1,25(OH)_(2)D_(3)对Aβ_(1-42)诱导阿尔茨海默病细胞模型中细胞焦亡的抑制作用

目的探讨1,25(OH)_(2)D_(3)对Aβ_(1-42)诱导阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)细胞模型中细胞焦亡的抑制作用及其机制。方法将PC12细胞分为对照组、模型组、Caspase-1-siRNA组、NC-siRNA组、1,25(OH)_(2)D_(3)组、联合干预组。对照组仅用DMEM高糖培养基培养细胞;模型组用20μmol/L Aβ_(1-42)处理细胞以造模;Caspase-1-siRNA组先用50 nmol/L Caspase-1-siRNA处理细胞,再加入20μmol/L Aβ_(1-42);NC-siRNA组先用50 nmol/L NC-siRNA处理细胞,再加入20μmol/L Aβ_(1-42);1,25(OH)_(2)D_(3)组用100 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)干预后加入20μmol/L Aβ_(1-42);联合干预组先用50 nmol/L Caspase-1-siRNA处理细胞,然后用100 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)干预,最后加入20μmol/L Aβ_(1-42)。细胞免疫荧光检测凋亡相关斑点蛋白(ASC)蛋白的表达;Western blot检测细胞焦亡通路相关蛋白表达,包括:NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-Caspase-1)、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、消皮素D-N端(GSDMD-N)、IL-1β、IL-1β前体(pro-IL-1β)、IL-18和IL-18前体(pro-IL-18)蛋白;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)染色检测细胞膜通透性。结果与对照组相比,模型组ASC蛋白荧光强度增强(P<0.01),细胞焦亡通路相关蛋白表达均增加(P<0.05),细胞膜通透性变大(P<0.01)。与模型组相比,1,25(OH)_(2)D_(3)组和Caspase-1-siRNA组ASC蛋白荧光强度减弱(P<0.01),pro-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD-N、pro-IL-1β、IL-1β、pro-IL-18和IL-18蛋白表达均下调(P<0.01),细胞通透性减小(P<0.01)。与Caspase-1-siRNA组相比,联合干预组GSDMD-N和IL-18蛋白表达降低(P<0.01),细胞通透性减小(P<0.01)。结论Aβ_(1-42)能够诱导PC12细胞发生细胞焦亡现象。1,25(OH)_(2)D_(3)可以通过抑制Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞发生焦亡来发挥其抗炎的神经保护作用,其机制与Caspase-1的抑制密切相关。

p53半剂量缺失纠正1,25(OH)_(2)D_(3)缺乏小鼠的骨质疏松

目的:探索p53半剂量缺失杂合子小鼠能否通过增强抗氧化能力纠正活性维生素D(1,25(OH)_(2)D_(3))缺乏引起的骨质疏松。方法:取10周龄高钙高磷饮食喂养的同窝野生型(wild type,WT)小鼠、p53半剂量缺失杂合子(p53^(+/-))小鼠、1α-羟化酶基因敲除[1α(OH)ase^(-/-)]小鼠及p53半剂量缺失的1α羟化酶基因敲除[1α(OH)ase^(-/-)p53^(+/-)]小鼠的长骨,利用X线、micro-CT、组织病理学和分子生物学等方法,比较各组小鼠血清学、长骨骨矿化、骨形成、骨吸收以及氧化应激等表达变化。结果:与WT小鼠相比,p53^(+/-)小鼠血清钙、磷、甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)和1,25(OH)_(2)D_(3)水平差异无统计学意义,骨密度、总胶原(total collagen,T-col)阳性面积、成骨细胞数量、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,Col-Ⅰ)阳性面积均有所增加,活性氧水平降低,抗氧化酶SOD1表达增加。与1α(OH)ase^(-/-)小鼠相比,1α(OH)ase^(-/-)p53^(+/-)小鼠血清钙、磷和PTH差异无统计学意义,血清中检测不到1,25(OH)_(2)D_(3),骨密度、T-col阳性面积、成骨细胞数量、ALP和Col-Ⅰ阳性面积均明显增加,破骨细胞数量减少,活性氧水平降低,抗氧化酶SOD1表达增加。结论:p53半剂量缺失可通过增强抗氧化能力纠正1,25(OH)_(2)D_(3)缺乏小鼠的骨质疏松。

1,25（OH）2D3干预糖尿病肾病模型大鼠肾脏组织MicroRNA-130b及转化生长因子β1的变化

背景:1,25(OH)2D3在糖尿病肾病的发展过程中发挥着重要调节作用。目的:探索1,25(OH)2D3对糖尿病肾病大鼠肾脏组织MicroRNA-130b及转化生长因子β1表达的影响作用。方法:实验方案经新疆医科大学动物实验中心动物实验伦理委员会批准。将25只清洁级SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组、糖尿病肾病+花生油组,后2组分别给予骨化三醇(即1,25(OH)2D3,活性维生素D3)0.03μg/(kg?d)治疗、花生油对照处理。37 d后采集标本,以实时聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blot及免疫组织化学方法检测大鼠肾脏组织转化生长因子β1的表达;RT-PCR检测MicroRNA-130b的表达;采用苏木精-伊红及Masson染色对大鼠肾脏形态结构及纤维化程度进行分析。结果与结论:①RT-PCR结果显示,糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组及糖尿病肾病+花生油组MicroRNA-130b的表达明显低于正常对照组(P<0.01),糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组明显高于糖尿病肾病+花生油组(P<0.01);②RT-PCR、Western blot、免疫组织化学及病理结果显示,糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组及糖尿病肾病+花生油组转化生长因子β1 mRNA和蛋白的表达、大鼠肾脏组织结构紊乱及纤维化程度明显高于正常对照组(P<0.01),糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组明显低于糖尿病肾病+花生油组(P<0.01);③结果说明,糖尿病肾病大鼠肾脏MicroRNA-130b表达水平下降,转化生长因子β1 mRNA及蛋白表达水平升高,肾脏组织结构紊乱及纤维化程度严重;1,25(OH)2D3可上调糖尿病肾病大鼠肾脏MicroRNA-130b的表达水平,同时还可下调糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子β1的表达水平,改善肾脏组织结构紊乱及纤维化程度。

1,25-(OH)_(2)-VitD3通过抑制Snail1-SMAD3/SMAD4复合物形成减轻糖尿病肾病肾小管间质纤维化

目的研究1,25-(OH)2-VitD3(VitD3)对糖尿病肾病肾小管间质纤维化的影响.方法NRK-52E肾小管上皮细胞分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖培养基处理)、高糖组(25 mmol/L葡萄糖的培养基处理)和高糖加VitD3组(25 mmol/L葡萄糖培养基联合10-8 mol/L VitD3).实时定量PCR和Western blot法分别检测NRK-52E细胞Snail家族转录抑制物1(Snail1)、SMAD家族成员3(SMAD3)、SMAD4、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和上皮钙黏蛋白(E-cadherin)的mRNA和蛋白表达;免疫荧光细胞化学染色检测Snail1、SMAD3、SMAD4的表达及定位;通过染色质免疫沉淀检测Snail1与SMAD3/SMAD4形成的复合物与柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)的启动子结合情况;荧光素酶报告检测Snail1、SMAD3/SMAD4和E-cadherin的相互作用;采用小干扰RNA(siRNA)抑制细胞Snail1、SMAD4的表达后,通过实时定量PCR检测E-cadherin的mRNA表达.SD大鼠随机分为对照组、DKD组和VitD3处理组.DKD组和VitD3处理组通过注射链脲佐菌素(STZ)先制备DKD模型,DKD造模成功后,VitD3处理组予60ng/kgVitD3灌胃,对照组和DKD组给予生理盐水灌胃;DKD组和VitD3处理组同时皮下注射胰岛素(1~2)U/kg控制血糖,持续8周.采用实时定量PCR和Western blot法分别检测肾组织中Snail1、SMAD3、SMAD4、α-SMA、E-cadherin的mRNA和蛋白水平,免疫组织化学检测肾组织Snail1、SMAD3、SMAD4、α-SMA和E-cadherin的表达及定位.结果与对照组相比,高糖处理的NRK-52E细胞及DKD肾组织Snail1、SMAD3、SMAD4和α-SMA的mRNA和蛋白表达均上调,E-cadherin表达下调;给予VitD3干预后,DKD模型中Snail1、SMAD3、SMAD4、α-SMA和E-cadherin的表达水平恢复到与对照组接近.染色质免疫沉淀提示Snail1、SMAD3/SMAD4与CAR的启动子Ⅳ结合,而VitD3能够阻止Snail1、SMAD3/SMAD4与CAR的启动子Ⅳ结合;荧光素酶报告检测证实Snail1、SMAD3/SMAD4和E-cadherin的互作关系;用siRNA抑制Snail1、SMAD4的mRNA后,上调高糖诱导下E-cadherin的表达.结论VitD3可抑制Snail1-SMAD3/SMAD4的复合物的形成,减轻糖尿病肾病肾小管间质纤维化.

脑微出血患者血浆1,25-（OH）2D3,sLRP1水平与头颅SWI影像学特征的相关性

目的研究脑微出血(cerebral microbleeds,CMBs)患者1,25-二羟维生素D3[1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25-(OH)2D3],可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1(soluble low density lipoprotein receptor related protein 1,sLRP1)水平与头颅SWI微出血病灶数量及部位等影像学特征的相关关系。方法连续纳入2017年1月~2019年5月就诊于陕西省人民医院的CMBs患者196例(男性152例,女性44例),正常对照组99例(男性67例,女性32例),采集人口学资料及病史。对两组人群进行血浆1,25-(OH)2D3,sLRP1水平的检查。比较两组间血浆1,25-(OH)2D3和sLRP1水平的差异,并统计CMBs组各检验指标与CMBs病灶数量及部位的相关关系。结果CMBs组患者血浆1,25-(OH)2D3,sLRP1水平均低于对照组(23.32±18.91 mmol/L vs 39.60±18.58 mmol/L;237.96±70.62 ng/ml vs 312.61±62.78 ng/ml),差异均具有统计学意义(t=7.07,-9.24,均P<0.01)。CMBs患者血浆sLRP1水平与脑皮质CMBs病灶数量呈负相关(r=0.239,P=0.001),而与脑深部CMBs病灶数量无明显相关(t=-0.096,P>0.05)。结论CMBs患者的血浆1,25-(OH)2D3,sLRP1水平均低于正常人群。高表达的血浆sLRP1可能对脑皮质CMBs的发生具有一定的保护作用。

1,25(OH)2D3通过STAT5抑制Th17细胞分化的调控作用研究

目的研究1.25二羟基维生素D3[1,25(OH)_2D_3]抑制辅助性T细胞17(Th17)的分化与STAT5调控的关系。方法通过分选出的CD4+T细胞,在1,25(OH)_2D_3和/或STAT5抑制剂的作用下,采用ELISA法检测抑制剂处理后细胞培养上清液Th17细胞因子(IL-17A、IL-22)水平的变化;采用细胞免疫荧光技术检测STAT5的磷酸化水平,采用Western blot技术检测STAT5蛋白表达水平。结果 1,25(OH)_2D_3组细胞培养上清IL-17A和IL-22水平(12.5±0.5 ng/ml,48.5±0.9 pg/ml)明显低于对照组(22.7±0.5 ng/ml,73.8±1.9 pg/ml),而STAT5抑制剂组IL-17A和IL-22水平明显升高(33.5±0.7 ng/ml,89.1±1.4 pg/ml),1,25(OH)_2D_3与STAT5抑制剂联合作用细胞IL-17A和IL-22水平(18.5±0.7 ng/ml,54.1±1.6 pg/ml)显著高于1,25(OH)_2D_3组,但低于STAT5抑制剂组,差异有统计学意义(P<0.01);1,25(OH)_2D_3组细胞p-STAT5表达显著强于对照组,1,25(OH)_2D_3联合STAT5抑制剂组p-STAT5表达量低于对照组,而STAT5抑制剂组细胞p-STAT5表达量最低;1,25(OH)_2D_3组STAT5蛋白表达明显升高,而1,25(OH)_2D_3联合STAT5抑制剂组或STAT5抑制剂组STAT5蛋白表达明显降低,以STAT5抑制剂组细胞表达最弱,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 1,25(OH)_2D_3通过STAT5信号通路能抑制Th17细胞分化。

1,25(OH)_(2)VD_(3)对血管紧张素Ⅱ诱导的足细胞内质网应激的抑制作用

目的探讨1,25(OH)_(2)VD_(3)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的足细胞内质网应激的影响,为临床上应用骨化三醇治疗足细胞损伤产生的蛋白尿提供理论依据。方法体外培养小鼠足细胞系(MPC5),随机分为对照组、AngⅡ组(10^(-6)mol/L的AngⅡ)、1,25(OH)_(2)VD_(3)组[10^(-6)mmol/L的AngⅡ+10^(-8)mol/L的1,25(OH)_(2)VD_(3)]。各组均在给药处理6、12、18、24 h后收集细胞,分别应用实时定量PCR、免疫荧光技术检测不同时间点各组样本中葡萄糖调节蛋白(GRP78)及蛋白激酶样内质网激酶(PERK)的mRNA表达量和蛋白表达情况。结果与对照组比较,AngⅡ组GRP78、PERK mRNA表达量在各个时间点均显著增加(P<0.01)。与AngⅡ组比较,1,25(OH)_(2)VD_(3)组GRP78、PERK mRNA表达量在各个时间点均显著降低(P<0.01或<0.05),相应的GRP78、PERK蛋白表达均较低。AngⅡ组给药处理12 h后GRP78、PERK mRNA表达量较6 h mRNA表达量均显著增加(P<0.01);AngⅡ组给药处理18 h后GRP78、PERK mRNA表达量较12 h mRNA表达量均显著增加(P<0.01,P<0.05)。结论AngⅡ可以诱导足细胞发生内质网应激,其发生强度与药物作用时间有关,而1,25(OH)_(2)VD_(3)能通过抑制AngⅡ诱导的足细胞内质网应激,起到保护足细胞的作用。

1,25(OH)_(2)D_(3)及VDR敲除对山羊附睾头上皮细胞β防御素家族表达的影响

旨在研究1,25(OH)_(2)D_(3)是否通过VDR途径调节山羊附睾头上皮细胞β防御素基因表达。本试验选取3只6月龄太行黑山羊,分别采集附睾头组织。采用差速贴壁法分离山羊附睾头上皮细胞,用细胞免疫荧光鉴定上皮细胞纯度。添加100 nmol·L^(-1)1,25(OH)_(2)D_(3)处理附睾头上皮细胞以及筛选出敲除效率最高的pCas9/gRNA1质粒载体进行细胞转染,同时设置阴性对照组和空白对照组,每组3个重复孔。附睾头上皮细胞经1,25(OH)_(2)D_(3)处理以及VDR基因敲除后,分别用qRT-PCR检测VDR和17种β防御素基因的表达,用Western blot检测VDR蛋白和3种β防御素蛋白的表达。结果表明,1,25(OH)_(2)D_(3)能极显著提高VDR、gBD124、gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.01),同时极显著提高gBD104、gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD113、gBD116、gBD120、gBD 121以及gBD 123基因的表达(P<0.01),显著提高gBD106、gBD127、gBD 129以及gBD 134基因的表达(P<0.05),而对gBD 110like和gBD 128基因没有显著影响(P>0.05);3个基因敲除载体进行细胞转染后,pCas9-VDR-V1组VDR蛋白表达极显著降低(P<0.01)。VDR基因敲除极显著降低gBD124的mRNA和蛋白表达(P<0.01),显著降低gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.05),同时VDR基因敲除组gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD116、gBD123、gBD127、gBD 128以及gBD 134基因的表达极显著低于其他组(P<0.01),VDR基因敲除组gBD104、gBD106、gBD 120以及gBD 129基因的表达显著低于其他组(P<0.05),而对gBD121、gBD 110like以及gBD 113的相对表达则无显著影响(P>0.05)。综上所述,1,25(OH)_(2)D_(3)可以上调VDR和部分β防御素表达;VDR基因敲除后降低部分β防御素表达,结果表明1,25(OH)_(2)D_(3)通过上调VD/VDR信号通路关键基因VDR的表达调控山羊附睾头上皮细胞部分β防御素表达。

1,25(OH)2D3/VDR对湿疹患儿miRNA155/SOCS1通路的调节作用

目的检测湿疹患儿1,25-二羟维生素D3(1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25(OH)2D3)、维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)、微小核糖核酸155(micro RNA155,miRNA155)、细胞因子信号抑制因子一1(Suppressor of cytokine signaling-1,SOCS1)及淋巴细胞亚群的量,并探讨其相互关系。方法采用电化学发光法检测受试者外周血1,25(OH)2D3的表达,流式细胞术检测患者T细胞百分比及CD3、CD4、CD8阳性细胞含量,采用RT-PCR方法检测皮损处VDR、miRNA155、SOCS1。结果湿疹患儿1,25(OH)2D3及VDR(29.25±11.03 nmol/L,1.74±0.92)明显低于健康儿童(55.49±21.66 nmol/L,3.62±1.68);湿疹患儿T细胞亚群68.65±16.74%及CD4+的T淋巴细胞亚群38.83±10.82%明显高于对照组(64.47±17.23,33.25±11.95%),CD8+的T淋巴细胞亚群25.68±6.81%明显低于对照组29.01±7.93%;湿疹患者皮损处VDR、SOCS的表达(1.74±0.92,1.78±1.02)明显低于对照组(3.62±1.68,3.13±1.70),miRNA1551的表达5.41±3.23明显高于对照组2.06±0.84。结论湿疹患儿1,25(OH)2D3、VDR表达异常,且其可调节湿疹患儿miR155/SOCS1通路。

FoxO1在1,25（OH）2D3调控高糖环境下成骨细胞代谢中的作用

目的探究1,25(OH)2D3对高糖环境下骨代谢的调控作用,为1,25(OH)2D3对高糖环境下成骨细胞的可能调控机制提供证据。方法将成骨细胞系MC3T3-E1细胞分3组培养:①对照组,低糖(5.5 mmol/L)DMEM培养基培养;②高糖组:高糖(22 mmol/L)DMEM培养基培养;③高糖+1,25(OH)2D3组:高糖DMEM+1,25(OH)2D3培养基培养。利用CCK-8法检测各组细胞增殖活性;Annexin V,FITC凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况;茜素红半定量分析细胞分化水平;分别通过qRT-PCR检测叉头转录因子-1(forkhead transcription factor 1,FoxO1)mRNA表达,免疫荧光观察FoxO1蛋白表达变化和其与细胞核的相对位置关系。结果相较于对照组,高糖组成骨细胞过度增殖、凋亡显著增加、成骨分化受抑制(P <0.05),FoxO1 mRNA增加(P=0.006),FoxO1蛋白核内转移增加(P=0.001)。相较于高塘组,高糖+1,25(OH)2D3组细胞的过度增殖受到抑制、凋亡减少、成骨分化较高糖组改善(P <0.05),FoxO1 mRNA减少(P=0.006),FoxO1蛋白核内转移受阻(P <0.001)。结论 1,25(OH)2D3可能通过降低高糖环境中成骨细胞FoxO1 mRNA表达,阻止FoxO1向细胞核内转移,抑制高糖环境下成骨细胞的异常增殖、凋亡,并逆转高糖对成骨分化的抑制作用。

1,25-（OH）2D3通过Ca2+/CaM信号调控内皮细胞自噬抑制动脉粥样硬化钙化

目的探讨1,25二羟基维生素D3(1,25-(OH)2D3)是否通过信号调控人脐静脉内皮细胞(HUVEC)自噬抑制细胞钙化及小鼠动脉粥样硬化斑块内钙化。方法 (1)将体外培养的HUVEC高脂刺激自噬后予1,25-(OH)2D3干预后,通过荧光显微镜、透射电镜、蛋白免疫印记(Western blot)检测细胞自噬水平;利用慢病毒过表达或者沉默钙调蛋白(CaM),运用Western blot、茜素红染色法、钙检测试剂盒检测细胞钙化指标骨形态发生蛋白2(BMP-2)、碱性磷酸酶(ALP)。(2)取6~8周龄Apo E-/-雄性小鼠高脂饲养形成动脉粥样硬化模型,1,25-(OH)2D3灌胃后尾静脉注射CaM过表达或者沉默慢病毒,Western blot检测组织自噬及钙化水平指标;扫描电镜观察主动脉斑块自噬小体及钙沉积; HE及Von Kossa染色法分别检测小鼠主动脉粥样硬化及钙化程度。结果体外实验显示,1,25-(OH)2D3处理后细胞自噬增强,Ca(2+与CaM上调;与对照组相比,CaM过表达组自噬增强,细胞钙化减轻,ApoE-/-小鼠斑块内钙化明显被抑制; CaM沉默组细胞自噬流不通畅,细胞钙沉积增加; Apo E-/-小鼠斑块内钙化明显增加(P<0.01)。结论 1,25-(OH)2D3通过Ca2+/CaM信号调控HUVEC自噬抑制细胞钙化及小鼠动脉粥样硬化斑块钙化。

1，25-(OH)2D3负向调节糖尿病模型大鼠血管紧张肽活性

目的研究1,25-(OH)2D3对糖尿病(DM)模型大鼠肾素-血管紧张肽-醛甾酮系统(RAAS)活性的影响及对肾小球足细胞的保护作用。方法将40只SD大鼠分为正常对照组(A组)、糖尿病组(B组)、血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)灌注组(C组)、AngⅡ+1,25-(OH)2D3灌注组(D组)。B、C、D组均腹腔注射链脲菌素(STZ)制作DM大鼠模型。C组皮下埋置渗透性微量泵,给予AngⅡ400ng·kg-1·min-1;D组经两条渗透性微量泵通路分别给予AngⅡ(400ng·kg-1·min-1)+1,25-(OH)2D3(450ng·kg-1·min-1)。两组均连用10周。检测大鼠血糖(BG)、收缩压(SBP)、24h尿蛋白定量(TP)和肾素活性(PRA)、血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)和醛甾酮(Ald)水平。检测尿沉渣足细胞特异性标志蛋白podocalyxin以检测尿液足细胞(UPC)水平,免疫荧光染色观察肾小球上皮细胞蛋白-1(GLEPP1)的分布。结果B组BG、SBP、UPC、TP、PRA、AngⅡ、Ald均较A组明显升高。C组SBP、UPC、TP、PRA、AngⅡ、Ald较B组均明显升高(P<0.05或P<0.01)。D组SBP、UPC、TP、AngⅡ、Ald较C组明显降低,D组AngⅡ较B组明显降低。病理组织肾小球荧光染色示A组GLEPP1正常分布,C组呈明显缺失,B和D组亦缺失。UPC与TP、AngⅡ呈正相关(rs=0.51,0.35,P<0.01,P<0.05)。结论1,25-(OH)2D3可能是RAAS的负向调节因子,通过下调RAAS活性,防止足细胞脱落排泄介导其肾保护作用。

1,25(OH)_(2)D_(3)通过调节Th17/Treg比值和RANKL/OPG轴缓解胶原诱导的关节炎

目的 探讨1,25-二羟基维生素D_(3)[1,25-dihydroxy vitamin D3,1,25(OH)_(2)D_(3)]对胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠关节滑膜炎症和骨破坏的抑制作用及机制。方法 30只DBA/1J小鼠被均分为3组:对照组(CON)、模型组(CIA)和模型干预组(VD)。CIA组和VD组小鼠建立CIA模型,用1,25(OH)_(2)D_(3)对VD组CIA模型进行治疗。用游标卡尺测量小鼠后足爪的肿胀程度。用Micro-CT测量小鼠后足爪的骨密度。酶联免疫吸附剂测定法检测小鼠血清1,25(OH)_(2)D_(3)和炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的水平。流式细胞术检测小鼠脾脏Th17细胞和Treg细胞的比例。采用苏木精-伊红染色观察膝关节的病理特征。Western blot检测小鼠踝关节的蛋白OPG、RANKL、NF-κB和VDR的表达水平。结果 1,25(OH)_(2)D_(3)并没有降低CIA模型的发病率,但却明显缓解了关节炎症。VD组的脚掌厚度、关节炎评分以及膝关节HSS评分均较CIA组明显降低(P均<0.05)。CIA组的骨破坏程度更加明显,BMD及BV/TV明显低于VD组(P均<0.05)。VD组的IL-1β、IL-6、TNF-α水平和Th17/Treg细胞比例明显低于CIA组(P均<0.05)。与CIA组相比,VD组踝关节的VDR和OPG蛋白水平明显增加(P均<0.05),NF-κB和RANKL蛋白水平明显低于CIA组(P均<0.05),RANKL/OPG的比例也明显低于CIA组(P<0.05)。结论 1,25(OH)_(2)D_(3)可能通过调节Th17/Treg比值和RANKL/OPG轴缓解CIA模型小鼠的关节滑膜炎症并抑制骨破坏。

1,25(OH)2D3联合顺铂对原代肺腺癌细胞周期及调控因子的影响

目的:探讨1,25(OH)2D3联合顺铂对原代肺腺癌细胞周期及周期相关调控因子的影响。方法:体外培养手术切除的肺腺癌组织细胞,经药物作用后CCK-8法测定细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR检测细胞周期调控因子Cyclin D1、CDK4转录水平。结果:不同浓度的1,25(OH)2D3、顺铂单药作用于肺腺癌细胞均有明显的抑制作用,两药联合表现为协同作用,与单药相比,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞周期分析显示,经药物联合处理后的肺癌细胞,G0/G1期细胞数增多,S期和G2/M期细胞减少。细胞周期调控因子Cyclin D1、CDK4转录水平均有所降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1,25(OH)2D3联合铂类抗癌药物抑制原代肺腺癌细胞的增殖能力、诱导细胞周期阻滞,与下调Cyclin D1和CDK4的表达有关。

甲状腺癌患者1,25-(OH)2D3水平变化及临床价值

目的探究甲状腺癌(TC)患者1,25-(OH)2D3水平变化及临床价值。方法前瞻性的选取2014年6月-2016年9月我院肿瘤科收治的69例TC患者作为研究对象,收集患者资料;另选同时期体检健康的30例作为正常对照组。采用化学发光法检测所有入试者1,25-(OH)2D3水平,比较临床特征与1,25-(OH)2D3水平之间关系,并采用Pearson行相关性分析。结果在TC与健康人群的比较中发现,TC患者1,25-(OH)2D3水平显著低于健康人群(t=8.720,P<0.05)。在不同临床资料比较中,TC患者在性别、年龄上1,25-(OH)2D3水平差异无统计学意义(P>0.05)。但在病理类型中,3组患者1,25-(OH)2D3水平比较差异显著(F=19.413,P<0.05),其中以未分化甲状腺癌(ATC)患者1,25-(OH)2D3水平最低,而乳头状甲状腺癌(PTC)患者1,25-(OH)2D3水平最高;在TNM分期中,4组患者1,25-(OH)2D3水平比较差异显著(F=25.189,P<0.05),以TNM分期越高,其1,25-(OH)2D3水平越低。在Pearson相关性分析中,1,25-(OH)2D3水平与病理类型与TNM分期均呈现负相关,相关系数分别为-0.777、-0.827。结论TC患者中1,25-(OH)2D3水平显著低于健康人群水平,且在不同病理类型和TNM分期中均有显著差异,并以未分化类型和TNM分期越高其水平下降最为显著;可能提示,临床治疗可考虑引入1,25-(OH)2D3辅助手段。

1，25-（OH）2D3增加阿霉素肾病大鼠CD2AP表达

目的观察1，25-（OH）2D3对阿霉素肾病大鼠肾小球CD2AP表达的影响。方法Wistar大鼠随机分为对照组和阿霉素模型组，后者经尾静脉注射阿霉素（ADR）诱导肾病模型，再随机分肾病组和1，25-（OH）2D3组。实验5周末测定大鼠尿蛋白、相关生化指标及电解质。肾小球CD2AP免疫组化及荧光染色分析肾小球CD2AP蛋白的表达。多元回归分析CD2AP的平均吸光度值（A）与上述检测指标的关系。结果与对照组相比，肾病组大鼠尿红细胞、尿蛋白、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、甲状旁腺素（PTH）明显升高（P〈0．01），血清白蛋白（Alb）、1，25-（OH）2D3、离子钙（Ca^2＋）降低（P〈0．05或P〈0．01），磷（P）无明显差异（P〉0．05），CD2AP蛋白表达明显下调（P〈0．01）。与肾病组相比，1，25-（OH）2D3组尿红细胞、尿蛋白、TC、TG、PTH下降（P〈0．05或P〈0．01），而Alb，1，25-（OH）2D3、Ca^2＋增加（P〈0．01），P无明显差异（P〉0．05），CD2AP蛋白表达明显增加（P〈0．01）。多元回归分析显示，A值与尿蛋白呈负相关（rs=-0．63，P〈0．01），与1，25-（OH）2D3、Alb水平正相关（rs=0．59、0．27，P〈0．05）。结论1，25-（OH）2D3可减轻ADR肾病大鼠血尿、蛋白尿，调节血脂及钙磷代谢障碍，恢复CD2AP蛋白的表达，具有保护肾脏作用。

1,25(OH)2D3口服冲击与血液灌流对维持性血液透析患者继发甲状旁腺功能亢进的疗效对比与护理

目的:比较1,25(OH)2D3口服冲击与血液灌流对维持性血液透析患者继发甲状旁腺功能亢进(SHPT)的疗效与护理。方法:将维持性血液透析SHPT患者42例随机分成A组[1,25(OH)2D3口服冲击组]及B组(血液灌流组)各21例。A组在1周3次血液透析治疗基础上给予1,25(OH)2D3口服冲击;B组给予1周3次血液灌流串联血液透析治疗。比较治疗后两组血清全段反应性甲状旁腺激素(iPTH)和皮肤瘙痒等改善情况,并探讨护理要点。结果:治疗12周后两组患者iPTH与治疗前相比具有显著性(P<0.01),但B组下降程度较A组更为显著(P<0.01)。结论:血液灌流对维持性血液透析患者SHPT的疗效比1,25(OH)2D3口服冲击更明显,且皮肤瘙痒等症状好转,值得临床推广。

血清1,25(OH)2D3水平在糖尿病足创面愈合中的作用研究

目的探讨血清1,25-羟基维生素D3 [1,25(OH)2D3]在糖尿病足创面愈合中的作用。方法以该院2017年1月—2019年1月期间收治的糖尿病足溃疡患者为调查对象,采用整群抽样的方法,随机抽取128例纳入该次研究。根据愈合情况分为愈合组(80例)和未愈合组(48例)。收集患者资料,进行糖尿病足创面愈合的危险因素分析。结果未愈合组年龄>60岁的患者比率、溃疡深度较深、感染、有骨髓炎、有坏疽、踝肱指数ABI≤0.7的患者比率均明显高于愈合组,差异有统计学意义(P<0.05)。未愈合组患者的血清1,25(OH)2D3水平为(25.66±2.56)nmol/L,明显低于愈合组(40.25±5.25)nmol/L,差异有统计学意义(P<0.05)。年龄、溃疡深度、感染、骨髓炎、坏疽为糖尿病足创面愈合的独立危险因素,踝肱指数ABI、血清1,25(OH)2D3水平为糖尿病足创面愈合的保护性因素。结论 1,25(OH)2D3水平较低是糖尿病足创面愈合较差的重要影响因素。

1，25-(OH)2D3在促进大鼠外周血间充质干细胞扩增中的作用

目的:探讨大鼠外周血中是否存在非黏附间充质干细胞(MSCs)以及1,25-(OH)2D3能否刺激它们形成成纤维细胞集落形成单位(CFU-f)。方法:从大鼠外周血中分离单核粒细胞(PBMGC)组份,在缺乏和添加10-8mol/L1,25-(OH)2D3条件下进行贴壁培养。培养至4天和8天时,将未贴壁细胞转移到新的培养皿中继续培养,即:"pour-off"培养,培养16天形成的细胞进行亚甲基蓝染色,计数CFU-f数目,并对4天"pour-off"培养形成的细胞进行免疫细胞化学染色。结果:PBMGC培养及4天和8天非黏附PBMGC培养都能形成CFU-fs,而1,25-(OH)2D3能够明显地促进它们形成CFU-f。非黏附细胞形成的克隆表达波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅲ型胶原,而不表达Ⅰ型胶原。结论:大鼠外周血中存在非黏附MSCs,在体外培养能够形成CFU-fs,而1,25-(OH)2D3具有促进外周血MSC扩增的作用。

顺铂联合1,25（OH）2D3对原代肺癌细胞凋亡和侵袭迁移的影响

目的探讨顺铂(DDP)与1,25(OH)2D3联合作用对原代培养肺癌细胞凋亡、侵袭和迁移的影响。方法体外培养肺腺癌肿瘤组织分离的原代细胞。将细胞分为4组:对照组、1,25(OH)2D3组、DDP组、DDP联合 1,25(OH)2D3组(联合作用组)。各组细胞经相应药物作用后,使用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况,Tran swell检测肿瘤细胞的侵袭能力,细胞划痕实验检测肿瘤细胞的迁移能力。结果与对照组相比,DDP组、 1,25(OH)2D3组、联合作用组具有诱导肺癌细胞凋亡的作用差异有统计学意义(P <0.05 ),其中联合作用组诱导细胞凋亡的作用最强。Transwell检测结果显示,与对照组比较,DDP组、1,25(OH)2D3组、联合作用组肿瘤细胞的侵袭能力呈现不同程度的下降,差异有统计学意义(P<0.05)。迁移能力实验结果显示,与对照组比较,DDP组、1,25(OH)2D3组、联合作用组的划痕愈合距离显著缩短,联合作用组的划痕愈合距离明显短于DDP组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 1,25(OH)2D3可提高DDP抗癌敏感性,降低肿瘤细胞的侵袭迁移能力,诱导细胞凋亡。