1,25（OH）2D3干预糖尿病肾病模型大鼠肾脏组织MicroRNA-130b及转化生长因子β1的变化

背景:1,25(OH)2D3在糖尿病肾病的发展过程中发挥着重要调节作用。目的:探索1,25(OH)2D3对糖尿病肾病大鼠肾脏组织MicroRNA-130b及转化生长因子β1表达的影响作用。方法:实验方案经新疆医科大学动物实验中心动物实验伦理委员会批准。将25只清洁级SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组、糖尿病肾病+花生油组,后2组分别给予骨化三醇(即1,25(OH)2D3,活性维生素D3)0.03μg/(kg?d)治疗、花生油对照处理。37 d后采集标本,以实时聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blot及免疫组织化学方法检测大鼠肾脏组织转化生长因子β1的表达;RT-PCR检测MicroRNA-130b的表达;采用苏木精-伊红及Masson染色对大鼠肾脏形态结构及纤维化程度进行分析。结果与结论:①RT-PCR结果显示,糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组及糖尿病肾病+花生油组MicroRNA-130b的表达明显低于正常对照组(P<0.01),糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组明显高于糖尿病肾病+花生油组(P<0.01);②RT-PCR、Western blot、免疫组织化学及病理结果显示,糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组及糖尿病肾病+花生油组转化生长因子β1 mRNA和蛋白的表达、大鼠肾脏组织结构紊乱及纤维化程度明显高于正常对照组(P<0.01),糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组明显低于糖尿病肾病+花生油组(P<0.01);③结果说明,糖尿病肾病大鼠肾脏MicroRNA-130b表达水平下降,转化生长因子β1 mRNA及蛋白表达水平升高,肾脏组织结构紊乱及纤维化程度严重;1,25(OH)2D3可上调糖尿病肾病大鼠肾脏MicroRNA-130b的表达水平,同时还可下调糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子β1的表达水平,改善肾脏组织结构紊乱及纤维化程度。

FoxO1在1,25（OH）2D3调控高糖环境下成骨细胞代谢中的作用

目的探究1,25(OH)2D3对高糖环境下骨代谢的调控作用,为1,25(OH)2D3对高糖环境下成骨细胞的可能调控机制提供证据。方法将成骨细胞系MC3T3-E1细胞分3组培养:①对照组,低糖(5.5 mmol/L)DMEM培养基培养;②高糖组:高糖(22 mmol/L)DMEM培养基培养;③高糖+1,25(OH)2D3组:高糖DMEM+1,25(OH)2D3培养基培养。利用CCK-8法检测各组细胞增殖活性;Annexin V,FITC凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况;茜素红半定量分析细胞分化水平;分别通过qRT-PCR检测叉头转录因子-1(forkhead transcription factor 1,FoxO1)mRNA表达,免疫荧光观察FoxO1蛋白表达变化和其与细胞核的相对位置关系。结果相较于对照组,高糖组成骨细胞过度增殖、凋亡显著增加、成骨分化受抑制(P <0.05),FoxO1 mRNA增加(P=0.006),FoxO1蛋白核内转移增加(P=0.001)。相较于高塘组,高糖+1,25(OH)2D3组细胞的过度增殖受到抑制、凋亡减少、成骨分化较高糖组改善(P <0.05),FoxO1 mRNA减少(P=0.006),FoxO1蛋白核内转移受阻(P <0.001)。结论 1,25(OH)2D3可能通过降低高糖环境中成骨细胞FoxO1 mRNA表达,阻止FoxO1向细胞核内转移,抑制高糖环境下成骨细胞的异常增殖、凋亡,并逆转高糖对成骨分化的抑制作用。

p53半剂量缺失纠正1,25(OH)_(2)D_(3)缺乏小鼠的骨质疏松

目的:探索p53半剂量缺失杂合子小鼠能否通过增强抗氧化能力纠正活性维生素D(1,25(OH)_(2)D_(3))缺乏引起的骨质疏松。方法:取10周龄高钙高磷饮食喂养的同窝野生型(wild type,WT)小鼠、p53半剂量缺失杂合子(p53^(+/-))小鼠、1α-羟化酶基因敲除[1α(OH)ase^(-/-)]小鼠及p53半剂量缺失的1α羟化酶基因敲除[1α(OH)ase^(-/-)p53^(+/-)]小鼠的长骨,利用X线、micro-CT、组织病理学和分子生物学等方法,比较各组小鼠血清学、长骨骨矿化、骨形成、骨吸收以及氧化应激等表达变化。结果:与WT小鼠相比,p53^(+/-)小鼠血清钙、磷、甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)和1,25(OH)_(2)D_(3)水平差异无统计学意义,骨密度、总胶原(total collagen,T-col)阳性面积、成骨细胞数量、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,Col-Ⅰ)阳性面积均有所增加,活性氧水平降低,抗氧化酶SOD1表达增加。与1α(OH)ase^(-/-)小鼠相比,1α(OH)ase^(-/-)p53^(+/-)小鼠血清钙、磷和PTH差异无统计学意义,血清中检测不到1,25(OH)_(2)D_(3),骨密度、T-col阳性面积、成骨细胞数量、ALP和Col-Ⅰ阳性面积均明显增加,破骨细胞数量减少,活性氧水平降低,抗氧化酶SOD1表达增加。结论:p53半剂量缺失可通过增强抗氧化能力纠正1,25(OH)_(2)D_(3)缺乏小鼠的骨质疏松。

1.25（OH）2D3对实验性自身免疫性神经炎的治疗作用研究

目的:探讨1.25(OH)2D 3对实验性自身免疫性神经炎(Experimental autoimmune neuritis,EAN)的治疗作用。方法:采用人工合成P0180-199肽段与完全弗氏佐剂混合免疫Lewis大鼠建立EAN模型,采用1.25(OH)2D 3灌胃处理,测大鼠体重,观察发病情况并进行行为学评分,HE染色观察坐骨神经炎细胞浸润情况,电镜检测坐骨神经脱髓鞘改变。RT-PCR和ELISA法检测大鼠白介素17(IL-17)、白介素10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)、干扰素(IFN-γ)RORrt、FoxP3的表达变化。结果:1.25(OH)2D 3干预可减轻EAN大鼠体重丢失情况、降低行为学评分,减少坐骨神经炎细胞浸润和减轻脱髓鞘,IL-17、IFN-γ、RORrt表达降低、IL-10、TGF-β和FoxP3表达增加。结论:1.25(OH)2D 3可改善EAN大鼠临床症状,机制可能与影响T细胞的数量和功能进而抑制促炎性因子表达有关,有望为格林巴利综合征的治疗提供新策略。

顺铂联合1,25（OH）2D3对原代肺癌细胞凋亡和侵袭迁移的影响

目的探讨顺铂(DDP)与1,25(OH)2D3联合作用对原代培养肺癌细胞凋亡、侵袭和迁移的影响。方法体外培养肺腺癌肿瘤组织分离的原代细胞。将细胞分为4组:对照组、1,25(OH)2D3组、DDP组、DDP联合 1,25(OH)2D3组(联合作用组)。各组细胞经相应药物作用后,使用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况,Tran swell检测肿瘤细胞的侵袭能力,细胞划痕实验检测肿瘤细胞的迁移能力。结果与对照组相比,DDP组、 1,25(OH)2D3组、联合作用组具有诱导肺癌细胞凋亡的作用差异有统计学意义(P <0.05 ),其中联合作用组诱导细胞凋亡的作用最强。Transwell检测结果显示,与对照组比较,DDP组、1,25(OH)2D3组、联合作用组肿瘤细胞的侵袭能力呈现不同程度的下降,差异有统计学意义(P<0.05)。迁移能力实验结果显示,与对照组比较,DDP组、1,25(OH)2D3组、联合作用组的划痕愈合距离显著缩短,联合作用组的划痕愈合距离明显短于DDP组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 1,25(OH)2D3可提高DDP抗癌敏感性,降低肿瘤细胞的侵袭迁移能力,诱导细胞凋亡。

1.25（OH）2D3对NOD小鼠心肌超微结构的影响

目的 观察NOD小鼠在1,25（OH）2D3治疗前后心肌超微结构的改变,以探讨1.25（OH）2D3对心脏的保护作用. 方法 NOD小鼠（19只）用环磷酰胺诱发建立糖尿病模型后,随机分为1.25（OH）2D3治疗组及糖尿病模型组,每组6只.观察用药前及用药4周后糖尿病小鼠血糖及心肌超微结构的变化. 结果 模型组小鼠心肌纤维稀疏,肌丝扭曲部分断裂,z线增宽,M线、H带模糊不清.线粒体肿胀变形,嵴稀疏,排列紊乱,基底膜增厚,间质胶原纤维增生.1.25（OH）2D3治疗组小鼠心肌细胞中,肌丝排列整齐,结构清晰,肌纤维无明显断裂,线粒体肿胀较未治疗组明显减轻,心肌内微血管基底膜较模型组薄. 结论 1.25（OH）2D3可减轻实验性Ⅰ型糖尿病小鼠心肌超微结构的病变,对心肌有一定的保护作用.

血透患者使用冲击量1.25（OH）2D3治疗钙磷代谢紊乱的临床观察

目的观察1．25（OH）2D3（罗钙全）口服冲击剂量对纠正血液透析患者血清钙、磷代谢紊乱的疗效及甲状旁腺功能的影响。方法选择36例血液透析患者为治疗口服，1．25（OH）2D3剂量2-4ug／次，每周2次；选择32例常规治疗组剂量0．25ug／次，每天一次；10例为正常健康人对照组。结果冲击量治疗组与常规治疗组，血清钙明显升高，血清磷降低，PTH在常规组轻度降低，而冲击量组显著降低，但无统计学意义，临床症状观察冲击组症状明显好转，治疗过程中无明显副作用。结论1.25（OH）2D3口服冲击量治疗血液透析患者血清钙磷代谢紊乱改善甲状旁腺功能亢进疗效较佳，不失临床治疗的好方法。

血液透析治疗慢性肾衰竭患者致甲状旁腺功能亢进与血清1,25（OH）2D3及血磷水平的相关性分析

目的分析血液透析治疗慢性肾衰竭患者致其甲状旁腺功能亢进与1,25(OH)2D3以及血磷水平的相关性。方法回顾性分析2016年8月—2017年8月内蒙古自治区人民医院肾内科收治慢性肾功能衰竭患者100例的临床资料,按随机数字表法分为观察组和对照组,各50例。对照组患者给予常规治疗,观察组患者给予血液透析治疗,比较2组患者肾功能、血磷、血钙、1,25-二羟维生素D[1,25(OH)2D3]以及甲状旁腺激素(PTH)水平差异。随访1年,根据观察组患者预后是否并发甲状旁腺功能亢进,将其分为亢进亚组(n=16)和非亢进亚组(n=34)2组,比较上述指标变化,并采用Pearson法分析甲状旁腺功能亢进与1,25(OH)2D3以及血磷水平的相关性。结果治疗后,观察组患者血磷、1、25(OH)2D3、PTH、FGF23、血清肌酐、尿酸水平明显低于对照组,血钙、尿素氮水平明显高于对照组(t/P=8.106/0.000、30.007/0.000、20.948/<0.001、46.775/<0.001、5.657/0.000、20.337/0.000、14.352/<0.001、20.204/<0.001)。治疗后,亢进亚组患者的血磷、PTH、FGF23、1,25(OH)2D3水平明显高于非亢进亚组,血钙水平明显低于非亢进亚组(P<0.01)。Pearson相关性分析显示,血液透析治疗慢性肾衰竭患者致其甲状旁腺功能亢进与血磷、1,25(OH)2D3、FGF23以及PTH水平均呈正相关,与血钙水平呈负相关(r/P=0.684/0.015,0.781/0.005,0.537/0.014,0.575/0.000,-0.654/0.035)。结论血液透析治疗慢性肾衰竭患者致其甲状旁腺功能亢进与血磷、1,25(OH)2D3、FGF23以及PTH水平呈正相关,与血钙水平呈负相关,对其应予预防和诊治。

血清1,25（OH）2D3、SOD、IFN-γ在肺结核患者中的表达水平及临床意义

结核病是由结核分枝杆菌感染后引起的一种慢性传染病, 以肺结核最为多见, 结核分枝杆菌多可侵袭肺部, 引起肺增殖性组织反应、 渗出、 干酷样坏死等一系列病理反应, 临床主要表现为咳嗽、 咯血、 低热、 盗汗、 消瘦、 乏力等, 随着病情的进展, 可引起机体内多器官病变, 威胁患者生命健康[1]. 研究证实,肺结核具有高发病率、 高死亡率、 高耐药性等特点,使用抗结核药物治疗仍是其最主要的治疗手段, 但其治疗周期长、 对人体损害大, 故及时评估疗效、 调整治疗方案至关重要[2]. 细胞免疫及氧化应激损伤在肺结核的发病及病情进展过程中起着重要作用[3]. 本研究通过检测治疗前后肺结核患者血清1,25-二羟维生素D3[1,25（OH）2D3]、 超氧化物歧化酶（SOD）、 干扰素-γ（IFN-γ） 水平变化情况, 旨在进一步研究肺结核患者治疗前后细胞免疫与氧化应激相关指标变化情况, 为寻找可靠的肺结核疗效评估指标提供参考, 现报道如下.

1,25（OH）2D3诱导鼠骨髓细胞形成多核破骨细胞的实验研究

目的：观察１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对骨髓干细胞形成破骨细胞的调控作用，从而为破骨细胞骨吸收机制的研究奠定方法学的基础。方法：将不同浓度１，２５（ＯＨ）２Ｄ３加入原代培养的刀骨髓细胞培养液中，利用抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ）染色，监测不同时间点破骨细胞的形成情况，利用倒置光相差异微镜和扫描电镜检测所诱导形成破骨细胞的骨吸收功能情况。结果：培养前３天，细胞ＴＲＡＰ染色阴性。

1,25-(OH)_(2)-VitD3通过抑制Snail1-SMAD3/SMAD4复合物形成减轻糖尿病肾病肾小管间质纤维化

目的研究1,25-(OH)2-VitD3(VitD3)对糖尿病肾病肾小管间质纤维化的影响.方法NRK-52E肾小管上皮细胞分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖培养基处理)、高糖组(25 mmol/L葡萄糖的培养基处理)和高糖加VitD3组(25 mmol/L葡萄糖培养基联合10-8 mol/L VitD3).实时定量PCR和Western blot法分别检测NRK-52E细胞Snail家族转录抑制物1(Snail1)、SMAD家族成员3(SMAD3)、SMAD4、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和上皮钙黏蛋白(E-cadherin)的mRNA和蛋白表达;免疫荧光细胞化学染色检测Snail1、SMAD3、SMAD4的表达及定位;通过染色质免疫沉淀检测Snail1与SMAD3/SMAD4形成的复合物与柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)的启动子结合情况;荧光素酶报告检测Snail1、SMAD3/SMAD4和E-cadherin的相互作用;采用小干扰RNA(siRNA)抑制细胞Snail1、SMAD4的表达后,通过实时定量PCR检测E-cadherin的mRNA表达.SD大鼠随机分为对照组、DKD组和VitD3处理组.DKD组和VitD3处理组通过注射链脲佐菌素(STZ)先制备DKD模型,DKD造模成功后,VitD3处理组予60ng/kgVitD3灌胃,对照组和DKD组给予生理盐水灌胃;DKD组和VitD3处理组同时皮下注射胰岛素(1~2)U/kg控制血糖,持续8周.采用实时定量PCR和Western blot法分别检测肾组织中Snail1、SMAD3、SMAD4、α-SMA、E-cadherin的mRNA和蛋白水平,免疫组织化学检测肾组织Snail1、SMAD3、SMAD4、α-SMA和E-cadherin的表达及定位.结果与对照组相比,高糖处理的NRK-52E细胞及DKD肾组织Snail1、SMAD3、SMAD4和α-SMA的mRNA和蛋白表达均上调,E-cadherin表达下调;给予VitD3干预后,DKD模型中Snail1、SMAD3、SMAD4、α-SMA和E-cadherin的表达水平恢复到与对照组接近.染色质免疫沉淀提示Snail1、SMAD3/SMAD4与CAR的启动子Ⅳ结合,而VitD3能够阻止Snail1、SMAD3/SMAD4与CAR的启动子Ⅳ结合;荧光素酶报告检测证实Snail1、SMAD3/SMAD4和E-cadherin的互作关系;用siRNA抑制Snail1、SMAD4的mRNA后,上调高糖诱导下E-cadherin的表达.结论VitD3可抑制Snail1-SMAD3/SMAD4的复合物的形成,减轻糖尿病肾病肾小管间质纤维化.

1,25(OH)_(2)D_(3)及VDR敲除对山羊附睾头上皮细胞β防御素家族表达的影响

旨在研究1,25(OH)_(2)D_(3)是否通过VDR途径调节山羊附睾头上皮细胞β防御素基因表达。本试验选取3只6月龄太行黑山羊,分别采集附睾头组织。采用差速贴壁法分离山羊附睾头上皮细胞,用细胞免疫荧光鉴定上皮细胞纯度。添加100 nmol·L^(-1)1,25(OH)_(2)D_(3)处理附睾头上皮细胞以及筛选出敲除效率最高的pCas9/gRNA1质粒载体进行细胞转染,同时设置阴性对照组和空白对照组,每组3个重复孔。附睾头上皮细胞经1,25(OH)_(2)D_(3)处理以及VDR基因敲除后,分别用qRT-PCR检测VDR和17种β防御素基因的表达,用Western blot检测VDR蛋白和3种β防御素蛋白的表达。结果表明,1,25(OH)_(2)D_(3)能极显著提高VDR、gBD124、gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.01),同时极显著提高gBD104、gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD113、gBD116、gBD120、gBD 121以及gBD 123基因的表达(P<0.01),显著提高gBD106、gBD127、gBD 129以及gBD 134基因的表达(P<0.05),而对gBD 110like和gBD 128基因没有显著影响(P>0.05);3个基因敲除载体进行细胞转染后,pCas9-VDR-V1组VDR蛋白表达极显著降低(P<0.01)。VDR基因敲除极显著降低gBD124的mRNA和蛋白表达(P<0.01),显著降低gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.05),同时VDR基因敲除组gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD116、gBD123、gBD127、gBD 128以及gBD 134基因的表达极显著低于其他组(P<0.01),VDR基因敲除组gBD104、gBD106、gBD 120以及gBD 129基因的表达显著低于其他组(P<0.05),而对gBD121、gBD 110like以及gBD 113的相对表达则无显著影响(P>0.05)。综上所述,1,25(OH)_(2)D_(3)可以上调VDR和部分β防御素表达;VDR基因敲除后降低部分β防御素表达,结果表明1,25(OH)_(2)D_(3)通过上调VD/VDR信号通路关键基因VDR的表达调控山羊附睾头上皮细胞部分β防御素表达。

1,25(OH)_(2)VD_(3)对血管紧张素Ⅱ诱导的足细胞内质网应激的抑制作用

目的探讨1,25(OH)_(2)VD_(3)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的足细胞内质网应激的影响,为临床上应用骨化三醇治疗足细胞损伤产生的蛋白尿提供理论依据。方法体外培养小鼠足细胞系(MPC5),随机分为对照组、AngⅡ组(10^(-6)mol/L的AngⅡ)、1,25(OH)_(2)VD_(3)组[10^(-6)mmol/L的AngⅡ+10^(-8)mol/L的1,25(OH)_(2)VD_(3)]。各组均在给药处理6、12、18、24 h后收集细胞,分别应用实时定量PCR、免疫荧光技术检测不同时间点各组样本中葡萄糖调节蛋白(GRP78)及蛋白激酶样内质网激酶(PERK)的mRNA表达量和蛋白表达情况。结果与对照组比较,AngⅡ组GRP78、PERK mRNA表达量在各个时间点均显著增加(P<0.01)。与AngⅡ组比较,1,25(OH)_(2)VD_(3)组GRP78、PERK mRNA表达量在各个时间点均显著降低(P<0.01或<0.05),相应的GRP78、PERK蛋白表达均较低。AngⅡ组给药处理12 h后GRP78、PERK mRNA表达量较6 h mRNA表达量均显著增加(P<0.01);AngⅡ组给药处理18 h后GRP78、PERK mRNA表达量较12 h mRNA表达量均显著增加(P<0.01,P<0.05)。结论AngⅡ可以诱导足细胞发生内质网应激,其发生强度与药物作用时间有关,而1,25(OH)_(2)VD_(3)能通过抑制AngⅡ诱导的足细胞内质网应激,起到保护足细胞的作用。

1,25(OH)_(2)D_(3)通过调节Th17/Treg比值和RANKL/OPG轴缓解胶原诱导的关节炎

目的 探讨1,25-二羟基维生素D_(3)[1,25-dihydroxy vitamin D3,1,25(OH)_(2)D_(3)]对胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠关节滑膜炎症和骨破坏的抑制作用及机制。方法 30只DBA/1J小鼠被均分为3组:对照组(CON)、模型组(CIA)和模型干预组(VD)。CIA组和VD组小鼠建立CIA模型,用1,25(OH)_(2)D_(3)对VD组CIA模型进行治疗。用游标卡尺测量小鼠后足爪的肿胀程度。用Micro-CT测量小鼠后足爪的骨密度。酶联免疫吸附剂测定法检测小鼠血清1,25(OH)_(2)D_(3)和炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的水平。流式细胞术检测小鼠脾脏Th17细胞和Treg细胞的比例。采用苏木精-伊红染色观察膝关节的病理特征。Western blot检测小鼠踝关节的蛋白OPG、RANKL、NF-κB和VDR的表达水平。结果 1,25(OH)_(2)D_(3)并没有降低CIA模型的发病率,但却明显缓解了关节炎症。VD组的脚掌厚度、关节炎评分以及膝关节HSS评分均较CIA组明显降低(P均<0.05)。CIA组的骨破坏程度更加明显,BMD及BV/TV明显低于VD组(P均<0.05)。VD组的IL-1β、IL-6、TNF-α水平和Th17/Treg细胞比例明显低于CIA组(P均<0.05)。与CIA组相比,VD组踝关节的VDR和OPG蛋白水平明显增加(P均<0.05),NF-κB和RANKL蛋白水平明显低于CIA组(P均<0.05),RANKL/OPG的比例也明显低于CIA组(P<0.05)。结论 1,25(OH)_(2)D_(3)可能通过调节Th17/Treg比值和RANKL/OPG轴缓解CIA模型小鼠的关节滑膜炎症并抑制骨破坏。

1,25(OH)_(2)D_(3)对miR-130b转染的高糖条件下HMC细胞TGF-β1/Smad3及Col-Ⅳ表达的影响

目的观察高糖环境下1,25(OH)_(2)D_(3)对miR-130b转染肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad3、Col-IV表达水平的变化,探索1,25(OH)_(2)D_(3)是否可通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。方法HMC细胞传代培养,miR-130b mimics及miR-130b inhibitor经LipofectamineTM 2000转染肾小球系膜细胞,依据分组加入1,25(OH)_(2)D_(3)1.0×10^(-8) mol/L,37℃、5%CO_(2)饱和湿度条件下继续培养48 h,共分为6组:①空白对照组;②细胞+无水乙醇组(A组);③细胞+miR-130b mimics+无水乙醇组(B组);④细胞+miR-130b mimics+1,25(OH)_(2)D_(3)组(C组);⑤细胞+miR-130b inhibitor+无水乙醇组(D组);⑥细胞+miR-130b inhibitor+1,25(OH)_(2)D_(3)组(E组)。以实时荧光定量PCR检测细胞miR-130b及TGF-β1、Smad3、Col-IVmRNA的表达水平,以Western blot方法检测细胞TGF-β1、Smad3、Col-IV蛋白的表达水平。采用多组间比较的单因素方差分析及组内两两比较采用LSD、Dunnett s T3法比较各组数据。结果空白对照组与A组细胞miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平,差异无统计学意义(P>0.05),与A组相比,B组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显升高(P<0.05),D组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05)。经1,25(OH)_(2)D_(3)治疗发现,与B组相比,C组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05),与D组相比,E组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05)。结论1,25(OH)_(2)D_(3)可降低miR-130b转染肾小球系膜细胞miR-130b及纤维化相关因子TGF-β1、Smad3、Col-IV的表达水平,1,25(OH)_(2)D_(3)可能通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。

1,25(OH)_2D_3合成及代谢酶与大鼠施万细胞关系研究

1,25（OH）2D3作为维生素D3的活性代谢产物,是钙磷代谢及机体免疫调节的重要激素,对中枢神经系统具有保护作用[1-3],给予1,25（OH）2D3可降低多发性硬化的发生[4]。推测其可能对周围神经系统也有保护作用,但目前国内外尚未见相关研究报道。施万细胞作为周围神经胶质细胞,对周围神经具有支持、营养及修复作用。CYP27A1、CYP27B1、CYP24作为1,25（OH）2D3活化和代谢的酶类,与其作用紧密相关,可作为1,25（OH）2D3是否与施万细胞作用的标志。该研究通过探讨施万细胞上CYP27A1、CYP27B1和CYP24基因的表达情况,旨在初步探讨1,25（OH）2D3与施万细胞之间的关系。

1，25（OH）_2D_3及其类似物调节人原始巨核白血病细胞系增殖分化的机制

１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３及其两种新型类似物（ＭＣ９０３和ＥＢ１０８９）对人原始巨核白血病细胞系ＨＩＭｅｇ的增殖分化过程有重要调节作用。本研究利用分子杂交及逆转录－聚合酶链反应首次证明，ＨＩＭｅｇ细胞中有１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３受体（ＶＤＲ）ｍＲＮＡ的表达，强烈提示１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３对ＨＩＭｅｇ细胞的作用是由ＶＤＲ介导的。同时还发现，１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３及其类似物、维甲酸在调节ＨＩＭｅｇ细胞增殖分化过程中，Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达水平迅速降低，６ｈ时已基本达到最低水平，提示这些作用因子对ＨＩＭｅｇ细胞的抑制增殖和诱导分化作用是和Ｃ－ｍｙｃ癌基因的表达改变密切相关的。

血清骨钙素、TP1NP、25(OH)D3水平在绝经后女性T2DM患者并发DKD中的应用价值探讨

目的 分析血清骨钙素(OC)、总I型前胶原N端前肽(TP1NP)、25-羟维生素D3[25(OH)D3]水平在绝经后女性2型糖尿病(T2DM)并发糖尿病肾病(DKD)患者中的应用价值。方法 收集122例绝经后女性T2DM患者临床资料,其中合并DKD 41例(DKD组),无DKD 81例(对照组),比较两组血清OC、TP1NP、25(OH)D3水平,使用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清OC、TP1NP、25(OH)D3对绝经后女性T2DM患者合并DKD的诊断价值;并比较不同尿白蛋白/肌酐比值(UACR)的DKD患者血清OC、TP1NP、25(OH)D3水平差异。结果 DKD组血清OC、TP1NP、25(OH)D3水平均低于对照组(P<0.05)。OC、TP1NP、25(OH)D3对绝经后女性T2DM患者合并DKD均有较高诊断价值(P<0.05),且3项联合诊断价值更高(P<0.05)。绝经后女性DKD患者中,UACR>300mg/g者血清OC、TP1NP、25(OH)D3水平明显低于UACR≤300mg/g者(P<0.05)。结论 血清OC、TP1NP、25(OH)D3水平对评估绝经后女性T2DM患者DKD发生、发展进程有利。

1,25(OH)_2D_3抑制肝星状细胞激活和调控Th细胞分化治疗肝纤维化

目的明确1,25-二羟基维生素D_3[1,25-dihydroxyvitamin D_3,1,25(OH)_2D_3]对肝纤维化的治疗作用及其作用机制。方法病理学检查和肝功能血生化检查评估肝纤维化程度;免疫组化检测α-SMA、TGF-β和collagen I表达观察肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)激活水平;流式细胞实验、ELISA、RT-PCR等衡量1,25(OH)_2D_3对CD4+T细胞亚群分化的影响。结果与肝纤维化模型组相比,1,25(OH)_2D_3治疗组肝细胞状态明显恢复。肝纤维化小鼠肝脏中collagen I、TGF-β和α-SMA表达明显增多(P<0.05),1,25(OH)_2D_3治疗后表达明显下降(P<0.05)。1,25(OH)_2D_3治疗后Th1细胞和Th17细胞比例降低(P<0.05)、Th2细胞比例增加(P<0.05)。1,25(OH)_2D_3治疗组小鼠的IFNγ、IL-17A和IL-22因子浓度水平较肝纤维化小鼠明显降低,IL-4浓度升高(P<0.01);RORγt和T-bet表达量降低,GATA3表达升高(P<0.01)。结论 1,25(OH)_2D_3通过降低肝星状细胞激活水平以及调控肝纤维化中Th细胞的分化减轻肝纤维化。

1,25(OH)_2D_3干预实验性自身免疫性甲状腺炎TH1/TH2细胞失衡的研究

目的观察1,25(OH)2D3对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠炎症及Th1/Th2细胞的干预效果。方法 48只雌性Wistar大鼠随机分为预防组(n=10),治疗组(n=10),阳性对照组(n=12)和阴性对照组(n=16)。除阴性对照组外,其余大鼠均给予pTG免疫致敏。预防和治疗组每只大鼠使用维生素D35μg/kg.,隔日腹腔注射,分别从建模0～6周和2～8周作干预,阴性对照组和阳性对照组应用花生油作对照。各组大鼠在处死后取甲状腺组织做病理学检查,检测血清自身抗体,及细胞因子的改变。结果阴性对照大鼠的甲状腺结构完整;阳性对照组大鼠甲状腺滤泡结构破坏严重,部分滤泡萎缩或消失,1,25(OH)2D3干预组大鼠甲状腺结构保持较完整,萎缩滤泡减少,淋巴细胞浸润不明显。与阴性对照组相比,预防组其自身抗体及细胞因子水平均无显著性差异;治疗组大鼠血清抗体水平与同时期的阳性对照相比水平明显降低(P<0.05),但较阴性对照明显升高(P<0.05);与阳性对照组相比,治疗组大鼠IFN-γ及IL-12水平显著下降(P<0.05),IL-4和IL-10水平升高(P<0.01)。结论在EAT大鼠建模开始就使用1,25(OH)2D3可使大鼠甲状腺组织保持较完整形态,维持血清抗体及细胞因子正常范围。对EAT大鼠,1,25(OH)2D3有可能减缓病理损害,调整细胞因子的失衡。