缺氧诱导因子-1α基因G1790A多态性与慢性牙周炎易感性分析

目的 了解深圳地区不同分度慢性牙周炎(CP)患者缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、25-羟基维生素D[25-(OH)VitD]水平及HIF-1α基因(HIF-1α)G1790A位点多态性,并探讨其与牙周临床指标的相关性。方法 选择2020年3月至2022年5月CP确诊者137例(CP组),其中男性81例,年龄16~58岁,平均年龄31.89岁;女性56例,年龄17~56岁,平均年龄32.04岁;疾病程度,轻度79例,中度31例,重度27例。同期非CP健康体检人群115例(对照组),其中男性69例,年龄15~57岁,平均年龄30.28岁;女性46例,年龄16~59岁,平均年龄32.86岁。采用酶联免疫吸附分析法检测HIF-1α和VEGF水平,并运用C8000化学发光分析仪检测25-(OH)VitD水平,同时采用限制性片段长度多态性-聚合酶链式反应分析HIF-1α G1790A位点多态性。结果 CP组HIF-1α、VEGF水平(31.37 pg/mL±7.56 pg/mL,102.35 pg/mL±29.68 pg/mL)明显高于对照组(5.62 pg/mL±1.32 pg/mL,37.06 pg/mL±9.21 pg/mL),而25-(OH)VitD水平(23.54 mmol/L±7.82 mmol/L)明显低于对照组(48.09 mmol/L±5.76 mmol/L),差异有统计学意义(P <0.05)。HIF-1α、VEGF水平重度(79.49 pg/mL±7.58 pg/mL,203.95 pg/mL±26.34 pg/mL)>中度(32.50 pg/mL±3.17 pg/mL,103.64 pg/mL±20.78 pg/mL)>轻度(14.48 pg/mL±2.95 pg/mL,67.12 pg/mL±18.59 pg/mL),而25-(OH)VitD水平重度(7.65 mmol/L±4.02 mmol/L)<中度(18.09 mmol/L±8.35 mmol/L)<轻度(31.11 mmol/L±6.37 mmol/L),差异有显著统计学意义(P <0.001)。牙周袋深度(PD)、附着丧失(AL)、出血指数(BI)及菌斑指数(PLI)值重度>中度>轻度,差异有统计学意义(P <0.05)。经Pearson相关分析,CP组HIF-1α、VEGF水平与PD、BI、AL、PLI呈正相关,而25-(OH)VitD水平呈负相关(P <0.05)。CP组AA基因型和A等位基因频率(55.47%、65.69%)明显高于对照组(21.74%、31.30%),而GG基因型和G等位基因频率(24.09%、34.31%)明显低于对照组(59.13%、68.70%),差异有统计学意义(P <0.05),但GA基因型频率差异不明显,不同分度CP患者HIF-1α G1790A位点GG、GA、AA基因型及G、A等位基因频率差异无统计学意义(P> 0.05)。AA基因型CP患者HIF-1α水平(37.82 pg/mL)明显高于GA和GG基因型(24.03 pg/mL、22.74 pg/mL),差异有统计学意义(P <0.05),但GA和GG基因型差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 CP组HIF-1α、VEGF及25-(OH)VitD水平与牙周临床指标密切相关;同时CP组HIF-1α G1790A位点呈多态性分布,其中AA基因型CP患者HIF-1α水平升高尤为突出,可能与深圳地区CP发病存在一定易感性。

清远麻鸡PGC-1α基因多态性与肉质性状的相关性分析

PGC-1α基因是影响肉品质的关键基因,因此对清远麻鸡PGC-1α基因的多态性进行了研究,希望找出对肉品质有较大影响的突变位点,为下一步进行蛋白质功能验证打下基础。利用PCR-SSCP和PCR-LDR方法找出清远麻鸡PGC-1α基因的多态性位点,将所测得的肉品质指标脂肪含量、剪切力和胸肌失水率按照不同基因型进行方差分析与多重比较,分析不同基因型对肉品质的影响。筛查出了清远麻鸡的两个多态性位点SNP1和SNP2,均为G到A的突变。其中SNP1为内含子的突变,SNP2为外显子8上的有义突变。SNP1对肉品质没有显著影响,SNP2对胸肌系水力有显著影响。母鸡的肉品质要高于公鸡的,其中剪切力指标性别之间差异极显著。至于SNP2,AG型的肉品质要好于AA型和GG型的。

基于COⅡ和EF-1α基因部分序列的中国蝶类科间系统发生关系

为了探讨中国蝶类科间系统发生关系,本文对细胞色素氧化酶Ⅱ(COⅡ)的部分序列(620bp)和延伸因子基因(EF-1α)部分序列(595bp)进行了分析(共1215bp)。其中有464个变异位点,330个简约信息位点。COⅡ基因部分序列表现出明显的A+T含量(76.3%)偏高。分别采用最大简约法(Maximum Parsimony,MP)、最大似然法(Maximum Likelihood,ML)和贝叶斯推论法(Bayesian Inference,BI)重建了分子系统树。结果表明:弄蝶科、凤蝶科、粉蝶科、灰蝶科能够单独成一支,其中弄蝶科位于系统树的基部,分化较早,是较原始的类群,与传统的形态分类结果是相一致的;粉蝶科与凤蝶科的亲缘关系较近;蚬蝶科倾向与灰蝶科有较近的亲缘关系,且蚬蝶科种群始终聚为一支,显示了该科是一个单系群,从单系性方面来看,本文支持将蚬蝶科作为一个独立的科;此外,本文结果表明,中国分布的蛱蝶总科是一单系群,并且它与灰蝶科和蚬蝶科聚成的一支是姐妹群关系。

中国黄粉蝶亚科六属间基于COⅡ和EF-1α基因部分序列的系统发育关系(鳞翅目:粉蝶科)

为了探讨中国黄粉蝶亚科属间的系统发育关系,我们对其中6属9种的细胞色素氧化酶Ⅱ(COⅡ)的部分序列和延伸因子基因(EF-1α)部分序列进行了分析。分别采用最大简约法(maximum parsimony,MP)、最大似然法(maximum likelihood,ML)和贝叶斯推论法(bayesian inference,BI)构建黄粉蝶亚科分子系统树。结果表明:在测得的COⅡ基因的648bp序列和EF-1α基因的504bp序列中,有261个变异位点,151个简约信息位点,黄粉蝶亚科内各属COⅡ基因A+T含量(77.3%)均明显偏高。系统发育分析显示黄粉蝶属为亚科中较为原始的类群,分化较早,豆粉蝶属和迁粉蝶属亲缘关系较近,但钩粉蝶属与豆粉蝶属、迁粉蝶属之间的亲缘关系还不能确定。本研究结果和传统的基于形态学的黄粉蝶亚科的分类体系有所不同,最显著的分歧是本研究支持内群中分化最早的属应为黄粉蝶属,而不是豆粉蝶属和迁粉蝶属。

2型糖尿病PGC-1α基因单核苷酸多态性筛查及Gly482Ser变异分析

对120例T2DM和106例NGT研究对象,筛查其PGC1α基因的单核苷酸多态性(SNP)时应用PCRSSCP和DNA测序法。发现了4种SNP,即394Thr→Thr,482Gly→Ser,528Thr→Thr,612Thr→Met。其中,PGC1α基因的482Gly→Ser多态性相关于T2DM的发生。

人HIF-1α基因重组腺病毒的构建与鉴定

目的构建人缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的重组腺病毒载体,并观察其对HepG2细胞的转染情况。方法采用基因工程技术,经过亚克隆将人HIF-1α基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,利用pAdEasy系统进行细菌内同源重组后,经脂质体转染HEK293细胞,进行重组腺病毒的包装、扩增。采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,进行病毒滴度的测定和对HepG2细胞感染效率的监测。结果酶切鉴定及PCR结果证明重组腺病毒载体成功,人HIF-1α重组腺病毒滴度达1.15×1010pfu/ml,阴性对照腺病毒的滴度为8×1010pfu/ml,并对HepG2细胞具有很强的感染力。结论应用细菌内同源重组法成功构建了含人HIF-1α基因的重组腺病毒载体。

PGC-1α基因在两种类型鸡骨骼肌间的表达差异

为了检测过氧化物体增殖物激活受体γ辅激活因子1-α(PGC-1α)基因mRNA在鸡骨骼肌组织中的分布以及在速生型隐性白羽鸡和慢生型清远麻鸡品种间的表达差异,采集不同周龄(0、2、4、6、8、10、12)隐性白羽鸡和清远麻鸡的胸肌和腓肠肌组织样,提取总RNA,以β-actin基因为内参基因,进行实时荧光定量PCR。对PGC-1α基因mRNA进行均一化处理,利用荧光阈值(Ct值)计算PGC-1α基因mRNA在不同骨骼肌组织以及速生型和慢生型鸡品种间的表达量。发现PGC-1α基因在鸡骨骼肌组织不同发育阶段广泛表达,在初生时表达量最高,并显著高于其他各周龄的表达量;相同周龄时,慢生型清远麻鸡骨骼肌中PGC-1α表达量大多高于速生型隐性白羽鸡。表明不同类型鸡骨骼肌PGC-1α mRNA表达具有特定的发育模式,并可能与鸡肉品质存在关联。

广西巴马小型猪PGC-1α基因克隆与组织表达分析

目的克隆广西巴马小型猪PGC-1α基因编码区(CDS)序列,利用RT-PCR和QRT-PCR方法分析PGC-1αmRNA组织表达情况。方法本实验以广西巴马小型猪背最长肌cDNA为模版,PCR扩增PGC-1α基因CDS序列,将其连接至pEASY-T5载体,转染细菌、验证和序列测定;通过RT-PCR半定量和QRT-PCR实时荧光定量检测PGC-1α基因在小型猪多个组织中的表达情况。结果克隆获得广西巴马小型猪PGC-1α基因CDS序列,全长2391 bp,编码796个氨基酸,与参考序列的同源性为99.9%,两处碱基发生同义突变,分别是C-A1105和GA1524;PGC-1α基因在广西巴马小型猪心脏和肾脏中的表达丰度最高,其次是肝脏、皮下脂肪和背最长肌,而在胰腺中未检测到其表达。结论成功克隆了广西巴马小型猪PGC-1α基因编码区序列并进行了多种组织表达分析,为后续研究PGC-1α在小型猪2型糖尿病发生过程中作用途径打下基础。

HIF-1α基因修饰神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤组织NF200和GFAP表达的影响及意义

目的探讨低氧诱导因子-1α基因(HIF-1α)修饰神经干细胞(NSC)移植治疗脊髓损伤的可行性及机制。方法将120只SD大鼠随机分为四组各30只。假手术组仅行椎板切开术;单纯损伤组(SCI组)、神经干细胞组(NSC组)、HIF-1α基因修饰NSC组(HIF-NSC组)均采用电控脊髓损伤打击装置制作脊髓损伤模型,分别于脊髓注入生理盐水、NSC悬液、HIF-NSC悬液。采用免疫组化法检测1、3、7、14及28d各组脊髓组织HIF-1α、NF200、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达。结果HIF-NSC组各时点HIF-1α表达明显高于其他各组(P均<0.01),且表达高峰延迟至移植后14d;除第1天外,NF200表达明显高于SCI组和NSC组(P<0.05),GFAP表达显著低于SCI组和NSC组(P<0.01)。结论HIF-1α基因修饰NSC移植可促进损伤脊髓神经轴突再生,减少胶质细胞的增生和胶质疤痕形成,为神经再生创造有利的微环境;其机制可能为促进HIF-1α、NF200表达,抑制GFAP表达。

HIF-1α基因沉默对人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤生长及survivin表达的影响

目的观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因沉默对肺癌的抑瘤效应和survivin表达的影响。方法将实验用肺腺癌A549细胞分为空白对照组、无意义序列转染组和实验组,接种裸鼠,建立裸鼠荷瘤模型,观测HIF-1α-MiRNA对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用和对survivin表达的影响。采用免疫组化SP法,检测HIF-1α和survivin蛋白在裸鼠移植瘤中的表达。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HIF-1α和survivin mRNA的表达。采用原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤组织中细胞凋亡。结果实验组裸鼠肿瘤的生长速度较空白对照组、无意义序列转染组明显减慢(P<0.05)。接种60 d后处死裸鼠,实验组裸鼠的肿瘤重量为(0.59±0.28)g,明显轻于空白对照组[(1.90±0.18)g]和无意义序列转染组[(1.66±0.24)g,P<0.01]。实验组肿瘤组织中HIF-1αmRNA和蛋白的相对表达量分别为(0.45±0.04)%和(24.56±5.83)%,survivin mRNA和蛋白的相对表达量分别为(0.32±0.02)%和(29.08±3.99)%,均明显低于空白对照组、无意义序列转染组(P均<0.05)。但实验组肿瘤组织中凋亡细胞的数量显著高于对照组。结论以HIF-1α为靶点的基因治疗,可能通过下调靶基因survivin的表达促进肺癌细胞凋亡,发挥抑制肿瘤生长的作用。

加味四君子汤对lewis肺癌小鼠缺氧诱导因子-1α基因CXC型趋化因子受体4基因及D-木糖的影响

目的探讨加味四君子汤对肺癌小鼠可能作用机制及肺癌对小鼠消化系统的影响。方法建立小鼠Lewis肺癌模型,模型成功建立后,加味四君子汤灌胃14 d,第15天脱颈椎处死小鼠,取肿瘤组织采用Realtime PCR方法检测缺氧诱导因子-1α基因(HIF-1α)、CXC型趋化因子受体4基因(CXCR4)的表达;取血清采用间苯三酚法检测D-木糖。结果加味四君子汤干预lewis肺癌小鼠后,肺癌健脾组与肺癌组的HIF-1α、CXCR4mRNA有统计学意义(P<0.01);肺癌组和肺癌健脾组与正常组相比均有统计学意义(P<0.01)。结论加味四君子汤对肺癌有抑制作用,肺癌能降低小鼠消化吸收功能。

PGC-1α基因Gly482Ser多态性与广西地区汉族人群妊娠期糖尿病的相关性分析

目的探讨过氧化物酶增殖物激活受体-γ辅助激活因子-1α(PGC-1α)基因Gly482Ser的多态性与广西地区汉族人群妊娠期糖尿病(GDM)的关系。方法研究对象为我院产科住院分娩的234例孕妇,其中GDM患者84例(病例组),糖耐量正常者150例(对照组)。采用PCR-RFLP法检测两组PGC-1α基因Gly482Ser多态性,并分析其与GDM的相关性。结果两组PGC-1α基因Gly482Ser的基因型频率及等位基因分布均无统计学差异。结论PGC-1α基因Gly482Ser多态性与广西汉族地区汉族人群GDM的发病无明显相关性。

藏羊HIF-1α基因CDS区多态性及生物信息学分析

应用DNA混池测序法检测藏羊HIF-1α基因CDS区的多态性,并采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构等方面进行预测和分析。结果表明,在藏羊群体中发现HIF-1α基因CDS区有4个SNP,其中901G→A为错义突变,其余为同义突变;HIF-1α基因包含1个2 295 bp的开放阅读框,编码764个氨基酸,其编码蛋白属于亲水性蛋白;二级结构主要以无规则卷曲和α基因螺旋为主;HIF-1α基因编码产物氨基酸同源分析表明,藏羊HIF-1α编码的氨基酸与山羊、牦牛的遗传距离较近,具有高度同源性。

新生儿PGC-1α基因Gly482Ser多态性与产妇妊娠期糖尿病的关系

目的：探讨新生儿过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α（PGC-1α）基因Gly482Ser多态性与妊娠期糖尿病（GDM）的关系。方法：选取在我院住院的50例GDM产妇分娩的新生儿作为实验组以及50例正常产妇分娩的新生儿作为对照组,采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术,检测新生儿PGC-1α基因Gly482Ser多态性情况以及该多态性与产妇GDM的关系。结果：（1）实验组与对照组新生儿PGC-1α基因Gly482Ser多态性及等位基因的分布情况比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。（2）分娩GG基因型或GA基因型新生儿的产妇患GDM的风险是分娩新生儿为AA基因型的产妇的3.20倍（95%CI=1.172~8.735）。结论：尚不能表明GDM产妇所分娩新生儿的PGC-1α基因Gly482Ser多态性与正常产妇分娩的新生儿有差异,但通过研究发现新生儿的PGC-1α基因型为AA可能是产妇患GDM的保护因素之一。

HNF-1α基因突变致MODY3型糖尿病1家系报道及文献复习

先证者,男,12岁,因多饮、多尿3个月,体质量减轻2个月于2019年2月入院。3个月前出现多饮(3000 ml/d)、多尿、消瘦(2个月内消瘦3 kg),自测空腹血糖10 mmol/L,餐后2 h血糖18 mmol/L,否认“糖尿病酮症酸中毒”发生。既往体健。患者为第一胎第一产,足月顺产,母孕期平顺,无特殊药物使用史,孕期未监测血糖,未行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)筛查。

肝细胞核因子-1α基因A1a98 Val变异与中国汉族迟发型2型糖尿病的关系

目的 :探讨肝细胞核因子 1α(HNF 1α)基因外显子 1Ala98Val变异是否与中国汉族迟发型 2型糖尿病相关。方法 :选择中国汉族 15 0例迟发型 2型糖尿病患者及 15 5例正常对照者 ,应用聚合酶链反应———限制性片段长度多态 (PCR SSCP)及直接测序法检测Ala98Val变异。结果 :受检者均不存在Ala98Val变异。结论 :Ala98Val变异不是引起中国汉族迟发型 2型糖尿病的重要遗传因素。

siRNA沉默HIF-1α基因对人卵巢癌细胞SKOV3/DDP耐药的影响

卵巢癌的治疗主要以手术与化疗相结合,化疗在其治疗中占据重要位置,而耐药的产生往往成为临床治疗的障碍。研究表明缺氧诱导因子-1α表达与肿瘤的耐药密切相关[1],应用抑制HIF-1α的表达可增加乏氧肿瘤细胞系对依托泊甙的化疗敏感性[2]。

PGC-1α基因Gly482Ser多态性与2型糖尿病的相关性研究

目的了解云南省昆明地区PGC-1α基因Gly482Ser多态性与2型糖尿病的相关性.方法采集430例2型糖尿病患者(T2DM)和431例OGTT正常的健康志愿者(NGT)的血样,提取基因组DNA.应用高分辨率熔解曲线方法 (HRM)分析PGC-1α基因Gly482Ser基因型,观察T2DM人群中基因型和等位基因的分布情况.结果 PGC-1α基因Gly482Ser AA基因型及G等位基因在T2DM组中的频率分别为0.209和0.587,在NGT组中为0.139和0.651,2组之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 PGC-1α基因Gly482Ser多态性与云南省昆明地区2型糖尿病相关.

高原鼠兔HIF-1α基因真核表达载体的构建及细胞表达和定位

利用PCR从克隆质粒PMD18-T-pHIF-1α中扩增鼠兔HIF-1α;构建重组质粒pcDNA3.0/6Xmyc-p HIF-1α,用重组质粒转染HEK-293T,HeLa和COS-7细胞,通过免疫印迹分析,检测HIF-1α表达蛋白在细胞中的分布。EcoRI和XhoⅠ酶切鉴定和序列分析表明,构建的pcDNA3.0/6Xmyc-pHIF-1α真核表达载体序列正确;HIF-1α在真核细胞中能够正确表达,且其表达产物主要存在于细胞核中。