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靶向抑制黑质网状部GABA能神经元的DRP1改善肝性脑病小鼠运动功能
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作者 李晓东 铁静静 +4 位作者 陈京浩 孙毓泽 吴菲菲 杨雁灵 王亚云 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期25-34,共10页
目的:探讨黑质网状部(SNr)的GABA能神经元中线粒体分裂对急性肝性脑病(AHE)小鼠运动障碍的影响。方法:利用硫代乙酰胺(TAA)腹腔注射制备AHE小鼠模型,通过苏木精-伊红(HE)染色观察AHE小鼠肝小叶的变化,利用生化检测试剂盒检测AHE小鼠血... 目的:探讨黑质网状部(SNr)的GABA能神经元中线粒体分裂对急性肝性脑病(AHE)小鼠运动障碍的影响。方法:利用硫代乙酰胺(TAA)腹腔注射制备AHE小鼠模型,通过苏木精-伊红(HE)染色观察AHE小鼠肝小叶的变化,利用生化检测试剂盒检测AHE小鼠血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和血氨的变化。接下来通过转棒疲劳实验、高架十字迷宫实验、旷场实验观察AHE小鼠运动功能。进一步利用透射电镜观察分析AHE小鼠SNr的线粒体面积、周长、圆率等形态学指标的变化,Western Blot观察AHE小鼠SNr的线粒体分裂融合相关分子的表达变化。接下来,利用重组腺相关病毒(AAV)靶向调控AHE小鼠SNr的线粒体动力相关蛋白1(DRP1)的表达,在荧光酶标仪上检测SNr的线粒体膜电位(MMP)、细胞的ATP和活性氧(ROS),并观察小鼠运动功能的变化。结果:较对照组,AHE小鼠运动功能明显降低,SNr的线粒体分裂明显增强,线粒体分裂相关蛋白表达显著升高;AHE小鼠SNr的MMP显著下降,细胞的ATP下降,ROS升高。靶向抑制AHE小鼠SNr的DRP1表达后,运动改善;进一步观察发现,AHE小鼠SNr的线粒体分裂被抑制后,MMP显著升高,细胞的ATP升高,ROS下降,证明线粒体功能明显改善。结论:靶向抑制AHE小鼠黑质网状部GABA能神经元的线粒体分裂,可以改善线粒体形态和功能,从而缓解其运动障碍。 展开更多
关键词 急性肝性脑病 黑质网状部 线粒体 线粒体动力相关蛋白1 小鼠
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Mdivi-1对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮炎的作用及机制研究
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作者 顾玉洁 熊莉 +4 位作者 吴倩 杨文翠 李元朝 周春丽 王儒鹏 《免疫学杂志》 CAS CSCD 2024年第1期59-64,共6页
目的 观察动力相关蛋白Drp1抑制剂Mdivi-1对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮炎的作用,并探讨其作用机制。方法 雌性8周龄C57BL/6小鼠随机分为对照组、咪喹莫特(IMQ)模型组、IMQ+Mdivi-1实验组。使用咪喹莫特构建小鼠银屑病样模型,实验组予... 目的 观察动力相关蛋白Drp1抑制剂Mdivi-1对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮炎的作用,并探讨其作用机制。方法 雌性8周龄C57BL/6小鼠随机分为对照组、咪喹莫特(IMQ)模型组、IMQ+Mdivi-1实验组。使用咪喹莫特构建小鼠银屑病样模型,实验组予以Mdivi-1腹腔注射,对照组及模型组予以等剂量溶剂腹腔注射。于造模第7天处死小鼠并取材。用PASI评分评判小鼠皮损严重程度,冰冻切片荧光染色检测小鼠皮肤组织中ROS含量,HE染色观察皮损组织形态学变化,免疫组织化学染色检测小鼠皮肤内Drp1蛋白的表达,Western blot检测小鼠皮肤组织中Drp1、NLRP3、IL-1β蛋白水平,ELISA技术检测小鼠血清中IL-17A、IL-18的表达。结果 模型组小鼠背部皮肤出现红斑、鳞屑、增厚等典型银屑病样皮损,实验组皮损明显减轻。实验组的PASI评分明显低于模型组。HE染色提示,实验组小鼠背部皮肤表皮厚度明显低于模型组,且Munro微脓肿明显减少。ROS荧光染色提示实验组ROS含量明显低于模型组。免疫组化结果显示,Drp1蛋白在实验组中表达明显低于模型组。Western blot结果显示,Drp1、NLRP3、IL-1β在实验组中的表达量明显低于模型组。ELISA结果提示,实验组小鼠血清中IL-17A、IL-18的含量低于模型组。结论 Mdivi-1可通过抑制动力相关蛋白Drp1的表达,减轻咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮炎。 展开更多
关键词 Mdivi-1 drp1 银屑病 NLRP3炎症小体
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Drp1的调控对PINK1突变转基因果蝇的保护作用 被引量:4
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作者 陈梅玲 胡艳梅 +3 位作者 崔莹 曾爱源 林小慧 李清华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期410-417,共8页
帕金森病(PD)是以黑质致密部多巴胺神经元选择性减少和胞浆内路易小体的形成为特征的神经退行性疾病。研究发现,PTEN诱导激酶1(PINK1)基因突变导致家族性早发型帕金森病的发生。在转基因果蝇中,PINK1功能丢失导致间接飞行肌缺陷,线粒体... 帕金森病(PD)是以黑质致密部多巴胺神经元选择性减少和胞浆内路易小体的形成为特征的神经退行性疾病。研究发现,PTEN诱导激酶1(PINK1)基因突变导致家族性早发型帕金森病的发生。在转基因果蝇中,PINK1功能丢失导致间接飞行肌缺陷,线粒体结构、功能障碍,多巴胺神经元丢失。本研究在PINK1突变PD转基因果蝇中,进行发动蛋白相关蛋白1(Drp1)过表达和敲低,探索Drp1对PD转基因果蝇的保护作用及其可能机制。本研究选用MHC-Gal4/UAS系统的PD转基因果蝇模型,特异性启动PINK1B9基因于果蝇肌肉组织中表达;运用Drp1基因过表达和RNA干扰干预PINK1B9转基因果蝇,研究其对PD转基因果蝇的作用。结果显示,不论过表达Drp1还是Drp1敲低均可挽救PINK1突变转基因果蝇,降低翅膀异常率,改善飞行能力,恢复间接飞行肌排列,调节线粒体形态,提高ATP生成量,上调NDUFS3蛋白表达水平。本文结果提示,Drp1的调控挽救PINK1突变转基因果蝇与线粒体呼吸链有关。 展开更多
关键词 转基因果蝇 PTEN诱导激酶1(PINK1)突变 发动蛋白相关蛋白1(drp1) 线粒体
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阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)与动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1) 被引量:1
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作者 李华 龙建纲 刘健康 《生物学杂志》 CAS CSCD 2013年第2期68-72,共5页
阿尔茨海默病(AD)已成为威胁老年人生活的一种常见病,对老年人的生活质量有着严重的影响,目前尚无有效地防治方法。最新研究发现在阿尔茨海默病的病理发生中,神经细胞伴有显著的线粒体代谢紊乱和动态变化的异常,其中动力相关蛋白1(Drp1... 阿尔茨海默病(AD)已成为威胁老年人生活的一种常见病,对老年人的生活质量有着严重的影响,目前尚无有效地防治方法。最新研究发现在阿尔茨海默病的病理发生中,神经细胞伴有显著的线粒体代谢紊乱和动态变化的异常,其中动力相关蛋白1(Drp1)是参与线粒体动态变化的关键分子。深入研究阿尔茨海默病中线粒体动态变化的异常及Drp1等关键分子的作用机制,对于揭示AD的发生机制及寻找药物作用靶点具有重要意义。综述了Drp1在阿尔茨海默病中的调控机制。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病(AD) 动力相关蛋白1(drp1) 线粒体
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DRP1表达与恶性肿瘤患者预后关系的Meta分析 被引量:1
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作者 吕佳乐 朱云娜 +2 位作者 王雅 梁路 李宁 《海南医学》 CAS 2021年第17期2278-2283,共6页
目的系统评价动力相关蛋白1(DRP1)的表达对肿瘤患者预后的评估价值,以期为肿瘤患者预测预后和治疗提供新的靶点。方法计算机检索PubMed、EMBASE、Web of Science、CNKI及万方等数据库,检索时间为建库至2020年10月,按照文献纳入与排除标... 目的系统评价动力相关蛋白1(DRP1)的表达对肿瘤患者预后的评估价值,以期为肿瘤患者预测预后和治疗提供新的靶点。方法计算机检索PubMed、EMBASE、Web of Science、CNKI及万方等数据库,检索时间为建库至2020年10月,按照文献纳入与排除标准筛选文献并提取数据,根据Newcastle-Ottawa Scale(NOS)量表评估文献质量,采用Review Maneger5.3软件进行Meta分析。结果共纳入10篇研究共1138例患者。Meta分析结果显示DRP1高表达与肿瘤患者OS有关(HR=1.46,95%CI为1.11~1.92,P<0.001)。亚组分析结果显示,DRP1高表达与消化系统恶性肿瘤患者OS相关(HR=1.61,95%CI为1.12~2.31,P<0.001),与肿瘤患者淋巴结转移发生率相关(OR=3.24,95%CI为1.85~5.67,P<0.001)。结论DRP1高表达的肿瘤患者预后较差,且与淋巴结转移发生相关,可以作为肿瘤预测预后及治疗的新靶点。 展开更多
关键词 动力相关蛋白1 恶性肿瘤 消化系统肿瘤 预后 淋巴结转移 META分析
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动力相关蛋白1促进高糖诱导的冠状动脉内皮细胞线粒体损伤 被引量:2
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作者 郑曦 何蔺 +1 位作者 窦晓涛 蒲明玉 《解剖学研究》 CAS 2023年第4期379-383,共5页
目的探讨动力相关蛋白1(Drp1)在高糖诱导的冠状动脉内皮细胞中的表达水平、生物学功能及其对线粒体功能的影响。方法通过实时荧光定量PCR和Western blot实验检测高糖诱导的冠状动脉内皮细胞中Drp1、OPA1及MFN1的表达水平;通过转染Drp1 s... 目的探讨动力相关蛋白1(Drp1)在高糖诱导的冠状动脉内皮细胞中的表达水平、生物学功能及其对线粒体功能的影响。方法通过实时荧光定量PCR和Western blot实验检测高糖诱导的冠状动脉内皮细胞中Drp1、OPA1及MFN1的表达水平;通过转染Drp1 shRNA表达质粒敲低Drp1的表达,用CCK⁃8实验检测细胞活力,用Annexin V染色实验检测细胞凋亡水平,并通过JC⁃1荧光染色实验和Calcein⁃AM荧光染色实验分别检测线粒体膜电位和线粒体通透性转换孔。结果高浓度葡萄糖处理的冠状动脉内皮细胞中Drp1 mRNA和蛋白的表达显著升高(均P<0.05),细胞活力显著下降(P<0.05),凋亡细胞比例显著升高(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.05),线粒体通透性转换孔活性升高(P<0.05);敲低Drp1可以增强细胞活力(P<0.05),并显著抑制高糖诱导的细胞凋亡(P<0.05)、线粒体膜电位下降(P<0.05)和线粒体通透性转换孔活性的升高(P<0.05)。结论Drp1在高糖诱导的冠状动脉内皮细胞损伤中表达水平升高,敲低Drp1可以缓解高糖诱导的冠状动脉内皮细胞损伤和线粒体功能损伤。 展开更多
关键词 糖尿病 冠心病 动力相关蛋白1 线粒体 冠状动脉内皮细胞
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Multifaceted functions of Drp1 in hypoxia/ischemia- induced mitochondrial quality imbalance: from regulatory mechanism to targeted therapeutic strategy
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作者 Shuai Hao He Huang +2 位作者 Rui-Yan Ma Xue Zeng Chen-Yang Duan 《Military Medical Research》 SCIE CAS 2024年第4期589-615,共27页
Hypoxic-ischemic injury is a common pathological dysfunction in clinical settings.Mitochondria are sensitive organelles that are readily damaged following ischemia and hypoxia.Dynamin-related protein 1(Drp1)regulates ... Hypoxic-ischemic injury is a common pathological dysfunction in clinical settings.Mitochondria are sensitive organelles that are readily damaged following ischemia and hypoxia.Dynamin-related protein 1(Drp1)regulates mitochondrial quality and cellular functions via its oligomeric changes and multiple modifications,which plays a role in mediating the induction of multiple organ damage during hypoxic-ischemic injury.However,there is active controversy and gaps in knowledge regarding the modification,protein interaction,and functions of Drp1,which both hinder and promote development of Drp1 as a novel therapeutic target.Here,we summarize recent findings on the oligomeric changes,modification types,and protein interactions of Drp1 in various hypoxic-ischemic diseases,as well as the Drp1-mediated regulation of mitochondrial quality and cell functions following ischemia and hypoxia.Additionally,potential clinical translation prospects for targeting Drp1 are discussed.This review provides new ideas and targets for proactive interventions on multiple organ damage induced by various hypoxic-ischemic diseases. 展开更多
关键词 Dynamin-related protein 1(drp1) Hypoxic-ischemic injury Mitochondrial quality imbalance Cell dysfunction Organ damage
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敲减抗增殖蛋白2促进非小细胞肺癌细胞系A549凋亡 被引量:1
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作者 张婧 杨自更 +4 位作者 韦红梅 宁海虹 薛茜茜 金玲 吴宾 《基础医学与临床》 2023年第10期1522-1529,共8页
目的探讨抑制抗增殖蛋白2(PHB2)表达对非小细胞肺癌细胞系A549凋亡的影响及机制。方法慢病毒感染非小细胞肺癌细胞系A549,建立敲减PHB2的稳转细胞株,用动力相关蛋白1(DRP1)抑制剂Mdivi-1处理敲减PHB2的A549细胞。Western blot检测PHB2、... 目的探讨抑制抗增殖蛋白2(PHB2)表达对非小细胞肺癌细胞系A549凋亡的影响及机制。方法慢病毒感染非小细胞肺癌细胞系A549,建立敲减PHB2的稳转细胞株,用动力相关蛋白1(DRP1)抑制剂Mdivi-1处理敲减PHB2的A549细胞。Western blot检测PHB2、p-DRP1(Ser616)和DRP1蛋白表达水平;TUNEL染色和annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡;MitoTracker染色评估线粒体分裂情况;用相应试剂盒检测线粒体含量、柠檬酸合酶活性和细胞色素c含量。结果与shCtrl组相比,shPHB2组A549细胞凋亡率增加(P<0.05),DRP1介导的线粒体分裂增加(P<0.05),ATP含量减少(P<0.05),柠檬酸合酶活性降低(P<0.05),线粒体内细胞色素c减少(P<0.05)。与shPHB2组相比,shPHB2+Mdivi-1组A549细胞凋亡率减少(P<0.05),DRP1介导的线粒体分裂减少(P<0.05),ATP含量增加(P<0.05),柠檬酸合酶活性增加(P<0.05),线粒体内细胞色素c增加(P<0.05)。结论抑制PHB2促进A549细胞凋亡,其机制可能与促进DRP1介导的线粒体分裂有关。 展开更多
关键词 抗增殖蛋白2 线粒体分裂 非小细胞肺癌 动力相关蛋白1 凋亡
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法舒地尔减轻大鼠缺血/再灌注心肌线粒体损伤和细胞凋亡 被引量:11
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作者 叶红伟 张冠军 +3 位作者 曹瑞平 康品方 李正红 高琴 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期909-914,共6页
目的观察线粒体融合蛋白2(Mfn2)和发动蛋白相关蛋白1(Drp1)在法舒地尔抑制Rho激酶对抗心肌缺血/再灌注(I/R)损伤中的变化,并分析其意义。方法离体大鼠心脏,结扎冠状动脉左前降支缺血0.5 h,持续再灌注2 h模拟心肌I/R损伤模型。实验分假... 目的观察线粒体融合蛋白2(Mfn2)和发动蛋白相关蛋白1(Drp1)在法舒地尔抑制Rho激酶对抗心肌缺血/再灌注(I/R)损伤中的变化,并分析其意义。方法离体大鼠心脏,结扎冠状动脉左前降支缺血0.5 h,持续再灌注2 h模拟心肌I/R损伤模型。实验分假手术组、I/R组、法舒地尔组。测定心室动力学变化和再灌注期间冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,透射电镜观察心肌超微结构改变,免疫组织化学染色检测Rho激酶下游磷酸化的蛋白磷酸酶1调节亚基12A(p-PPP1R12A/p-MYPT1)表达,Western blot法检测Mfn2、Drp1和裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)蛋白水平。结果与假手术组相比,各组再灌注不同时间点左心室收缩和舒张功能均降低,LDH释出增加;与I/R组相比,法舒地尔组左心室收缩和舒张功能得到改善,LDH释出减少;透射电镜结果显示I/R组心肌明显肌丝断裂、肌原纤维结构不完整、线粒体损伤,免疫组织化学染色显示p-MYPT1蛋白表达上调;与I/R组比,法舒地尔组心肌肌原纤维和线粒体损伤减轻,p-MYPT1蛋白表达下调;Western blot结果显示,与假手术组相比,I/R组Mfn2蛋白表达减少,Drp1和c-caspase-3蛋白水平增加,与I/R组相比,法舒地尔组Mfn2蛋白水平无明显变化,Drp1和c-caspase-3蛋白水平减少。结论法舒地尔抑制Rho激酶的抗心肌I/R损伤作用与Mfn2蛋白表达无明显关联,可能与降低Drp1蛋白表达减少线粒体损伤,进而减少细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 心脏 缺血/再灌注 法舒地尔 线粒体融合蛋白2(Mfn2) 发动蛋白相关蛋白1(drp1)
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安寐丹通过修复线粒体分裂/融合失衡状态改善睡眠剥夺模型大鼠学习记忆水平 被引量:8
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作者 谢光璟 徐波 +1 位作者 黄攀攀 王平 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2021年第9期2986-2993,共8页
目的探讨安寐丹(AMD)对睡眠剥夺大鼠学习记忆的影响及其作用机制。方法60只Sprague Dawley雄性大鼠随机分为空白组(control)、模型组(SD)、安寐丹(AMD,9.09 g·kg^(-1)·d^(-1))组和褪黑素组(MT,0.27 g·kg^(-1)·d^(-... 目的探讨安寐丹(AMD)对睡眠剥夺大鼠学习记忆的影响及其作用机制。方法60只Sprague Dawley雄性大鼠随机分为空白组(control)、模型组(SD)、安寐丹(AMD,9.09 g·kg^(-1)·d^(-1))组和褪黑素组(MT,0.27 g·kg^(-1)·d^(-1))。通过自制睡眠剥夺箱进行持续性睡眠剥夺30天。以Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆水平,尼氏染色检测海马神经元形态改变,免疫组化检测海马CA1、CA3区Drp1、Mfn2蛋白的表达水平,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测海马Drp1、Mfn2 mRNA的表达。结果与control组比较,SD组学习记忆明显受损,表现为水迷宫逃避潜伏期、游泳总路程、初次穿越平台时间延长,跨越平台次数和目标象限时间减少(P<0.01),同时海马神经元尼氏小体少,着色浅;CA1、CA3区Drp1、Mfn2蛋白表达减少,mRNA表达下调(P<0.01)。与SD组比较,AMD改善了SD大鼠的学习记忆,缩短逃避潜伏期、游泳总路程及初次穿越平台时间,增加平台次数和目标象限时间(P<0.01),同时海马神经元胞体较为饱满,尼氏小体增加,着色加深;CA1、CA3区Drp1、Mfn2蛋白增加,mRNA表达上调(P<0.01)。结论安寐丹改善SD大鼠学习记忆障碍可能是与修复线粒体分裂/融合失衡状态,升高Drp1、Mfn2蛋白及mRNA表达相关。 展开更多
关键词 安寐丹 睡眠剥夺 学习记忆 线粒体分离/融合 动力蛋白相关蛋白 1 线粒体融合蛋白-2
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依达拉奉对毒死蜱所致大鼠脑损伤的保护作用及其机制
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作者 林佩瑶 宋英 +2 位作者 秦东旭 卢栋泽 范徐丽 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期163-168,共6页
目的:探讨依达拉奉在毒死蜱诱导的神经元凋亡中的保护作用及其线粒体机制。方法:在随机双盲的原则下,将大鼠分为对照组、毒死蜱组、依达拉奉组(n=6);以毒死蜱(18 mg/0.7 ml/kg, sc.)造模,在注射毒死蜱1 h后用依达拉奉(10 mg/1.6 ml/kg, ... 目的:探讨依达拉奉在毒死蜱诱导的神经元凋亡中的保护作用及其线粒体机制。方法:在随机双盲的原则下,将大鼠分为对照组、毒死蜱组、依达拉奉组(n=6);以毒死蜱(18 mg/0.7 ml/kg, sc.)造模,在注射毒死蜱1 h后用依达拉奉(10 mg/1.6 ml/kg, ip.)治疗。连续注射毒死蜱及依达拉奉28 d后,通过旷场和水迷宫试验测试大鼠学习记忆能力。在心脏灌流后取大鼠脑组织,通过HE染色检测大脑海马区的神经元损伤情况以及透射电子显微镜观察线粒体和细胞核损伤情况。测定Na^(+)-K^(+)-ATP酶、ATP含量判断线粒体损伤情况。用免疫组织化学和免疫印迹法测定线粒体分裂蛋白DRP1及DRP1的Ser 637位点磷酸化的表达。结果:与对照组相比,毒死蜱组大鼠在旷场实验的3 min内的总运动距离和平均速度明显减小(P<0.01),在水迷宫试验中的1 min内的逃避潜伏期明显延长、平台穿越次数明显减少(P<0.01),脑组织的ATP酶活性明显降低(P<0.01)且ATP含量下降(P<0.05)、线粒体DRP1的Ser637位点磷酸化水平显著下降(P<0.01);依达拉奉治疗后,大鼠在旷场试验中的运动总距离增大、平均速度增加(P<0.05),在水迷宫试验中的潜伏期减短、穿越平台次数增加(P<0.01),脑部病理切片显示神经细胞排列整齐、细胞核和线粒体损伤明显改善,脑组织的ATP酶活性升高(P<0.01)、ATP水平上升(P<0.05)、线粒体DRP1的Ser637位点磷酸化水平升高(P<0.01)。结论:依达拉奉通过促进DRP1的Ser637位点磷酸化的表达减轻毒死蜱所致大鼠脑损伤。 展开更多
关键词 毒死蜱 依达拉奉 动力相关蛋白1(drp1) 线粒体 大鼠
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补阳还五汤防治2型糖尿病小鼠骨骼肌病变的作用 被引量:1
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作者 王杨 姜立娟 +2 位作者 崔巍 张文风 魏岩 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期10-16,共7页
目的:基于线粒体转运、糖代谢、氧化应激及炎性介质探讨补阳还五汤防治2型糖尿病骨骼肌病变的作用。方法:选用60只SPF级雄性C57BL/6J小鼠,高脂饲料联合链脲佐菌素腹腔注射构建2型糖尿病小鼠模型,按随机数字表法随机分组,其中正常组、补... 目的:基于线粒体转运、糖代谢、氧化应激及炎性介质探讨补阳还五汤防治2型糖尿病骨骼肌病变的作用。方法:选用60只SPF级雄性C57BL/6J小鼠,高脂饲料联合链脲佐菌素腹腔注射构建2型糖尿病小鼠模型,按随机数字表法随机分组,其中正常组、补阳还五汤高、中、低剂量组、二甲双胍组、模型组各10只。补阳还五汤各剂量组及二甲双胍组灌喂剂量分别为86.5、43.2、21.6 g·kg^(-)1、150 mg·kg^(-1);实验期间定期检测小鼠血糖等指标,实验结束后取骨骼肌,分别置于4%多聚甲醛-80℃冰箱冻存。进行血液样本送检,骨骼肌采用苏木素-伊红(HE)染色,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎症指标及活性氧(ROS),蛋白免疫印迹法(Western blot)、免疫组化检测线粒体蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组小鼠空腹血糖、饮水量、进食量显著升高(P<0.01),体质量显著降低(P<0.01),与模型组比较,补阳还五汤组及二甲双胍组小鼠空腹血糖、进水量、进食量明显降低(P<0.05,P<0.01),体质量上升(P<0.01);与正常组比较,模型组TNF-α、IL-6、ROS显著增加(P<0.01),与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各组TNF-α、IL-6、ROS均明显下降(P<0.05,P<0.01)。模型组骨骼肌肌纤维普遍萎缩性变细,提示骨骼肌萎缩,形态结构改变,而二甲双胍组及补阳还五汤各组小鼠骨骼肌病理状态有所减轻,纤维束形态部分恢复正常;与正常组比较,模型组线粒体融合蛋2(Mfn2)显著减少(P<0.01),与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各剂量组Mfn2明显增多(P<0.05,P<0.01);与正常组比较,模型组分裂蛋白Drp1显著增多(P<0.01),与模型组比较,二甲双胍组与补阳还五汤各剂量组分裂蛋白1(Drp1)显著减少(P<0.01)。结论:补阳还五汤可以改善2型糖尿病骨骼肌病变小鼠的体质量及骨骼肌病理形态,降低空腹血糖、进食量、进水量、TNF-α、IL-6、ROS值及分裂蛋白Drp1,升高体质量及线粒体融合蛋白Mfn2。 展开更多
关键词 补阳还五汤 2型糖尿病 骨骼肌 线粒体 线粒体融合蛋2(Mfn2) 分裂蛋白1(drp1)
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Mdivi-1减轻异丙酚诱导的发育期神经元凋亡 被引量:2
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作者 胡锦涛 焦晶晶 彭晓红 《中国医院药学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期53-56,71,共5页
目的:探讨mdivi-1对异丙酚诱导胎鼠海马神经元凋亡的影响。方法:原代培养孕16~18 d SD大鼠胎鼠海马神经元5 d,采用随机数字表法,将神经元随机分为5组(n=6):对照组(C组)、异丙酚组(P组)和不同浓度mdivi-1组(M1~M3组,浓度分别为1,2. 5,5... 目的:探讨mdivi-1对异丙酚诱导胎鼠海马神经元凋亡的影响。方法:原代培养孕16~18 d SD大鼠胎鼠海马神经元5 d,采用随机数字表法,将神经元随机分为5组(n=6):对照组(C组)、异丙酚组(P组)和不同浓度mdivi-1组(M1~M3组,浓度分别为1,2. 5,5μmol·L-1,P组加入异丙酚(终浓度为30μmol·L-1)孵育3 h,M1~3组给予异丙酚前4 h加入mdivi-1,使各组mdivi-1浓度分别为1、2. 5和5μmol·L-1,C组加入等量生理盐水。检测发育期神经元活性和caspase3活性; Western blot法测定线粒体p-drp1 (ser616)、Bax表达;采用实时定量PCR检测BDNF及Bcl-2 mRNA的表达。结果:与C组相比,P组神经元活性降低(P <0. 05),Caspase3活性增加(P <0. 05);与P组比较,M1~M3组神经元活性增高(P <0. 05)、Caspase3活性降低(P <0. 05);与M1组比较,M2-3组神经活性增高(P <0. 05)、Caspase3活性降低(P <0. 05); M2与M3比较,神经元活性及Caspase3活性差异无显著性(P> 0. 05),因此后续实验选择M2浓度处理,称为M组。与C组比较,P组线粒体p-drp1(ser616)及Bax表达升高(P <0. 05)、BDNF和Bcl-2 mRNA表达下调(P<0. 05);与P组比较,M组线粒体p-drp1 (ser616)及Bax表达降低(P <0. 05),BDNF和Bcl-2 mRNA表达下调(P <0. 05)。结论:Mdivi-1通过减少p-drp1 (ser616)和Bax向神经元移位,抑制线粒体过度分裂及降低线粒体通透性并且上调BDNF和Bcl-2,从而减轻异丙酚诱导发育期海马神经元凋亡。 展开更多
关键词 mdivi-1 drp1 异丙酚 神经元 细胞凋亡
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线粒体动力学介导冠心病血瘀证心肌能量代谢 被引量:8
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作者 周曼丽 俞赟丰 +4 位作者 罗晓欣 兰晓栋 金梦雨 张宜帆 简维雄 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第21期80-90,共11页
目的:以冠心病血瘀证形成过程中3个阶段大鼠模型为切入点,从线粒体融合-分裂动态变化的角度探索冠心病血瘀证形成过程能量变化的机制。方法:30只大鼠随机分为空白组6只和模型组24只。空白组给予普通饲料喂养,模型组大鼠高脂饲料适应性喂... 目的:以冠心病血瘀证形成过程中3个阶段大鼠模型为切入点,从线粒体融合-分裂动态变化的角度探索冠心病血瘀证形成过程能量变化的机制。方法:30只大鼠随机分为空白组6只和模型组24只。空白组给予普通饲料喂养,模型组大鼠高脂饲料适应性喂养7 d后进行维生素D(3 VitD3,30万U·kg^(-1))灌胃,14 d后再予以VitD3灌胃(20万U·kg^(-1)),继续高脂饲料喂养21 d后,随机选择6只大鼠为血瘀证前期组,进行模型验证并同时取材;其余大鼠继续高脂饲养30 d后随机选择6只为亚血瘀证期组;剩下的大鼠为心血瘀阻证期组,继续高脂饲养的同时予以皮下多点注射异丙肾上腺素(ISO,5 mg·kg^(-1))连续3 d,1周后记录心电图。采用透射电镜观察线粒体形态、数量变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测线粒体动力学蛋白表达量,免疫荧光技术检测相关蛋白的细胞定位。结果:与空白组比较,血瘀证前期组、亚血瘀证期组总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平明显上调(P<0.05);与空白组比较,血瘀证前期组血液流变学指标明显上调(P<0.05)。空白组主动脉三层膜结构完整;血瘀证前期组中膜开始出现明显的钙化现象,内膜少量炎性细胞附着;亚血瘀证组动脉内膜下及中膜平滑肌出现空腔结构;心血瘀阻证组动脉管壁三层结构均严重破坏。空白组心电图提示P波规律出现,QRS波波形规律,无宽大畸形,S-T段未见明显压低及抬高;血瘀证前期组心电图与空白组心电图对比未见明显异常;亚血瘀证期组心电图出现J点上抬趋势,S-T段有稍许抬高,但抬高程度≤0.1 mV;心血瘀阻证期心电图提示S-T段明显压低,压低程度>0.1 mV,J点压低>0.1 mV。空白组线粒体大小、形态正常,嵴清晰致密;血瘀证前期组线粒体呈梭形,嵴稀疏;亚血瘀证期组部分线粒体形态上显著拉长,甚至出现空泡样改变;心血瘀阻证期组线粒体呈现破碎状态。与空白组比较,模型组线粒体融合蛋白2(Mfn2),动力学相关蛋白1(Drp1),分裂蛋白1(Fis1)表达均明显升高(P<0.05,P<0.01);与血瘀证前期组比较,心血瘀阻证组Mfn2表达下调(P<0.05);与空白组及血瘀证前期组比较,亚血瘀证组、心血瘀阻证组视神经萎缩症蛋白1(OPA1)表达下调(P<0.05,P<0.01);与血瘀证前期组比较,亚血瘀证组Drp1,Fis1蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01);与亚血瘀证组比较,心血瘀阻证组Mfn2,Drp1表达下调(P<0.01)。与空白组比较,血瘀证前期组及亚血瘀证组Mfn2及OPA1在线粒体中广泛聚集,而在心血瘀阻证期Mfn2红染明显变少;Drp1/Fis1在空白组及血瘀证前期组荧光表现微弱,而在亚血瘀证组及心血瘀阻证组荧光强度明显。结论:心肌细胞线粒体动力学随着心肌细胞能量需求的改变而变化。Mfn2在冠心病血瘀证形成过程早期阶段以融合效应为主,随着病程的逐渐发展,Mfn2开始介导线粒体自噬过程;OPA1在内膜融合及嵴的完整性中发挥作用,OPA1表达量下降与冠心病血瘀证加速发展密切相关;Drp1与Fis1将受损的线粒体分离出来为线粒体自噬作准备的过程有利于缓解机体能量需求和供应失衡的状态。 展开更多
关键词 线粒体动力学 冠心病血瘀证 线粒体融合蛋白2(Mfn2) 视神经萎缩相关蛋白1(OPA1) 动力学相关蛋白1(drp1) 分裂蛋白1(Fis1) 能量代谢
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不同浓度脂多糖对脓毒症急性肺损伤肺上皮细胞坏死性凋亡和线粒体自噬的影响 被引量:17
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作者 陈祝桂 彭志勇 +4 位作者 张智豪 梁青春 刘瑞蒙 张良清 刘友坦 《中华实用诊断与治疗杂志》 2020年第4期330-333,共4页
目的观察不同浓度脂多糖(lippopolysaccharide,LPS)对肺上皮细胞坏死性凋亡和线粒体动力学相关蛋白1(dynamin related protein 1,Drp1)依赖的线粒体自噬的影响,探讨LPS制作脓毒症急性肺损伤模型的合适浓度。方法对数生长期A549细胞分为... 目的观察不同浓度脂多糖(lippopolysaccharide,LPS)对肺上皮细胞坏死性凋亡和线粒体动力学相关蛋白1(dynamin related protein 1,Drp1)依赖的线粒体自噬的影响,探讨LPS制作脓毒症急性肺损伤模型的合适浓度。方法对数生长期A549细胞分为对照组、5 mg/L LPS组、10 mg/L LPS组、25 mg/L LPS组、50 mg/L LPS组,5 mg/L LPS组、10 mg/L LPS组、25 mg/L LPS组、50 mg/L LPS组分别采用PBS稀释的5、10、25、50 mg/L LPS处理16 h,对照组给予等体积PBS培养16 h。采用Western blot法检测各组细胞坏死性凋亡标志蛋白p-RIP3、RIPK1、p-MLKL和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α以及线粒体自噬标志蛋白PINK1、LC3B、Drp1、p-Mfn2相对表达量,并采用JC-1线粒体探针检测线粒体膜电位。结果10、25、50 mg/L LPS组细胞p-RIP3、RIPK1、p-MLKL、TNF-α、PINK1、Drp1、LC3B蛋白相对表达量依次增高(P<0.05),且均高于5 mg/L LPS组和对照组(P<0.05)。10、25、50 mg/L LPS组p-Mfn2蛋白相对表达量(1.043±0.085、0.844±0.085、0.204±0.040)和细胞线粒体膜电位(7.323±0.331、6.429±0.456、4.661±0.456)依次降低(P<0.05),且均低于5 mg/L LPS组(1.288±0.035、9.013±0.648)和对照组(2.497±0.440、14.392±1.216)(P<0.05)。5 mg/L LPS组细胞p-RIP3、RIPK1、p-MLKL、TNF-α、PINK1、LC3B蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05),p-Mfn2蛋白相对表达量和细胞线粒体膜电位低于对照组(P<0.05),Drp1蛋白相对表达量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论10~50 mg/L LPS可诱导肺上皮细胞发生坏死性凋亡,可能与Drp1依赖的线粒体自噬有关;10~50 mg/L LPS可能是建立脓毒症急性肺损伤细胞模型的较合适浓度。 展开更多
关键词 脓毒症 急性肺损伤 坏死性凋亡 线粒体动力相关蛋白1 线粒体自噬
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