血清IL-8、ESM-1、VAP-1在慢性阻塞性肺疾病临床诊断及病情评估中的应用

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清白细胞介素-8(IL-8)、内皮特异性分子-1(ESM-1)、血管黏附蛋白-1(VAP-1)表达水平,分析其与病情程度相关性及其对COPD的诊断价值。方法选取2021年11月至2022年8月郑州大学第一附属医院收治的153例COPD患者为研究对象,其中COPD稳定期42例(设为SCOPD组)、COPD急性加重期111例(设为AECOPD组),同时选取同期于医院体检的健康志愿者51例为对照组。比较两组临床资料及血清IL-8、ESM-1、VAP-1水平。对比不同病情程度患者血清IL-8、ESM-1、VAP-1水平。分析血清各指标与肺功能、生化指标、病情程度相关性。评价血清各指标对SCOPD、AECOPD的诊断价值。结果AECOPD组、SCOPD组血清IL-8、ESM-1、VAP-1水平高于对照组,且AECOPD组高于SCOPD组(P<0.05);IL-8、ESM-1、VAP-1与生化指标、COPD评估测试表(CAT)、病情程度呈正相关,与肺功能呈负相关(P<0.05);血清各指标联合诊断SCOPD与AECOPD的曲线下面积(AUC)大于单独指标诊断(P<0.05)。结论血清IL-8、ESM-1、VAP-1与COPD病情严重程度相关,联合检测其水平对COPD具有一定诊断价值,可能作为疾病诊断、病情评估的重要指标。

lncRNA FUT8-AS1通过调控miR-142-5p/BCL2轴促进上皮性卵巢癌细胞增殖、侵袭和EMT

目的 观察FUT8-AS1基因在上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer, EOC)组织和细胞株中的表达,探讨影响EOC细胞增殖、侵袭和EMT的机制。方法 采用GEPIA2和Kaplan-Meier Plotter数据库分析FUT8-AS1在EOC组织中的表达及与患者生存期的关系。收集74例EOS组织标本和60例正常组织标本,应用RT-PCR法检测FUT8-AS1、miR-142-5p、BCL2和EMT相关基因的表达;运用CCK-8和Transwell实验检测敲低FUT8-AS1基因表达对EOC细胞CAOV3增殖和侵袭的影响。利用双荧光素酶报告分析FUT8-AS1与miR-142-5p的相互作用。结果 GEPIA2和Kaplan-Meier Plotter数据库分析发现,FUT8-AS1在EOC组织中的表达显著高于正常组织(P<0.05),FUT8-AS1高表达组的总生存率显著低于FUT8-AS1低表达组(P<0.01);FUT8-AS1基因在74例EOC组织中的表达明显高于正常组织[(2.547±1.370)vs(1.330±0.831),P<0.01],与大网膜转移、淋巴结转移、FIGO分期和总生存期均相关(P<0.01或P<0.05),敲低FUT8-AS1基因可以抑制CAOV3细胞的体外增殖、侵袭能力和EMT(P<0.01或P<0.05)。双荧光素酶报告分析系统检测显示,共转染miR-142-5p mimics和野生型FUT8-AS1-WT质粒,CAOV3细胞的荧光素酶活性明显降低(P<0.05),同时转染miR-142-5p mimics可抵消CAOV3细胞中由敲低FUT8-AS1导致的BCL2基因表达下调(P<0.05)。结论 FUT8-AS1基因在EOC中呈高表达且导致预后差,敲低FUT8-AS1基因可以抑制CAOV3细胞的体外增殖、侵袭能力和EMT,FUT8-AS1基因可能通过靶向miR-142-5p/BCL2分子轴促进EOC的进展。

SLC16A8通过正调控FN1促进结直肠癌细胞增殖、迁移及血管生成

目的探讨溶质载体家族16成员8(SLC16A8)通过上调纤维连接蛋白1(FN1)表达促进结直肠癌(CRC)细胞增殖和血管生成的作用机制。方法通过癌症基因体图谱(TCGA)的数据分析SLC16A8在CRC中的表达及与患者预后的关系,通过CancerSEA数据库对SLC16A8的功能进行分析。实时定量PCR法(RT-qPCR)检测CRC细胞中SLC16A8的表达水平,将培养CRC细胞分为SLC16A8过表达组,空白对照组和阴性对照组;CCK8法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移能力;小管形成实验检测血管生成能力。通过生物信息学方法分析SLC16A8的下游基因,蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析SLC16A8对FN1蛋白表达的影响。过表达SLC16A8并抑制FN1表达,将培养CRC细胞分为SLC16A8过表达组,SLC16A8过表达+FN1 siRNA组,空白对照组和阴性对照组,分析SLC16A8是否通过正调控FN1促进CRC细胞增殖和血管生成。结果SLC16A8在CRC中高表达,并且高表达SLC16A8的CRC患者预后较差。SLC16A8功能主要与血管生成相关。SLC16A8在CRC细胞中高表达并可促进CRC细胞增殖、迁移和血管生成。FN1可能是SLC16A8的下游基因并且两者表达呈正相关。SLC16A8可促进FN1蛋白表达,并且SLC16A8通过正调控FN1促进CRC细胞增殖、迁移和血管生成。结论SLC16A8在CRC中高表达,并且SLC16A8通过正调控FN1促进CRC细胞增殖、迁移和血管生成。

急性胆囊炎患者胆囊切除术后血清CCK-8、TREM1水平与发生感染的关系

目的分析急性胆囊炎(AC)患者胆囊切除术后血清胆囊收缩素-8(CCK-8)、髓系细胞触发受体1(TREM1)水平与发生感染的关系。方法将该院2020年12月至2022年12月收治的70例胆囊切除术后发生感染的AC患者纳入研究组,66例胆囊切除术后未发生感染的AC患者纳入对照组。采用酶联免疫吸附试验检测血清CCK-8、TREM1水平。采用Pearson相关分析胆囊切除术后发生感染AC患者血清中CCK-8、TREM1水平与炎症因子水平的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CCK-8、TREM1水平对AC患者胆囊切除术后发生感染的诊断价值。采用多因素Logistic回归分析AC患者胆囊切除术后感染的影响因素。结果研究组与对照组有胆囊结石、胆囊周边积液比例比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,研究组血清CCK-8水平明显降低,TREM1水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。胆囊切除术后发生感染的AC患者血清CCK-8水平与CRP、IL-8、TNF-α水平均呈负相关(P<0.05),TREM1水平与CRP、IL-8、TNF-α水平均呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清CCK-8与TREM1联合检测诊断AC患者胆囊切除术后发生感染的曲线下面积(AUC)明显大于CCK-8、TREM1单独检测的AUC(Z=5.703,P<0.001;Z=4.584,P<0.001)。有胆囊结石、胆囊周边积液及血清CCK-8水平降低、血清TREM1水平升高均为AC患者胆囊切除术后发生感染的危险因素(P<0.05)。结论胆囊切除术后发生感染的AC患者血清CCK-8水平降低,TREM1水平升高,二者联合检测能够提高对AC患者胆囊切除术后发生感染的诊断价值。

NapA蛋白诱导巨噬细胞分泌趋化因子单核细胞趋化蛋白1和白细胞介素8的机制

目的:研究幽门螺杆菌NapA蛋白诱导巨噬细胞分泌趋化因子单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)和白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)的机制。方法:利用NapA蛋白处理巨噬细胞,然后使用ELISA法检测上清中MCP-1和IL-8的表达量。使用C29、ST2825、SB203580、SP600125以及PDTC和巨噬细胞预先共孵育1 h,分别抑制Toll样受体2(toll-like receptors 2,TLR2)、髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、核糖核酸酶p蛋白亚基p38(ribonuclease p-protein subunit p38,p38)、应激活化蛋白激酶(c-Jun N-terminal kinase,c-Jun)和核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的活性,然后再加入NapA蛋白孵育4 h,收集上清并检查其中MCP-1和IL-8的表达量。结果:NapA蛋白刺激巨噬细胞后,MCP-1和IL-8的表达量明显高于未处理组。利用抑制剂C29抑制TLR2的活性,NapA蛋白诱导的MCP-1和IL-8表达量降低。使用ST2825、PDTC以及SB203580分别抑制MyD88、NF-κB以及p38的活性,能够降低NapA蛋白诱导巨噬细胞分泌MCP-1和IL-8的能力,但是抑制c-Jun不影响NapA蛋白诱导巨噬细胞分泌MCP-1和IL-8。结论:幽门螺杆菌NapA蛋白通过TLR2/MyD88/NF-κB通路诱导巨噬细胞分泌MCP-1和IL-8。

肾透明细胞癌来源的IL4I1介导PD1^(+)CD8^(+)T淋巴细胞募集的相关研究

目的:探讨肾透明细胞癌(ccRCC)来源的白细胞介素4诱导蛋白1(IL4I1)对表达PD1的CD8^(+)肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)的诱导与募集作用。方法:利用公共数据库分析ccRCC组织中IL4I1的表达与CD8^(+)T淋巴细胞浸润及免疫功能相关分子表达的关系,通过免疫组织化学法进行验证;构建过表达IL4I1蛋白的769P细胞系并验证;荧光定量PCR(qPCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测过表达IL4I1 ccRCC细胞表达趋化因子的变化。结果:高表达IL4I1的ccRCC组织中有更多的CD8^(+)T淋巴细胞浸润(P=6.843×10^(-7)),其浸润水平与IL4I1的表达水平呈正相关(r^(2)=0.5764,P<0.001);且浸润的CD8^(+)T细胞多表达抑制型分子PD1。过表达IL4I1的ccRCC 769P细胞所表达的趋化因子配体(CCL2、CCL4、CCL5、CCL17)在mRNA水平显著下调(t=95.16、116.1、21.28、68.47,均P<0.05)。同时,细胞培养上清中CCL4、CCL5浓度明显升高(t=6.760、6.846,均P<0.05)。结论:ccRCC组织中IL4I1与PD1+CD8^(+)T淋巴细胞浸润密切相关,可能通过调控趋化因子的表达,参与免疫抑制型CD8^(+)T淋巴细胞在肿瘤局部的募集。

沉默lncRNA PSMB8-AS1通过调控miR-144-5p表达对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)PSMB8-AS1通过靶向miR-144-5p对甲状腺癌细胞增殖和迁移的影响。方法研究时间为2023年3月至2024年5月,地点:青岛大学附属医院科研中心。采用GeneCards数据库分析PSMB8-AS1在甲状腺癌组织中的表达。采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测PSMB8-AS1在人正常甲状腺上皮细胞HTori-3以及甲状腺癌细胞系(8505C、FTC-133、KTC-1、TPC-1)中的表达。采用LncRBase和Cancer LncRNA Census数据库预测PSMB8-AS1的靶基因,用双荧光素酶基因报告实验验证。将FTC-133细胞根据转染物的不同分为si-NC组和si-PSMB8-AS1组,CCK-8法和划痕实验分别检测低表达PSMB8-AS1对FTC-133细胞增殖和迁移的影响,PSMB8-AS1与miR-144-5p的靶向关系。qPCR检测低表达PSMB8-AS1对FTC-133细胞中miR-144-5p和ITGA3 mRNA表达的影响。Western blot法检测低表达PSMB8-AS1对FTC-133细胞中ITGA3、Cyclin A、CDK2、FOXC2、Hedgehog蛋白表达的影响。结果PSMB8-AS1在甲状腺癌组织中表达高于癌旁组织(P<0.01)。PSMB8-AS1在甲状腺癌细胞质8505C、FTC-133、KTC-1、TPC-1中表达均高于HTori-3细胞(均P<0.01)。PSMB8-AS1能够靶向结合miR-144-5p(P<0.01)。si-PSMB8-AS1组FTC-133细胞中PSMB8-AS1表达低于si-NC组[(1.07±0.54)比(6.69±1.16),t=8.78,P<0.01]。低表达PSMB8-AS1后,si-PSMB8-AS1组FTC-133细胞的增殖水平均低于si-NC组(均P<0.01)。si-PSMB8-AS1组FTC-133细胞的迁移率低于si-NC组[(27.89±6.01)%比(68.08±6.16)%,t=4.67,P<0.01]。si-PSMB8-AS1组细胞中miR-144-5p表达高于si-NC组,ITGA3 mRNA表达低于si-NC组(t=7.45、3.13,均P<0.01)。低表达PSMB8-AS1能够抑制FTC-133细胞中ITGA3、Cyclin A、CDK2、FOXC2、Hedgehog蛋白表达(均P<0.01)。结论PSMB8-AS1在甲状腺癌组织和细胞系中表达显著上调,低表达PSMB8-AS1可通过靶向调控miR-144-5p抑制FTC-133细胞的增殖和迁移。

血浆IL-1β、IL-8和临床因素对儿童肿瘤患者血小板输注无效的预测价值研究

目的探讨化疗相关性血小板减少症(chemotherapy induced thrombocytopenia,CIT)的儿童肿瘤患者临床因素和炎症指标对血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness,PTR)的影响并评估其预测价值,为肿瘤患儿由非免疫因素导致PTR发生的机制研究提供基础和为患儿合理有效的输注血小板提供临床指导价值。方法以来自2022年11月至2024年2月间浙江大学医学院附属儿童医院的CIT儿童肿瘤患者共60名为研究对象,分为血小板输注无效组(PTR)和血小板输注有效组(Non-PTR)(各30名),收集其临床资料和血小板(Plt)输注前的实验室数据;采用单因素和多因素Logistic回归分析等方法分析PTR发生的影响因素;通过受试者工作特征(ROC)曲线对影响因素在PTR的预测价值中进行分析。结果PTR组血浆IL-1β浓度显著高于Non-PTR组[67.43 pg/mL(29.38,222.40)vs 36.38 pg/mL(17.27,68.06);P<0.05];PTR组血浆IL-8浓度显著高于Non-PTR组[60.97 pg/mL(39.07,112.00)vs 25.23 pg/mL(5.00,71.38);P<0.01];PTR组起始化疗至Plt输注间隔天数显著高于Non-PTR组[9.5 d(8.0,12.0)vs 12.0 d(9.8,13.2);P<0.05]。多因素逻辑回归分析中,IL-8浓度(OR=1.05,P<0.05)对PTR发生的影响具有统计学意义;ROC曲线分析,血浆IL-1β浓度[Cut-off值:64.88 pg/mL;AUC:0.653(95%CI:0.511~0.796)]、血浆IL-8浓度[Cut-off值:33.33 pg/mL;AUC:0.754(95%CI:0.631~-0.878)]和起始化疗至Plt输注间隔天数[Cut-off值:11.5 d;AUC:0.669(95%CI:0.529~0.810)]对PTR的预测具有统计学意义。结论血浆IL-8浓度是PTR发生的独立危险因素,血浆IL-1β、IL-8浓度和起始化疗至Plt输注间隔天数对PTR发生具有预测价值。

血清sCD73、S100A8/A9水平与晚期子宫内膜癌患者临床病理特征及PD-1/PD-L1抑制剂治疗预后的关联性分析

目的 分析血清可溶性CD73(sCD73)、S100钙结合蛋白A8/A9(S100A8/A9)与晚期子宫内膜癌患者临床病理特征及程序性死亡受体-1(PD-1)/程序性死亡配体1(PD-L1)抑制剂治疗预后的关联性。方法 招募2020年3月至2021年2月于齐齐哈尔市第一医院接受PD-1/PD-L1抑制剂治疗的晚期子宫内膜癌患者142例,入院后于晨间采集空腹肘部静脉血5 mL,取血清,采用酶联免疫吸附法测定患者血清sCD73、S100A8/A9水平。在随访期间,有58例患者死亡(死亡组),84例存活(存活组)。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清sCD73、S100A8/A9水平预测患者生存结局的效能。根据ROC曲线分析的最佳截断值将患者分为sCD73高表达组、sCD73低表达组以及S100A8/A9高表达组、S100A8/A9低表达组。采用Cox回归分析影响PD-1/PD-L1抑制剂治疗晚期子宫内膜癌生存预后的因素。分析血清sCD73、S100A8/A9表达水平与患者临床病理特征的关联性。结果 存活组血清sCD73、S100A8/A9水平低于死亡组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清sCD73、S100A8/A9均能有效预测PD-1/PD-L1抑制剂治疗晚期子宫内膜癌患者的生存结局(P<0.05),其最佳截断值分别为5.30μg/L、3.06μg/mL。sCD73、S100A8/A9低表达组的生存预后均优于其高表达组(log-rank检验:χ^(2)=91.367,P<0.001;χ^(2)=69.852,P<0.001)。多因素Cox回归分析结果显示,较高的血清sCD73[HR(95%CI)=2.511(1.497~4.214),P<0.001]、S100A8/A9[HR(95%CI)=1.806(1.106~2.948),P=0.018]水平是患者生存预后不良的独立危险因素。sCD73、S100A8/A9高表达组低分化程度占比显著大于其低表达组(P<0.05)。结论 晚期子宫内膜癌患者血清sCD73、S100A8/A9高水平可能提示其肿瘤分化程度低,是PD-1/PD-L1抑制剂治疗患者生存预后不良的危险因素。

老年绝经后骨质疏松症患者血清CXCL1、CXCL8、CXCL12的表达及其预测骨折发生的价值

目的探讨血清CXC趋化因子配体(CXC chemokine ligand,CXCL)1、CXCL8及CXCL12在老年绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)患者中的表达及其联合骨折风险评估工具(fracture risk assessment tool,FRAX)预测骨折发生的价值。方法选取2021年1月至2023年12月中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院收治的老年女性PMOP患者128例,年龄60~86岁,平均(69.20±6.28)岁;另选取50例老年女性体检正常者(对照组)作为对照,年龄60~82岁,平均(67.40±5.93)岁。128例老年PMOP患者分为骨折组56例和未骨折组72例,根据FRAX评分检查分为骨折高风险组77例和骨折低风险组51例。比较各组血清CXCL1、CXCL8及CXCL12水平。多因素Logistic回归分析影响老年PMOP患者发生骨折的危险因素,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析CXCL1、CXCL8及CXCL12联合FRAX评分对老年PMOP患者骨折发生的价值。采用Pearson相关分析血清CXCL1、CXCL8、CXCL12水平与FRAX评分的相关性。结果骨折组和未骨折组血清CXCL1、CXCL8及CXCL12水平均明显高于对照组(P<0.001),且骨折组血清CXCL1、CXCL8及CXCL12水平均明显高于未骨折组(P<0.001)。骨折高风险组血清CXCL1、CXCL8及CXCL12水平均明显高于低风险组(P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,血清CXCL1、CXCL8及CXCL12水平升高是影响老年PMOP患者发生骨折的危险因素。ROC曲线显示,CXCL1、CXCL8及CXCL12联合FRAX评分预测老年PMOP患者发生骨折的AUC最大(0.96,95%CI:0.90~0.99),其准确度为94.15%。相关分析显示,老年PMOP患者血清CXCL1、CXCL8及CXCL12水平与FRAX评分均呈正相关(P<0.001)。结论血清CXCL1、CXCL8及CXCL12水平升高是影响老年PMOP患者发生骨折的危险因素,其与FRAX评分密切相关,CXCL1、CXCL8及CXCL12联合FRAX评分预测老年PMOP患者发生骨折的准确度较高。

LncRNA HCG18影响鼻咽癌细胞PD-L1表达及CD8^(+)T细胞的杀伤功能研究

目的:探究LncRNA HCG18调控CD8^(+)T细胞抗鼻咽癌细胞的功能及机制。方法:qRT-PCR检测鼻咽癌组织及癌旁组织HCG18表达以及人鼻黏膜上皮细胞HNEpC和人鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2、HONE-1、HNE-2中HCG18表达。CNE1细胞分为si-HCG18组、si-NC组、si-HCG18^(+)PD-L1组,HNE-2细胞分为HCG18组、Vector组和HCG18^(+)sh-PD-L1组,上述各组CNE1细胞和HNE-2细胞分别与CD8^(+)T细胞共孵育24h(si-HCG18^(+)CD8^(+)T组、si-NC+CD8^(+)T组、si-HCG18^(+)PD-L1+CD8^(+)T组、HCG18^(+)CD8^(+)T组、Vector+CD8^(+)T组和HCG18^(+)sh-PD-L1+CD8^(+)T组),酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度,细胞毒性试剂盒检测肿瘤细胞裂解率。Western blot检测PD-L1蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证HCG18与miR-20b-5p的靶向关系,miR-20b-5p与PD-L1的靶向关系。结果:鼻咽癌组织中HCG18表达显著高于癌旁组织,CNE1、CNE2、HONE-1、HNE-2细胞中HCG18表达均显著高于HNEpC细胞(P<0.05)。si-HCG18组CNE1细胞中PD-L1表达显著低于si-NC组(P<0.05),HCG18组HNE-2细胞PD-L1表达显著高于Vector组(P<0.05),相比于si-NC+CD8^(+)T组,si-HCG18^(+)CD8^(+)T组共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度显著增加(P<0.05),CNE1细胞裂解率显著增加(P<0.05),相比于si-HCG18^(+)CD8^(+)T组,si-HCG18^(+)PD-L1+CD8^(+)T组共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度显著降低(P<0.05),CNE1细胞裂解率显著降低(P<0.05)。相比于Vector+CD8^(+)T组,HCG18^(+)CD8^(+)T组共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度显著降低(P<0.05),HNE-2细胞裂解率显著降低(P<0.05),相比于HCG18^(+)CD8^(+)T组,HCG18^(+)sh-PD-L1+CD8^(+)T组共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度显著增加(P<0.05),HNE-2细胞裂解率显著增加(P<0.05)。miR-20b-5p为HCG18靶基因,PD-L1为miR-20b-5p靶基因。结论:HCG18上调鼻咽癌细胞PD-L1表达并且抑制CD8^(+)T细胞的抗肿瘤活性。

血清S100A8和PD-L1联合超声检测在子宫内膜癌诊断及预后中的价值分析

目的探究血清S100钙结合蛋白A8(S100A8)和程序性死亡配体-1(PD-L1)联合超声检测在子宫内膜癌诊断及预后中的价值。方法选取2020年4月至2022年4月于我院收治的确诊为子宫内膜癌的患者166例即为癌症组,按照国际妇产科联合会(FIGO)标准分为Ⅰ期48例、Ⅱ期52例、Ⅲ期42例、Ⅳ期24例。选择同期在我院确诊为子宫内膜增生的患者166例为对照组;使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中S100A8和PD-L1水平;使用阴道超声获取血流频谱测得血流参数:搏动指数(PI)、阻力指数(RI)。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清S100A8和PD-L1联合超声参数对子宫内膜癌的诊断价值以及预后的预测价值。结果与对照组相比,癌症组患者血清中S100A8和PD-L1水平显著升高(t=10.688、8.605,均P<0.001);与Ⅰ期相比,Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者血清中S100A8和PD-L1水平显著升高,与Ⅱ期相比,Ⅳ期患者血清中S100A8和PD-L1水平显著升高(P<0.05)。与对照组相比,癌症组PI和RI的值显著降低(t=7.183、6.799,均P<0.001);血清S100A8和PD-L1联合超声参数对子宫内膜癌诊断的曲线下面积(AUC)高于各指标单独诊断的AUC值(Z S100A8 vs.S100A8+PD-L1+PI+RI=6.472,Z PD-L1 vs.S100A8+PD-L1+PI+RI=6.903,Z PI vs.S100A8+PD-L1+PI+RI=7.072,Z RI vs.S100A8+PD-L1+PI+RI=5.987,均P<0.001);与预后良好组相比,预后不良组S100A8、PD-L1水平显著升高,PI、RI水平显著降低(P<0.001);血清S100A8和PD-L1联合超声参数对子宫内膜癌预后预测的AUC高于各指标单独预测的AUC值(Z S100A8 vs.S100A8+PD-L1+PI+RI=2.841,P=0.005;Z PD-L1 vs.S100A8+PD-L1+PI+RI=2.146,P=0.032;Z PI vs.S100A8+PD-L1+PI+RI=6.056,P<0.001;Z RI vs.S100A8+PD-L1+PI+RI=4.370,P<0.001)。结论子宫内膜癌患者血清中S100A8和PD-L1水平显著升高,血清S100A8和PD-L1联合超声能够提高对子宫内膜癌诊断及预后价值。

高迁移率族蛋白B1对甲苯二异氰酸酯诱导的支气管上皮细胞中性粒细胞趋化因子CXCL12、IL-8表达的影响

目的通过体外实验探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)在甲苯二异氰酸酯(toluene diisocyanate,TDI)所致的职业性哮喘中趋化中性粒细胞的作用机制。方法制备TDI-人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)偶联物(TDI-HSA),并通过Gutmann法与BCA法分别测定偶联物中TDI及HSA含量。分别以0、40、80、120 mg/L TDI-HSA染毒人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)12 h,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、趋化因子12(C-X-C motif chemokine 12,CXCL12)的水平;Western blot法检测细胞中HMGB1、CXCL12及核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)相关蛋白的表达;活细胞荧光探针法检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平;免疫荧光法观察HMGB1的核转位情况。使用不同浓度(100、200 mmol/L)甘草素(glycyrrhizin,GL)预处理HBECs细胞24 h抑制HMGB1后,继续用TDI-HSA染毒12 h,检测细胞培养上清中IL-8水平,HMGB1、CXCL12及NF-κB相关蛋白表达,ROS释放水平及HMGB1的核转位情况。结果不同浓度TDI-HSA染毒HBECs 12 h后,随着染毒浓度的升高,HBECs细胞内HMGB1发生明显核转位,细胞中ROS和细胞上清中IL-8水平明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,120 mg/L染毒组HBECs细胞HMGB1、磷酸化P65蛋白表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。以含有不同浓度GL的培养基联合120 mg/L TDI-HSA处理HBECs细胞12 h后,与对照组相比,GL作用于HBECs细胞可显著抑制TDI-HSA导致的HMGB1的核转位,抑制HBECs细胞中的ROS和上清液中的IL-8水平的升高,显著减少细胞中HMGB1、磷酸化P65蛋白的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TDI可通过增加HBECs细胞HMGB1蛋白表达和核转位,激活NF-κB,促进IL-8的释放,不影响CXCL12的表达。GL可通过降低HMGB1表达,抑制NF-κB活化,减少IL-8释放水平。

高氏盆炎方二号方对慢性盆腔炎大鼠的抗炎抗粘连作用及对ICAM-1和caspase-8表达的影响

目的探讨高氏盆炎方二号方对慢性盆腔炎(CPID)大鼠的抗炎抗粘连作用及对细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和半胱天冬酶-8(caspase-8)表达的影响。方法首先通过体外抑菌试验观察高氏盆炎方二号方药液的最低抑菌浓度(MIC)。将75只雌性SD大鼠随机分为空白组(n=10)和造模组(n=65)。造模10 d后,在造模组随机抽取5只大鼠处死,进行子宫组织HE染色后镜下呈慢性炎症改变,提示造模成功。随后将60只大鼠再随机分为模型组、中药组、中成药组及人胎盘组织液组,其中中药组又分为低、中、高剂量组,每组10只。模型组给予生理盐水2 mL/只灌胃,中药低、中、高剂量组分别给予高氏盆炎方二号方7、14、28 g/kg灌胃,中成药组给予蒲苓盆炎康颗粒3 g/kg灌胃,人胎盘组织液组给予人胎盘组织液1 mL/kg腹腔注射。以上各给药组均每日1次给药,连续给药20 d。末次给药24 h后处死大鼠并取子宫组织称重,计算子宫肿胀度及子宫系数;光镜下观察大鼠子宫组织病理学改变情况;用免疫组化法及Western-blot法检测大鼠子宫组织中ICAM-1和caspase-8蛋白表达水平。结果高氏盆炎方二号方对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及乙型溶血性链球菌有明显的抑菌作用。与空白组比较,模型组的子宫肿胀度升高,子宫系数降低(P<0.05),提示模型建立成功;与模型组比较,各给药组的子宫肿胀度降低(P<0.05),尤以中药组高、中剂量组及人胎盘组织液组改善显著。与模型组比较,各给药组大鼠子宫组织中的ICAM-1蛋白表达水平降低,caspase-8蛋白表达水平升高(P<0.05),提示给药治疗有效;空白组与中药高剂量组、中药中剂量组及人胎盘组织液组的ICAM-1、caspase-8蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),说明以上三组疗效相当。结论高氏盆炎方二号方具有抑菌的作用,能够有效改善疾病症状、控制宫腔粘连的发展,修复受损的子宫组织形态及结构,其治疗机制可能与ICAM-1表达下调、caspase-8表达上调相关,可促进炎症细胞凋亡,增强机体抵抗力。

CircSLC8A1_005通过编码蛋白抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用

【目的】探究环形RNA circSLC8A1_005调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用及可能机制。【方法】利用腺病毒介导在小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circSLC8A1_005,并检测mCFs中纤维化相关因I型胶原α1链(Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(Col3a1)和平滑肌肌动蛋白α2(Acta2)基因表达,通过EdU和划痕实验检测不同干预对mCFs的增殖和迁移能力的影响。双萤光素酶报告基因实验检测circSLC8A1_005包含的潜在核糖体进入序列(IRES)的活性。通过Western blot实验检测circSLC8A1_005翻译蛋白SLC8A1-605aa及其在细胞内分布情况。双萤光素酶报告基因实验检测SLC8A1-605aa对超氧化物歧化酶2(Sod2)的转录激活作用。通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验检测SLC8A1-605aa与Sod2 mRNA的结合作用。放线菌素D实验检测SLC8A1-605aa对Sod2 mRNA稳定性的影响。【结果】利用腺病毒可在mCFs中有效介导过表达circSLC8A1_005,过表达circSLC8A1_005可显著抑制mCFs中纤维化相关基因表达,抑制mCFs的增殖和迁移能力。双萤光素酶报告基因实验结果提示circ⁃SLC8A1_005包含的2个IRES具有活性。Western blot检测结果显示circSLC8A1_005可翻译预期大小为70 ku的SLC8A1-605aa蛋白,并主要分布于细胞核内。过表达SLC8A1-605aa和circSLC8A1_005可一致地抑制mCFs的纤维化表型。SLC8A1-605aa可特异上调超氧化物歧化酶2(Sod2)表达,但并不能转录激活Sod2表达;RIP实验结果显示SLC8A1-605aa与Sod2 mRNA有特异结合作用,而放线菌素D实验结果显示SLC8A1-605aa能够增强Sod2 mRNA的稳定性。【结论】CircSLC8A1_005通过翻译蛋白SLC8A1-605aa发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用,SLC8A1-605aa可能是潜在的用于心肌纤维化治疗的靶点。

1,8-桉叶油素对2型糖尿病胰岛β细胞铁死亡的干预作用及机制

目的 研究1,8-桉叶油素对2型糖尿病胰岛β细胞铁死亡的干预作用及机制。方法 使用高糖作用于小鼠胰岛β细胞以建立细胞铁死亡模型,考察低、高剂量1,8-桉叶油素(0.25、0.5μmol/L)对胰岛β细胞中Fe2+水平的影响,并考察1,8-桉叶油素(0.5μmol/L)联合铁死亡诱导剂Erastin(20μmol/L)和抑制剂Ferrostatin-1(20μmol/L)后对胰岛β细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、环氧合酶2(COX2)蛋白表达的影响。采用高脂高糖饲料饲养联合腹腔注射链脲佐菌素构建2型糖尿病小鼠模型,考察低、高剂量1,8-桉叶油素(50、200 mg/kg)对模型小鼠胰腺组织病理形态、铁含量以及GPX4、COX2蛋白表达的影响。结果 细胞实验结果显示,与模型组比较,经1,8-桉叶油素干预后,胰岛β细胞中Fe2+水平显著降低(P<0.05);GPX4蛋白表达水平显著升高(P<0.05),COX2蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且联合Ferrostatin-1后上述两种蛋白表达趋势相同,而联合Erastin后差异无统计学意义。动物实验结果显示,与模型组比较,经1,8-桉叶油素干预后,小鼠胰岛结构恢复完整,形态有所改善;胰腺组织中铁含量和COX2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),GPX4蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论 1,8-桉叶油素对2型糖尿病胰岛β细胞损伤具有明显的改善作用,其作用机制可能与降低细胞内铁沉积以及调控铁死亡相关蛋白有关。

脑小血管病患者血清8-OHdG、CX3CL1水平与认知功能障碍的相关性

[目的]探究脑小血管病(CSVD)患者血清8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG)、趋化因子C-X3-C配体1(CX3CL1)水平与认知功能障碍的关系。[方法]选取2021年5月—2022年5月本院收治的CSVD患者128例,依据蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分分为认知障碍组与无认知障碍组两组,测定两组血清8-OHdG、CX3CL1水平,应用Pearson相关性分析血清8-OHdG、CX3CL1水平与CSVD患者MoCA评分的关系,Logistic回归分析影响CSVD患者认知功能障碍的因素,并绘制ROC曲线研究血清8-OHdG、CX3CL1水平对CSVD患者认知功能障碍的预测效能。[结果]认知功障碍组患者血清8-OHdG和CX3CL1水平分别高于无认知障碍组,但其MoCA评分低于无认知障碍组(均P<0.05)。血清8-OHdG、CX3CL1水平均与MoCA评分呈负相关(r=-0.715、-0.413,P<0.05)。血清8-OHdG水平,重度认知障碍组分别高于中度和轻度认知障碍组(均P<0.05),中度认知障碍组高于轻度认知障碍组(P<0.05)。CX3CL1水平,重度认知障碍组分别高于中度和轻度认知障碍组(均P<0.05),中度认知障碍组高于轻度认知障碍组(P<0.05)。8-OHdG诊断CSVD患者认知功能障碍的ROC曲线下面积(AUC)为0.866,灵敏度、特异度分别为76.53%和80.00%(均P<0.05);CX3CL1诊断CSVD患者认知功能障碍的AUC为0.868,灵敏度、特异度分别为86.73%和80.00%(均P<0.05);8-OHdG、CX3CL1二者联合诊断CSVD患者认知功能障碍的AUC为0.922,灵敏度、特异度分别为88.78%和86.67%(均P<0.05)。血清8-OHdG>2.69μg/L、CX3CL1>179.18 pg/L均为CSVD患者认知功能障碍的影响因素(P<0.05)。[结论]血清8-OHdG、CX3CL1水平与CSVD患者认知功能障碍呈正相关,两者可作为预测CSVD患者出现认知功能障碍的辅助指标。

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子1在小鼠急性肝损伤中的作用及机制

目的探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子1(TNFAIP8L1)在小鼠急性肝损伤中的作用及机制。方法选择C57BL/6J雄性野生型(WT)小鼠和C57BL/6J雌性TNFAIP8L1^(+/-)小鼠杂交繁殖的第2代TNFAIP8L1^(+/-)小鼠和WT小鼠,进一步自交繁殖出第3代雄性TNFAIP8L1^(-/-)小鼠和第3代WT雄性小鼠。分别取5只正常第3代雄性WT小鼠和5只正常第3代雄性TNFAIP8L1^(-/-)小鼠,检测比较2种正常小鼠的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,苏木精-伊红(HE)染色观察2种正常小鼠肝组织中炎症细胞浸润及细胞坏死情况,采用流式细胞术检测2种正常小鼠肝组织髓系细胞亚群中性粒细胞(Neu)、嗜酸性粒细胞(EOS)、树突状细胞(DC)、骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)、骨髓来源的单核细胞(BMNCs)所占百分比。另取5只第3代雄性WT小鼠和4只第3代雄性TNFAIP8L1^(-/-)小鼠,采用脂多糖(LPS)/D-半乳糖胺(D-Gal)诱导制备急性肝损伤小鼠模型,24 h后采取上述方法检测比较2种急性肝损伤小鼠血清ALT水平,观察2种急性肝损伤小鼠肝组织中炎症细胞浸润及细胞坏死情况,并检测2种急性肝损伤小鼠肝组织髓系细胞亚群Neu、EOS、DC、BMDMs、BMNCs所占百分比。结果正常WT小鼠和TNFAIP8L1^(-/-)组小鼠肝组织中髓系细胞亚群Neu、EOS、DC、BMDMs、BMNCs百分比及血清ALT水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。正常WT小鼠和TNFAIP8L1^(-/-)小鼠的肝组织HE染色结果均显示肝小叶结构完整清晰,肝细胞形态正常、排列整齐,无明显炎症细胞浸润及细胞坏死。急性肝损伤24 h后,TNFAIP8L1^(-/-)小鼠肝组织髓系细胞亚群中Neu、BMNCs百分比及血清ALT水平显著高于WT小鼠(P<0.05);2组小鼠肝组织髓系细胞亚群EOS、DC、BMDMs百分比比较差异无统计学意义(P>0.05)。急性肝损伤WT小鼠肝组织中肝小叶结构模糊,肝细胞肿胀、散在空泡样脂肪变性,有少量炎症细胞浸润。急性肝损伤TNFAIP8L1^(-/-)小鼠肝组织中肝小叶结构几乎不存在,肝细胞损伤严重且大量坏死,并有大量炎症细胞浸润。结论TNFAIP8L1基因缺陷不影响小鼠肝组织中髓系细胞的发育和小鼠肝脏稳态。TNFAIP8L1在急性肝损伤的发生发展过程中起抑制作用。TNFAIP8L1基因缺陷加重LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤,有可能是通过增加Neu和BMNCs浸润而招募其他类型的免疫细胞浸润入肝组织,从而加重肝细胞的坏死。

CKMT1A、CRABP2、PAX8在子宫内膜癌患者血清中的表达水平及其与临床病理参数和预后的关系

目的探讨线粒体肌酸激酶1A(CKMT1A)、细胞视黄酸结合蛋白2(CRABP2)、配对盒基因8(PAX8)在子宫内膜癌患者血清中的表达水平及其与临床病理参数和预后的关系。方法选取2021年5月至2022年5月唐山市妇幼保健院收治的107例子宫内膜癌患者作为研究组。并在治疗后进行1年定期随访,根据患者复发情况分为复发组和未复发组。另选取同时期在该院进行体检的86例健康者作为健康组。采用酶联免疫吸附试验检测各组血清CKMT1A、CRABP2、PAX8水平,比较不同临床病理指标的子宫内膜癌患者血清CKMT1A、CRABP2、PAX8水平。采用Pearson相关分析子宫内膜癌患者血清CKMT1A、CRABP2、PAX8水平的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CKMT1A、CRABP2、PAX8单独及三者联合检测对子宫内膜癌复发的预测价值。结果研究组血清CKMT1A、CRABP2、PAX8水平均高于健康组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,血清CKMT1A与CRABP2水平呈正相关(r=0.437,P<0.001),CKMT1A与PAX8水平呈正相关(r=0.526,P<0.001),CRABP2与PAX8水平呈正相关(r=0.493,P<0.001)。不同肌层浸润、分化程度、淋巴结转移情况等的子宫内膜癌患者血清CKMT1A、CRABP2、PAX8水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且血清CKMT1A、CRABP2、PAX8水平随着分化程度的降低及淋巴结的转移而升高(P<0.05)。复发组纳入12例患者,非复发组纳入95例患者。复发组血清CKMT1A、CRABP2、PAX8水平均高于非复发组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清CKMT1A、CRABP2和PAX8单独预测子宫内膜癌复发的曲线下面积分别为0.886、0.850、0.811,均低于三者联合检测的0.978(Z三者联合-CKMT1A=2.318,P=0.020;Z三者联合-CRABP2=2.030,P=0.042;Z三者联合-PAX8=2.955,P=0.003)。结论子宫内膜癌患者血清CKMT1A、CRABP2和PAX8水平均高表达,三者表达与病理类型、分化程度、淋巴结转移情况等临床病理参数以及预后有关,可以作为评估子宫内膜癌患者预后的生物学指标。

肺非终末呼吸单元型腺癌中PD-L1表达和CD8^(+)TILs的临床意义

目的:探讨肺非终末呼吸单元型(non-TRU)腺癌中PD-L1表达和CD8^(+)肿瘤浸润淋巴细胞(CD8^(+)TILs)的临床意义。方法:回顾性研究85例手术切除的临床分期为I-IV期的肺non-TRU型腺癌患者的临床病理资料,应用免疫组化方法检测PD-L1、p53和4项错配修复蛋白(MLH1、MSH2、MSH6和PMS2)的表达以及CD8^(+)TILs,应用扩增阻滞突变系统(ARMS)和荧光原位杂交技术(FISH)检测EGFR、KRAS突变和ALK融合基因,并结合随访资料进行生存分析。结果:85例non-TRU腺癌中PD-L1阴性34例(40.0%)、低表达36例(42.4%)、高表达15例(17.6%),PD-L1表达更常见于有吸烟史(P<0.05)、浸润性非黏液性腺癌(P<0.01)、组织学分级高(P<0.05)、脏层胸膜浸润(P<0.05)和KRAS突变(P<0.05)患者。CD8^(+)TILs低密度17例(20.0%)、中密度42例(49.4%)、高密度26例(30.6%),中-高密度CD8^(+)TILs更常见于患者年龄较低(P<0.05)、有吸烟史(P<0.01)、肿块较小(P<0.05)、浸润性非黏液性腺癌(P<0.01)、组织学分级高(P<0.01)和p53异常表达(P<0.01)。相关分析显示PD-L1表达与CD8^(+)TILs密度之间无显著性相关关系(P>0.05)。高密度CD8^(+)TILs患者的OS显著高于低-中密度患者(P<0.05),不同PD-L1表达水平的OS和DFS以及不同密度CD8^(+)TILs患者的DFS之间的差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:肺non-TRU型腺癌常表达PD-L1并具有较高密度的CD8^(+)TILs,提示患者可能从ICIs治疗中获益,高密度CD8^(+)TILs可以作为一项辅助判断肺non-TRU型腺癌预后的指标。