NR0B1突变致先天性肾上腺发育不全的分子诊断及致病机制

目的 对3例NR0B1基因突变所致的先天性肾上腺发育不全(adrenal hypoplasia congenital, AHC)患者进行分子诊断,以探讨其致病机制并为患者提供遗传咨询。方法 采集3例AHC患者及其家系成员的外周血标本并提取DNA,通过PCR结合Sanger测序对患者的NR0B1基因进行测序分析。结果 在3例AHC患者DNA标本中分别检出NR0B1基因c.676delG、c.509_572dup、c.409G>T半合子突变,并证实均遗传自其母亲。结论 检出的c.676delG和c.509_572dup为未报道的新突变,可判为致病突变,扩展了NR0B1基因突变谱系。

NR0B1基因新突变致先天性肾上腺发育不良1例

浙江大学医学院附属儿童医院于2019年7月收治NR0B1基因新突变致先天性肾上腺发育不良1例。该患儿既往诊断为先天性肾上腺皮质增生症,予以口服氢化可的松治疗,失盐症状好转。之后发现患儿生长缓慢,性发育落后,14岁2个月时就诊,内分泌激素检测提示性发育落后,基因检测发现NR0B1基因第1外显子上存在c.864dupC(p.N289Qfs*10)半合子突变,该突变为移码突变,使得第289位上天冬酰胺(N)突变为谷氨酰胺(Q),随后的10位变为终止氨基酸,导致多肽链提前终止,蛋白功能受损,为新发突变。结合临床资料和基因检测结果,修正诊断为先天性肾上腺发育不良。

NR0B1基因突变致X连锁先天性肾上腺发育不全1例

1病例资料患儿男性,7岁,2018年8月15日因“间断呕吐4年余,加重3天”收住南京医科大学附属儿童医院内分泌科病房。患儿入院前4年频繁反酸呕吐,1~2次/月,以冬春、秋冬季明显。后因间断“呕吐、腹痛”于门诊予补液对症等治疗好转。入院前3天患儿呕吐加重,并伴脱水、低钠血症,遂以“肾上腺皮质功能减退危象”收住入院。患儿为第一胎第一产,足月顺产,新生儿期有“黄疸、败血症”病史。父母均体健,且非近亲婚配,否认家族性遗传病及传染病史。

7例儿童原发性肾上腺皮质功能减退症临床特征及NR0B1、类固醇生成因子-1基因突变分析

目的观察儿童原发性肾上腺皮质功能减退症(PAI)的临床特征及NR0B1、类固醇生成因子-1(SF1)基因的突变情况,并分析两者关系。方法 7例PAI患者,分别来自5个家系,记录其临床症状、体征以及血促肾上腺皮质激素(ACTH)、血皮质醇、电解质等实验室检查结果,采集患者及其家系成员的外周血进行NR0B1和SF1基因外显子测序,对测序结果阴性者进行多重连接探针扩增技术(MLPA)检测。结果 7例患者均为男性,均由儿童期起病,其中3例有家族史。全部患者均有不同程度的皮肤色素沉着、血ACTH升高及血皮质醇降低。仅1例患者存在NR0B1插入突变(5800-5801 ins G),但无肾上腺危象、低促性腺激素性性腺功能减退和生殖发育异常等表现;其母亲同时存在NR0B1同义突变(5129C>T,C38C)和插入突变(5800-5801 insG),但无肾上腺皮质功能减退表现。所有患者及其家系成员均未检测到SF1基因突变,MLPA检测亦未发现NR0B1和SF1存在大片段缺失或重复改变。结论儿童期PAI以遗传因素为主要病因,可能由先天性肾上腺皮质发育不良(AHC)所致,且NR0B1突变的区域、类型可能与临床表型的严重程度密切相关。除AHC外,可能存在X连锁致病基因导致PAI。

NR0B1(DAX-1)基因新发突变致X-连锁先天性肾上腺发育不良1例

X-连锁先天性肾上腺发育不良(AHC)是一种罕见的先天疾病,主要表现为失盐的肾上腺皮质功能不全、低促性腺激素型性腺功能减退(HH)以及不育。本文报道1例临床主要表现为HH的迟发AHC病例,患者为青年男性,以第二性征发育不全为主要表现,性激素检测提示HH,促性腺激素释放激素兴奋试验无反应,促肾上腺皮质激素升高,皮质醇基本正常。进一步行全外显子测序检测提示患者NR0B1(DAX-1)基因第二外显子有1个新的错义突变:c.1352(exon2)C>T。构建突变的NB0R1基因转录因子表达质粒并与包含黄体生成素β亚基(LHβ)基因启动子的质粒共转染COS7细胞株,行双荧光素酶检测,最终证实该突变能造成NR0B1功能的部分缺失。

青海回族女性ApoB基因多态性与乳腺癌相关性

目的探讨青海地区回族女性Apo B基因516位C/T基因多态性与乳腺癌的相关性。方法采用PCR方法扩增87例乳腺癌回族女性及50例正常回族女性的Apo B基因,用EarⅠ限制性核酸内切酶切割目的基因,鉴定乳癌组与对照组Apo B基因516位C/T基因的基因型并计算各组等位基因频率,比较两组基因型及等位基因频率分布的差异,分析青海地区回族女性Apo B基因516位C/T基因多态性与其乳腺癌发生的相关关系。结果乳癌组中CC、CT、TT型基因型频率分别为69.0%、19.5%、11.5%,对照组中分别为90.0%、4.0%、6.0%,两组中基因型分布存在差异(P<0.05),乳癌组中TT、CT基因型的个体多于对照组;乳癌组中C、T等位基因频率分别为78.7%、21.3%,对照组中C、T等位基因频率分别为92.0%、8.0%,两组中C、T等位基因频率分布存在差异(P<0.05),乳癌组T等位基因的频率比对照组高。结论青海地区回族女性Apo B基因516位C/T基因多态性与其乳腺癌的易感性有关。

一例由NR0B1基因重复引起的46,XY女性性反转的遗传学分析

目的探讨1例46,XY女性性反转患者的遗传发病机制。方法应用核型分析方法分析外周血淋巴细胞染色体、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术确认性染色体、Sanger测序法对SRY基因测序、下一代测序技术对外周血DNA外显子组测序、多重连接依赖探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术检测NR0B1、SF1、SRY、SOX9、WNT4基因拷贝数变异。结果患者染色体核型为46,XY;FISH分析结果显示性染色体为特异的X和Y信号;Sanger测序未检出SRY基因变异,外显子组高通量测序未见该疾病相关的有害变异,在Xp21上有大约67.31kb的重复片段,此片段包含MAGEB1、MAGEB3、MAGEB4和NR0B1基因;经MLPA分析结果显示,患者和母亲的NR0B1基因有1个拷贝重复。结论Xp21携带的NR0B1基因重复引起的46,XY女性性反转,由表型正常的携带者母亲以X连锁隐性遗传方式传递,具有隐匿性和较高发病率的特点。

针灸减肥思路探讨

对近几年来提出的针灸减肥思路加以整理、分析 ,从临床疗效观察和实验机理研究两方面阐述了目前针灸减肥的发展状况以及存在的差距 ,进一步探讨了针灸减肥的理论基础和作用机理。对充分利用针灸减肥的优势 ,提出新的思路 ,把针灸减肥的机理研究提升到一个理论高度 ,从而提高针灸减肥的确切临床疗效具有一定的价值。

七例X连锁先天性肾上腺发育不良患儿的临床及NROB1基因突变分析

目的 总结X连锁先天性肾上腺发育不良(X-linked adrenal hypoplasia congenita,XL-AHC)患儿的临床、NR0B1基因突变及家系特点.方法 收集7例XL-AHC患儿的临床资料;采用二代测序技术对患儿肾上腺相关基因外显子进行检测,对检出NR0B1基因突变的患儿及其父母、部分其他家庭成员采用Sanger测序验证,进行家系分析.结果 5例于新生儿期发病,2例在2岁发病,均以肾上腺皮质功能不全为首发症状;3例患儿(42.9%)存在身材矮小,1例生长迟缓(14.3%);7例患儿中有6例(85.7%)突变发生在第1外显子,1例(14.3%)发生在第2外显子;7例突变包含移码变异4例(57.1%),无义突变2例(28.6%),错义变异1例(14.3%);已报道致病突变2例,未报道新的变异5例;6例患儿突变为母系遗传,1例为自发变异;3例患儿有舅舅不明原因夭折史,2例患儿母亲有不明原因自然流产史,其中1例哥哥有不明原因夭折史.结论 男性原发性肾上腺功能不全患儿应常规行NR0B1基因检测,尤其是有家族史者;NR0B1基因突变多发生于第1外显子,以移码突变为主;所有XL-AHC患儿随访过程中应密切观察发育情况.

NROB1基因新突变致先天性肾上腺发育不良1例及文献复习

目的分析先天性肾上腺发育不良(AHC)患儿的临床特征,并对新发基因突变进行报告。方法收集郑州大学附属儿童医院2015年12月收治的1例AHC患儿的临床资料,提取基因组脱氧核糖核酸(DNA),并进行二代测序,对筛选的可能有害基因进行Sanger测序验证。结果该患儿新生儿期起病,表现为食欲差、体重下降、精神萎靡、皮肤色素沉着,生化显示低钠血症、高钾血症、代谢性酸中毒,促肾上腺皮质激素(ACTH)明显升高;基因检测发现NR0B1基因c.114_126delCGAACAGCCCCAG(p.W39Afs*42)半合子突变,该突变为移码突变,使得第39位上赖氨酸(W)突变为苏氨酸(A),在随后的42位变为终止氨基酸,使多肽链提前终止,导致其蛋白功能受损,为新发致病性突变。结论 AHC临床容易误诊,基因检测为AHC c.114_126delCGAACAGCCCCAG半合子突变为新发致病性突变。

1例先天性肾上腺发育不良的诊断

目的探讨先天性肾上腺发育不良(AHC)的有效诊断方法。方法对1例确诊AHC患儿的临床资料及基因检测结果进行分析。结果该患儿婴儿期曾出现皮肤色素沉着、高钾血症、低钠血症、休克,诊断为先天性肾上腺皮质增生症,口服氢化可的松、氟氢可的松治疗,病情好转。之后患儿出现生长迟缓,6岁8个月时就诊,查血清17-羟孕酮0.261 ng/mL、促肾上腺皮质激素释放激素(ACTH)161.7 pg/mL、皮质醇8.708 ng/mL、睾酮<0.025ng/mL、孕酮<0.030 ng/mL,电解质、血气分析均无异常发现,CT检查双侧肾上腺区未见明显占位,X线检测骨龄相当于7岁。基因检测结果显示患儿NR0B1基因1号外显子和2号外显子区域存在大片段缺失,确诊为AHC。结论AHC临床表现复杂,对有皮肤色素沉着、严重高血钾、低血钠、血清ACTH水平明显升高的患儿应排除AHC,NR0B1基因检测是诊断AHC的可靠手段。

miR-32-5p靶向TOB1基因调控结直肠癌细胞放射增敏性及迁移侵袭能力机制研究

目的探讨miR-32-5p对结直肠癌细胞放射敏感性及迁移侵袭能力的影响及其潜在作用机制。方法培养人结直肠癌SW480细胞和正常结肠上皮NCM460细胞,将结直肠癌细胞分为未转染组和转染组(分别转染anti-miR-NC、anti-miR-32-5p、pcDNA、pcDNA-TOB1、anti-miR-32-5p+si-NC、nti-miR-32-5p+si-TOB1)。RT-qPCR和Western blot分别检测细胞中miR-32-5p、TOB1 mRNA和蛋白表达,克隆形成实验检测转染各组细胞放射敏感性,Transwell实验检测转染各组细胞迁移、侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-32-5p是否靶向TOB1。结果与人正常结肠上皮细胞相比,结肠癌细胞中miR-32-5p表达明显上调(P<0.05),TOB1 mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05)。与anti-miR-NC比较,anti-miR-32-5p组细胞放射增敏比1.801,细胞迁移和侵袭数目均明显减少(P<0.05);与pcDNA组比较pcDNA-TOB1组细胞放射增敏比1.764,细胞迁移数目和侵袭数目均明显减少(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验和Western blot结果证实miR-32-5p靶向负调控TOB1蛋白表达。与anti-miR-32-5p+si-NC组比较,anti-miR-32-5p+si-TOB1组细胞放射增敏比为0.591,细胞迁移数目和侵袭数目均明显增多(P<0.05)。结论抑制miR-32-5p表达能够明显增强结直肠癌细胞放射敏感性,抑制细胞迁移和侵袭,其作用机制可能与靶向促进TOB1表达有关。