1α,25-二羟基维生素D_(3)对哮喘小鼠SIRT1、GATA-3表达及气道炎症水平的影响

目的探究1α,25-二羟基维生素D_(3)对哮喘小鼠气道炎症变化的影响及可能机制。方法将24只SPF级BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、哮喘+1α,25-二羟基维生素D_(3)(哮喘+VD_(3))组,每组8只。哮喘组和哮喘+VD_(3)组小鼠于第1、8、15天给予卵清蛋白(OVA)混悬液0.2 ml致敏,对照组给予生理盐水0.2 ml;哮喘组和哮喘+VD_(3)组于第22~28天使用1%OVA雾化吸入激发,对照组给予等量生理盐水雾化吸入,每次雾化30 min,1次/d,连续激发7 d;哮喘+VD_(3)组每次雾化前30 min给予1α,25-二羟基维生素D_(3)注射液(4μg/kg),对照组和哮喘组给予等量生理盐水。最后一次激发后麻醉处理采集小鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本。采用HE染色和PAS染色观察肺组织病理学改变及气道黏液水平的变化;ELISA法检测血清IgE及BALF中炎性因子白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13水平;免疫组化、Western blotting检测小鼠肺组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)和GATA结合蛋白-3(GATA-3)的表达情况。采用Pearson直线相关分析肺组织SIRT1、GATA-3表达水平(SIRT1、GATA-3的平均OD值)与小鼠血清IgE及BALF中IL-4、IL-5、IL-13浓度的相关性。结果与对照组比较,哮喘组小鼠肺组织气管及伴行血管周围炎性细胞浸润明显增多,其中以嗜酸性粒细胞为主,支气管管腔狭窄,气道黏膜上皮增生,气管内黏液分泌增多;哮喘+VD_(3)组小鼠上述改变较哮喘组减轻。与对照组比较,哮喘组小鼠血清IgE和BALF中IL-4、IL-5、IL-13等炎性因子水平及肺组织中GATA-3表达均增高(P<0.05),肺组织中SIRT1表达降低(P<0.05);与哮喘组比较,哮喘+VD_(3)组小鼠血清IgE和BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平及肺组织GATA-3表达均降低(P<0.05),肺组织SIRT1表达增高(P<0.05)。相关性分析结果显示,小鼠肺组织SIRT1表达水平与GATA-3表达量、血清IgG及BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平均呈负相关(P<0.05);小鼠肺组织GATA-3表达水平与血清IgG及BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平均呈正相关(P<0.05)。结论1α,25-二羟基维生素D_(3)可缓解哮喘小鼠的气道炎症,其机制可能是通过上调肺组织中SIRT1的表达,抑制GATA-3的表达,进而降低炎性因子(IL-4、IL-5、IL-13)水平。

地塞米松及1α-25-(OH)_2-D_3体外诱导致耐受树突状细胞的特性

目的探讨地塞米松及1α-25-(OH)2-D3体外诱导致耐受树突状细胞的特性。方法用地塞米松及1α-25-(OH)2-D3诱导CBA/Ca小鼠骨髓来源的树突状细胞,加或不加脂多糖,观察不同树突状细胞的形态学特点,流式细胞仪检测免疫表型,ELISA法检测IL-12p70、IL-10细胞因子分泌,测定不同树突状细胞刺激异基因淋巴细胞增殖能力。结果地塞米松及1α-25-(OH)2-D3诱导的小鼠树突状细胞毛刺少,CD80、CD86水平低,IL-12p70水平降低(P<0.05),IL-10水平升高(P<0.05),刺激异基因淋巴细胞增殖能力受损。结论地塞米松及1α-25-(OH)2-D3体外诱导树突状细胞符合致耐受树突状细胞的特点,为其应用于自身免疫性疾病的治疗提供了理论依据。

1α，25-二羟维生素D3对体外培养的成骨细胞分化及矿化成熟影响

目的：探讨1α，25-二羟维生素D3（1α，25-（OH）2D3）对体外培育SD大鼠成骨细胞（OB）增殖、分化和成熟矿化的影响。方法采用胰蛋白酶和胶原酶消化法从24h新生SD乳鼠颅盖骨分离得到的OB，设置0nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L的1α，25-（OH）2D3为空白对照、低、中、高干预组，干预24h、48h和72h后分别采用噻唑蓝（MTT）比色法检测OB增殖率、PNPP法测定碱性磷酸酶（ALP）活性、放射免疫法检测骨钙素（OC）含量、RT-PCR检测BMP-2 mRNA表达；3d和6d后测定钙盐沉积量；10d和20d后茜素红染色法检测细胞钙化结节数。结果与空白组比较，在干预24h、48h、72h后低干预组成骨细胞A值分别增加20.50%、38.77%、18.22%，高干预组ALP分别增加（3.068±1.137）%、（0.505±0.156）%、（1.115±0.382）%，OC含量分别增加（0.285±0.097）%、（0.469±0.134）%、（0.734±0.225）%；高干预组成骨细胞钙沉积量在干预3d和6d后分别增加（0.968±0.236）%和（0.929±0.307）%，成骨细胞矿化结节在干预10 d和20d后，分别增加（13.889±3.973）%和（10.472±0.263）%，均呈正相关（P〈0.05）。结论在本实验浓度范围内，中、高剂量1α，25-（OH）2D3可促进体外成骨细胞分化和矿化，刺激成骨细胞分泌骨钙素，发挥着促进骨形成的作用。

rhIL-1α、1,25-(OH)_2D_3对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG的影响研究

目的研究rh IL-1α、1,25-(OH)2D3对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG的影响。方法将人牙周膜成纤维细胞分别放在含有纯培养液、含rh IL-1α培养液、含1,25-(OH)2D3培养液和含有rh IL-1α、1,25-(OH)2D3联合培养基中培养,并分别标记为D组、A组、B组和C组,培养48 h后,用荧光定量RT-PCR技术检验。结果 A组培养基中细胞表达RANKL和OPG均有上升,且RANKL/OPG比值也增加;B组培养基中细胞表达RANKL上升,但OPG下降,RANKL/OPG比值下降;C组培养基中RANKL上升,但对RANKL/OPG无明显影响。结论 rh IL-1α、1,25-(OH)2D3对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG有较大影响,且rh IL-1α、1,25-(OH)2D3联合使用时对RANKL起到了协同作用。值得临床进一步探究。

rhIL-1α与1,25-(OH)_2D_3联合作用对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG的影响

目的:研究rhIL-1α与1,25-(OH)2D3联合作用对HPDLFs表达RANKL和OPG的影响,探讨牙槽骨改建的调节机制。方法:10μg/L rhIL-1α与1×10-8 mol/L1,25-(OH)2D3联合作用于体外培养的HPDLFs,于48h后收集细胞,利用荧光定量RT-PCR技术检测RANKL mRNA和OPG mRNA的表达,探讨RANKL/OPG比值的变化。结果:rhIL-1α和1,25-(OH)2D3都调节HPDLFs表达RANKL和OPG。rhIL-1α单独作用上调HPDLFs表达RANKL和OPG,增加RANKL/OPG比值(P<0.05);1,25-(OH)2D3单独作用则上调表达RANKL,下调表达OPG,增加RANKL/OPG比值(P<0.05)。这2种调节因子联合作用对HPDLFs RANKL表达有协同作用,但对RANKL/OPG比值的影响无协同效应。结论:rhIL-1α和1,25-(OH)2D3都通过RANKL-OPG途径调节HPDLFs参与牙槽骨改建,2种调节因子联合作用对RANKL表达的影响明显优于单因素诱导效果,但对RANKL/OPG比值的影响并没有产生协同效应或累加效应。

利用薯蓣皂甙元完整骨架形式合成1α,25-二羟基维生素D_3

首次利用薯蓣皂甙元的完整骨架经16步反应以7.6%的总收率合成了骨化三醇(1α,25-二羟基维生素D3)的光化反应前体.3-苄基保护的薯蓣皂甙元经还原开E/F环产生3,16,26-胆甾三醇-3-苄醚(5).除去化合物5C-16羟基后,其C-26羟基经消除和羟基化反应转移到C-25位.目标分子A/B环结构单元通过薯蓣皂甙元A/B环的官能团转化被构筑.按照已知的光化反应,(1S,3R)-胆甾-5,7-二烯-1,3,25-三醇能被转化成为1α,25-二羟基维生素D3.

1α,25(OH)_2D_3通过阻滞细胞周期抑制胃癌细胞系增殖

目的研究1α,25(OH)2D3对胃癌细胞增殖和细胞周期的影响,并探讨其相关的作用机制。方法 BGC-823和SGC-7901胃癌细胞系分别给予终浓度为1×10-10～1×10-7mol/L的1α,25(OH)2D3处理72 h,用MTT法检测细胞抑制率;用流式细胞仪检测细胞周期;用RT-qPCR技术检测细胞周期相关基因P21、cyclin D1、cyclin E1和CDK6 mRNA表达。结果 1α,25(OH)2D3对胃癌细胞的增殖抑制率具有浓度依赖性,1α,25(OH)2D3干预导致BGC-823和SGC-7901细胞系G1期细胞比例升高,S期细胞比例降低(P<0.05);1α,25(OH)2D3干预后,BGC-823和SGC-7901胃癌细胞P21 mRNA表达升高(P<0.01),而cyclin D1、cyclin E1和CDK6 mRNA表达降低(P<0.01)。结论 1α,25(OH)2D3抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞,可能与上调P21,下调cyclin D1、cyclin E1和CDK6的表达有关。

肉鸡日粮中1α-羟基维生素D_3与25-羟基维生素D_3生物学效价比较研究

本试验比较了肉鸡日粮中1α-羟基维生素D_3（1α-OH-D_3）与25-羟基维生素D_3（25-OH-D_3）生物学效价。将300只1日龄罗斯308肉鸡公雏随机分为6个处理,每个处理5个重复,每个重复10只鸡。设计6种日粮,即在相同的基础日粮中分别添加2.5、5.0和10.0μg/kg 25-OH-D_3和1.25、2.5和5.0μg/kg 1α-OH-D_3,斜率比法测定1α-OH-D_3与25-OH-D_3的相对生物学效价。结果显示,日粮中添加1α-OH-D_3和25-OH-D_3可改善肉鸡平均体增重、料重比及血浆磷浓度,显著增加胫骨和股骨重量、长度和灰分重量（P〈0.05）,而对骨骼钙和磷含量无显著影响（P〉0.05）。以1~42日龄肉鸡平均体增重、料重比和血浆磷浓度评价,1α-OH-D_3生物学效价分别是25-OH-D_3的2.16、2.56和2.77倍;以42日龄肉鸡胫骨重量、长度、宽度和灰分重量评价,1α-OH-D_3生物学效价是25-OH-D_3的1.80、1.88、2.42和2.04倍;以42日龄肉鸡股骨重量、长度和灰分重量评价,1α-OH-D_3生物学效价是25-OH-D_3的1.89、1.98和2.18倍。试验表明,以1~42日龄肉鸡生长性能和骨骼矿化指标评价,1α-OH-D_3生物学效价约为25-OH-D_3的2.17倍。

1α,25-二羟基维生素D3通过表皮生长因子受体和细胞周期调节卵巢癌细胞的生长

目的:研究1α,25-二羟基维生素D3(1,25VD3)通过对表皮生长因子受体和细胞周期的调控调节人卵巢癌细胞的生长。方法:用1,25VD3处理人卵巢癌细胞株OVCAR3后,MTT法测定细胞生长情况,流式细胞仪分析细胞周期,Western blot检测EGFR表达。用pcDNA3-EGFRvIII质粒转染OVCAR3细胞,筛选出稳定过表达EGFR的克隆株EGFR-OVCAR3。用1,25VD3及EGFR抑制剂分别处理OVCAR3和EGFR-OVCAR3细胞,Western blot检测p27、Cyclin E和GADD45蛋白表达。结果:1,25VD3下调OVCAR3细胞EG-FR蛋白表达,对细胞生长有明显抑制作用,使其G0/G1和G2/M期增多,S期明显减少,而对EGFR-OVCAR3细胞无明显作用。Western blot显示,1,25VD3上调OVCAR3细胞p27和GADD45蛋白表达,下调Cyclin E蛋白表达,而对EGFR-OVCAR3细胞三种蛋白表达无调节作用,用EGFR抑制剂处理EGFR-OVCAR3细胞后,又能调节p27和cyclin E蛋白的表达。结论:1,25VD3可以调节EGFR蛋白表达,并进而调节下游分子,包括p27和GADD45,最后调控细胞周期,抑制细胞G1/S期转换和G2/M期转换,从而抑制卵巢癌细胞的生长。

1α,25-二羟基维生素D3抑制人结肠癌细胞系SW480中β-catenin转录活性

目的探讨1α,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对人结肠癌细胞系SW480中β-catenin转录活性的影响及作用机制。方法1,25(OH)2D3(100 nmol/L)干预和溶剂对照处理SW480细胞48 h;用双荧光素酶报告系统检测β-catenin的转录活性;Western blot检测1,25(OH)2D3干预后β-catenin在细胞核/质内的定位变化;用RT-qPCR和Western blot检测β-catenin和FOXM1 mRNA及蛋白水平。采用siRNA敲降SW480细胞中FOXM1后,检测1,25(OH)2D3干预后β-catenin转录活性的变化。结果1)在SW480细胞中,1,25(OH)2D3能显著降低β-catenin的转录活性(P<0.05),但不影响β-catenin mRNA和蛋白表达水平;2)1,25(OH)2D3上调SW480细胞中FOXM1蛋白水平的表达(P<0.05);3)敲降SW480细胞中FOXM1降低1,25(OH)2D3对β-catenin转录活性的抑制作用(P<0.05)。结论1,25(OH)2D3通过上调FOXM1的表达,发挥抑制β-catenin转录活性的作用。

1α,25-二羟维生素D_3对体外培养人输卵管上皮细胞VDR、CaBP-D28k表达的影响

目的:探讨1α,25-二羟维生素D3[1α,25-(OH)2D3]对体外培养人输卵管上皮细胞活性及细胞维生素D受体(VDR)、钙结合蛋白calbindin-D28k(CaBP-D28k)表达的影响。方法:以不同浓度(0,10-10,10-9,10-8,10-7mol/L)1α,25-(OH)2D3处理体外培养人输卵管壶腹部上皮细胞,分别于不同时间收集细胞。应用溴化四唑蓝比色法检测细胞活性,逆转录聚合酶链反应法、免疫印迹法检测细胞VDR、CaBP-D28k mRNA及其蛋白表达。结果:1α,25-(OH)2D3对体外培养人输卵管上皮细胞增殖无影响。以不同浓度1α,25-(OH)2D3处理细胞12 h,与对照组比较,10-7mol/L 1α,25-(OH)2D3组细胞VDR、CaBP-D28k mRNA表达显著增加(P均<0.05)。以10-7mol/L1α,25-(OH)2D3处理细胞不同时间,与对照组比较,处理6h,12h后细胞VDR、CaBP-D28k mRNA表达显著增加(P均<0.05);处理24h,48h后细胞VDR、CaBP-D28k蛋白表达显著增加(P均<0.05)。结论:在体外培养条件下,1α,25-(OH)2D3不影响人输卵管上皮细胞增殖,1α,25-(OH)2D3可能通过VDR上调人输卵管上皮细胞CaBP-D28k的表达。

孕鼠补充1α,25-二羟维生素D3水平对仔鼠变应性气道炎症的影响

目的观察孕鼠在孕期补充不同浓度1α,25-二羟维生素D3后，相应仔鼠经卵蛋白致敏与激发后变应性气道炎症的差异，探讨孕期孕鼠1α,25-二羟维生素D3（VitD3）水平对子代幼鼠气道变应性气道炎症的影响。方法30只8周龄BALB/c小鼠按雌雄比例2∶1分笼饲养，采用随机数字表法分为5组：空白组，哮喘组，50、100、150 ng 1α,25-二羟维生素D3组（50、100、150 ng组），每组6只。阴栓出现表明受孕，记为D0。50、100、150 ng组孕鼠从D0起隔日于皮下注射相应剂量1α,25-二羟维生素D3 0.1 mL。空白组、哮喘组孕鼠从受孕当天隔日于皮下注射生理盐水0.1 mL。孕鼠产仔后，从各组雌仔鼠中随机选取6只致敏/激发。仔鼠5周龄时哮喘组、50 ng组、100 ng组、150 ng组分别于D0和D2腹腔注射卵清白蛋白（ovalbumin，OVA）0.05 mg＋氢氧化铝5 μg（0.5 mL），D7～12将致敏小鼠置于密闭容器中，用1%的OVA溶液15 mL超声雾化激发，每天1次，每次30 min。末次激发后24 h处理各组仔鼠，采用HE染色法观察肺组织病理变化，单盲法检测支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中细胞总数及分类，ELISA法检测BALF中IL-4、IL-5、IFN-γ水平和血清IgE水平。结果50、100、150 ng组仔鼠变应性气道炎症较哮喘组明显减轻。与哮喘组相比，50、100、150 ng组仔鼠BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞（eosinophil，EOS）均明显减少（P〈0.05），且随VitD3剂量增加而减少，呈剂量依赖性，各组间差异有统计学意义（P〈0.05）；BALF中IL-4、IL-5水平明显下降（P〈0.05），且随VitD3剂量增加而减少，呈剂量依赖性，各组间差异有统计学意义（P〈0.05）；而IFN-γ水平明显增高，且随VitD3剂量增加而增加，呈剂量依赖性，各组间差异有统计学意义（P〈0.05）；血清中IgE水平明显下降（P〈0.05），且随VitD3剂量增加而减少，呈剂量依赖性，各组间差异有统计学意义（P〈0.05）。结论孕鼠补充VitD3可以明显减轻仔鼠变应性气道炎症，该作用呈剂量依赖性。

1α,25-二羟基维生素D_3对绒毛膜癌细胞株JAR的影响及其机制

目的:研究生物制剂1α,25-二羟基维生素D3(calcitriol)对绒毛膜癌细胞株JAR的影响,探讨其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度(10-8、10-7、10-6mol/L)calcitriol在不同的时间点(1天、3天、6天)对JAR细胞增殖的影响;流式细胞仪检测calcitriol对JAR细胞周期的影响;RT-PCR检测维生素D受体(VDR)mRNA水平的表达;Western blot检测VDR蛋白表达。结果:MTT比色法检测10-6mol/Lcalcitriol作用JAR细胞3天,10-7、10-6mol/L calcitriol作用6天抑制率分别为(22.74±12.08)%(P<0.05),(29.64±8.66)%(P<0.01),(49.74±17.42)%(P<0.01),呈明显的时间-剂量效应关系。calcitriol作用JAR细胞的半数抑制浓度(IC50)组与对照组比较,细胞周期G1期细胞比例从39.78%增至59.81%(P<0.01),S期细胞数百分比从54.6%减至33.08%(P<0.01)。calcitriol上调JAR细胞的VDR mRNA及蛋白表达水平。结论:calcitriol能明显抑制绒毛膜癌细胞株JAR增殖,并诱导JAR分化,其作用机制与calcitriol上调VDR mRNA,进而增加VDR蛋白的表达有关。

1α,25-双羟维生素D_3作用于靶细胞的机制

1α,2 5-双羟维生素 D3 [1 α,2 5(OH) 2 D3 ]作用于靶细胞后产生 2种不同的信号传导系统 :基因效应和非基因效应。前者是指 1α,2 5(OH) 2 D3 与维生素 D核受体 (n VDR)结合 ,n VDR再与视黄酸 X受体 (RXR)发生异二聚化反应 ,在转录因子 (TF)的作用下 ,促使靶基因转录。后者是指 1 α,2 5(OH) 2 D3 与维生素 D膜受体 (m VDR)结合 ,随之引发一系列信号传导 ,促使细胞膜上的 Ca2 +-通道迅速打开。探讨 1α,2 5(OH) 2 D3 的作用机制有利于开发治疗维生素 D内分泌系统疾病的新药。本文就目前有关 1 α,2 5(OH) 2 D3 作用于靶细胞的机制的研究成果进行综述。

1α,25-二羟基维生素D3对高糖刺激下大鼠肾小管上皮细胞CTGF表达的影响及其机制

目的探讨1α,25-二羟基维生素D3对高糖刺激下大鼠肾小管上皮细胞中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响及其机制。方法将大鼠肾小管上皮细胞NRK52E传代培养。将传代培养后的细胞按是否加入干预剂分为3组:正常对照(A)组(D-葡萄糖6μmol·L^(-1))、高糖(B)组(D-葡萄糖30μmol·L^(-1))和1α,25-二羟基维生素D3干预(C)组(1α,25-二羟基维生素D3 5nmol·L^(-1),预处理1h,再给予D-葡萄糖30μmol·L^(-1))。3组干预后再进行培养。将培养后的3组细胞按培养时间的不同分为3个亚组:Aa 12、24、48h3组,Bb 12、24、48h3组和Cc 12、24、48h3组。采用Real-time PCR检测各组CTGF mRNA的表达水平,采用Western blot检测各组CTGF蛋白、β-catenin蛋白的表达水平。结果与Aa 24h组比较,Bb 24h组CTGF mRNA、CTGF蛋白、β-catenin蛋白表达水平均升高(均P<0.01);与Bb 24h组比较,Cc 24h组CTGF mRNA、CTGF蛋白、β-catenin蛋白表达水平均降低(均P<0.01)。结论在高糖体外培养的大鼠肾小管上皮细胞中1α,25-二羟维生素D3能够显著降低高糖刺激的CTGF表达水平,其机制可能是阻断Wnt/β-catenin信号通路来实现的。

1α,25-二羟维生素D_3的免疫抑制作用

1α, 25 二羟维生素D3 [1α, 25 (OH)2D3 ]是主要调节钙磷代谢的激素,近年来它的免疫抑制作用已受到医学界的广泛关注,其作用主要在于影响免疫细胞的功能和对细胞因子分泌的影响。本文就1α, 25(OH)2D3 的免疫调节作用及其应用作一综述。

1α,25-二羟维生素D_3对早期角膜移植小鼠Th17细胞的免疫调控作用

目的:观察在同种异体角膜移植的小鼠模型中,1α,25-二羟维生素D3对Th17细胞及其相关细胞因子的影响。方法:C57BL/6小鼠作为受体,BALB/c小鼠作为供体,建立小鼠穿透性角膜移植术模型。术后隔日对角膜移植小鼠腹腔注射1.0μg 1α,25二羟维生素D3(维生素D3干预组),模型组和正常对照组腹腔注射等量大豆油。在裂隙灯活组织镜下观察角膜移植物的透明情况,评估排斥反应的发生情况,并取角膜移植物做病理学检测。采用实时荧光定量PCR检测脾脏中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平,Western blotting分析外周血中RORγt及IL-17的蛋白含量,流式细胞术检测外周血IL-17和IFN-γ细胞因子的表达情况。结果:1α,25-二羟维生素D3显著地抑制了同种异体角膜移植排斥反应,同时减少了角膜移植物的炎性渗出。应用1α,25-二羟维生素D3治疗后,小鼠脾脏中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平降低;外周血中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平被下调。结论:1α,25-二羟维生素D3抑制小鼠同种异体角膜排斥反应的作用与IL-17及相关细胞因子RORγt细胞调节密切相关。

2型糖尿病患者TLRs的表达以及1α,25-二羟维生素D_3的干预作用

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)患者外周血单个核细胞上果蝇样受体(TLRs)的表达以及1α,25-二羟维生素D3对TLRs表达的干预作用。方法:30例T2DM患者[其中伴有动脉粥样硬化(AS)者15例]和15名健康志愿者均抽取外周血,采用Ficol密度梯度离心法提取外周血单个核细胞(PBMCs),在不加或加入不同浓度1α,25-二羟维生素D3(10-8 mol/L、10-9 mol/L、10-10 mol/L)的情况下孵育48 h后,收集培养细胞,分别用流式细胞仪和定量RT-PCR检测细胞TLR2、TLR4表达水平。结果:与健康对照组相比,T2DM组PBMCs上TLR4水平增高,尤以伴有AS组明显,各组间TLR2表达差异无统计学意义。加入不同浓度1α,25-二羟维生素D3后,各组TLR4水平均有不同程度的下降,并呈现一定的剂量依赖性。结论:T2DM及其AS可能与TLR4水平增高有关;1α,25-二羟维生素D3能抑制体外培养的T2DM患者PBMCs TLR4的表达。

1α,25-二羟维生素D3通过上调MiR-146a表达抑制肝星状细胞活化

背景:1α,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]是维生素D在体内的最终活性形式,研究显示其具有一定的抗肝纤维化作用,但具体作用机制尚未完全明确。研究发现有多个微RNAs(miRNAs)参与了肝星状细胞(HSC)的增殖、活化,可促进或抑制肝纤维化发生、发展。目的:探讨1,25(OH)2D3是否可通过调控miRNAs表达而抑制HSC活化。方法:通过文献检索和q PCR技术筛选在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导激活的HSC与未活化HSC之间明显差异表达的miRNAs。分别以差异表达miRNA mimic、阴性对照mimic、1,25(OH)2D3和DMSO与TGF-β1共同干预HSC,采用CCK-8实验和流式细胞术检测细胞活力和细胞凋亡情况。结果:筛选显示miR-146a在活化HSC中的表达显著下调(P<0.05)。与DMSO对照组相比,1,25(OH)2D3治疗组HSC中的miR-146a表达和细胞凋亡率显著增高,细胞存活率显著降低(P均<0.05)。MiR-146a mimic转染组与阴性对照mimic转染组相比亦表现为miR-146a表达和细胞凋亡率显著增高,细胞存活率显著降低(P均<0.05)。结论:1,25(OH)2D3调控miR-146a表达可能是其抑制TGF-β1诱导的HSC活化、促进细胞凋亡的重要机制之一。