1,25(OH)_(2)D_(3)对Aβ_(1-42)诱导阿尔茨海默病细胞模型中细胞焦亡的抑制作用

目的探讨1,25(OH)_(2)D_(3)对Aβ_(1-42)诱导阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)细胞模型中细胞焦亡的抑制作用及其机制。方法将PC12细胞分为对照组、模型组、Caspase-1-siRNA组、NC-siRNA组、1,25(OH)_(2)D_(3)组、联合干预组。对照组仅用DMEM高糖培养基培养细胞;模型组用20μmol/L Aβ_(1-42)处理细胞以造模;Caspase-1-siRNA组先用50 nmol/L Caspase-1-siRNA处理细胞,再加入20μmol/L Aβ_(1-42);NC-siRNA组先用50 nmol/L NC-siRNA处理细胞,再加入20μmol/L Aβ_(1-42);1,25(OH)_(2)D_(3)组用100 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)干预后加入20μmol/L Aβ_(1-42);联合干预组先用50 nmol/L Caspase-1-siRNA处理细胞,然后用100 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)干预,最后加入20μmol/L Aβ_(1-42)。细胞免疫荧光检测凋亡相关斑点蛋白(ASC)蛋白的表达;Western blot检测细胞焦亡通路相关蛋白表达,包括:NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-Caspase-1)、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、消皮素D-N端(GSDMD-N)、IL-1β、IL-1β前体(pro-IL-1β)、IL-18和IL-18前体(pro-IL-18)蛋白;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)染色检测细胞膜通透性。结果与对照组相比,模型组ASC蛋白荧光强度增强(P<0.01),细胞焦亡通路相关蛋白表达均增加(P<0.05),细胞膜通透性变大(P<0.01)。与模型组相比,1,25(OH)_(2)D_(3)组和Caspase-1-siRNA组ASC蛋白荧光强度减弱(P<0.01),pro-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD-N、pro-IL-1β、IL-1β、pro-IL-18和IL-18蛋白表达均下调(P<0.01),细胞通透性减小(P<0.01)。与Caspase-1-siRNA组相比,联合干预组GSDMD-N和IL-18蛋白表达降低(P<0.01),细胞通透性减小(P<0.01)。结论Aβ_(1-42)能够诱导PC12细胞发生细胞焦亡现象。1,25(OH)_(2)D_(3)可以通过抑制Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞发生焦亡来发挥其抗炎的神经保护作用,其机制与Caspase-1的抑制密切相关。

慢性肾脏病患者血清STC1、1,25-(OH)2D3与疾病严重程度的关系

目的:检测慢性肾脏病患者血清斯钙素1(STC1)、1,25-羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]水平并探究其与疾病严重程度的关系。方法:选取在本院确诊的126例慢性肾脏病患者作为研究对象(研究组),同期在本院体检健康的受试者56例作为对照组。比较不同严重程度患者血清STC1、1,25-(OH)2D3水平,以Pearson相关性分析1,25-(OH)2D3、STC1在慢性肾脏病患者血清中的相关性。多因素Logistic回归分析影响慢性肾脏病患者肾功能重度损害相关因素。结果:研究组血清STC1、BUN、Scr水平明显高于对照组(P<0.05),1,25-(OH)2D3水平低于对照组(P<0.05);慢性肾脏病1期、2期、3期、4期、5期患者血清STC1水平依次升高(P<0.05),1,25-(OH)2D3水平依次降低(P<0.05);慢性肾脏病3期、4期、5期BUN、Scr水平逐次升高,且均高于1期、2期(P<0.05)。STC1与BUN、Scr水平均呈正相关(r=0.698、0.702,P<0.01),1,25-(OH)2D3与血清BUN、Scr水平均呈负相关(r=0.698、0.702,P<0.01);STC1、BUN、Scr是影响慢性肾脏病患者肾功能重度损害的危险因素,而1,25-(OH)2D3是慢性肾脏病患者肾功能重度损害的保护因素(P<0.05)。结论:慢性肾脏病患者血清STC1表达较高,1,25-(OH)2D3水平呈低表达,与疾病严重程度关系密切,为影响慢性肾脏病疾病严重程度的独立危险因素,且两者呈负相关,可能作为评估慢性肾脏病患者严重程度的有效、潜在指标。

1,25(OH)_(2)D_(3)对miR-130b转染的高糖条件下HMC细胞TGF-β1/Smad3及Col-Ⅳ表达的影响

目的观察高糖环境下1,25(OH)_(2)D_(3)对miR-130b转染肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad3、Col-IV表达水平的变化,探索1,25(OH)_(2)D_(3)是否可通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。方法HMC细胞传代培养,miR-130b mimics及miR-130b inhibitor经LipofectamineTM 2000转染肾小球系膜细胞,依据分组加入1,25(OH)_(2)D_(3)1.0×10^(-8) mol/L,37℃、5%CO_(2)饱和湿度条件下继续培养48 h,共分为6组:①空白对照组;②细胞+无水乙醇组(A组);③细胞+miR-130b mimics+无水乙醇组(B组);④细胞+miR-130b mimics+1,25(OH)_(2)D_(3)组(C组);⑤细胞+miR-130b inhibitor+无水乙醇组(D组);⑥细胞+miR-130b inhibitor+1,25(OH)_(2)D_(3)组(E组)。以实时荧光定量PCR检测细胞miR-130b及TGF-β1、Smad3、Col-IVmRNA的表达水平,以Western blot方法检测细胞TGF-β1、Smad3、Col-IV蛋白的表达水平。采用多组间比较的单因素方差分析及组内两两比较采用LSD、Dunnett s T3法比较各组数据。结果空白对照组与A组细胞miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平,差异无统计学意义(P>0.05),与A组相比,B组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显升高(P<0.05),D组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05)。经1,25(OH)_(2)D_(3)治疗发现,与B组相比,C组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05),与D组相比,E组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05)。结论1,25(OH)_(2)D_(3)可降低miR-130b转染肾小球系膜细胞miR-130b及纤维化相关因子TGF-β1、Smad3、Col-IV的表达水平,1,25(OH)_(2)D_(3)可能通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。

1,25（OH）2D3干预糖尿病肾病模型大鼠肾脏组织MicroRNA-130b及转化生长因子β1的变化

背景:1,25(OH)2D3在糖尿病肾病的发展过程中发挥着重要调节作用。目的:探索1,25(OH)2D3对糖尿病肾病大鼠肾脏组织MicroRNA-130b及转化生长因子β1表达的影响作用。方法:实验方案经新疆医科大学动物实验中心动物实验伦理委员会批准。将25只清洁级SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组、糖尿病肾病+花生油组,后2组分别给予骨化三醇(即1,25(OH)2D3,活性维生素D3)0.03μg/(kg?d)治疗、花生油对照处理。37 d后采集标本,以实时聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blot及免疫组织化学方法检测大鼠肾脏组织转化生长因子β1的表达;RT-PCR检测MicroRNA-130b的表达;采用苏木精-伊红及Masson染色对大鼠肾脏形态结构及纤维化程度进行分析。结果与结论:①RT-PCR结果显示,糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组及糖尿病肾病+花生油组MicroRNA-130b的表达明显低于正常对照组(P<0.01),糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组明显高于糖尿病肾病+花生油组(P<0.01);②RT-PCR、Western blot、免疫组织化学及病理结果显示,糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组及糖尿病肾病+花生油组转化生长因子β1 mRNA和蛋白的表达、大鼠肾脏组织结构紊乱及纤维化程度明显高于正常对照组(P<0.01),糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组明显低于糖尿病肾病+花生油组(P<0.01);③结果说明,糖尿病肾病大鼠肾脏MicroRNA-130b表达水平下降,转化生长因子β1 mRNA及蛋白表达水平升高,肾脏组织结构紊乱及纤维化程度严重;1,25(OH)2D3可上调糖尿病肾病大鼠肾脏MicroRNA-130b的表达水平,同时还可下调糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子β1的表达水平,改善肾脏组织结构紊乱及纤维化程度。

1,25(OH)_2D_3对甲状旁腺素诱导的肾小管上皮细胞转分化和TGF-β_1的表达的影响

目的:探讨1,25(OH)2D3对甲状旁腺素(PTH)诱导的肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)培养在含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液中。对照组:加入等体积含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液;PTH刺激组:加入终浓度为10-10 mol/L PTH的含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液;PTH+1,25(OH)2D3干预组:加入10-10 mol/L PTH,同时加入不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7 mol/L)的1,25(OH)2D3。刺激HK-2细胞48 h。半定量RT-PCR法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TGF-β1的基因表达;Western blot法检测细胞中α-SMA和TGF-β1的蛋白表达;免疫细胞化学法检测细胞中α-SMA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1的含量。结果:半定量RT-PCR结果显示,对照组HK-2细胞中几乎无α-SMA的mRNA表达,仅有少量的TGF-β1 mRNA表达;PTH刺激组α-SMA和TGF-β1mRNA表达量与对照组比较明显增加;PTH+1,25(OH)2D3干预组表达量比PTH刺激组显著降低,且随着1,25(OH)2D3浓度的升高呈一定的剂量依赖性(P<0.05)。Western blot结果显示,对照组HK-2细胞中无α-SMA的蛋白表达,仅有少量的TGF-β1蛋白表达;10-10 mol/L的PTH能够明显诱导HK-2细胞中α-SMA的蛋白表达,增加TGF-β1的蛋白表达量;PTH+1,25(OH)2D3干预组,α-SMA和TGF-β1的蛋白表达量比PTH刺激组显著降低(P<0.05)。免疫细胞化学法结果显示,对照组几乎无α-SMA阳性表达的细胞,PTH刺激组可见大量细胞α-SMA表达阳性;PTH+1,25(OH)2D3干预组α-SMA表达阳性的细胞数明显低于PTH刺激组(P<0.05)。ELISA结果显示,对照组细胞上清液中可检测到少量的TGF-β1,PTH刺激组含量显著升高,PTH+1,25(OH)2D3干预组与PTH刺激组比较含量明显降低(P<0.05)。结论:1,25(OH)2D3能够部分拮抗PTH诱导的HK-2细胞转分化和TGF-β1的表达。

早期糖尿病肾病患者1,25-(OH)_2D_3及炎性因子的变化及骨化三醇胶丸的干预作用

目的观察维生素D代谢物1,25-二羟维生素D_3[1,25-(OH)_2D_3]对早期糖尿病肾病(DN)患者炎性因子TGF-β、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平的影响。方法2型糖尿病患者150例,其中单纯糖尿病患者60例为DM组,早期DN 90例为DN组。DN组再随机分为治疗亚组和对照亚组各45例。对照亚组常规治疗,治疗亚组常规治疗+骨化三醇胶丸,疗程均3个月,比较各组1,25-(OH)_2D_3、24 h尿蛋白定量及相关炎性因子的变化。结果治疗前,DN组1,25-(OH)_2D_3水平低于DM组(P<0.05);TGF-β、TNF-α、IL-6、hs-CRP,24 h尿蛋白定量、SCr水平均高于DM组(P<0.05);治疗亚组治疗后TGF-β、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平及24 h尿蛋白定量均较治疗前降低(P<0.05),1,25-(OH)_2D_3水平较前升高(P<0.05)。对照亚组与治疗亚组不良反应发生率比较差异无统计学意义(11.1】%vs.11.11%,P>0.05)。结论早期DN患者1,25-(OH)_2D_3缺乏,炎性因子水平增高,补充骨化三醇胶丸可以改善炎性反应状态。

1,25-(OH)_2VitD_3对食管癌细胞分化相关基因NDRG1表达的影响

目的了解1,25-(OH)2VitD3对食管癌细胞分化相关基因NDRG1表达的影响。方法采用1,25-(OH)2VitD3作用于人食管癌EC9706细胞,应用免疫组化和RT-PCR方法分别检测1,25-(OH)2VitD3作用不同时间后NDRG1基因的表达。结果1,25-(OH)2-VitD3作用24h～5dNDRG1基因蛋白和mRNA均显著高于对照组水平(P<0.05)。结论1,25-(OH)2VitD3可上调EC9706细胞分化相关基因NDRG1表达,促使其分化。

DA、CARM1、25-(OH)-D 3在糖尿病患者外周血中的表达及与NAFLD发生的关系

目的探讨多巴胺(DA)、共激活剂相关精氨酸甲基转移酶1(CARM1)、25-羟维生素D 3[25-(OH)-D 3]在糖尿病患者外周血中的表达及与非酒精性脂肪肝(NAFLD)发生的关系。方法选取2021年5月至2023年2月在该院治疗的2型糖尿病(T2DM)合并NAFLD患者70例作为T2DM合并NAFLD组,同时选取单纯T2DM患者66例作为T2DM组,选取体检健康者70例作为健康组,比较各组外周血DA、CARM1、25-(OH)-D 3水平,同时分析T2DM合并NAFLD组不同血糖控制、严重程度患者外周血DA、CARM1、25-(OH)-D 3水平。采用Pearson相关分析外周血DA、CARM1、25-(OH)-D3水平与糖化血红蛋白(HbA1c)、受控衰减参数(CAP)的相关性,受试者工作特征曲线分析外周血DA、CARM1、25-(OH)-D 3诊断重度NAFLD的价值。结果T2DM合并NAFLD组外周血DA和25-(OH)-D 3水平明显低于T2DM组和健康组(P<0.05),而CARM1水平明显高于T2DM组和健康组(P<0.05);T2DM组外周血DA和25-(OH)-D 3水平明显低于健康组(P<0.05),而CARM1水平明显高于健康组(P<0.05)。T2DM合并NAFLD组血糖控制差者DA和25-(OH)-D 3水平明显低于血糖控制好者(P<0.05),而CARM1水平明显高于血糖控制好者(P<0.05)。重度患者DA和25-(OH)-D 3水平明显低于轻中度患者(P<0.05),而CARM1水平明显高于轻中度患者(P<0.05)。外周血DA、25-(OH)-D 3水平与HbA1c、CAP呈负相关(P<0.05),CARM1水平与HbA1c、CAP呈正相关(P<0.05)。CARM1、25-(OH)-D 3、DA诊断重度NAFLD的曲线下面积分别为0.858(95%CI 0.768~0.948)、0.922(95%CI 0.856~0.989)、0.571(95%CI 0.427~0.715)。结论DA和25-(OH)-D 3水平在T2DM患者外周血中降低,而CARM1水平升高,尤其在T2DM合并NAFLD患者中变化更加明显;DA、CARM1、25-(OH)-D 3水平与血糖控制、NAFLD严重程度存在相关性,其中CARM1、25-(OH)-D 3水平在诊断重度NAFLD方面有一定应用价值。

1,25-(OH)_2D_3对糖尿病大鼠ZO-1表达的影响

目的观察糖尿病(DM)大鼠肾小球ZO-1蛋白的表达,1,25-(OH)2D3对ZO-1蛋白表达及分布的影响。方法Wistar大鼠随机分为3组:对照组、糖尿病组(DM组)、1,25-(OH)2D3组。链脲菌素(STZ)腹腔注射建立糖尿病动物模型,1,25-(OH)2D3组在糖尿病建立时即开始渗透性微量泵按3ng/100g·d皮下给予1,25-(OH)2D3,给药10周处死小鼠,检测血糖、半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CysC)、尿红细胞、24h尿蛋白定量(24hUPE);光镜观察肾小球细胞数,细胞外基质(ECM)聚积;Western印迹检测ZO-1蛋白的表达;免疫金荧光染色电镜观察肾小球ZO-1分布的改变。结论DM组大鼠CysC、尿红细胞、24hUPE均高于1,25-(OH)2D3组,差异均有统计学意义(P<0.05)。1,25-(OH)2D3组大鼠较DM组肾小球细胞数减少,细胞外基质聚积减轻(P<0.05或P<0.01)。Western印迹示1,25-(OH)2D3组和对照组肾小球ZO-1表达无显著差异,均明显高于DM组(P<0.01)。免疫金荧光染色显示DM组肾小球ZO-1表达缺失及易位分布明显,1,25-(OH)2D3组ZO-1的表达缺失及易位分布较轻。结论1,25-(OH)2D3可减少尿蛋白的排泄,抑制肾小球细胞数及细胞外基质的增殖,增加足细胞特异蛋白ZO-1的表达,减少其易位,对肾脏有保护作用。

1,25-(OH)_(2)D_(3)通过lncRNA-uc.412抑制TGF-β1诱导的系膜细胞增殖的机制研究

目的:研究1,25二羟基维生素D 3[1,25-(OH)_(2)D_(3)]通过长链非编码RNA uc.412(lncRNA-uc.412)抑制转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠系膜细胞增殖的可能机制。方法:用TGF-β1、1,25-(OH)_(2)D_(3)、SIS3分别干预系膜细胞,用lncRNA-uc.412过表达慢病毒转染系膜细胞,MTT法、流式细胞术检测系膜细胞增殖率,RT-PCR法检测ki67、p27、PCNA及lncRNA-uc.412的表达,Western blot检测smad3及p-smad3的表达。结果:①与TGF-β1组相比,1,25-(OH)_(2)D_(3)+TGF-β1干预后的ki67、PCNA、lncRNA-uc.412的表达下调,p27的表达上调(P<0.01),细胞增殖率下降(P<0.01);②TGF-β1+SIS3组p-smad3蛋白表达、lncRNA-uc.412的表达量较TGF-β1组下降(P<0.01);③与过表达lncRNA-uc.412组比较,过表达lncRNA-uc.412+1,25-(OH)_(2)D_(3)组的ki67、PCNA的表达下调,p27的表达上调(P<0.01)。结论:1,25-(OH)_(2)D_(3)可抑制TGF-β1诱导的大鼠系膜细胞增殖,其机制可能与1,25-(OH)_(2)D_(3)阻滞细胞周期及下调lncRNA-uc.412的表达水平有关。

p21^(wafl)在1,25(OH)_2D_3调节人骨肉瘤细胞系HOS-8603增殖分化中的作用

目的 :探讨p2 1wafl在 1,2 5 (OH) 2 D3调节人骨肉瘤细胞系HOS - 860 3增殖中的作用。方法 :用定量RT-PCR法检测 1,2 5 (OH) 2 D3对p2 1waflmRNA表达的诱导作用 ,并构建稳定表达p2 1wafl真核表达载体的细胞系HOS -p2 1wafl进一步观察该细胞的生长及分化情况。结果 :1,2 5 (OH) 2 D3作用 2h即可诱导HOS - 860 3细胞内源性p2 1wafl的表达 ,4h达高峰 ,2 4h仍未回降。细胞过度表达p2 1wafl后生长速度明显减慢 ,培养 6d时细胞数为未转染细胞的5 0 % ;并且组织化学染色结果表明细胞的分化标志性抗原碱性磷酸酶 (AKP)的表达明显增强。结论 :表明 1,2 5(OH) 2 D3对p2

脑微出血患者血浆1,25-（OH）2D3,sLRP1水平与头颅SWI影像学特征的相关性

目的研究脑微出血(cerebral microbleeds,CMBs)患者1,25-二羟维生素D3[1,25-dihydroxyvitamin D3,1,25-(OH)2D3],可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1(soluble low density lipoprotein receptor related protein 1,sLRP1)水平与头颅SWI微出血病灶数量及部位等影像学特征的相关关系。方法连续纳入2017年1月~2019年5月就诊于陕西省人民医院的CMBs患者196例(男性152例,女性44例),正常对照组99例(男性67例,女性32例),采集人口学资料及病史。对两组人群进行血浆1,25-(OH)2D3,sLRP1水平的检查。比较两组间血浆1,25-(OH)2D3和sLRP1水平的差异,并统计CMBs组各检验指标与CMBs病灶数量及部位的相关关系。结果CMBs组患者血浆1,25-(OH)2D3,sLRP1水平均低于对照组(23.32±18.91 mmol/L vs 39.60±18.58 mmol/L;237.96±70.62 ng/ml vs 312.61±62.78 ng/ml),差异均具有统计学意义(t=7.07,-9.24,均P<0.01)。CMBs患者血浆sLRP1水平与脑皮质CMBs病灶数量呈负相关(r=0.239,P=0.001),而与脑深部CMBs病灶数量无明显相关(t=-0.096,P>0.05)。结论CMBs患者的血浆1,25-(OH)2D3,sLRP1水平均低于正常人群。高表达的血浆sLRP1可能对脑皮质CMBs的发生具有一定的保护作用。

1,25(OH)_2D_3干预IL-17通路抑制大鼠肝纤维化作用机制研究

目的通过检测1,25(OH)_2D_3对大鼠肝组织中IL-17及其相关蛋白表达的影响,探讨1,25(OH)_2D_3抑制肝纤维化形成的作用机制。方法将60只大鼠随机分为四组:对照组、模型组(DMN盐溶液)、药物溶剂组(DMN盐溶液+花生油灌胃)、治疗组(DMN盐溶液+1,25(OH)_2D_3油溶液灌胃),8周后对各组大鼠肝脏行Masson染色,观察其病理学变化,并行纤维化程度分级;免疫组化法(IHC)观察各肝组织中IL-17的蛋白表达;Western blotting法定量检测各组肝脏中IL-17、RORγt及MIP3α蛋白表达;Real time-PCR法分析各组肝脏中IL-17、RORγt和MIP3αmRNA表达量。结果模型组及药物溶剂组大鼠肝脏呈显著纤维化改变,1,25(OH)_2D_3治疗组肝脏纤维化程度较溶剂组明显减轻;模型组和药物溶剂组肝组织中IL-17、RORγt、MIP3α蛋白及mRNA表达量较对照组明显升高,而治疗组中三者蛋白及mRNA表达量较溶剂组显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论1,25(OH)_2D_3抑制肝纤维化发生、发展;1,25(OH)_2D_3可抑制肝组织中IL-17、RORγt及MIP3α蛋白和mRNA表达,从而减轻肝纤维化,提示1,25(OH)_2D_3可能通过干预肝脏IL-17信号通路抑制纤维化进程。

地塞米松和1,25-(OH)_2D_3对EC1细胞增殖和细胞周期的影响

目的:观察地塞米松(DEX)和1,25-(OH)2D3及2药联用对食管鳞状细胞癌EC1细胞增殖及周期的影响。方法:分别用10-7mol/LDEX与10-7mol/L1,25-(OH)2D3以及同种浓度2药联合处理EC1细胞48、72和96h,并设溶剂对照组。采用MTT法检测细胞增殖情况及流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:1,25-(OH)2D3单独应用具有抑制EC1细胞增殖的作用(F1,25-(OH)2D3=51.185,P<0.001);DEX单独应用具有阻滞细胞周期的作用(FDEX=8.170,P=0.009)。DEX、1,25-(OH)2D3及时间3种因素两两间均存在交互作用(细胞增殖抑制:F1,25-(OH)2D3×DEX=11.017,P=0.003;F1,25-(OH)2D3×时间=3.668,P=0.041;FDEX×时间=7.887,P=0.002。G0/G1期细胞比率:F1,25-(OH)2D3×DEX=12.381,P=0.002;F1,25-(OH)2D3×时间=6.583,P=0.005;FDEX×时间=5.096,P=0.014),且两药间提示存在拮抗作用。未发现3因素之间存在交互作用(细胞增殖抑制:F1,25-(OH)2D3×DEX×时间=0.512,P=0.606。G0/G1期细胞比率:F1,25-(OH)2D3×DEX×时间=0.410,P=0.668)。结论:DEX和1,25-(OH)2D3单独及联合使用能对EC1细胞增殖起抑制作用,且使EC1细胞周期阻滞在G0/G1期。

1,25-(OH)_2D_3对UUO模型大鼠ILK及TGF-β1表达的影响

目的探讨1,25-(OH)2D3减轻单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的作用及其机制。方法将96只雄性SD大鼠随机分为对照组、UUO组、假手术组、干预组各24只,其中UUO组和干预组均于左肾下极处游离并结扎左输尿管建立UUO模型,假手术组开腹后仅游离左输尿管,对照组不行特殊处理。其后干预组予1,25-(OH)2D30.5μg(溶于1 mL花生油中)灌胃、余三组均予1 mL花生油灌胃;各组分别于术后第1、3、7、14天每天各处死6只大鼠,留取左侧肾脏标本,光镜观察肾脏组织形态学改变及肾脏病理损害,免疫组化法观察整合来连接激酶(ILK)、转化生长因子(TGF)-β1蛋白表达,RT-PCR法检测ILK mRNA表达。结果①与对照组相比,UUO组肾皮质变薄、肾间质炎细胞浸润明显增多、纤维化随时间延长而加重(P<0.05);与UUO组相比,干预组肾组织炎细胞浸润减少、纤维化程度减轻、病变积分明显降低(P<0.05)。②与对照组相比,UUO组ILK蛋白阳性表达随时间延长显著增加(P<0.01);与UUO组比较,干预组ILK蛋白表达减少(P<0.01);与对照组相比,UUO组TGF-β1蛋白随时间延长阳性表达显著增加(P<0.01);与UUO组比较,干预组TGF-β1蛋白表达减少;ILK蛋白表达与TGF-β1蛋白表达呈显著正相关(r=0.872,P<0.05)。③与对照组比较,UUO组和干预组ILK mRNA表达均随时间延长明显增强(P<0.01),其中干预组表达在7、14 d无显著差异;干预组各期均显著低于UUO组(P<0.01)。结论 1,25-(OH)2D3可减轻UUO大鼠肾间质纤维化、保护肾脏功能,可能机制为间接或直接抑制肾间质ILK、TGF-β1表达;此为防治肾间质纤维化提出了新的方向。

骨关节炎患者血清1,25(OH)_2D_3、IL-17和IL-10水平的变化及临床意义

目的探讨骨关节炎(OA)患者血清1,25-羟基维生素D3[1,25(OH)_2D_3]、白细胞介素(IL)17及IL-10水平变化及临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测91例OA患者(OA组)及80名体检健康者(正常对照组)血清1,25(OH)_2D_3、 IL-17和IL-10水平,同时采用电化学发光法检测血清25-羟基维生素D3[25(OH)D3]水平。采用视觉模拟评分法(VAS)对OA患者的疼痛程度进行评分。采用Spearman相关分析评价各指标之间的相关性。结果与正常对照组比较,OA组血清1,25(OH)_2D_3、25(OH)D3、IL-10水平明显降低(P<0.05),IL-17水平明显升高(P<0.05)。按25(OH)D3水平将患者分为维生素D缺乏、不足和充足3组,维生素D缺乏组VAS评分明显高于维生素D不足组和维生素D充足组(P<0.05),而维生素D不足组与维生素D充足组之间VAS评分差异无统计学意义(P>0.05)。按VAS评分将患者分为轻度疼痛组、中度疼痛组和重度疼痛组。重度疼痛组和中度疼痛组血清1,25(OH)_2D_3水平均明显低于轻度疼痛组(P<0.05);而重度疼痛组与中度疼痛组之间差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman相关分析显示,1, 2 5 (O H)_2D_3与IL-10呈正相关(r=0.778、P=0.002),与VAS和IL-17呈负相关(r值分别为-0.691、-?0.735,P值分别为0.01、0.007);VAS评分与IL-10呈负相关(r=-0.725,P=0.008),与IL-17呈正相关(r=0.699、P=0.010)。OA患者治疗后血清1,25(OH)_2D_3和IL-10水平明显高于治疗前(P<0.05),但仍低于正常对照组(P<0.05);血清IL-17水平明显低于治疗前(P<0.05),但仍高于正常对照组(P<0.05)。结论 1,25(OH)_2D_3可能与OA的发生及严重程度有一定关系。

1,25(OH)_2D_3对Thy-1肾炎大鼠Ki67、mTOR表达的影响

目的研究1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对Thy-1肾炎模型大鼠Ki67和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)表达的影响,并探讨其机制。方法 90只清洁级雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、1,25(OH)2D3组,每组30只。模型组与1,25(OH)2D3组尾静脉注射抗Thy-1单克隆抗体建立肾炎模型,对照组给予等剂量生理盐水。建模后,1,25(OH)2D3组给予1,25(OH)2D30.5μg/d灌胃,连续给药21 d,对照组及模型组给予等体积花生油。分别于给药后第1、3、7、14、21天每组随机处死6只大鼠,处死前1 d收集24 h尿液进行24 h尿蛋白定量;取各组肾组织标本,经HE和PAS染色后进行肾脏病理损害评分,免疫组化法检测肾组织中Ki67、m TOR表达。结果模型组和1,25(OH)2D3组大鼠在建模后第1天尿蛋白水平升高,模型组第3天达高峰,至第14天恢复至正常水平,1,25(OH)2D3组大鼠第1、3、7天的尿蛋白水平均低于模型组(P<0.05)。1,25(OH)2D3组大鼠肾组织病理损害程度第3、7天较模型组减轻(P<0.05),Ki67、m TOR蛋白表达水平较模型组降低(P<0.05)。24 h尿蛋白定量,Ki67表达水平,m TOR表达水平及肾组织病理损害评分彼此间均呈正相关。结论 1,25(OH)2D3可抑制Thy-1肾炎模型大鼠肾小球系膜细胞的增殖,其作用机制可能与减少Ki67、m TOR的表达有关。

活动期炎症性肠病患者骨密度和血清1,25-(OH)D_3水平检测分析

目的：分析检测活动期炎症性肠病（IBD）患者骨密度和血清1，25-（OH）D3水平以及两者之间的关系。方法选择活动期IBD患者65例，健康对照组33例，记录患者身高和体重，采用直接数字化双能X线骨密度仪测量患者腰椎1～4骨密度值，同时检测患者静脉血1，25-（OH）D3、血钙、血磷以及碱性磷酸酶（ALP）。结果溃疡性结肠炎（UC）组、克罗恩病（CD）组、对照组组间的腰1～4骨密度值以及血清1，25-（OH）D3水平等比较，差异有统计学意义（F分别=3.65、14.40，P均＜0.05）；UC组患者腰1～4骨密度值和血清1，25-（OH）D3浓度均低于对照组，差异有统计学意义（P均＜0.05）。 CD组患者腰1～4骨密度值和1，25-（OH）D3水平低于对照组，差异有统计学意义（P均＜0.05）。UC组和CD组患者腰1～4骨密度值和血清1，25-（OH）D3差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 IBD患者相对健康成人发生骨质疏松或骨折的风险较高，活动期IBD患者应及早开展骨质疏松筛查和风险评估。

1,25-(OH)_(2)D_(3)干预糖尿病大鼠模型对P38MAPK与TGF-β1的影响及肾保护作用研究

目的研究1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)_(2)D_(3)]干预糖尿病大鼠模型对P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)与转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法选用雄性大鼠作为实验动物,采用随机数字表法将大鼠分为A、B、C 3组,每组各28只。A组给予常规饲料喂养,B、C组给予高脂高胆固醇饲料喂养6周,糖尿病大鼠模型建模成功后,A组继续常规饲料喂养,B、C组继续给予高脂高胆固醇喂养,同时B组给予1,25-(OH)_(2)D_(3)干预,共7次。处死大鼠,分别在喂养开始时(T1)、建模成功时(T2)及1,25-(OH)_(2)D_(3)干预完成后2周时(T3)取血,检测血肌酐(Scr)、尿肌酐(Ucr)、血尿素氮(BUN)和胱抑素C(Cys-C)肾功能指标水平,计算内生肌酐清除率(Ccr)。处死大鼠后取肾组织,采用免疫组化法和Western blot法检测P38MAPK与TGF-β1表达情况。分析P38MAPK与TGF-β1的关系。结果 3组大鼠T2和T3时Ccr、BUN及Cys-C水平比较有统计学意义(P<0.05),其中T2时B、C 2组Ccr、BUN及Cys-C水平显著高于A组(P<0.05),T3时B组Ccr、BUN及Cys-C显著低于C组(P<0.05)。3组大鼠肾组织P38MAPK与TGF-β1表达差异具有统计学意义(P<0.05)。3组大鼠肾组织P38MAPK与TGF-β1蛋白相对表达量差异有统计学意义(P<0.05),B组大鼠P38MAPK与TGF-β1显著低于C组(P<0.05)。3组大鼠肾组织P38MAPK与TGF-β1蛋白相对表达量呈显著正相关性(r=0.418,P<0.05)。结论 1,25-(OH)_(2)D_(3)干预能显著改善糖尿病大鼠肾功能,这可能与其抑制P38MAPK与TGF-β1表达有关。

rhIL-1α、1,25-(OH)_2D_3对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG的影响研究

目的研究rh IL-1α、1,25-(OH)2D3对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG的影响。方法将人牙周膜成纤维细胞分别放在含有纯培养液、含rh IL-1α培养液、含1,25-(OH)2D3培养液和含有rh IL-1α、1,25-(OH)2D3联合培养基中培养,并分别标记为D组、A组、B组和C组,培养48 h后,用荧光定量RT-PCR技术检验。结果 A组培养基中细胞表达RANKL和OPG均有上升,且RANKL/OPG比值也增加;B组培养基中细胞表达RANKL上升,但OPG下降,RANKL/OPG比值下降;C组培养基中RANKL上升,但对RANKL/OPG无明显影响。结论 rh IL-1α、1,25-(OH)2D3对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG有较大影响,且rh IL-1α、1,25-(OH)2D3联合使用时对RANKL起到了协同作用。值得临床进一步探究。