载体对照组NO:(40.4±3.0)μmol/Lvs(27.5±3.2)μmol/L,IFN-γ:(2.11±0.031)ng/mLvs(0.62±0.025)ng/mL,P均<0.05。结论pcDNA3.1-Rv0901转染小鼠巨噬细胞后使巨噬细胞的凋亡增加,NO和IFN-γ的释放量增加,提示结核分枝杆菌Rv0901基因可能导致巨噬细胞的活性增强,与结核分枝杆菌感染巨噬细胞的机理有关。

结核分枝杆菌Rv0901基因原核表达质粒的构建及其表达

目的 为研究结核分枝杆菌基因Rv0 90 1的功能提供材料。方法 PCR扩增Rv0 90 1基因编码序列 ,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pGEX 1λT获得重组表达质粒 ,转化大肠杆菌后用IPTG进行诱导表达 ,通过SDS PAGE、GST 纯化试剂盒鉴定并纯化表达产物。结果 从结核杆菌H37Rv株基因组DNA中扩增出Rv0 90 1基因 ;成功构建了融合表达质粒pGEX Rv0 90 1;重组质粒经IPTG诱导后能在大肠杆菌中稳定表达 4 5kDa的GST Rv0 90 1融合蛋白。结论 本实验成功表达并纯化GST Rv0 90 1融合蛋白 ,为Rv0 90 1基因功能的研究打下了基础。

结核杆菌Rv0901基因真核表达质粒的构建及在细胞内的表达与鉴定(英文)

目的构建结核杆菌Rv0901基因的真核表达质粒并进行表达,为研究Rv0901基因的功能提供材料。方法以结核杆菌基因组DNA为模板PCR扩增Rv0901基因序列,将Rv0901基因定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)获得重组表达质粒,体外转染Cos7细胞,RT-PCR检测转染的情况,并提取转染细胞总蛋白和收集细胞培养液上清检测蛋白的表达,Western-blotting检测蛋白表达的特异性。结果成功扩增出Rv0901基因序列,成功构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-Rv0901,重组质粒转染细胞后的RT-PCR能扩增出Rv0901基因序列,转染细胞总蛋白和细胞培养液上清均能特异表达Rv0901基因蛋白。结论成功构建Rv0901基因真核表达质粒并在真核细胞内进行了良好表达,为研究该基因功能打下了坚实基础。

高产广适多抗小麦新品种皖垦麦0901选育报告

介绍皖垦麦0901的选育过程,总结该品种多年来的产量表现、抗性、适应性,以及栽培技术要点等,以为该品种的种植推广提供依据。

HLA-DRB1 ＊0803与HLA-DRB1 ＊0901等位特异性HBcAg表位肽的筛查与鉴定

目的鉴定HLA-DRB1*0803与HLA-DRB1*0901等位特异性HBV表位,进一步认识HLA-DR不同等位限制性表位的差异。方法 BLCL细胞表面高表达HLA-DR分子,从HBc Ag肽池负载的特征HLA-DR等位的BLCL细胞表面上收集相关多肽,多肽经过过滤、脱盐、浓缩等处理步骤后对其进行液质联用质谱分析(LC-MS),再结合生物信息学预测工具Net MHCⅡpan 3.0 Server初步确定其潜在候选表位。结果筛选出HLA-DRB1*0803限制性表位HBc17-31、HBc22-36、HBc27-41、HBc82-96、HBc87-101、HBc92-106、HBc117-131、HBc122-136共8条,HLA-DRB1*0901限制性表位HBc2-16、HBc7-21、HBc12-26、HBc27-41、HBc82-96、HBc87-101、HBc122-136共7条,其中相同的有4条。结论发现了HBc7-21、HBc22-36、HBc27-41、HBc82-96、HBc87-101、HBc92-106新的HLA-Ⅱ类分子表位,不同的HLA-DR等位限制的HBc Ag表位肽存在差异。

水稻亲本0901和湘早籼32号的光敏感性研究

研究以水稻亲本0901和湘早籼32号,以及其组合陆两优0901和陆两优湘早籼32号为材料,通过不同遮荫处理,设置不同光强梯度,对不同光照强度下水稻的生育期、分蘖动态、株高和叶面积进行测量分析。结果表明:0901表现出对光照强度的强敏感性,而湘早籼32号是耐荫性较好的材料;不同光照强度处理下,水稻亲本0901的抽穗动态、生育期、分蘖动态、株高和叶面积与对照相比均表现出显著性差异。对于生产上大面积推广的水稻品系0901的叶面积和株高等都容易受到外界光照条件影响,如果能充分利用其强光敏感特性,将其改良成更适应外界环境生长的品种,对于最终实现高产、稳产是有利的保证。

不同基本苗对啤酒大麦新品种“苏B0901”产量的影响

为探讨啤酒大麦新品种“苏B0901”的高产栽培调控技术，于2012～2013年进行了不同基本苗对其产量影响的试验。结果表明，该品种在适期播种，基本苗为16万苗／667m2、氮肥运筹为基肥：蘖肥：拔节穗肥=7：1：2、施N量为15kg／667m2的条件下，产量较好。

不同播期对啤用大麦新品种“苏B0901”产量的作用效应初探

＂苏B0901＂是江苏省扬州大学大麦研究所通过杂交选育而成的啤用大麦新品种。在适宜的基本苗条件下,在10月20日~11月14日播期范围内,随播期的推迟,产量呈现出＂低-高-低＂的变化趋势,以10月25日~11月4日播种的产量较高,早播、迟播均不利于产量的形成。

网状内皮组织增生病病毒HLJR0901株全基因组的克隆及序列分析

以网状内皮组织增生病病毒(REV)东北分离株HLJR0901基因组为模板,分别用6对引物扩增其全基因组,最终通过拼接和比对确定HLJR0901株的全基因组长8284bp,其基因组结构为LTR-PBS-gag-pol-env-PPT-LTR,GenBank登录号为GQ415646。运用软件将其序列与已知的其他REV全基因组进行比较。结果显示,HLJR0901株不仅与中国台湾和美国的REV毒株有较高的同源性,而且与鹅、野鸟及插入到鸡痘病毒中的REV前病毒有较近的亲缘关系,而与我国南方毒株HA9901的亲缘关系较远,表明我国流行的REV存在多样性。

结核分枝杆菌Rv0901基因重组耻垢分枝杆菌的构建及其细胞作用

目的 对结核分枝杆菌Rv0901基因的功能进行研究。方法 以PCR扩增Rv0901基因编码序列，定向克隆人穿梭表达质粒pMV261获得重组穿梭表达质粒，将重组质粒电穿孔进入耻垢分枝杆菌，构建重组Rv0901基因的耻垢分枝杆菌，对重组耻垢分枝杆菌进行诱导表达，用SDS-PAGE检测表达结果。比较耻垢分枝杆菌和重组耻垢分枝杆菌对THP-1细胞的不同作用。结果 成功构建重组穿梭表达质粒及重组Rv0901基因的耻垢分枝杆菌，重组菌诱导THP-1细胞的凋亡率高于耻垢分枝杆菌，其感染THP-1细胞后细胞的存活率低于耻垢分枝杆菌的感染，重组菌感染THP-1细胞后细胞培养液中NO（一氧化氮）的产生高于耻垢分枝杆菌的感染。结论 Rv0901基因可能与结核毒力存在一定关系。

T细胞识别HLA DRB1 0901分子显示TCR BV基因取用的高度局限性

目的分析ＤＲ９纯合细胞刺激下ＤＲ９阴性正常人ＴＣＲＢＶ基因片段的取用格局，确定和分离出ＤＲ９关联性疾病中的自身反应性Ｔ细胞克隆。方法常规方法获取ＰＢＭＣ经ＰＣＲ－ＳＳＯ和ＰＣＲ－ＲＦＬＰＤＮＡ分型，确定ＤＲ、ＤＱ、ＤＰ等位基因后，进行单向混合淋巴细胞培养，抽提总ＲＮＡ并合成第一链ｃＤＮＡ，定量ＰＣＲ检测２２种ＴＣＲＢＶ基因片段的取用格局。结果Ｔ细胞对ＤＲ９分子的识别和扩增具有寡克隆性，２例都有ＢＶ７和ＢＶ１６片段的优势取用，而片段ＢＶ１９和ＢＶ１０则在２例中分别表达。结论实验结果表明，共有ＢＶ７和ＢＶ１６片段的优势取用是ＤＲ９抗原等分子经直接途径激活了带有相应ＴＣＲＢＶ细胞的结果；而片段ＢＶ１９和ＢＶ１０在２例中分别表达可能是不同ＨＬＡ背景的ＡＰＣ间接递呈ＤＲ９抗原的结果。

一株猕猴源唾液乳杆菌对DSS诱导的结肠炎小鼠的影响

目的基于课题组先前分离获得的一株猕猴Macaca mulatta源唾液乳杆菌Lactobacillus salivarius MK0901,探究该菌对动物结肠炎的影响。方法通过葡聚糖硫酸钠(DSS)构建结肠炎小鼠模型,比较MK0901组(DSS处理+MK0901菌液)、LGG组(DSS处理+LGG菌液)、模型组(DSS处理+无菌生理盐水)和空白对照组(灌胃无菌生理盐水)的生理生化表现和肠道菌群之间的差异。结果与模型组比较,MK0901组的体重增加、脾脏指数下降、结肠组织溃疡程度降低、炎症因子(TNF-α和IL-6)水平显著下降(P<0.01)、肠道菌群结构更趋近于正常水平、肠道细菌多样性和益生性菌群丰度增高。结论MK0901可抑制由DSS诱导产生的炎症反应,改善肠道菌群结构,具有良好的益生性能,是具有开发潜力的益生菌候选菌株,为防治圈养猕猴的溃疡性结肠炎提供了一个潜在的解决方案。

HLA-DRB1等位基因多态性对食管癌发生影响的Meta分析

目的采用系统评价的方法探究HLA-DRB1等位基因多态性对于食管癌发生的影响。方法计算机检索Medline、EMbase、Cochrane Library、Web of Science、CBM、CNKI、VIP、万方等数据库查找相关文献。按照纳入和排除标准筛选后提取数据,采用Stata12.0软件进行Meta分析。结果最终纳入5篇文献,总共包含1 630例患者。Meta分析结果显示,食管癌组HLADRB1*0901基因易感率明显高于正常人,两组基因易感率差异有统计学意义[OR=1.70,95%CI(1.31,2.20),P<0.001];食管癌患者HLA-DRB1*1501基因易感率明显高于正常人,两组基因易感率差异有统计学意义[OR=3.02,95%CI(1.65,5.51),P<0.001];食管癌组HLA-DRB1*0301基因易感率明显高于正常人,两组基因易感率差异有统计学意义[OR=2.84,95%CI(0.43,18.96),P<0.001]。结论食管癌的发生与HLA-DRB1*0901、HLA-DRB1*1501与HLA-DRB1*0301基因有关。