rno-miR-30b-5p调控Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达在实验性自身免疫性葡萄膜炎中的作用

目的探讨rno-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达变化。方法 双荧光素酶检测mo-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控作用。Lewis大鼠随机分为正常对照组和EAU组,每组各6只,EAU组诱导EAU模型,两组大鼠每天用Genesis-A眼底相机观察眼底情况。免疫后12 d,取眼球观察睫状体、视网膜的病理学表现;分离大鼠的脾脏和淋巴结,实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测rno-miR-30b-5p、Atg5、Atg12和Becn1 mRNA的表达情况;ELISA方法检测Atg5、Atg12和Becn1蛋白的表达水平。结果双荧光素酶检测结果证实Atg5、Atg12和Becn1为rno-miR-30b-5p调控的靶基因。免疫后12 d,EAU组大鼠眼底血管严重肿胀,病理学检测可见睫状体、视网膜内大量炎性细胞浸润。Q-PCR检测结果示,与正常对照组相比,免疫后12 d EAU组大鼠脾脏和淋巴结中rno-miR-30b-5p mRNA水平分别为0.46±0.01和0.29±0.17,均呈下调表达(均为P<0.01);Atg5、Atg12和Becn1 mRNA水平均呈上调表达,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。ELISA检测结果示,EAU组大鼠脾脏和淋巴结中Atg5、Atg12和Becn1蛋白表达水平均明显高于正常对照组大鼠(均为P<0.05)。结论 rno-miR-30b-5p可调控Atg5、Atg12和Becn1的表达。在EAU大鼠脾脏和淋巴结中,rno-miR-30b-5p的下调表达使Atg5、Atg12和Becn1基因和蛋白的表达水平均明显升高,从而影响葡萄膜炎的发展进程。

平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达的影响

目的:通过测定Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达,探讨平喘颗粒对哮喘大鼠自噬的抑制机理。方法:随机将30只Wistar大鼠分为3组,正常组、模型组、平喘颗粒组,每组10只。在第2次致敏后第4天开始给予给与中药药液灌胃。平喘颗粒组按体质量给予平喘颗粒溶液1 mL/100 g灌胃,激发阶段则每次激发前1h灌胃;正常组与模型组均予等量生理盐水灌胃。各组均于末次激发24 h后处死,取肺组织,光镜下观察肺组织的病理学改变。采用免疫组化SP法检测肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达。结果:平喘颗粒组和模型组大鼠肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达均高于正常组,差异有统计学意义(P<0.01);平喘颗粒组Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达较模型组明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:平喘颗粒能减轻哮喘后的炎症反应,并且可抑制细胞自噬信号通路,从而保护肺部组织细胞,减轻哮喘发作。

四妙散调节软骨细胞凋亡与自噬治疗膝骨关节炎大鼠的实验研究

目的:通过膝骨关节炎大鼠模型研究四妙散调节软骨细胞凋亡与自噬治疗膝骨关节炎(KOA)大鼠的作用机制。方法:8周龄SD大鼠27只,随机分为正常对照组、KOA模型组、四妙散组,KOA模型组和四妙散组采用前交叉韧带切除法制作KOA模型,手术6周后四妙散组以四妙散药液灌胃,正常对照组和KOA模型组以生理盐水灌胃。连续灌胃4周后取膝关节软骨组织,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术测定凋亡细胞所占比例,采用荧光定量PCR检测关节软骨组织中凋亡和自噬相关基因表达水平。结果:与正常对照组比较,KOA模型组大鼠关节软骨细胞凋亡率显著升高,关节软骨细胞中凋亡相关蛋白Fadd、Casp3的表达显著升高,自噬相关蛋白LC3的表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与KOA模型组比较,四妙散组大鼠关节软骨细胞凋亡率显著降低,关节软骨细胞中凋亡相关蛋白Fadd、Casp3的表达显著降低,自噬相关蛋白LC3的表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:软骨细胞凋亡是KOA发病中的重要因素,该凋亡可能通过FADD-CASP3途径发挥作用。软骨细胞自噬作用的激活可抑制细胞凋亡,可能是延缓及控制KOA进展的一个新机制,四妙散可能通过该机制发挥治疗作用。

葫芦素BE聚乳酸纳米微粒对肺癌细胞自噬及其生物学行为的作用研究

目的研究以葫芦素BE聚乳酸纳米微粒为载体,lncRNA靶向调控苄氯素1重组蛋白(BECN1)对肺癌细胞自噬及其生物学行为的作用。方法对肺癌细胞A549进行培养,将肺癌细胞A549分为对照组(Control组)与实验组,实验组为不同浓度的葫芦素BE聚乳酸纳米微粒组(0.01μg·mL^(-1)组、0.10μg·mL^(-1)组、1.00μg·mL^(-1)组、10.00μg·mL^(-1)组及20.00μg·mL^(-1)组),CuBE-PLA-NP+si-NC组和CuBE-PLA-NP+si-BECN1组。通过噻唑蓝(MTT)法检测A549细胞抑制率以及活力;用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测BECN1 mRNA表达水平;用蛋白质印迹法检测BECN1蛋白表达水平及BECN1对A549细胞自噬及凋亡相关蛋白的影响;用流式细胞术检测调控BECN1对A549细胞凋亡的影响。结果Control组、CuBE-PLA-NP组、CuBE-PLA-NP+si-NC、CuBE-PLA-NP+si-BECN1组细胞活力分别为(100.00±4.94)%,(45.22±3.79)%,(44.85±4.93)%,(85.59±5.62)%,Control组与CuBE-PLA-NP组相比,CuBE-PLA-NP+si-NC组与CuBE-PLA-NP+si-BECN1组相比,差异有统计学意义(P<0.05);随着CuBE-PLA-NP浓度的增加,BECN1 mRNA表达上调,20.00μg·mL^(-1)组A549中BECN1 mRNA水平(2.59±0.30)及BECN1蛋白水平(1.26±0.06)升高最明显,且呈现剂量依赖;CuBE-PLA-NP可促进A549细胞自噬,而敲低BECN1可逆转CuBE-PLA-NP对A549细胞自噬的影响;CuBE-PLA-NP可通过调控BECN1的表达诱导A549细胞凋亡。结论以葫芦素BE聚乳酸纳米微粒为载体,lncRNA靶向调控BECN1能够促进肺癌细胞发生自噬,促进其凋亡。