1,25(OH)_(2)D_(3)对Aβ_(1-42)诱导阿尔茨海默病细胞模型中细胞焦亡的抑制作用

目的探讨1,25(OH)_(2)D_(3)对Aβ_(1-42)诱导阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)细胞模型中细胞焦亡的抑制作用及其机制。方法将PC12细胞分为对照组、模型组、Caspase-1-siRNA组、NC-siRNA组、1,25(OH)_(2)D_(3)组、联合干预组。对照组仅用DMEM高糖培养基培养细胞;模型组用20μmol/L Aβ_(1-42)处理细胞以造模;Caspase-1-siRNA组先用50 nmol/L Caspase-1-siRNA处理细胞,再加入20μmol/L Aβ_(1-42);NC-siRNA组先用50 nmol/L NC-siRNA处理细胞,再加入20μmol/L Aβ_(1-42);1,25(OH)_(2)D_(3)组用100 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)干预后加入20μmol/L Aβ_(1-42);联合干预组先用50 nmol/L Caspase-1-siRNA处理细胞,然后用100 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)干预,最后加入20μmol/L Aβ_(1-42)。细胞免疫荧光检测凋亡相关斑点蛋白(ASC)蛋白的表达;Western blot检测细胞焦亡通路相关蛋白表达,包括:NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-Caspase-1)、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、消皮素D-N端(GSDMD-N)、IL-1β、IL-1β前体(pro-IL-1β)、IL-18和IL-18前体(pro-IL-18)蛋白;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)染色检测细胞膜通透性。结果与对照组相比,模型组ASC蛋白荧光强度增强(P<0.01),细胞焦亡通路相关蛋白表达均增加(P<0.05),细胞膜通透性变大(P<0.01)。与模型组相比,1,25(OH)_(2)D_(3)组和Caspase-1-siRNA组ASC蛋白荧光强度减弱(P<0.01),pro-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD-N、pro-IL-1β、IL-1β、pro-IL-18和IL-18蛋白表达均下调(P<0.01),细胞通透性减小(P<0.01)。与Caspase-1-siRNA组相比,联合干预组GSDMD-N和IL-18蛋白表达降低(P<0.01),细胞通透性减小(P<0.01)。结论Aβ_(1-42)能够诱导PC12细胞发生细胞焦亡现象。1,25(OH)_(2)D_(3)可以通过抑制Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞发生焦亡来发挥其抗炎的神经保护作用,其机制与Caspase-1的抑制密切相关。

血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)对银屑病患者并发心血管疾病的预测价值

目的检测血清氧磷酯酶1(PON1)及1,25二羟基维生素D 3[1,25(OH)_(2)D_(3)]水平及其对银屑病患者并发心血管疾病(CVD)的预测价值。方法选取2018年2月—2022年2月中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院皮肤科收治银屑病患者88例为银屑病组,根据疾病严重程度,再分为轻度亚组(n=34)、中度亚组(n=26)和重度亚组(n=28);根据是否合并CVD分为非CVD亚组63例和CVD亚组25例。选取医院同期体检健康者70例为健康对照组。酶联免疫吸附实验检测血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)水平;比较不同病情程度银屑病患者血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)水平差异;多因素Logistic回归分析影响银屑病患者并发CVD的因素;受试者工作特征曲线分析血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)对银屑病患者并发CVD的预测价值。结果银屑病组血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)水平低于健康对照组(t=51.008,25.088,P均<0.001)。血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)水平比较,轻度亚组>中度亚组>重度亚组(F=207.130、54.240,P均<0.001);Framingham风险评分(FRS评分)高是影响银屑病患者并发CVD的独立危险因素,血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)升高是保护因素[OR(95%CI)=1.791(1.294~2.480),0.623(0.493~0.786),0.630(0.495~0.802)];血清PON1、1,25(OH)_(2)D_(3)及两项联合预测银屑病患者并发CVD的AUC分别为0.815、0.784、0.878,两项联合的AUC高于血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)单独诊断,差异具有统计学意义(Z/P=3.124/0.002、3.349/0.001)。结论银屑病患者血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)水平与银屑病患者病情严重程度有关,有望作为评估银屑病患者CVD发生的新指标。

p53半剂量缺失纠正1,25(OH)_(2)D_(3)缺乏小鼠的骨质疏松

目的:探索p53半剂量缺失杂合子小鼠能否通过增强抗氧化能力纠正活性维生素D(1,25(OH)_(2)D_(3))缺乏引起的骨质疏松。方法:取10周龄高钙高磷饮食喂养的同窝野生型(wild type,WT)小鼠、p53半剂量缺失杂合子(p53^(+/-))小鼠、1α-羟化酶基因敲除[1α(OH)ase^(-/-)]小鼠及p53半剂量缺失的1α羟化酶基因敲除[1α(OH)ase^(-/-)p53^(+/-)]小鼠的长骨,利用X线、micro-CT、组织病理学和分子生物学等方法,比较各组小鼠血清学、长骨骨矿化、骨形成、骨吸收以及氧化应激等表达变化。结果:与WT小鼠相比,p53^(+/-)小鼠血清钙、磷、甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)和1,25(OH)_(2)D_(3)水平差异无统计学意义,骨密度、总胶原(total collagen,T-col)阳性面积、成骨细胞数量、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,Col-Ⅰ)阳性面积均有所增加,活性氧水平降低,抗氧化酶SOD1表达增加。与1α(OH)ase^(-/-)小鼠相比,1α(OH)ase^(-/-)p53^(+/-)小鼠血清钙、磷和PTH差异无统计学意义,血清中检测不到1,25(OH)_(2)D_(3),骨密度、T-col阳性面积、成骨细胞数量、ALP和Col-Ⅰ阳性面积均明显增加,破骨细胞数量减少,活性氧水平降低,抗氧化酶SOD1表达增加。结论:p53半剂量缺失可通过增强抗氧化能力纠正1,25(OH)_(2)D_(3)缺乏小鼠的骨质疏松。

1,25-(OH)_(2)D_(3)对慢性哮喘小鼠血清TGF-β、IL-4水平的影响

目的:观察1,25-二羟维生素D_(3)﹝1,25-(OH)_(2)D_(3)﹞对慢性哮喘小鼠血清转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-4(IL-4)水平的影响,探索1,25-(OH)_(2)D_(3)抑制哮喘气道重塑的作用机制。方法:将30只BALA/c小鼠随机分为模型组(10只)、维生素D组(10只)、正常对照组(10只)。模型组、维生素D组小鼠检疫3 d正常后分别于第1 d、第14 d背部、腹腔注射卵清蛋白(OVA)混合液100μg﹝OVA 100μg+氢氧化铝1 mg+磷酸盐缓冲液(PBS)0.05 mL/只﹞,构建慢性哮喘小鼠模型,正常对照组不建模。维生素D组在第21 d予1,25-(OH)_(2)D_(3)腹腔注射(100 ng/只,共18次),30 min后予1%OVA雾化吸入(隔天1次,共18次);模型组予等量生理盐水腹腔注射,30 min后予1%OVA雾化吸入(隔天1次,共18次)。第55 d收集标本,处死动物,采用酶联免疫吸附试验(ELLSA)测验各组的血清TGF-β、IL-4水平。结果:维生素D组的血清TGF-β、IL-4水平与模型组比较均明显降低(P<0.05);维生素D组和模型组的血清TGF-β、IL-4水平与正常对照组比较均明显升高(P<0.05);慢性哮喘小鼠血清中TGF-β与IL-4呈正相关(r=0.856,P<0.05)。结论:1,25-(OH)_(2)D_(3)可降低慢性哮喘小鼠的血清TGF-β、IL-4水平,从而发挥治疗哮喘的作用,其可能的机制是1,25-(OH)_(2)D_(3)通过降低血清TGF-β、IL-4水平而抑制Th1/Th2失衡,进而抑制气道重塑。

1,25(OH)_(2)D_(3)及VDR敲除对山羊附睾头上皮细胞β防御素家族表达的影响

旨在研究1,25(OH)_(2)D_(3)是否通过VDR途径调节山羊附睾头上皮细胞β防御素基因表达。本试验选取3只6月龄太行黑山羊,分别采集附睾头组织。采用差速贴壁法分离山羊附睾头上皮细胞,用细胞免疫荧光鉴定上皮细胞纯度。添加100 nmol·L^(-1)1,25(OH)_(2)D_(3)处理附睾头上皮细胞以及筛选出敲除效率最高的pCas9/gRNA1质粒载体进行细胞转染,同时设置阴性对照组和空白对照组,每组3个重复孔。附睾头上皮细胞经1,25(OH)_(2)D_(3)处理以及VDR基因敲除后,分别用qRT-PCR检测VDR和17种β防御素基因的表达,用Western blot检测VDR蛋白和3种β防御素蛋白的表达。结果表明,1,25(OH)_(2)D_(3)能极显著提高VDR、gBD124、gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.01),同时极显著提高gBD104、gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD113、gBD116、gBD120、gBD 121以及gBD 123基因的表达(P<0.01),显著提高gBD106、gBD127、gBD 129以及gBD 134基因的表达(P<0.05),而对gBD 110like和gBD 128基因没有显著影响(P>0.05);3个基因敲除载体进行细胞转染后,pCas9-VDR-V1组VDR蛋白表达极显著降低(P<0.01)。VDR基因敲除极显著降低gBD124的mRNA和蛋白表达(P<0.01),显著降低gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.05),同时VDR基因敲除组gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD116、gBD123、gBD127、gBD 128以及gBD 134基因的表达极显著低于其他组(P<0.01),VDR基因敲除组gBD104、gBD106、gBD 120以及gBD 129基因的表达显著低于其他组(P<0.05),而对gBD121、gBD 110like以及gBD 113的相对表达则无显著影响(P>0.05)。综上所述,1,25(OH)_(2)D_(3)可以上调VDR和部分β防御素表达;VDR基因敲除后降低部分β防御素表达,结果表明1,25(OH)_(2)D_(3)通过上调VD/VDR信号通路关键基因VDR的表达调控山羊附睾头上皮细胞部分β防御素表达。

1,25(OH)_(2)D_(3)通过调节Th17/Treg比值和RANKL/OPG轴缓解胶原诱导的关节炎

目的 探讨1,25-二羟基维生素D_(3)[1,25-dihydroxy vitamin D3,1,25(OH)_(2)D_(3)]对胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠关节滑膜炎症和骨破坏的抑制作用及机制。方法 30只DBA/1J小鼠被均分为3组:对照组(CON)、模型组(CIA)和模型干预组(VD)。CIA组和VD组小鼠建立CIA模型,用1,25(OH)_(2)D_(3)对VD组CIA模型进行治疗。用游标卡尺测量小鼠后足爪的肿胀程度。用Micro-CT测量小鼠后足爪的骨密度。酶联免疫吸附剂测定法检测小鼠血清1,25(OH)_(2)D_(3)和炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的水平。流式细胞术检测小鼠脾脏Th17细胞和Treg细胞的比例。采用苏木精-伊红染色观察膝关节的病理特征。Western blot检测小鼠踝关节的蛋白OPG、RANKL、NF-κB和VDR的表达水平。结果 1,25(OH)_(2)D_(3)并没有降低CIA模型的发病率,但却明显缓解了关节炎症。VD组的脚掌厚度、关节炎评分以及膝关节HSS评分均较CIA组明显降低(P均<0.05)。CIA组的骨破坏程度更加明显,BMD及BV/TV明显低于VD组(P均<0.05)。VD组的IL-1β、IL-6、TNF-α水平和Th17/Treg细胞比例明显低于CIA组(P均<0.05)。与CIA组相比,VD组踝关节的VDR和OPG蛋白水平明显增加(P均<0.05),NF-κB和RANKL蛋白水平明显低于CIA组(P均<0.05),RANKL/OPG的比例也明显低于CIA组(P<0.05)。结论 1,25(OH)_(2)D_(3)可能通过调节Th17/Treg比值和RANKL/OPG轴缓解CIA模型小鼠的关节滑膜炎症并抑制骨破坏。

中青年难治性高血压患者血清1,25-二羟维生素D_(3)、维生素D受体mRNA水平与中心动脉压的相关性

目的探讨1,25二羟维生素D_(3)[1,25(OH)2D_(3)]、维生素D受体(VDR)mRNA在中青年难治性高血压(RH)患者中的水平及与中心动脉压的相关性。方法选取2018年5月至2021年5月石家庄市人民医院收治的RH患者65例为A组,同时选取血压控制达标的高血压患者76例为B组,选择60例血压正常者为C组。采用酶联免疫吸附法检测血清中1,25(OH)2D_(3)水平,采用qRT-PCR检测外周血单个核细胞中VDR mRNA水平,Sphygmocor脉搏波分析系统检测中心动脉压。利用ROC曲线评价血清1,25(OH)2D_(3)、VDR mRNA水平对中青年RH的预测能力。结果A组与B组患者1,25(OH)2D_(3)、VDR mRNA水平均低于C组,且A组低于B组,差异均具有统计学意义(F=315.910、217.196,P<0.05);A组和B组患者中心动脉收缩压(CSBP)、中心动脉舒张压(CDBP)、中心动脉脉压(CAPP)均高于C组,且A组高于B组,差异有统计学意义(F=66.192、16.719、116.047,P<0.05);中青年RH患者1,25(OH)2D_(3)、VDR mRNA水平与CSBP、CDBP、CAPP均呈负相关。ROC曲线分析显示,血清1,25(OH)2D_(3)、VDR mRNA水平预测RH的曲线下面积分别为0.932、0.883,对应的敏感度分别为81.54%、86.92%,特异度分别为94.74%、71.05%。二者联合的曲线下面积为0.956,敏感度和特异度分别为90.77%、92.11%。结论中青年RH患者中1,25(OH)2D_(3)、VDR mRNA水平较低,与中心动脉压密切相关,联合检测对诊断中青年RH具有重要意义。

1,25-二羟维生素D_(3)通过糖酵解途径促进人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的:探讨1,25-二羟维生素D_(3)(VD_(3))对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:取体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞,随机分为6组:对照组、2-脱氧葡萄糖(2-DG,葡萄糖抑制剂)组、1μmol/L VD_(3)组、10μmol/L VD_(3)组、2-DG+1μmol/L VD_(3)组和2-DG+10μmol/L VD_(3)组。药物干预6组细胞48 h后,以葡萄糖摄取测定试剂盒检测细胞的葡萄糖摄取量、ATP试剂盒检测细胞中ATP含量和乳酸试剂盒检测细胞的乳酸水平,WB法检测MCF-7细胞中细胞色素C(Cyt c)和凋亡相关蛋白(Bcl-2、BAX、PARP1、caspase9和caspase3)的表达水平。结果:与对照组比较,VD_(3)干预后,MCF-7细胞的凋亡率明显增加(P<0.05或P<0.01),同时细胞的葡萄糖摄取量、ATP含量及乳酸水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),Cyt c、BAX、PARP1、caspase9及caspase3蛋白表达量明显升高(均P<0.05),Bcl-2蛋白表达量降低(P<0.05或P<0.01);VD_(3)联合2-DG干预后,各组细胞检测指标的变化更为明显(P<0.05或P<0.01)。结论:VD_(3)可通过抑制人乳腺癌MCF-7细胞的糖酵解过程并以线粒体的Cyt c途径促进细胞凋亡。

1,25(OH)_(2)D_(3)对miR-130b转染的高糖条件下HMC细胞TGF-β1/Smad3及Col-Ⅳ表达的影响

目的观察高糖环境下1,25(OH)_(2)D_(3)对miR-130b转染肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad3、Col-IV表达水平的变化,探索1,25(OH)_(2)D_(3)是否可通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。方法HMC细胞传代培养,miR-130b mimics及miR-130b inhibitor经LipofectamineTM 2000转染肾小球系膜细胞,依据分组加入1,25(OH)_(2)D_(3)1.0×10^(-8) mol/L,37℃、5%CO_(2)饱和湿度条件下继续培养48 h,共分为6组:①空白对照组;②细胞+无水乙醇组(A组);③细胞+miR-130b mimics+无水乙醇组(B组);④细胞+miR-130b mimics+1,25(OH)_(2)D_(3)组(C组);⑤细胞+miR-130b inhibitor+无水乙醇组(D组);⑥细胞+miR-130b inhibitor+1,25(OH)_(2)D_(3)组(E组)。以实时荧光定量PCR检测细胞miR-130b及TGF-β1、Smad3、Col-IVmRNA的表达水平,以Western blot方法检测细胞TGF-β1、Smad3、Col-IV蛋白的表达水平。采用多组间比较的单因素方差分析及组内两两比较采用LSD、Dunnett s T3法比较各组数据。结果空白对照组与A组细胞miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平,差异无统计学意义(P>0.05),与A组相比,B组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显升高(P<0.05),D组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05)。经1,25(OH)_(2)D_(3)治疗发现,与B组相比,C组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05),与D组相比,E组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05)。结论1,25(OH)_(2)D_(3)可降低miR-130b转染肾小球系膜细胞miR-130b及纤维化相关因子TGF-β1、Smad3、Col-IV的表达水平,1,25(OH)_(2)D_(3)可能通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。

银屑病患者1,25(OH)_(2)D_(3)与炎性因子水平关系及阿维A联合NB-UVB疗效观察

目的 探讨银屑病患者血清1,25-二羟基维生素D_(3)[1,25(OH)_(2)D_(3)]与炎性因子水平关系及阿维A联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)方案的疗效。方法 选取2020年1月至2021年11月在山西省运城市中心医院治疗的银屑病患者109例作为观察组,同时选取100名健康者作为对照组,根据病历号末尾奇偶数将观察组患者分为观察A组(n=57)和观察B组(n=52),其中观察A组给予阿维A联合NB-UVB治疗,观察B组给予NB-UVB治疗,对比观察两组治疗疗效。结果 观察组血清1,25(OH)_(2)D_(3)明显低于对照组,差异有统计学意义(t=-16.614,P<0.05),而白细胞计数(WBC)、中性粒细胞/淋巴细胞比(NLR)、血小板/淋巴细胞比(PLR)、C反应蛋白(CRP)和肿瘤坏死因子a(TNF-a)明显高于对照组,差异有统计学意义(t=12.832、5.869、8.678、26.944、19.084,P<0.05)。观察组中重度患者血清1,25(OH)_(2)D_(3)明显低于轻度患者,差异有统计学意义(t=2.699,P<0.05),而NLR和PLR明显高于轻度患者,差异有统计学意义(t=-5.141、-3.719,P<0.05)。结论 银屑病患者血清1,25(OH)_(2)D_(3)与NLR和PLR呈负相关,同时与患者病情程度呈负相关;阿维A联合NB-UVB治疗银屑病有较好的疗效,明显改善患者生活质量。

1,25-二羟维生素D_(3)水平与新生儿呼吸道感染分析研究

目的探讨1,25-二羟维生素D_(3)[1,25-(OH)_(2)-D_(3)]水平对新生儿呼吸道感染的影响,为新生儿呼吸道感染预防与治疗提供依据。方法收集2020年1月至2020年6月在首都医科大学附属北京世纪坛医院新生儿重症监护病房诊断为急性呼吸道感染的新生儿120例作为呼吸道感染组,选择同期住院出生的116例健康足月新生儿作为对照组,同时测定各组新生儿血清1,25-(OH)_(2)-D_(3)水平。依据1,25-(OH)_(2)-D_(3)含量为四组,血清1,25-(OH)_(2)-D_(3)含量>250nmol/L为过量,血清1,25-(OH)_(2)-D_(3)含量75~250nmol/L为适宜,血清1,25-(OH)_(2)-D_(3)含量50~74nmol/L为不足,血清1,25-(OH)_(2)-D_(3)含量<50nmol/L为缺乏。结果呼吸道感染组1,25-(OH)_(2)-D_(3)的水平显著低于对照组[P<0.001,(85.85±18.07)nmol/L比(119.34±26.12)nmol/L]。呼吸道感染组1,25-(OH)_(2)-D_(3)不足比例显著高于对照组(P<0.001);而呼吸道感染组1,25-(OH)_(2)-D_(3)缺乏比例与对照组1,25-(OH)_(2)-D_(3)缺乏比例相比较,其差异无统计学意义(P>0.05);重度呼吸道感染新生儿1,25-(OH)_(2)-D_(3)水平低于轻度呼吸道感染新生儿(P<0.05)。结论呼吸道感染的新生儿1,25-(OH)_(2)-D_(3)水平显著低于正常健康新生儿。1,25-(OH)_(2)-D_(3)缺乏或出现不足均可能会导致新生儿感染呼吸道疾病,可适当补充维生素D以早期预防呼吸道感染。

1,25-(OH)_(2)D_(3)通过lncRNA-uc.412抑制TGF-β1诱导的系膜细胞增殖的机制研究

目的:研究1,25二羟基维生素D 3[1,25-(OH)_(2)D_(3)]通过长链非编码RNA uc.412(lncRNA-uc.412)抑制转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠系膜细胞增殖的可能机制。方法:用TGF-β1、1,25-(OH)_(2)D_(3)、SIS3分别干预系膜细胞,用lncRNA-uc.412过表达慢病毒转染系膜细胞,MTT法、流式细胞术检测系膜细胞增殖率,RT-PCR法检测ki67、p27、PCNA及lncRNA-uc.412的表达,Western blot检测smad3及p-smad3的表达。结果:①与TGF-β1组相比,1,25-(OH)_(2)D_(3)+TGF-β1干预后的ki67、PCNA、lncRNA-uc.412的表达下调,p27的表达上调(P<0.01),细胞增殖率下降(P<0.01);②TGF-β1+SIS3组p-smad3蛋白表达、lncRNA-uc.412的表达量较TGF-β1组下降(P<0.01);③与过表达lncRNA-uc.412组比较,过表达lncRNA-uc.412+1,25-(OH)_(2)D_(3)组的ki67、PCNA的表达下调,p27的表达上调(P<0.01)。结论:1,25-(OH)_(2)D_(3)可抑制TGF-β1诱导的大鼠系膜细胞增殖,其机制可能与1,25-(OH)_(2)D_(3)阻滞细胞周期及下调lncRNA-uc.412的表达水平有关。

Molecular mechanism of the effects of 1,25-dihydroxyvitaminn D_3 and its novel analogues on proliferation and differentiation of a human megakaryoblastic leukemia cell line

Our previous studies revealed that 1, 25-dihydroxyvrtamin D_3[1, 25 (OH)_2, D_3] and its two novel analogues (MC903 and EB1089) play an important role in the modulation of proliferation and differentiation of a newly established human megakaryoblastic leu

1,25(OH)_(2)D_(3)对实验性自身免疫性神经炎大鼠肠道菌群的影响

目的:16S rDNA高通量测序观察1,25(OH)_(2)D_(3)对实验性自身免疫性神经炎肠道菌群的影响。方法:采用人工合成P0180-199肽段与完全弗氏佐剂混合免疫Lewis大鼠建立EAN模型,1,25(OH)_(2)D_(3)末次灌胃后无菌收集粪便,采用Illumina Miseq PE300型高通量测序仪检测肠道菌群16S rDNA V3-V4可变区,分析肠道菌群结构和丰度变化。结果:1,25(OH)2D3干预可调节EAN大鼠肠道菌群Alpha、Beta多样性,提高菌群丰度、多样性指数。EAN大鼠粪便Verrucomicrobiaceae、Enterobacteriaceae显著增加,Lachnospiraceae、Ruminococcaceae显著减少,均在1,25(OH)_(2)D_(3)干预后回调。结论:1,25(OH)_(2)D_(3)对EAN大鼠肠道菌群有调节作用,肠道微生态的变化可能用于解释EAN的发病机制。

1,25-(OH)_(2)D_(3)干预糖尿病大鼠模型对P38MAPK与TGF-β1的影响及肾保护作用研究

目的研究1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)_(2)D_(3)]干预糖尿病大鼠模型对P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)与转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法选用雄性大鼠作为实验动物,采用随机数字表法将大鼠分为A、B、C 3组,每组各28只。A组给予常规饲料喂养,B、C组给予高脂高胆固醇饲料喂养6周,糖尿病大鼠模型建模成功后,A组继续常规饲料喂养,B、C组继续给予高脂高胆固醇喂养,同时B组给予1,25-(OH)_(2)D_(3)干预,共7次。处死大鼠,分别在喂养开始时(T1)、建模成功时(T2)及1,25-(OH)_(2)D_(3)干预完成后2周时(T3)取血,检测血肌酐(Scr)、尿肌酐(Ucr)、血尿素氮(BUN)和胱抑素C(Cys-C)肾功能指标水平,计算内生肌酐清除率(Ccr)。处死大鼠后取肾组织,采用免疫组化法和Western blot法检测P38MAPK与TGF-β1表达情况。分析P38MAPK与TGF-β1的关系。结果 3组大鼠T2和T3时Ccr、BUN及Cys-C水平比较有统计学意义(P<0.05),其中T2时B、C 2组Ccr、BUN及Cys-C水平显著高于A组(P<0.05),T3时B组Ccr、BUN及Cys-C显著低于C组(P<0.05)。3组大鼠肾组织P38MAPK与TGF-β1表达差异具有统计学意义(P<0.05)。3组大鼠肾组织P38MAPK与TGF-β1蛋白相对表达量差异有统计学意义(P<0.05),B组大鼠P38MAPK与TGF-β1显著低于C组(P<0.05)。3组大鼠肾组织P38MAPK与TGF-β1蛋白相对表达量呈显著正相关性(r=0.418,P<0.05)。结论 1,25-(OH)_(2)D_(3)干预能显著改善糖尿病大鼠肾功能,这可能与其抑制P38MAPK与TGF-β1表达有关。

轮状病毒性肠炎患儿血清1,25-(OH)_(2)D_(3)、INF-γ、CD11b水平变化及意义

目的探讨轮状病毒性肠炎(RE)患儿血清1,25-二羟基维生素D_(3)[1,25-(OH)_(2)D_(3)]、γ干扰素(INF-γ)、CD11b的水平变化及临床意义。方法选取RE患儿108例(RE组),根据脱水严重程度分为轻度组(n=34)、中度组(n=50)、重度组(n=24),同期选取53例体检健康儿童为对照组。采集受检者清晨空腹静脉血,用酶联免疫吸附法测定1,25-(OH)_(2)D_(3)、INF-γ,全自动特定蛋白分析仪测定免疫球蛋白A(IgA)、IgG、IgM,流式细胞仪测定CD11b和CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞百分比并计算CD4^(+)/CD8^(+),Pearson相关分析RE患儿血清1,25-(OH)_(2)D_(3)、INF-γ、CD11b水平与体液和细胞免疫指标的相关性,受试者工作特征曲线分析各指标对小儿RE的诊断价值。结果与对照组比较,RE组血清1,25-(OH)_(2)D_(3)水平低,INF-γ、CD11b水平高(P均<0.05)。轻度组、中度组、重度组血清1,25-(OH)_(2)D_(3)水平逐渐降低,INF-γ、CD11b水平逐渐升高(P均<0.05)。与对照组比较,RE组IgA、IgG、IgM、CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)降低(P均<0.05)。轻度组、中度组、重度组IgA、IgG、IgM、CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)逐渐降低(P均<0.05)。RE患儿血清1,25-(OH)_(2)D_(3)水平与IgA、IgG、IgM、CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)呈正相关,INF-γ、CD11b水平与IgA、IgG、IgM、CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)呈负相关(P均<0.05)。1,25-(OH)_(2)D_(3)、INF-γ、CD11b诊断小儿RE的曲线下面积分别为0.806(95%CI:0.736~0.864)、0.803(95%CI:0.733~0.862)、0.799(95%CI:0.729~0.858)。结论RE患儿血清1,25-(OH)_(2)D_(3)水平低,INF-γ、CD11b水平高;三者可反映患儿免疫功能及脱水严重程度,并对RE有一定诊断价值。

1,25-二羟维生素D_3对高危角膜移植急性排斥反应及角膜新生血管的影响

目的研究药物1,25-二羟基维生素D3(二羟维D3)在高危角膜移植模型中对免疫排斥反应及新生血管生长情况的影响,揭示1,25-二羟维D3作为免疫抑制剂在角膜移植中的治疗作用及机制。方法建立大鼠高危角膜移植模型,按不同浓度的1,25-二羟维D3(1×10-5和1×10-7mol/L)及环孢霉素A(CsA)分组,连续用药2周,观察移植物排斥情况并于术后4、7、14d取材行原位杂交等实验,分析各组细胞因子白介素1α(IL-1α)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平的变化情况。结果在1,25-二羟维D3作用下,高危角膜移植物的存活时间明显延长;新生血管生长受抑制;合用CsA后效果更明显。原位杂交实验证实1,25-二羟维D3能显著抑制植片IL-1α、TNF-αmRNA表达(P<0.01);对VEGF表达无直接影响。结论1,25-二羟维D3能有效地抑制新生血管生长及角膜移植急排期的免疫排斥反应,机制可能包括对前炎症因子(IL-1α、TNF-α)生成的抑制作用,而对VEGF无明显直接作用。

血清1,25-二羟维生素D_3水平与儿童支气管哮喘的相关性研究

目的探讨儿童血清1,25-二羟维生素D_3[1,25(OH)_2D_3]水平与支气管哮喘的相关性及其在哮喘患者中的水平变化。方法收集2012年1月至2014年12月中山市博爱医院儿科222例哮喘患儿与同期223例健康体检儿童,化学发光法检测其血清维生素D水平并评价其与儿童哮喘的相关性。结果相比健康体检儿童(93.39±27.15)nmol/L,哮喘患儿的血清维生素D水平明显较低为(86.30±27.70)nmol/L;在同一组内,不同年龄儿童的血清维生素D水平有显著性差异,不同性别之间则没有显著性差异。结论儿童的血清维生素D水平与其性别无关,随着年龄的增长而递减,哮喘组显著低于健康组,提示维生素D缺乏是哮喘发作的重要原因之一。

1,25-二羟基维生素D_3和维生素K_2联合诱导HL-60细胞分化及凋亡的研究

目的:研究1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3,简称D3]与维生素K2(VK2)联合应用对HL-60细胞分化及凋亡的影响。方法:通过四唑氮蓝(MTT)比色,细胞形态,流式细胞仪(FCM)测定细胞周期、凋亡率及CD-14的表达,观察D3、VK2对HL-60细胞的影响。结果:D3与VK2都能抑制HL60细胞增殖,并且联合使用抑制作用显著。10-8mol/LD3与10μmol/LVK2联合处理HL-60细胞72h后CD-14的表达率为63.15%,且G0/G1期细胞显著增多,与单独一种比较差异有统计学意义(P<0.05)。10μmol/L、20μmol/LVK2作用于HL-60细胞72h凋亡率分别为11.31%、20.36%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);而10μmol/LVK2与10-8mol/LD3联用72h细胞的凋亡率为5.41%,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:D3与VK2联合使用可以使D3诱导分化作用加强,而VK2诱导凋亡作用受到抑制。

1,25-二羟维生素D_3对糖尿病肾病患者炎症状态的影响

目的探讨1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)_2D_3]对糖尿病肾病(DN)患者血清炎症因子的影响。方法选择单纯2型糖尿病患者设为A组,DN微量白蛋白尿患者设为B组,DN大量蛋白尿患者设为C组,每组30例。将60例DN患者按性别、年龄配对,再随机分为治疗组和对照组,各30例。检测所有患者血1,25-(OH)_2D_3、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-17、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞趋化因子(MCP-1)水平及尿白蛋白/尿肌酐(ACR)。治疗组给予骨化三醇胶丸治疗24周,并复查上述指标。结果血1,25-(OH)_2D_3水平A组患者最高,B组和C组明显下降(P<0.05),C组水平最低,与B组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。与A组相比,B组和C组CRP,IL-6,IL-17,TNF-α,MCP-1明显上升(P<0.05);与B组相比,C组CRP,IL-6,IL-17,TNF-α水平显著升高(P<0.05)。治疗前后对照组血1,25-(OH)_2D_3,CRP,IL-6,IL-17,TNF-α,MCP-1无显著变化(P>0.05),ACR显著升高(P<0.05);治疗组治疗后CRP,IL-17,TNF-α,ACR水平显著下降(P<0.05),血1,25-(OH)2D3水平明显升高(P<0.05);与对照组治疗后相比,治疗组血1,25-(OH)_2D_3水平显著升高,IL-17,TNF-α,ACR水平明显下降(P<0.05);相关分析显示,1,25-(OH)_2D_3水平与CRP,IL-17,TNF-α水平呈负相关。结论 DN患者1,25-(OH)_2D_3缺乏,炎症因子水平高,补充骨化三醇胶丸可改善DN患者炎症状态,减少尿蛋白的产生。