1,25(OH)_(2)D_(3)对Aβ_(1-42)诱导阿尔茨海默病细胞模型中细胞焦亡的抑制作用

目的探讨1,25(OH)_(2)D_(3)对Aβ_(1-42)诱导阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)细胞模型中细胞焦亡的抑制作用及其机制。方法将PC12细胞分为对照组、模型组、Caspase-1-siRNA组、NC-siRNA组、1,25(OH)_(2)D_(3)组、联合干预组。对照组仅用DMEM高糖培养基培养细胞;模型组用20μmol/L Aβ_(1-42)处理细胞以造模;Caspase-1-siRNA组先用50 nmol/L Caspase-1-siRNA处理细胞,再加入20μmol/L Aβ_(1-42);NC-siRNA组先用50 nmol/L NC-siRNA处理细胞,再加入20μmol/L Aβ_(1-42);1,25(OH)_(2)D_(3)组用100 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)干预后加入20μmol/L Aβ_(1-42);联合干预组先用50 nmol/L Caspase-1-siRNA处理细胞,然后用100 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)干预,最后加入20μmol/L Aβ_(1-42)。细胞免疫荧光检测凋亡相关斑点蛋白(ASC)蛋白的表达;Western blot检测细胞焦亡通路相关蛋白表达,包括:NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-Caspase-1)、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、消皮素D-N端(GSDMD-N)、IL-1β、IL-1β前体(pro-IL-1β)、IL-18和IL-18前体(pro-IL-18)蛋白;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)染色检测细胞膜通透性。结果与对照组相比,模型组ASC蛋白荧光强度增强(P<0.01),细胞焦亡通路相关蛋白表达均增加(P<0.05),细胞膜通透性变大(P<0.01)。与模型组相比,1,25(OH)_(2)D_(3)组和Caspase-1-siRNA组ASC蛋白荧光强度减弱(P<0.01),pro-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD-N、pro-IL-1β、IL-1β、pro-IL-18和IL-18蛋白表达均下调(P<0.01),细胞通透性减小(P<0.01)。与Caspase-1-siRNA组相比,联合干预组GSDMD-N和IL-18蛋白表达降低(P<0.01),细胞通透性减小(P<0.01)。结论Aβ_(1-42)能够诱导PC12细胞发生细胞焦亡现象。1,25(OH)_(2)D_(3)可以通过抑制Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞发生焦亡来发挥其抗炎的神经保护作用,其机制与Caspase-1的抑制密切相关。

慢性肾脏病患者血清STC1、1,25-(OH)2D3与疾病严重程度的关系

目的:检测慢性肾脏病患者血清斯钙素1(STC1)、1,25-羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]水平并探究其与疾病严重程度的关系。方法:选取在本院确诊的126例慢性肾脏病患者作为研究对象(研究组),同期在本院体检健康的受试者56例作为对照组。比较不同严重程度患者血清STC1、1,25-(OH)2D3水平,以Pearson相关性分析1,25-(OH)2D3、STC1在慢性肾脏病患者血清中的相关性。多因素Logistic回归分析影响慢性肾脏病患者肾功能重度损害相关因素。结果:研究组血清STC1、BUN、Scr水平明显高于对照组(P<0.05),1,25-(OH)2D3水平低于对照组(P<0.05);慢性肾脏病1期、2期、3期、4期、5期患者血清STC1水平依次升高(P<0.05),1,25-(OH)2D3水平依次降低(P<0.05);慢性肾脏病3期、4期、5期BUN、Scr水平逐次升高,且均高于1期、2期(P<0.05)。STC1与BUN、Scr水平均呈正相关(r=0.698、0.702,P<0.01),1,25-(OH)2D3与血清BUN、Scr水平均呈负相关(r=0.698、0.702,P<0.01);STC1、BUN、Scr是影响慢性肾脏病患者肾功能重度损害的危险因素,而1,25-(OH)2D3是慢性肾脏病患者肾功能重度损害的保护因素(P<0.05)。结论:慢性肾脏病患者血清STC1表达较高,1,25-(OH)2D3水平呈低表达,与疾病严重程度关系密切,为影响慢性肾脏病疾病严重程度的独立危险因素,且两者呈负相关,可能作为评估慢性肾脏病患者严重程度的有效、潜在指标。

血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)对银屑病患者并发心血管疾病的预测价值

目的检测血清氧磷酯酶1(PON1)及1,25二羟基维生素D 3[1,25(OH)_(2)D_(3)]水平及其对银屑病患者并发心血管疾病(CVD)的预测价值。方法选取2018年2月—2022年2月中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院皮肤科收治银屑病患者88例为银屑病组,根据疾病严重程度,再分为轻度亚组(n=34)、中度亚组(n=26)和重度亚组(n=28);根据是否合并CVD分为非CVD亚组63例和CVD亚组25例。选取医院同期体检健康者70例为健康对照组。酶联免疫吸附实验检测血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)水平;比较不同病情程度银屑病患者血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)水平差异;多因素Logistic回归分析影响银屑病患者并发CVD的因素;受试者工作特征曲线分析血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)对银屑病患者并发CVD的预测价值。结果银屑病组血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)水平低于健康对照组(t=51.008,25.088,P均<0.001)。血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)水平比较,轻度亚组>中度亚组>重度亚组(F=207.130、54.240,P均<0.001);Framingham风险评分(FRS评分)高是影响银屑病患者并发CVD的独立危险因素,血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)升高是保护因素[OR(95%CI)=1.791(1.294~2.480),0.623(0.493~0.786),0.630(0.495~0.802)];血清PON1、1,25(OH)_(2)D_(3)及两项联合预测银屑病患者并发CVD的AUC分别为0.815、0.784、0.878,两项联合的AUC高于血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)单独诊断,差异具有统计学意义(Z/P=3.124/0.002、3.349/0.001)。结论银屑病患者血清PON1及1,25(OH)_(2)D_(3)水平与银屑病患者病情严重程度有关,有望作为评估银屑病患者CVD发生的新指标。

p53半剂量缺失纠正1,25(OH)_(2)D_(3)缺乏小鼠的骨质疏松

目的:探索p53半剂量缺失杂合子小鼠能否通过增强抗氧化能力纠正活性维生素D(1,25(OH)_(2)D_(3))缺乏引起的骨质疏松。方法:取10周龄高钙高磷饮食喂养的同窝野生型(wild type,WT)小鼠、p53半剂量缺失杂合子(p53^(+/-))小鼠、1α-羟化酶基因敲除[1α(OH)ase^(-/-)]小鼠及p53半剂量缺失的1α羟化酶基因敲除[1α(OH)ase^(-/-)p53^(+/-)]小鼠的长骨,利用X线、micro-CT、组织病理学和分子生物学等方法,比较各组小鼠血清学、长骨骨矿化、骨形成、骨吸收以及氧化应激等表达变化。结果:与WT小鼠相比,p53^(+/-)小鼠血清钙、磷、甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)和1,25(OH)_(2)D_(3)水平差异无统计学意义,骨密度、总胶原(total collagen,T-col)阳性面积、成骨细胞数量、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,Col-Ⅰ)阳性面积均有所增加,活性氧水平降低,抗氧化酶SOD1表达增加。与1α(OH)ase^(-/-)小鼠相比,1α(OH)ase^(-/-)p53^(+/-)小鼠血清钙、磷和PTH差异无统计学意义,血清中检测不到1,25(OH)_(2)D_(3),骨密度、T-col阳性面积、成骨细胞数量、ALP和Col-Ⅰ阳性面积均明显增加,破骨细胞数量减少,活性氧水平降低,抗氧化酶SOD1表达增加。结论:p53半剂量缺失可通过增强抗氧化能力纠正1,25(OH)_(2)D_(3)缺乏小鼠的骨质疏松。

1,25(OH)_(2)D和25(OH)D对慢性肾病患者的监测意义

目的研究1,25-二羟基维生素D[1,25(OH)_(2)D]和25-羟基维生素D[25(OH)D]在慢性肾病患者血中的变化以及与肾、肝、骨等生化检测指标的关系;探讨两种维生素D检测对慢性肾病患者的临床监测意义以及差异。方法研究对象包括48例临床确诊的慢性肾病患者(研究组)和50例其他疾病患者或健康体检者(对照组),研究组和对照组同时检测1,25(OH)_(2)D、25(OH)D、甲状旁腺素、钙、磷、碱性磷酸酶、肌酐、尿素氮、尿酸、白蛋白、总蛋白、AST、ALT和总胆红素;对各检测指标的结果进行研究组与对照组的均值t检验、多因素逻辑回归以及相关性聚类分析。结果研究组1,25(OH)_(2)D比对照组严重偏低[(8.55±6.75)vs(46.42±23.05)pmol/L,P<0.001],而25(OH)D只是轻度偏低[(13.55±5.85)vs(17.61±6.30)ng/mL,P=0.002];1,25(OH)_(2)D与25(OH)D量值的相关性很低(R=0.16,P>0.05);研究组60岁以上老年人血清1,25(OH)_(2)D和25(OH)D水平均显著性低于59岁以下年龄组,与对照组对比,60岁以上老年人组及59岁以下组的血清1,25(OH)_(2)D和25(OH)D水平显著性降低。用多因素逻辑回归校正性别、年龄后,1,25(OH)_(2)D对区分研究组和对照组仍有显著性(OR=0.007,P<0.001),而25(OH)D已无显著性(OR=0.027,P=0.068)。iPTH、磷、ALP、肌酐和尿素氮在研究组均显著偏高(P<0.01),而1,25(OH)_(2)D、钙、总胆红素、白蛋白和总蛋白在研究组均显著偏低(P<0.01);相关性的层序聚类分析显示与肾功能(eGFR)的紧密关系(P<0.05)依次为肌酐、尿素氮、血清蛋白、钙、1,25(OH)_(2)D、磷、iPTH、总胆红素、ALP,而25(OH)D与各项生化指标的关系均较远。结论60岁以上老年人,无论是正常人或患慢性肾病,血清1,25(OH)_(2)D和25(OH)D水平均显著性降低,患慢性肾病的老年人群更易缺乏维生素D。1,25(OH)_(2)D检测技术难度较大、操作比较复杂,目前仅有手工试剂,而25(OH)D在临床上的应用很广;但是,1,25(OH)_(2)D在慢性肾病患者中的变化更显著,且与相关的肾、骨、肝的生化指标的关系更为密切,可能对慢性肾病疾病状态的监测意义更大。

1,25-(OH)_(2)D_(3)对慢性哮喘小鼠血清TGF-β、IL-4水平的影响

目的:观察1,25-二羟维生素D_(3)﹝1,25-(OH)_(2)D_(3)﹞对慢性哮喘小鼠血清转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-4(IL-4)水平的影响,探索1,25-(OH)_(2)D_(3)抑制哮喘气道重塑的作用机制。方法:将30只BALA/c小鼠随机分为模型组(10只)、维生素D组(10只)、正常对照组(10只)。模型组、维生素D组小鼠检疫3 d正常后分别于第1 d、第14 d背部、腹腔注射卵清蛋白(OVA)混合液100μg﹝OVA 100μg+氢氧化铝1 mg+磷酸盐缓冲液(PBS)0.05 mL/只﹞,构建慢性哮喘小鼠模型,正常对照组不建模。维生素D组在第21 d予1,25-(OH)_(2)D_(3)腹腔注射(100 ng/只,共18次),30 min后予1%OVA雾化吸入(隔天1次,共18次);模型组予等量生理盐水腹腔注射,30 min后予1%OVA雾化吸入(隔天1次,共18次)。第55 d收集标本,处死动物,采用酶联免疫吸附试验(ELLSA)测验各组的血清TGF-β、IL-4水平。结果:维生素D组的血清TGF-β、IL-4水平与模型组比较均明显降低(P<0.05);维生素D组和模型组的血清TGF-β、IL-4水平与正常对照组比较均明显升高(P<0.05);慢性哮喘小鼠血清中TGF-β与IL-4呈正相关(r=0.856,P<0.05)。结论:1,25-(OH)_(2)D_(3)可降低慢性哮喘小鼠的血清TGF-β、IL-4水平,从而发挥治疗哮喘的作用,其可能的机制是1,25-(OH)_(2)D_(3)通过降低血清TGF-β、IL-4水平而抑制Th1/Th2失衡,进而抑制气道重塑。

1,25-(OH)_(2)-VitD3通过抑制Snail1-SMAD3/SMAD4复合物形成减轻糖尿病肾病肾小管间质纤维化

目的研究1,25-(OH)2-VitD3(VitD3)对糖尿病肾病肾小管间质纤维化的影响.方法NRK-52E肾小管上皮细胞分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖培养基处理)、高糖组(25 mmol/L葡萄糖的培养基处理)和高糖加VitD3组(25 mmol/L葡萄糖培养基联合10-8 mol/L VitD3).实时定量PCR和Western blot法分别检测NRK-52E细胞Snail家族转录抑制物1(Snail1)、SMAD家族成员3(SMAD3)、SMAD4、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和上皮钙黏蛋白(E-cadherin)的mRNA和蛋白表达;免疫荧光细胞化学染色检测Snail1、SMAD3、SMAD4的表达及定位;通过染色质免疫沉淀检测Snail1与SMAD3/SMAD4形成的复合物与柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)的启动子结合情况;荧光素酶报告检测Snail1、SMAD3/SMAD4和E-cadherin的相互作用;采用小干扰RNA(siRNA)抑制细胞Snail1、SMAD4的表达后,通过实时定量PCR检测E-cadherin的mRNA表达.SD大鼠随机分为对照组、DKD组和VitD3处理组.DKD组和VitD3处理组通过注射链脲佐菌素(STZ)先制备DKD模型,DKD造模成功后,VitD3处理组予60ng/kgVitD3灌胃,对照组和DKD组给予生理盐水灌胃;DKD组和VitD3处理组同时皮下注射胰岛素(1~2)U/kg控制血糖,持续8周.采用实时定量PCR和Western blot法分别检测肾组织中Snail1、SMAD3、SMAD4、α-SMA、E-cadherin的mRNA和蛋白水平,免疫组织化学检测肾组织Snail1、SMAD3、SMAD4、α-SMA和E-cadherin的表达及定位.结果与对照组相比,高糖处理的NRK-52E细胞及DKD肾组织Snail1、SMAD3、SMAD4和α-SMA的mRNA和蛋白表达均上调,E-cadherin表达下调;给予VitD3干预后,DKD模型中Snail1、SMAD3、SMAD4、α-SMA和E-cadherin的表达水平恢复到与对照组接近.染色质免疫沉淀提示Snail1、SMAD3/SMAD4与CAR的启动子Ⅳ结合,而VitD3能够阻止Snail1、SMAD3/SMAD4与CAR的启动子Ⅳ结合;荧光素酶报告检测证实Snail1、SMAD3/SMAD4和E-cadherin的互作关系;用siRNA抑制Snail1、SMAD4的mRNA后,上调高糖诱导下E-cadherin的表达.结论VitD3可抑制Snail1-SMAD3/SMAD4的复合物的形成,减轻糖尿病肾病肾小管间质纤维化.

血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平与脑小血管病患者认知功能损害程度的相关性分析

目的研究1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)_(2)D_(3)]水平与脑小血管病(CSVD)患者认知功能损害(CI)程度的相关性.方法选取2020年7月-2021年8月河北医科大学第一医院神经内科收治的126例CSVD患者,入院后参照简易智能状态检查量表(MMSE)分为CSVD并发CI组(MMSE<27分,n=89)及CSVD无并发CI组(MMSE≥27分,n=37).比较两组同型半胱氨酸(Hcy)、1,25(OH)_(2)D_(3)、3-硝基酪氨酸(3-NT)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,通过ROC分析Hcy、1,25(OH)_(2)D_(3)、3-NT、hs-CRP、HDL-C预测CSVD并发CI的价值.根据MMSE量表评分评估患者认知功能,将89例CSVD并发CI患者分为轻度组(21分≤MMSE量表评分<27分,n=46)、中度组(10分≤MMSE量表评分<21分,n=28)、重度组(MMSE量表评分<10分,n=15),比较三组患者Hcy、1,25(OH)_(2)D_(3)、3-NT、hs-CRP、HDL-C水平差异,通过Spearman相关系数分析血清Hcy、1,25(OH)_(2)D_(3)、3-NT、hs-CRP、HDL-C与CI严重程度的相关性.结果CSVD并发CI组血清Hcy、3-NT、hs-CRP显著高于CSVD无并发CI组,1,25(OH)_(2)D_(3)、HDL-C水平显著低于CSVD无并发CI组,差异有统计学意义(P<0.05);经ROC分析,Hcy≥14.516μmol·L^(-1)、1,25(OH)_(2)D_(3)≤0.325ng·mL^(-1)、3-NT≥5.741ng·mL^(-1)、hs-CRP≥3.149mg·L^(-1)、HDL-C≤1.160mmol·L^(-1)是预测CSVD并发CI的最佳截断值,曲线下面积分别为0.901、0.894、0.899、0.916、0.904,敏感度为0.932、0.838、0.932、0.943、0.865,特异性为0.865、0.932、0.892、0.865、0.920,且P<0.05;不同CI程度患者血清Hcy、3-NT、hs-CRP比较,轻度组<中度组<重度组;1,25(OH)_(2)D_(3)、HDL-C水平比较,轻度组>中度组>重度组,差异有统计学意义(P<0.05);经相关性分析,CI程度与血清Hcy、3-NT、hs-CRP呈正相关,与1,25(OH)_(2)D_(3)、HDL-C呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05).结论血清Hcy、1,25(OH)_(2)D_(3)、3-NT、hs-CRP、HDL-C与CSVD并发CI发病机制相关,且CI程度与血清Hcy、3-NT、hs-CRP呈正相关,与1,25(OH)_(2)D_(3)、HDL-C呈负相关.

1,25(OH)_(2)VD_(3)对血管紧张素Ⅱ诱导的足细胞内质网应激的抑制作用

目的探讨1,25(OH)_(2)VD_(3)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的足细胞内质网应激的影响,为临床上应用骨化三醇治疗足细胞损伤产生的蛋白尿提供理论依据。方法体外培养小鼠足细胞系(MPC5),随机分为对照组、AngⅡ组(10^(-6)mol/L的AngⅡ)、1,25(OH)_(2)VD_(3)组[10^(-6)mmol/L的AngⅡ+10^(-8)mol/L的1,25(OH)_(2)VD_(3)]。各组均在给药处理6、12、18、24 h后收集细胞,分别应用实时定量PCR、免疫荧光技术检测不同时间点各组样本中葡萄糖调节蛋白(GRP78)及蛋白激酶样内质网激酶(PERK)的mRNA表达量和蛋白表达情况。结果与对照组比较,AngⅡ组GRP78、PERK mRNA表达量在各个时间点均显著增加(P<0.01)。与AngⅡ组比较,1,25(OH)_(2)VD_(3)组GRP78、PERK mRNA表达量在各个时间点均显著降低(P<0.01或<0.05),相应的GRP78、PERK蛋白表达均较低。AngⅡ组给药处理12 h后GRP78、PERK mRNA表达量较6 h mRNA表达量均显著增加(P<0.01);AngⅡ组给药处理18 h后GRP78、PERK mRNA表达量较12 h mRNA表达量均显著增加(P<0.01,P<0.05)。结论AngⅡ可以诱导足细胞发生内质网应激,其发生强度与药物作用时间有关,而1,25(OH)_(2)VD_(3)能通过抑制AngⅡ诱导的足细胞内质网应激,起到保护足细胞的作用。

1,25(OH)_(2)D_(3)及VDR敲除对山羊附睾头上皮细胞β防御素家族表达的影响

旨在研究1,25(OH)_(2)D_(3)是否通过VDR途径调节山羊附睾头上皮细胞β防御素基因表达。本试验选取3只6月龄太行黑山羊,分别采集附睾头组织。采用差速贴壁法分离山羊附睾头上皮细胞,用细胞免疫荧光鉴定上皮细胞纯度。添加100 nmol·L^(-1)1,25(OH)_(2)D_(3)处理附睾头上皮细胞以及筛选出敲除效率最高的pCas9/gRNA1质粒载体进行细胞转染,同时设置阴性对照组和空白对照组,每组3个重复孔。附睾头上皮细胞经1,25(OH)_(2)D_(3)处理以及VDR基因敲除后,分别用qRT-PCR检测VDR和17种β防御素基因的表达,用Western blot检测VDR蛋白和3种β防御素蛋白的表达。结果表明,1,25(OH)_(2)D_(3)能极显著提高VDR、gBD124、gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.01),同时极显著提高gBD104、gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD113、gBD116、gBD120、gBD 121以及gBD 123基因的表达(P<0.01),显著提高gBD106、gBD127、gBD 129以及gBD 134基因的表达(P<0.05),而对gBD 110like和gBD 128基因没有显著影响(P>0.05);3个基因敲除载体进行细胞转染后,pCas9-VDR-V1组VDR蛋白表达极显著降低(P<0.01)。VDR基因敲除极显著降低gBD124的mRNA和蛋白表达(P<0.01),显著降低gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.05),同时VDR基因敲除组gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD116、gBD123、gBD127、gBD 128以及gBD 134基因的表达极显著低于其他组(P<0.01),VDR基因敲除组gBD104、gBD106、gBD 120以及gBD 129基因的表达显著低于其他组(P<0.05),而对gBD121、gBD 110like以及gBD 113的相对表达则无显著影响(P>0.05)。综上所述,1,25(OH)_(2)D_(3)可以上调VDR和部分β防御素表达;VDR基因敲除后降低部分β防御素表达,结果表明1,25(OH)_(2)D_(3)通过上调VD/VDR信号通路关键基因VDR的表达调控山羊附睾头上皮细胞部分β防御素表达。

1,25(OH)_(2)D_(3)通过调节Th17/Treg比值和RANKL/OPG轴缓解胶原诱导的关节炎

目的 探讨1,25-二羟基维生素D_(3)[1,25-dihydroxy vitamin D3,1,25(OH)_(2)D_(3)]对胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠关节滑膜炎症和骨破坏的抑制作用及机制。方法 30只DBA/1J小鼠被均分为3组:对照组(CON)、模型组(CIA)和模型干预组(VD)。CIA组和VD组小鼠建立CIA模型,用1,25(OH)_(2)D_(3)对VD组CIA模型进行治疗。用游标卡尺测量小鼠后足爪的肿胀程度。用Micro-CT测量小鼠后足爪的骨密度。酶联免疫吸附剂测定法检测小鼠血清1,25(OH)_(2)D_(3)和炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的水平。流式细胞术检测小鼠脾脏Th17细胞和Treg细胞的比例。采用苏木精-伊红染色观察膝关节的病理特征。Western blot检测小鼠踝关节的蛋白OPG、RANKL、NF-κB和VDR的表达水平。结果 1,25(OH)_(2)D_(3)并没有降低CIA模型的发病率,但却明显缓解了关节炎症。VD组的脚掌厚度、关节炎评分以及膝关节HSS评分均较CIA组明显降低(P均<0.05)。CIA组的骨破坏程度更加明显,BMD及BV/TV明显低于VD组(P均<0.05)。VD组的IL-1β、IL-6、TNF-α水平和Th17/Treg细胞比例明显低于CIA组(P均<0.05)。与CIA组相比,VD组踝关节的VDR和OPG蛋白水平明显增加(P均<0.05),NF-κB和RANKL蛋白水平明显低于CIA组(P均<0.05),RANKL/OPG的比例也明显低于CIA组(P<0.05)。结论 1,25(OH)_(2)D_(3)可能通过调节Th17/Treg比值和RANKL/OPG轴缓解CIA模型小鼠的关节滑膜炎症并抑制骨破坏。

全反式维甲酸和1α,25二羟维生素D_3对肝癌细胞HepG2生长的协同抑制作用

背景与目的:全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)和1α,25二羟维生素D3[1alpha,25-dihydroxyvitaminD3,1,25(OH)2D3]已被证实能诱导肿瘤细胞分化,并用于造血系统肿瘤的治疗,但其对实体瘤的影响研究较少。本研究旨在通过单独和联合使用ATRA和1,25(OH)2D3,观察其对肝癌HepG2细胞生长和细胞周期的影响,并探讨其相关机制。方法:HepG2细胞经过不同浓度的ATRA和1,25(OH)2D3单独或联合用药处理后,用MTT法检测细胞抑制率、显微镜观察细胞形态的改变、流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的变化,同时分别用逆转录多聚酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)及流式细胞仪(flowcytometry,FCM)检测细胞周期负调节基因p21WAF1/CIP1和p27KIP1的mRNA及蛋白的表达情况。结果:单独使用ATRA或1,25(OH)2D3和联合用药的HepG2细胞生长均受到抑制,并呈浓度和时间依赖关系,其中联合用药组抑制率明显高于单独用药组(P<0.05)。经10nmol/L1,25(OH)2D3及联合用药诱导72h的HepG2细胞G1期细胞占(54.27±3.69)%和(65.64±5.65)%,与对照组[(40.40±1.91)%]相比明显增高(P<0.05),而1μmol/LATRA组的细胞周期与对照组相比无明显差异(P>0.05);同时各实验组均有细胞凋亡产生(P<0.05),并以联合用药组最为显著。RT-PCR显示10nmol/L1,25(OH)2D3和联合用药处理HepG2细胞24h,p21WAF1/CIP1mRNA表达与对照组相比分别增高35%和56%;FCM显示两组细胞的P21WAF1/CIP1和P27KIP1的蛋白表达与对照组相比明显增高(P<0.05),联合用药组更为显著,但经1μmol/LATRA诱导的细胞P21WAF1/CIP1和P27KIP1的蛋白表达未见明显改变。结论:ATRA和1,25(OH)2D3均能够抑制HepG2细胞生长,诱导细胞凋亡,1,25(OH)2D3对细胞周期的影响作用是使细胞阻滞在G1期,其作用机制可能与其上调P21WAF1/CIP1和P27KIP1蛋白的表达有关,当与ATRA联合用药时,能够对HepG2细胞生长产生协同抑制作用。

不同浓度1,25-二羟维生素D3对高原肺水肿雄性大鼠的防治作用及可能机制

目的探究不同浓度1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)_(2)D_(3)]对高原肺水肿(High altitude pulmonary edema,HAPE)雄性大鼠的防治作用及可能机制。方法将105只雄性SD大鼠随机分为对照组、低氧组和5个不同浓度组(低氧+浓度A-E组)。不同浓度组大鼠每天灌胃[应用1,25-(OH)_(2)D_(3)]一次,5天后,低氧组和5个浓度组均置于模拟海拔6000 m的低压舱48 h,检测大鼠血气指标氧饱和度(Oxygen Saturation,SaO_(2))、氧分压(Partial pressure of oxygen,PaO_(2))及肺动脉压(Pulmonary artery pressure,PAP)后处死大鼠,测定肺组织干湿重比,通过HE染色法观察大鼠肺组织病理学变化,用ELISA法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)活性含量,用RT-PCR法测定大鼠肺组织中炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞色素1β(IL-1β)、白细胞色素6(IL-6)和CYP27B1、VDR mRNA水平,用蛋白质免疫印迹实验(Western Blot)法检测CYP27B1、VDR蛋白水平。结果1,25-(OH)_(2)D_(3)降低HAPE大鼠PAP、LWC,提高SaO_(2)及PaO_(2),降低肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平(P<0.05),升高SOD、GSH-Px酶活性(P<0.05),降低MDA含量,上调VDR蛋白水平,下调CYP27B1水平,可减轻肺水肿程度。预防性给予1,25-(OH)_(2)D_(3)(浓度0.252μg/kg)能够有效预防HAPE的发生。结论初步明确了浓度为0.252μg/kg(浓度D组)的1,25-(OH)_(2)D_(3)对雄性大鼠有较好的防治HAPE的效果;这种预防及保护作用可能与1,25-(OH)_(2)D_(3)下调CYP27B1、上调VDR表达有关。

中青年难治性高血压患者血清1,25-二羟维生素D_(3)、维生素D受体mRNA水平与中心动脉压的相关性

目的探讨1,25二羟维生素D_(3)[1,25(OH)2D_(3)]、维生素D受体(VDR)mRNA在中青年难治性高血压(RH)患者中的水平及与中心动脉压的相关性。方法选取2018年5月至2021年5月石家庄市人民医院收治的RH患者65例为A组,同时选取血压控制达标的高血压患者76例为B组,选择60例血压正常者为C组。采用酶联免疫吸附法检测血清中1,25(OH)2D_(3)水平,采用qRT-PCR检测外周血单个核细胞中VDR mRNA水平,Sphygmocor脉搏波分析系统检测中心动脉压。利用ROC曲线评价血清1,25(OH)2D_(3)、VDR mRNA水平对中青年RH的预测能力。结果A组与B组患者1,25(OH)2D_(3)、VDR mRNA水平均低于C组,且A组低于B组,差异均具有统计学意义(F=315.910、217.196,P<0.05);A组和B组患者中心动脉收缩压(CSBP)、中心动脉舒张压(CDBP)、中心动脉脉压(CAPP)均高于C组,且A组高于B组,差异有统计学意义(F=66.192、16.719、116.047,P<0.05);中青年RH患者1,25(OH)2D_(3)、VDR mRNA水平与CSBP、CDBP、CAPP均呈负相关。ROC曲线分析显示,血清1,25(OH)2D_(3)、VDR mRNA水平预测RH的曲线下面积分别为0.932、0.883,对应的敏感度分别为81.54%、86.92%,特异度分别为94.74%、71.05%。二者联合的曲线下面积为0.956,敏感度和特异度分别为90.77%、92.11%。结论中青年RH患者中1,25(OH)2D_(3)、VDR mRNA水平较低,与中心动脉压密切相关,联合检测对诊断中青年RH具有重要意义。

1,25-二羟维生素D_(3)通过糖酵解途径促进人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的:探讨1,25-二羟维生素D_(3)(VD_(3))对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:取体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞,随机分为6组:对照组、2-脱氧葡萄糖(2-DG,葡萄糖抑制剂)组、1μmol/L VD_(3)组、10μmol/L VD_(3)组、2-DG+1μmol/L VD_(3)组和2-DG+10μmol/L VD_(3)组。药物干预6组细胞48 h后,以葡萄糖摄取测定试剂盒检测细胞的葡萄糖摄取量、ATP试剂盒检测细胞中ATP含量和乳酸试剂盒检测细胞的乳酸水平,WB法检测MCF-7细胞中细胞色素C(Cyt c)和凋亡相关蛋白(Bcl-2、BAX、PARP1、caspase9和caspase3)的表达水平。结果:与对照组比较,VD_(3)干预后,MCF-7细胞的凋亡率明显增加(P<0.05或P<0.01),同时细胞的葡萄糖摄取量、ATP含量及乳酸水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),Cyt c、BAX、PARP1、caspase9及caspase3蛋白表达量明显升高(均P<0.05),Bcl-2蛋白表达量降低(P<0.05或P<0.01);VD_(3)联合2-DG干预后,各组细胞检测指标的变化更为明显(P<0.05或P<0.01)。结论:VD_(3)可通过抑制人乳腺癌MCF-7细胞的糖酵解过程并以线粒体的Cyt c途径促进细胞凋亡。

银屑病患者1,25(OH)_(2)D_(3)与炎性因子水平关系及阿维A联合NB-UVB疗效观察

目的 探讨银屑病患者血清1,25-二羟基维生素D_(3)[1,25(OH)_(2)D_(3)]与炎性因子水平关系及阿维A联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)方案的疗效。方法 选取2020年1月至2021年11月在山西省运城市中心医院治疗的银屑病患者109例作为观察组,同时选取100名健康者作为对照组,根据病历号末尾奇偶数将观察组患者分为观察A组(n=57)和观察B组(n=52),其中观察A组给予阿维A联合NB-UVB治疗,观察B组给予NB-UVB治疗,对比观察两组治疗疗效。结果 观察组血清1,25(OH)_(2)D_(3)明显低于对照组,差异有统计学意义(t=-16.614,P<0.05),而白细胞计数(WBC)、中性粒细胞/淋巴细胞比(NLR)、血小板/淋巴细胞比(PLR)、C反应蛋白(CRP)和肿瘤坏死因子a(TNF-a)明显高于对照组,差异有统计学意义(t=12.832、5.869、8.678、26.944、19.084,P<0.05)。观察组中重度患者血清1,25(OH)_(2)D_(3)明显低于轻度患者,差异有统计学意义(t=2.699,P<0.05),而NLR和PLR明显高于轻度患者,差异有统计学意义(t=-5.141、-3.719,P<0.05)。结论 银屑病患者血清1,25(OH)_(2)D_(3)与NLR和PLR呈负相关,同时与患者病情程度呈负相关;阿维A联合NB-UVB治疗银屑病有较好的疗效,明显改善患者生活质量。

1,25(OH)_(2)D_(3)对miR-130b转染的高糖条件下HMC细胞TGF-β1/Smad3及Col-Ⅳ表达的影响

目的观察高糖环境下1,25(OH)_(2)D_(3)对miR-130b转染肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad3、Col-IV表达水平的变化,探索1,25(OH)_(2)D_(3)是否可通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。方法HMC细胞传代培养,miR-130b mimics及miR-130b inhibitor经LipofectamineTM 2000转染肾小球系膜细胞,依据分组加入1,25(OH)_(2)D_(3)1.0×10^(-8) mol/L,37℃、5%CO_(2)饱和湿度条件下继续培养48 h,共分为6组:①空白对照组;②细胞+无水乙醇组(A组);③细胞+miR-130b mimics+无水乙醇组(B组);④细胞+miR-130b mimics+1,25(OH)_(2)D_(3)组(C组);⑤细胞+miR-130b inhibitor+无水乙醇组(D组);⑥细胞+miR-130b inhibitor+1,25(OH)_(2)D_(3)组(E组)。以实时荧光定量PCR检测细胞miR-130b及TGF-β1、Smad3、Col-IVmRNA的表达水平,以Western blot方法检测细胞TGF-β1、Smad3、Col-IV蛋白的表达水平。采用多组间比较的单因素方差分析及组内两两比较采用LSD、Dunnett s T3法比较各组数据。结果空白对照组与A组细胞miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平,差异无统计学意义(P>0.05),与A组相比,B组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显升高(P<0.05),D组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05)。经1,25(OH)_(2)D_(3)治疗发现,与B组相比,C组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05),与D组相比,E组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05)。结论1,25(OH)_(2)D_(3)可降低miR-130b转染肾小球系膜细胞miR-130b及纤维化相关因子TGF-β1、Smad3、Col-IV的表达水平,1,25(OH)_(2)D_(3)可能通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。

1,25(OH)_2D_3合成及代谢酶与大鼠施万细胞关系研究

1,25（OH）2D3作为维生素D3的活性代谢产物,是钙磷代谢及机体免疫调节的重要激素,对中枢神经系统具有保护作用[1-3],给予1,25（OH）2D3可降低多发性硬化的发生[4]。推测其可能对周围神经系统也有保护作用,但目前国内外尚未见相关研究报道。施万细胞作为周围神经胶质细胞,对周围神经具有支持、营养及修复作用。CYP27A1、CYP27B1、CYP24作为1,25（OH）2D3活化和代谢的酶类,与其作用紧密相关,可作为1,25（OH）2D3是否与施万细胞作用的标志。该研究通过探讨施万细胞上CYP27A1、CYP27B1和CYP24基因的表达情况,旨在初步探讨1,25（OH）2D3与施万细胞之间的关系。

1,25（OH）2D3干预糖尿病肾病模型大鼠肾脏组织MicroRNA-130b及转化生长因子β1的变化

背景:1,25(OH)2D3在糖尿病肾病的发展过程中发挥着重要调节作用。目的:探索1,25(OH)2D3对糖尿病肾病大鼠肾脏组织MicroRNA-130b及转化生长因子β1表达的影响作用。方法:实验方案经新疆医科大学动物实验中心动物实验伦理委员会批准。将25只清洁级SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组、糖尿病肾病+花生油组,后2组分别给予骨化三醇(即1,25(OH)2D3,活性维生素D3)0.03μg/(kg?d)治疗、花生油对照处理。37 d后采集标本,以实时聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blot及免疫组织化学方法检测大鼠肾脏组织转化生长因子β1的表达;RT-PCR检测MicroRNA-130b的表达;采用苏木精-伊红及Masson染色对大鼠肾脏形态结构及纤维化程度进行分析。结果与结论:①RT-PCR结果显示,糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组及糖尿病肾病+花生油组MicroRNA-130b的表达明显低于正常对照组(P<0.01),糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组明显高于糖尿病肾病+花生油组(P<0.01);②RT-PCR、Western blot、免疫组织化学及病理结果显示,糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组及糖尿病肾病+花生油组转化生长因子β1 mRNA和蛋白的表达、大鼠肾脏组织结构紊乱及纤维化程度明显高于正常对照组(P<0.01),糖尿病肾病+1,25(OH)2D3组明显低于糖尿病肾病+花生油组(P<0.01);③结果说明,糖尿病肾病大鼠肾脏MicroRNA-130b表达水平下降,转化生长因子β1 mRNA及蛋白表达水平升高,肾脏组织结构紊乱及纤维化程度严重;1,25(OH)2D3可上调糖尿病肾病大鼠肾脏MicroRNA-130b的表达水平,同时还可下调糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子β1的表达水平,改善肾脏组织结构紊乱及纤维化程度。

1,25-二羟维生素D_(3)水平与新生儿呼吸道感染分析研究

目的探讨1,25-二羟维生素D_(3)[1,25-(OH)_(2)-D_(3)]水平对新生儿呼吸道感染的影响,为新生儿呼吸道感染预防与治疗提供依据。方法收集2020年1月至2020年6月在首都医科大学附属北京世纪坛医院新生儿重症监护病房诊断为急性呼吸道感染的新生儿120例作为呼吸道感染组,选择同期住院出生的116例健康足月新生儿作为对照组,同时测定各组新生儿血清1,25-(OH)_(2)-D_(3)水平。依据1,25-(OH)_(2)-D_(3)含量为四组,血清1,25-(OH)_(2)-D_(3)含量>250nmol/L为过量,血清1,25-(OH)_(2)-D_(3)含量75~250nmol/L为适宜,血清1,25-(OH)_(2)-D_(3)含量50~74nmol/L为不足,血清1,25-(OH)_(2)-D_(3)含量<50nmol/L为缺乏。结果呼吸道感染组1,25-(OH)_(2)-D_(3)的水平显著低于对照组[P<0.001,(85.85±18.07)nmol/L比(119.34±26.12)nmol/L]。呼吸道感染组1,25-(OH)_(2)-D_(3)不足比例显著高于对照组(P<0.001);而呼吸道感染组1,25-(OH)_(2)-D_(3)缺乏比例与对照组1,25-(OH)_(2)-D_(3)缺乏比例相比较,其差异无统计学意义(P>0.05);重度呼吸道感染新生儿1,25-(OH)_(2)-D_(3)水平低于轻度呼吸道感染新生儿(P<0.05)。结论呼吸道感染的新生儿1,25-(OH)_(2)-D_(3)水平显著低于正常健康新生儿。1,25-(OH)_(2)-D_(3)缺乏或出现不足均可能会导致新生儿感染呼吸道疾病,可适当补充维生素D以早期预防呼吸道感染。