急性缺血再灌注大鼠脑中γ-氨基丁酸A型受体α1 mRNA的表达变化

目的观察大鼠脑组织中GABAARα1mRNA在脑缺血再灌注不同时段的表达及动态变化规律,探讨其在脑缺血再灌注损伤中的意义。方法55只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、脑缺血2h再灌注6h、12h、24h、3d、7d组(手术组),及其相应的假手术对照组,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,至上述规定时间点后取大脑组织,利用地高辛标记寡聚核苷酸探针原位杂交技术与计算机分析系统在光学显微镜下观察GABAARα1mRNA分别在相应海马区及大脑皮质阳性神经元的表达情况,以及相应海马区及大脑皮质的病理变化。结果假手术组GABAARα1mRNA表达同正常对照组相比没有明显改变。而各手术组GABAARα1 mRNA表达在脑缺血2h再灌注24h开始下降,3d下降显著,7d恢复正常。结论GABAARα1 mRNA在急性脑缺血再灌注时含量降低可能为脑缺血再灌注损伤的重要原因。

X染色体上脆性X智力低下基因1敲除模型小鼠针刺长强穴学习记忆及海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达的影响

背景:X染色体上脆性X智力低下基因1敲除小鼠海马区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达低于野生型小鼠。目的:观察针刺长强穴对X染色体上脆性X智力低下基因1敲除小鼠学习记忆及海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达的影响。方法:采用X染色体上脆性X智力低下基因1敲除纯合子小鼠雌雄各5只,一雌一雄合笼饲养。所繁殖幼鼠经基因型鉴定为X染色体上脆性X智力低下基因1敲除纯合子小鼠者,随机分为模型组、长强组、非穴组,各10只,另取野生型小鼠10只作为空白组。长强组小鼠采用平补平泻,行提插手法针刺长强穴1 min,频率160-200次/min,1次/d,连续治疗10 d;非穴组刺激小鼠右肋弓最低点上1 cm处;模型组及空白组每日只进行模拟抓取。结果与结论:与空白组相比,模型组小鼠水迷宫逃避潜伏期明显延长(P<0.05);而与模型组相比,长强组小鼠水迷宫逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达率增加(P<0.05);而非穴组小鼠水迷宫逃避潜伏期及海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基表达率与模型组接近(P>0.05)。且针刺X染色体上脆性X智力低下基因1敲除小鼠长强穴后其海马CA1区γ-氨基丁酸A型受体α1亚基阳性细胞率与逃避潜伏期呈负相关(r=-0.554,P=0.001)。提示针刺长强穴可改善X染色体上脆性X智力低下基因1敲除小鼠的学习记忆能力,上调γ-氨基丁酸A型受体α1亚基在海马CA1区的表达。

A型γ-氨基丁酸受体α1亚基Cys^(166)-Leu^(296)片段的配体结合和结构性质

研究A型γ 氨基丁酸受体 (γ aminobutyricacidtypeA ,GABAAreceptor)α1亚基Cys166 Leu2 96片段的苯并二氮杂 (benzodiazepine ,BZ)结合位点及其结构特性 ,了解该片段结构与功能的关系 .利用PfuDNA多聚酶依赖的点突变技术将该片段的每一残基用丙氨酸替代 ,通过E .coli体系过表达 ,纯化得到各种突变蛋白 .运用圆二色性 (circulardichroism ,CD)技术测定突变蛋白的二级结构 ,借助荧光各向异性 (fluorescenceanisotropy ,FA)、荧光共振能量转移 (fluorescenceresonanceenergytrans fer,FRET)技术测定其与BZ荧光配基Bodipy FLRo 1986 (BFR)的结合强弱 .通过与野生型的比较 ,确定其残基是否与结构和或结合相关 .结果显示 ,突变体R191A、G2 12A、S2 13A、R2 14A及V2 79A的结合能力减弱 2～ 3倍 ,除V2 79A显著增加α螺旋外均无二级结构的改变 .E193A、S2 78A、V2 79A和P2 80A的α螺旋显著增多 ,N2 75A和R2 76A的α螺旋则显著减少 .推测Cys166 Leu2 96的Arg191,Gly2 12 ,Ser2 13 和Arg2 14 可能位于BZ的结合袋 ,其第 4个环区 (Glu2 10 Asn2 16)与结合密切相关 .Glu193 、Ser2 78和Pro2 80 参与维持β折叠结构 ,而Asn2 75和Arg2 76参与维持α螺旋结构 .Cys166 Leu2 96的第 9个环区 (Asn2 75 Pro2 80 )对其结?

γ-氨基丁酸B1型受体对紫杉醇诱发神经痛大鼠背根神经节/脊髓背角核因子-κB通路的调控作用

目的 通过鞘内给予不同药物，观察γ-氨基丁酸B（GABAB）受体对紫杉醇诱发神经痛大鼠背根神经节（DRG）/脊髓背角核因子-κB（NF-κB）通路的调控作用。 方法 清洁级SD雄性大鼠（体重160～180 g），腹腔注射紫杉醇制备大鼠紫杉醇诱发神经痛模型，取模型制备成功的40只大鼠，采用随机数字表法，根据鞘内给药不同分为4组（n＝10）：紫杉醇组（P组）：生理盐水10 μl；巴氯芬（Baclofen）组（B组）：Baclofen 0.5 μg/10 μl；Saclofen（S组）：Saclofen 30 μg/10 μl；SN50组（SN）组：SN50 200 ng/10 μl。另取10只同周龄正常大鼠腹腔注射等体积溶剂并鞘内注射生理盐水10 μl作为对照组（C组）。5组大鼠分别于腹腔给药前1 d（T1）、鞘内给药前1 d（T2）、鞘内给药后120 min（T3）测定大鼠50%机械缩足阈值（PWT），然后快速取腰段DRG和脊髓背角，采用分子生物学方法测定GABAB1受体、NF-κBp65及炎性因子白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达变化。 结果 与T1比较，除C组外其余各组T2时点的PWT均明显降低（P、B、A、SN组P值分别为0.001、0.000、0.000、0.000）；与T2比较，T3时点B、SN组的PWT升高（B/SN组P值分别为0.003、0.002），而S组PWT降低（P＝0.007）。P组脊髓背角GABAB1受体的mRNA（0.59±0.06）和蛋白（0.42±0.05）与C组的mRNA（0.89±0.05）和蛋白（0.66±0.02）比较表达下调（P＝0.000、0.000），而DRG中GABAB1受体的mRNA（1.31±0.12）和蛋白（0.37±0.02）与C组的mRNA（0.95±0.07）和蛋白（0.28±0.04）比较则表达上调（P＝0.000、0.003）；与C组比较，P组的NF-κBp65、IL-1β和TNF-α的mRNA及蛋白在脊髓背角和DRG上均表达上调（mRNA：P＝0.000、0.001、0.000、0.000、0.000、0.000，蛋白：P＝0.004、0.000、0.000、0.000、0.000、0.000）。与P组比较，B组GABAB1受体mRNA及蛋白表达在脊髓背角（1.01±0.08比0.59±0.06；0.50±0.03比0.42±0.05）与DRG（1.60±0.10比1.31±0.12; 0.50±0.03比0.37±0.02）一致上调（mRNA：P＝0.000、0.000，蛋白：P＝0.004、0.000），而NF-κBp65、IL-1β及TNF-α的mRNA及蛋白均表达下调（mRNA：P＝0.000、0.000、0.000、0.000、0.001、0.000，蛋白：P＝0.000、0.001、0.000、0.000、0.000 、0.000）；S组和B组的GABAB1受体及上述细胞因子表达则正好相反；在SN组的脊髓背角和DRG中，随着NF-κBp65、IL-1β及TNF-α的mRNA和蛋白表达下调（mRNA：P＝0.000、0.000、0.000、0.000、0.000、0.000，蛋白：P＝0.000、0.000、0.000、0.000、0.000、0.000），GABAB1受体mRNA（0.36±0.03比0.59±0.06；0.34±0.03比1.31±0.12）和蛋白（0.29±0.01比0.42±0.05；0.28±0.03比0.37±0.02）表达也明显下调（mRNA：P＝0.000、0.000，蛋白：P＝0.000、0.003）。 结论 激活紫杉醇诱发神经痛大鼠脊髓背角内GABAB受体，或阻断NF-κB通路，均可通过下调DRG和脊髓背角中NF-κB及下游炎性因子表达，缓解神经痛，NF-κB在其中发挥关键作用。

GA_BABR1基因多态性与OSAHS合并高血压的相关性研究

目的探讨云南汉族人γ-氨基丁酸B1型受(GABABR1)Phe658Phe基因多态性与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(0SAHS)合并高血压的相关性.方法以24例重度0SAHS患者(其中12例血压正常,12例高血压)、12例原发性高血压及12例正常对照组为研究对象,用聚合酶链反应(PCR)及限制性内切酶酶切法检测GABABR1 Phe658Phe的基因多态性.结果四组基因型及等位基因频率分布差异均无统计学意义(P>0.05).男女性别之间基因基因型及等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05).结论 GABABR1基因Phe658Phe多态性可能与云南汉族人0SAHS合并高血压的发生无关.

扶正祛邪方加减治疗失眠症的药效及其对脑组织内GABA ARα1、5-HT1AR、mGluR7表达的影响

目的 探究扶正祛邪方加减对氯苯丙氨酸(para-chlorophenylalanine, PCPA)失眠模型小鼠的镇静催眠作用及其对脑组织内γ-氨基丁酸A受体α1(gamma-aminobutyric acid A receptor subtype α1, GABA ARα1)、5-羟色胺1A受体(5-hydroxytryptamine 1A receptor, 5-HT1AR)、代谢型谷氨酸受体7(metabotropic glutamate receptor 7, mGluR7)表达的影响。方法 将50只小鼠随机分为空白对照组、模型组、艾司唑仑组、高剂量组和低剂量组,连续灌胃给药7 d后,各组小鼠进行戊巴比妥钠协同睡眠实验和旷场试验的行为学测试,分别采用RT-qPCR和Western blot法检测脑组织中GABA ARα1、5-HT1AR、mGluR7 mRNA和蛋白的表达以及mGluR7/GABA ARα1的比值。结果 与空白对照组比较,模型组小鼠睡眠潜伏期延长(P<0.05),睡眠时间缩短(P<0.05),旷场试验中总的区域路程延长(P<0.05),中心区停留时间缩短(P<0.05),脑组织中GABA ARα1、5-HT1AR m RNA和蛋白的表达均降低(P<0.05),mGluR7 mRNA和蛋白的表达升高(P<0.05),mGluR7/GABA ARα1上升(P<0.05)。与模型组比较,艾司唑仑组和高剂量组、低剂量组小鼠睡眠潜伏期缩短(P<0.05),睡眠时间延长(P<0.05),总的区域路程减少(P<0.05),中心区停留时间增加(P<0.05),脑组织中GABA ARα1、5-HT1AR mRNA和蛋白的表达上升(P<0.05),mGluR7 m RNA和蛋白表达降低(P<0.05),m GluR7/GABA ARα1下降(P<0.05)。与艾司唑仑组比较,高剂量组、低剂量组小鼠睡眠潜伏期和总区域路程增加(P<0.05),睡眠持续时间和中心区停留时间减少(P<0.05),GABA ARα1、5-HT1AR mRNA和蛋白表达下降(P<0.05)、mGluR7 mRNA和蛋白表达上升(P<0.05),mGluR7/GABA ARα1上升(P<0.05)。与高剂量组比较,低剂量组小鼠睡眠潜伏期、总区域路程增加(P<0.05),睡眠持续时间、中心区停留时间减少(P<0.05),GABA ARα1、5-HT1AR mRNA和蛋白表达下降(P<0.05)、mGluR7 m RNA和蛋白表达上升(P<0.05),mGluR7/GABA ARα1上升(P<0.05)。结论 扶正祛邪方加减可以改善PCPA失眠模型小鼠的睡眠,有较好的镇静催眠作用,其机制可能是通过调节脑组织内GABA ARα1、5-HT1AR、mGluR7水平发挥作用。

在大鼠肝癌发生过程中GABA-BR1的表达变化及意义

为探讨γ-氨基丁酸B型受体1(γ-aminobutyric acid type B1 receptor,GABA-BR1)与肝癌发生的关系,利用二乙基亚硝胺(DEN)制备诱发型大鼠肝癌模型,模拟人类肝癌发生发展过程,采用免疫组织化学技术对GABA-BR1和细胞周期素E(Cyclin E)蛋白在大鼠肝脏中的表达进行定性和定量分析.结果显示,在正常肝组织中有少量散在分布的GABA-BR1表达阳性的细胞;在变性或坏死灶周围GABA-BR1表达阳性的肝细胞较多;增生结节中部分肝细胞呈过表达;在肝癌细胞中广泛表达.Cyclin E与GABA-BR1阳性表达的细胞分布特点相似.实验结果提示,在肝癌发生发展过程GABA-BR1过表达,可能对肝细胞的异常增生或癌变过程起到抑制作用.

自身免疫性脑炎临床特征初探

目的:探讨自身免疫性脑炎(AE)的临床特征、治疗及预后。方法:对7例AE患者的临床表现、实验室检查、治疗及预后等临床资料进行回顾性分析。结果:7例AE患者中,4例为抗N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)脑炎,其中2例伴畸胎瘤;2例为抗富含亮氨酸胶质瘤失活蛋白1(LGI1)脑炎;1例为抗γ-氨基丁酸B型受体(GABABR)脑炎。以精神行为异常(5/7)、癫痫发作(4/7)、意识清晰度下降(4/7)、面-臂肌张力障碍发作(FBDs)(1/7)、近事记忆力下降(2/7)为主要临床表现。2例颅脑MRI检查异常。2例脑脊液(CSF)抗NMDAR抗体阳性,2例CSF抗LGI1抗体阳性,1例CSF抗GABABR抗体阳性。2例血清抗NMDAR抗体阳性,1例血清抗GABABR抗体阳性。7例经治疗后4例基本恢复,2例遗留癫痫发作(1例伴精神行为异常),复发1例。结论:以急性发作的精神行为异常、癫痫发作及FBDs为主要临床表现的患者要警惕AE可能。AE临床治疗以激素、免疫球蛋白及手术(伴有畸胎瘤患者)治疗为主,早期诊疗多数预后良好。

老年人自身免疫性脑炎临床特点

目的探讨老年人3种类型的自身免疫性脑炎(AE)的临床特点。方法收集AE患者18例,分别为10例抗γ-氨基丁酸B型受体(GABABR)抗体脑炎患者,5例抗N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)抗体脑炎,3例抗富含亮氨酸胶质瘤失活蛋白(LGI)1抗体脑炎,回顾性分析其临床资料。男14例,女4例,年龄60~73岁,平均年龄(64.17±3.31)岁。依照改良的Rankin量表(mRS)进行预后评价。结果3种类型的AE患者在痫性发作、精神症状、认知障碍、睡眠障碍、中枢性低通气及自主神经功能障碍相互比较差异无统计学意义(P>0.05),而在意识障碍、言语障碍及运动障碍方面比较差异具有统计学意义(P<0.05)。3种类型的AE在脑脊液压力升高、白细胞数升高及蛋白增高上相互比较差异无统计学意义(P>0.05)。7例抗GABABR抗体脑炎患者及1例抗NMDAR抗体脑炎患者血肿瘤标志物异常,与抗LGI1抗体脑炎患者比较差异具有统计学意义(P<0.05)。3种类型的AE患者CT提示占位性病变异常率比较差异无统计学意义(P>0.05)。18例AE患者中13例表现头颅磁共振成像(MRI)异常,主要累及边缘系统,少数累及边缘系统以外。3种类型的AE头颅MRI异常率比较差异无统计学意义(P>0.05)。3种类型的AE脑电图异常率比较差异无统计学意义(P>0.05)。3种类型的AE患者在联合治疗、mRS评分≥3分及死亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论AE的老年患者男性多于女性,急性或亚急性起病,部分有前驱感染症状;以痫性发作、精神异常、认知障碍为主要症状;注意肿瘤的筛查及定期跟踪随访;头颅MRI异常表现主要为边缘系统;脑电图检查特异性不高;抗GABABR抗体脑炎患者预后相对稍差。

祛痰治呛方穴位敷贴脑缺血再灌注损伤后吞咽障碍大鼠的作用机制

背景:前期临床研究发现祛痰治呛方穴位敷贴对于改善脑卒中后吞咽障碍患者的吞咽功能有一定疗效,但作用机制不明确。在脑干吞咽中枢,疑核是腹侧区吞咽中枢的主要构成部分,并且能够诱发吞咽动作的出现和吞咽时间的产生,而疑核内谷氨酸受体、γ氨基丁酸受体、c-fos蛋白等递质与吞咽密切相关。目的:观察祛痰治呛方穴位敷贴对缺血再灌注损伤大鼠疑核内神经递质谷氨酸受体、γ氨基丁酸受体及c-fos蛋白表达的影响,探究祛痰治呛方穴位敷贴治疗短暂性脑缺血再灌注大鼠吞咽障碍的机制。方法:70只SD大鼠随机分为正常组(n=16),缺血再灌注损伤模型组(n=18),贴敷组(n=18),假贴敷组(n=18)。模型组、贴敷组、假贴敷组采用线栓法短暂脑缺血90 min后再灌注进行造模,造模6 h后进行神经功能评分,选取评分为2分的大鼠进入后续实验;造模第2天贴敷组给予祛痰治呛方穴位敷贴治疗,假贴敷组在模型制备的基础上给予无药物贴敷,其余两组正常饲养1个月。记录各组大鼠造模后第2,7,14,30天体质量、吞咽启动反应时间及吞咽次数。治疗4周后,测定各组大鼠的脑组织含水量,采用免疫组化法、RT-PCR、Western blot法检测延髓吞咽中枢疑核处谷氨酸受体1N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR1)、氨基丁酸A型受体α1(GABAA Rα1)和c-fos蛋白的表达。结果与结论:①与正常组相比,模型组、贴敷组和假贴敷组大鼠体质量、1 min内吞咽次数在造模后第14,30天时均减少(P<0.05),吞咽启动反应时间均延长(P<0.05);第30天时,与模型组相比,贴敷组大鼠体质量、吞咽次数增加(P<0.05),吞咽启动时间缩短(P<0.05);②治疗4周后,与模型组相比,贴敷组大鼠脑组织含水量减少(P<0.05);③与模型组相比,贴敷组延髓疑核处氨基丁酸A型受体α1阳性数量、mRNA和蛋白表达增加,但仍低于正常组,1N-甲基-D-天门冬氨酸受体和c-fos阳性数量、mRNA和蛋白表达降低,但仍高于正常组,差异有显著性意义(P<0.05);④结果表明,祛痰治呛方穴位贴敷可以改善脑卒中后吞咽障碍大鼠的吞咽功能,其作用机制可能与改善脑水肿程度,调节吞咽中枢疑核内的神经递质谷氨酸受体、γ氨基丁酸受体和c-fos蛋白等密切相关。

腺苷A1受体在全身麻醉中的作用研究进展

背景由于腺苷在睡眠方面的作用与全身麻醉所产生的作用非常相似，近年来关于腺苷及其受体在全身麻醉过程作用的研究越来越多，但其机制尚无定论。目的综述腺苷A1受体与全身麻醉的关系及在全身麻醉过程中可能的作用机制。内容简述全身麻醉与腺苷A，受体在睡眠方面的相似之处以及全身麻醉相关的重要受体γ-氨基丁酸A型（γ-amino butyric acidA，GABA。）受体、N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartic acid，NMDA）受体与腺苷A1受体的关系，总结目前腺苷A1受体在全身麻醉中作用的研究结果。趋向腺苷A1受体在全身麻醉中的作用机制尚不完全清楚，有待进一步的研究证实，研究腺苷A1受体和全身麻醉之间的关系对于临床麻醉工作及药物的研究应用有一定的指导意义。

钩藤碱调控微小RNA-181a抑制甲基苯丙胺大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞成瘾的研究

目的 探讨钩藤碱对甲基苯丙胺成瘾大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞模型中微小RNA-181a(miR-181a)表达的影响。方法 将细胞分为9组:正常组、模型组、对照组、实验组、antagomiR negative control组((1)组)、miR-181a antagomiR组((2)组)、antagomiR negative control+甲基苯丙胺组((3)组)、miR-181a antagomiR+甲基苯丙胺组((4)组)和miR-181a antagomiR+钩藤碱+甲基苯丙胺组((5)组)。用实时荧光聚合酶链反应检测miR-181a的表达水平,用Western blot法检测A型γ-氨基丁酸受体α1亚基(GABRA1)蛋白的表达水平。结果 正常组、模型组、对照组、实验组、(1)组、(2)组、(3)组、(4)组和(5)组的miR-181a相对表达量分别为1.00±0.00,2.39±0.26,1.02±0.12,1.07±0.15,1.00±0.00,0.32±0.04,2.30±0.25,1.68±0.20和1.45±0.17;正常组、模型组、对照组、实验组、(1)组、(3)组、(4)组和(5)组的GABRA1蛋白相对表达量分别为1.00±0.00,0.54±0.06,0.98±0.12,0.91±0.12,1.00±0.00,0.53±0.06,0.88±0.09和0.92±0.11。与正常组相比,模型组的miR-181a表达升高、GABRA1蛋白表达降低,差异均有统计学意义(均P<0.01);与模型组相比,实验组的miR-181a表达降低、GABRA1蛋白表达升高,差异均有统计学意义(均P<0.01);与(3)组相比,(4)组的miR-181a表达降低、GABRA1蛋白表达升高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 钩藤碱可能通过调控miR-181a/GABRA1轴抑制甲基苯丙胺PC12细胞成瘾。

GABA_B受体基因突变和神经疾病研究进展

γ-氨基丁酸B型(GABA_B)受体是中枢神经系统主要抑制性神经递质GABA的代谢型受体,由GABBR1和GABBR2两个基因共同编码,属于C族G蛋白偶联受体,其介导GABA系统的功能紊乱与许多神经疾病有关,如焦虑、抑郁、癫痫、自闭症、药物成瘾和精神分裂症等。GABA_B受体相关基因及其多态性变异体参与了多种疾病的病因学过程,受体基因突变和疾病关联性研究为疾病的理解提供了新途径,也为疾病的诊断和治疗提供了潜在新靶标。本文重点对GABA_B受体编码基因相关突变和神经类疾病的关联性分析研究、不同突变和疾病具体表型的关联研究以及受体突变如何影响受体功能等方面最新进展进行综述。同时,对受体突变的可能致病机制提出了初步设想,并有针对性地指出了受体变构调节剂在相关疾病治疗领域的潜在应用,以期为这些疾病的诊断和治疗提供有效的帮助。

全身麻醉药物影响术后认知功能障碍的可能机制

背景研究证实全身麻醉药物对认知功能具有一定的影响，其确切机制目前尚无定论。目的综述全身麻醉药物影响术后认知功能的各种可能机制及进展。内容全身麻醉药物可能通过影响神经递质及受体、突触可塑性、微管相关蛋白以及细胞凋亡机制对认知功能产生作用。趋向探讨全身麻醉药物影响认知功能的机制，为预防和治疗术后认知功能障碍（postoperative cognitive dysfunction，POCD）探索可能方法。

巴氯芬缓减大鼠胫骨癌痛及可能机制

目的探讨巴氯芬对大鼠胫骨癌痛的作用及可能机制。方法使用Walker256乳腺癌细胞建立SD大鼠胫骨癌痛模型,第9天64只模型大鼠随机分8组(n=8):N1、N2组(生理盐水10μl),B1、B2组(巴氯芬0.1μg),C1、C2组[γ-氨基丁酸B型受体(GABAB)特异性拮抗剂(CGP35348)60μg],D1、D2组(CGP3534860μg+巴氯芬0.1μg)。N1、B1、C1、D1组单次鞘内给药前0.5h、给药后0.5、1、2、4、8、24h使用VonFrey纤维测定患肢机械缩足阈值(MWT)。N2、B2、C2、D2组鞘内连续给药4d,每天给药1次,最后一次给药后6h处死,用免疫组织化学方法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)表达。结果与N1组比较,B1组大鼠MWT明显增加(P<0.05),持续时间为4h;与N2组比较,B2组大鼠脊髓背角p-ERK1/2阳性细胞数明显减少(P<0.05)。结论巴氯芬可能通过GABAB受体调控下游p-ERK1/2变化减缓胫骨癌痛,其作用可被CGP35348阻断。

室旁核微小RNA 7a-5p在自发性高血压大鼠交感神经兴奋亢进中的作用及机制

目的探讨下丘脑室旁核内微小RNA 7a-5p(miR-7a-5p)在自发性高血压大鼠(SHR)交感神经兴奋亢进中的作用及机制。方法取12周龄正常血压大鼠(WKY)和SHR各24只,分别随机分为4组,每组6只:室旁核注射miR-7a-5p-空载病毒(Null)组、过表达miR-7a-5p基因重组腺相关病毒(rAAV)+敲减miR-7a-5p基因rAAV阴性对照(miR-7a-5p+NC antimiR-7a-5p)组、过表达miR-7a-5p基因rAAV+敲减miR-7a-5p基因rAAV(miR-7a-5p+antimiR-7a-5p)组、敲减miR-7a-5p基因rAAV+过表达miR-7a-5p基因rAAV阴性对照(antimiR-7a-5p+NC miR-7a-5p)组;另取12周龄WKY大鼠和SHR各24只,分别随机分为4组,每组6只:室旁核注射γ-氨基丁酸A型受体功能性α_(1)亚基(GABRA1)-Null组、过表达GABRA1基因rAAV+敲减GABRA1基因rAAV阴性对照(GABRA1+NC siGABRA1)组、过表达GABRA1基因rAAV+敲减GABRA1基因rAAV(GABRA1+siGABRA1)组和敲减GABRA1基因rAAV+过表达GABRA1基因rAAV阴性对照(siGABRA1+NC GABRA1)组,4周后观察血流动力学指标、肾交感神经活动(RSNA)和血浆去甲肾上腺素(NE)水平变化;采用免疫荧光检测室旁核内原癌基因AP-1转录因子亚基FosB(FosB)及GABRA1阳性神经元数量;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测室旁核内miR-7a-5p和GABRA1mRNA表达水平;免疫印迹法检测室旁核内GABRA1蛋白表达量;分离培养新生Wistar大鼠原代下丘脑神经细胞和传代培养NG108神经细胞系,并转染miR-7a-5p激动剂(agomiR-7a-5p)、抑制剂(antagomiR-7a-5p)或miR-7a-5p激动剂阴性对照(NC agomiR-7a-5p),48h后检测miR-7a-5p基因表达水平和GABRA1蛋白表达量,TargetScan软件预测和双荧光素酶报告系统检测miR-7a-5p和GABRA1的靶向关系。结果室旁核注射rAAV 4周后,过表达miR-7a-5p导致WKY和SHR的RSNA增强(均P<0.05),FosB阳性神经元数量上调,GABRA1阳性神经元数量下调(均P<0.01)。室旁核过表达GABRA1导致WKY和SHR的RSNA减弱(均P<0.05)。与WKY大鼠相比,过表达或敲减miR-7a-5p/GABRA1基因对SHR的RSNA的影响更显著(均P<0.05)。与WKY大鼠相比,SHR室旁核内miR-7a-5p表达上调(2.50±0.20比1.01±0.06,t=7.11,P<0.01),GABRA1蛋白表达水平下调(0.60±0.06比1.00±0.04,t=5.31,P<0.01)。在原代下丘脑神经细胞或NG108细胞内转染agomiR-7a-5p可导致GABRA1蛋白表达下调。TargetScan预测发现,miR-7a-5p和GABRA1mRNA的3’非翻译区(3’UTR)存在序列结合,双荧光素酶报告基因证实miR-7a-5p靶向调控GABRA1基因。结论SHR室旁核内上调的miR-7a-5p可通过靶向抑制GABRA1蛋白表达引起交感神经过度兴奋,从而影响高血压的发生发展。