miR-24-3p调控IFN-γ/STAT1通路抑制1型辅助性T细胞极化

目的探究microRNA-24-3p(miR-24-3p)抑制1型辅助性T细胞(Th1)极化的分子机制。方法应用免疫分选法从小鼠脾脏分离初始CD4+T辅助细胞(na?ve CD4+T细胞),利用γ干扰素(IFN-γ)体外诱导na?ve CD4+T细胞向Th1细胞极化,同时转染miR-24-3p模拟物(miR-24-3p mimic),诱导72 h后,流式细胞术检测IFN-γ+和CD4+双阳性标记的Th1细胞百分比;实时荧光定量PCR(qPCR)检测调控Th1细胞极化的关键细胞因子IFN-γ、T细胞介导的转录调节因子(Tbx21)、信号转导与转录激活因子1(STAT1)、STAT4和IL-12受体蛋白β1(IL-12Rβ1)的mRNA表达水平;Western印迹检测调控Th1细胞极化的关键转录因子STAT1蛋白及其磷酸化(p-STAT1)水平。结合生物信息学分析预测miR-24-3p对调控Th1极化的JAK-STAT信号通路组分IFN-γ和STAT1的作用靶点,并利用双荧光素酶报告系统验证miR-24-3p与IFN-γ和STAT1的3’非编码区(3’-UTR)靶序列结合情况。结果经免疫磁珠分选获得高纯度na?ve CD4+T细胞。经IFN-γ诱导后,诱导组Th1细胞极化比例为(73.98±3.65)%,而miR-24-3p mimic处理后Th1细胞极化比例下降至(60.61±4.70)%(P=0.0176);miR-24-3p mimic处理后,调控Th1细胞极化的关键转录因子STAT1(P=0.0002)、Tbx21(P=0.0056)和STAT4(P=0.0009)的表达水平下调;同时,炎症反应活化的关键细胞因子IFN-γ(P=0.0003)和JAK-STAT通路的关键受体蛋白IL-12Rβ1(P=0.0038)的表达水平亦下调。此外,miR-24-3p mimic处理还导致调控Th1细胞极化的关键转录因子STAT1(P=0.0113)蛋白水平及活化的p-STAT1(P=0.0161)蛋白水平下调。结合生物信息学分析结果,双荧光素酶报告系统证实miR-24-3p可特异性结合在IFN-γ和STAT1的3’-UTR靶序列位点,进而靶向下调IFN-γ/STAT1通路的关键组分IFN-γ和STAT1的表达。结论miR-24-3p靶向抑制IFN-γ和STAT1表达,进而抑制IFN-γ/STAT1通路激活和Th1细胞极化。

T-bet重组腺病毒调节哮喘小鼠辅助性T细胞1型/2型免疫平衡

目的研究静脉注射T-bet重组腺病毒(AdT-bet)对小鼠哮喘模型过敏性气道炎症及辅助性T细胞1型/2型(Th1/Th2)免疫失衡的影响。方法随机将36只C57BL/6小鼠分为AdT-bet治疗(A)组、模型对照(B)组、正常对照(C)组。以卵蛋白、氢氧化铝免疫建立哮喘模型,A组激发前尾静脉注射1×10~8 pfu/100μL的AdT-bet,各组激发后进行肺泡灌洗分析细胞组分,分离肺T淋巴细胞测定细胞因子分泌水平,以流式细胞仪检测CD3^+、CD4^+T细胞比例及表达γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素(IL)-4、IL-5的比例,比较各组肺组织学改变。结果A组与B组相比:①明显抑制抗原激发后气道内嗜酸性粒细胞的浸润(0.004±0.003比0.221±0.067,P<0.01);②明显抑制肺T淋巴细胞产生IL-4[(22±12)pg/mL比(170±28)pg/mL]、IL-5[(16±13)pg/mL比(330±30)pg/mL],增加了IFN-γ[(2100±360)pg/mL比(60±50)pg/mL]的产生,差异均有统计学意义(P值均<0.01);③肺T淋巴细胞CD4^+IFN-γ%及IFN-γ^+/IL-4^+明显升高(P值均<0.01),而CD4^+IL-4^+%明显下降(P<0.01);④明显抑制哮喘鼠气道内及肺泡内的过敏性炎症反应。结论激发前静脉应用AdT-bet对哮喘小鼠过敏性气道炎症有明显的防治作用,其机制可能与表达的T-bet上调Th1/Th2比值,从而调整了免疫平衡有关。

血必净注射液对脓毒症大鼠Claudin4蛋白和辅助性T淋巴细胞1型表达的影响

目的探讨血必净注射液对脓毒症大鼠肺组织Claudin4蛋白表达的影响。方法健康成年Sprague-Dawley大鼠100只,体重(250±25)g,随机分入4组,每组25只:假手术组大鼠只开腹、关腹和复苏,不行盲肠结扎穿孔术(CLP);脓毒症组大鼠行CLP;血必净3h组大鼠于CLP后3h腹腔内注射血必净注射液2mL/kg;血必净12h组大鼠于CLP后12h腹腔内注射血必净注射液2mL/kg。每组随机留取8只大鼠进行生存率分析。假手术组、脓毒症组、血必净3h组大鼠在术后6、15和24h,血必净12h组大鼠在术后15和24h各随机处死5只,分别留取血液和肺组织标本,测定肺组织湿/干质量比(肺水肿指数),对肺组织进行病理学观察并进行肺损伤病理学评分,测定血清促炎细胞因子IL-6和TNF-α水平,采用免疫组织化学方法测定肺组织骨架蛋白Claudin4蛋白表达情况,采用流式细胞术检测辅助性T淋巴细胞1型(Th1)在外周血单核细胞中的表达情况。结果假手术组、脓毒症组、血必净3h组和血必净12h组大鼠的术后72h存活率分别为8/8、0、1/8和0,血必净3h组显著高于脓毒症组(P<0.01),血必净12h组与脓毒症组的差异无统计学意义(P>0.05)。假手术组大鼠术后各项检测指标均基本不变。脓毒症组、血必净3h组和血必净12h组大鼠术后15和24h的肺水肿指数,以及术后6、15和24h的肺损伤病理学评分、血清IL-6和TNF-α水平、肺组织Claudin4蛋白表达阳性率均显著高于假手术组同时间点(P值均<0.01);脓毒症组大鼠术后6、15和24h,以及血必净12h组大鼠术后15和24h的肺水肿指数、肺损伤病理学评分、血清IL-6和TNF-α水平、肺组织Claudin4蛋白表达阳性率均显著高于血必净3h组同时间点(P值分别<0.05、0.01);脓毒症组与血必净12h组术后同时间点间上述指标的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。脓毒症组和血必净3h组大鼠术后各时间点的外周血单核细胞中Th1的表达率均显著高于假手术组同时间点(P值均<0.01);脓毒症组大鼠术后6和15h的外周血单核细胞中Th1的表达率均显著高于血必净3h组同时间点(P值均<0.01),术后24h的外周血单核细胞中Th1的表达率显著低于血必净3h组同时间点(P<0.05)。结论早期使用血必净治疗可以有效地抑制脓毒症大鼠肺组织的炎性反应,减轻肺损伤,提高大鼠存活率,其可能机制与抑制肺组织Claudin4蛋白表达,降低肺泡通透性有关。

食管鳞癌组织微小RNA-138、微小RNA-145表达水平与1型/2型辅助性T细胞漂移和预后的关系

目的 分析食管鳞癌组织中微小RNA(miR)-138、miR-145的表达水平及两者与1型辅助性T细胞(Th1)/2型辅助性T细胞(Th2)漂移和预后的关系。方法 2015年5月~2018年5月间我院收治的112例食管鳞癌病人为食管鳞癌组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测食管鳞癌组织及癌旁组织中miR-138、miR-145的表达水平。同期70例健康体检人群作为对照组,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测食管鳞癌组及对照组血清Th1型细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-2和Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平。分析癌组织中miR-138、miR-145表达水平与临床病理参数关系。Pearson相关性分析癌组织中miR-138、miR-145与Th1型、Th2型细胞因子的相关性。分析不同miR-138、miR-145表达情况食管鳞癌病人生存情况。结果 食管鳞癌组织中miR-138、miR-145的表达水平分别为(1.155±0.232)、(1.110±0.217),癌旁组织分别为(4.155±0.732)、(3.910±0.617),食管鳞癌组织中miR-138、miR-145的表达水平明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤分期的食管鳞癌组织中miR-138、miR-145表达水平差异具有统计学意义(P<0.05)。癌组织中miR-138、miR-145的表达水平均与IFN-γ、IL-2呈正相关(r=0.451、0.543;0.520、0.401,P<0.05),与IL-4、IL-10呈负相关(r=-0.391、-0.510;-0.402、0.553,P<0.05)。miR-138高表达病人的3年总体生存率(overall survival, OS)为58.49%(31/53),明显高于低表达病人17.24%(P<0.05);miR-145高表达3年OS为52.73%(29/55),明显高于低表达病人21.43%(12/56)(P<0.05)。结论 食管鳞癌组织中miR-138、miR-145表达水平降低,且与病人不良预后有关。miR-138、miR-145可能通过影响Th1/Th2漂移促进食管鳞癌恶性进展。

克拉霉素对铜绿假单胞菌慢性肺部感染小鼠辅助性T淋巴细胞1型/辅助性T淋巴细胞2型免疫平衡的调节作用

目的探讨克拉霉素对铜绿假单胞菌(PA)慢性肺部感染小鼠肺组织辅助型T淋巴细胞(Th)1/Th2免疫平衡的调节作用。方法将54只小鼠随机分入克拉霉素组、0.9%氯化钠溶液组和对照组。克拉霉素组和0.9%氯化钠溶液组通过小鼠气道接种由包裹PA的琼脂糖珠方法建立的PA慢性肺部感染模型,自建模后第7天起分别给予克拉霉素和0.9%氯化钠溶液治疗,对照组小鼠经气道接种无菌琼脂糖珠给予0.9%氯化钠溶液。分别于建模后第7、10、14天处死小鼠。标本进行肺组织细菌培养、病理学检查、支气管肺泡灌洗液(BALF)中γ-干扰素(IFN-γ)/白细胞介素(IL)-4水平测定和肺组织转录因子T-betmRNA/GATA-3mRNA表达水平分析。结果克拉霉素组小鼠在治疗后慢性肺部感染的症状明显改善。经气道接种后第7天,0.9%氯化钠溶液组和克拉霉素组BALF中IFN-γ、IL-4水平均显著高于对照组(P值均<0.05)。气道接种后第14天,克拉霉素组的IFN-γ水平显著低于0.9%氯化钠溶液组(P<0.05)。气道接种后第10、14天,克拉霉素组BALF中IL-4水平均显著高于0.9%氯化钠溶液组和对照组同时间点(P值均<0.05),而IFN-γ/IL-4比值均显著低于0.9%氯化钠溶液组同时间点(P值均<0.05)。气道接种后第7、10天,克拉霉素组与0.9%氯化钠溶液组的Th1、Th2细胞转录因子T-betmRNA、GATA-3mRNA表达水平相近,均显著高于对照组(P值均<0.05)。气道接种后第14天,克拉霉素组T-betmRNA表达水平、T-betmRNA/GATA-3mRNA比值均显著低于0.9%氯化钠溶液组(P值均<0.05)。结论在PA慢性肺部感染初期采用克拉霉素治疗可使小鼠肺组织的Th1/Th2平衡向Th2偏移,有利于缓解气道炎症。

原发性舍格伦综合征患者血浆弗林蛋白酶和Th1型细胞因子水平表达与唇腺损害及相关腺体功能的关系研究

目的探讨原发性舍格伦综合征(pSS)患者血浆弗林蛋白酶(FURIN)和辅助性T细胞1(Th1)型细胞因子水平表达与唇腺损害及相关腺体功能的关系。方法将邯郸市中心医院2017年8月~2019年8月收治的pSS患者109例作为pSS组,选取同期于邯郸市中心医院体检的健康志愿者90例作为对照组。比较两组血浆FURIN水平及Th1型细胞因子[白介素(IL)-2,IL-7,γ干扰素(INF-γ)]与Th2型细胞因子(IL-4,IL-13)水平。根据欧洲抗风湿联盟舍格伦综合征疾病活动指数(ESSDAI)将患者分成轻度组(n=37)、中度组(n=48)和重度组(n=24),比较三组上述各指标水平与唇腺损害及相关腺体功能指标(唾液流率、唇腺病理分级和Schirmer试验)水平。分析pSS患者抗SSA抗体、抗SSB抗体、血浆FURIN及Th1和Th2型细胞因子的关系,并观察血浆FURIN水平和Th1,Th2型细胞因子水平与唇腺损害及相关腺体功能指标的相关性。结果pSS组血浆FURIN及血清IL-2,IL-7,INF-γ,IL-4,IL-13水平均高于对照组(t=8.054~156.875,均P<0.05),Th1/Th2低于对照组(t=3.624,P=0.000)。中、重度组血浆FURIN及血清IL-2,IL-7,INF-γ,IL-4,IL-13水平、唇腺病理评分高于轻度组(t=5.339~36.092,均P<0.05),且重度组高于中度组(t=4.240~13.707,均P<0.05),而中、重度组Th1/Th2,唾液流率及左、右眼Schirmer试纸浸湿长度低于轻度组(t=3.013~42.715,均P<0.05),且重度组低于中度组(t=3.178~18.641,均P<0.05),差异均有统计学意义。抗SSA抗体、抗SSB抗体阳性患者的血浆FURIN水平及血清IL-2,IL-7,INF-γ,IL-4,IL-13水平高于阴性患者(t=2.560~14.333,均P<0.05),Th1/Th2低于阴性患者(t=2.363~4.604,均P<0.05),差异有统计学意义。血浆FURIN水平与血清IL-2,IL-7,INF-γ,IL-4,IL-13水平及唇腺病理评分呈正相关(r=0.362~0.640,均P<0.05),与Th1/Th2,唾液流率及左、右眼Schirmer试纸浸湿长度呈负相关(r=-0.715~-0.404,均P<0.05)。结论pSS患者血浆FURIN水平明显升高,且其水平变化和Th1及Th2型细胞因子水平与唇腺损害及相关腺体功能指标相关,临床可能通过测定血浆FURIN水平,进一步了解pSS的发病机制。

生血合剂对慢性再生障碍性贫血患者T-bet/GATA-3、相关信号分子、细胞因子表达及Th_1/Th_2的影响

目的研究转录因子T-bet(T-box expressed in T cells)、GATA-3(GATA binding protein3)及相关信号通路在慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anemia,CAA)免疫发病中的作用,从辅助性T(helper T,Th)细胞失衡、转录因子及相关信号通路水平探讨生血合剂治疗CAA的免疫调控机制。方法 40例CAA患者均来自上海中医药大学附属岳阳医院,随机分为治疗组20例和对照组20例,选取体检健康者20名为正常组。治疗组患者辨证分为脾肾阳虚型和脾肾阴虚型,脾肾阳虚型患者服用生血合剂1号,脾肾阴虚型患者服用生血合剂2号,对照组服用环孢菌素A(CsA),采用实时荧光定量PCR(Realtime FQ-PCR)检测CAA患者治疗前后外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMNC)、T-bet、GATA-3及信号转导子及转录激活因子4(signal transducer and activator of transcription 4,STAT4)、STAT6 mRNA表达,采用流式细胞术、酶联免疫吸附法(ELISA)检测CAA患者治疗前后PBMNC Th_1、Th_2比例及PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12、IL-4水平。结果 CAA患者PBMNC T-bet、STAT4 mRNA表达、T-bet/GATA-3比值、Th_1比例、Th_1/Th_2比值、PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12表达均明显高于正常组(P<0.01),采用生血合剂或CsA治疗后,患者T-bet、STAT4表达、T-bet/GATA-3比值、Th_1比例、IFN-γ、IL-12表达均有所下降(P<0.01),但T-bet、STAT4、T-bet/GATA-3比值、Th_1比例、IFN-γ表达仍未达到正常水平,治疗组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而GATA-3、STAT6 mRNA表达、Th_2比例、IL-4表达治疗前后与正常组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路的异常活化,及Th_1/Th_2平衡向Th_1型偏移,在CAA免疫异常的发病过程中起关键的作用。生血合剂和CsA能通过下调IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路的异常活化,并纠正Th_1过度极化,从而减轻CAA异常亢进的细胞免疫,解除造血抑制。

Let-7e-5p对变应性鼻炎小鼠Treg/Th17细胞失衡的影响

目的:探讨let-7e-5p对变应性鼻炎(AR)小鼠调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)失衡的影响。方法:12只BALB/c小鼠,3只为正常组,余9只小鼠采用卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝[Al(OH)3]建立AR模型后随机均分为模型组(仅造模)、let-7e-5p激动剂对照组(鼻内滴注let-7e-5p agomir阴性对照)及let-7e-5p激动剂组(鼻内滴注let-7e-5p agomir);采用行为学评分考察各组小鼠的过敏症状,酶联免疫吸附法检测各组小鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素17-A(IL-17A)和白细胞介素-10(IL-10)水平,HE染色观察各组小鼠鼻黏膜组织学变化,采用实时荧光定量PCR检测各组小鼠鼻黏膜组织let-7e-5p的表达、蛋白印迹法检测RORγt和Foxp3蛋白的表达,采用流式细胞术检测各组小鼠外周血CD4^+Foxp3^+Treg和CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群变化。结果:模型组小鼠较正常组的行为学评分、血清IgE及IL-17A水平明显增高、IL-10水平明显降低(P<0.01),let-7e-5p激动剂组较模型组的行为学评分、IgE及IL-17A水平明显下降、IL-10水平明显升高(P<0.01);同模型组比较,let-7e-5p激动剂组小鼠鼻黏膜基底层结构清晰,炎性细胞浸润明显减少;模型组小鼠鼻黏膜组织let-7e-5p基因的表达较正常组减少,let-7e-5p激动剂组则较模型组升高(P<0.05);模型组小鼠鼻黏膜组织RORγt蛋白表达较正常组增加、Foxp3蛋白表达减少,let-7e-5p激动剂组小鼠鼻黏黏膜组织RORγt蛋白表达较模型组减少、Foxp3蛋白表达增加(P<0.05);模型组小鼠较正常组外周血中CD4^+Foxp3^+Treg细胞亚群比例明显降低,CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群比例明显升高(P<0.01);let-7e-5p激动剂组小鼠较模型组的CD4^+Foxp3^+Treg细胞亚群比例显著升高,CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群比例明显降低(P<0.01)。结论:Let-7e-5p可能通过调节AR小鼠Foxp3和RORγt蛋白的表达,介导Treg/Th17细胞平衡,减轻炎症反应,从而改善AR小鼠鼻部过敏症状。

不同血糖水平的冠心病患者外周血中Th1、Th2细胞比例变化分析

目的探讨不同血糖水平的冠心病患者外周血中1型辅助性T细胞(Th1)、2型辅助性T细胞(Th2)的细胞比例变化.方法选取冠心病患者86例,根据血糖检测结果分为冠心病血糖正常组34例,冠心病合并糖耐量异常组20例,冠心病合并糖尿病组32例;另收集同期健康志愿者25名为健康对照组.采集空腹外周静脉血,检测空腹血糖、糖化血红蛋白、γ干扰素、白细胞介素4、白细胞介素5、白细胞介素10水平.分离外周血单个核细胞,流式细胞仪检测Th1、Th2细胞比例.分离并培养人脐静脉内皮细胞,并使用免疫磁珠清除外周血单个核细胞中CD4+T细胞,进行人脐静脉内皮细胞毒性试验.出院后对冠心病患者进行1 a的随访,记录主要不良心血管事件发生情况.结果冠心病合并糖尿病组患者空腹血糖、糖化血红蛋白水平明显高于健康对照组、冠心病血糖正常组、冠心病合并糖耐量异常组(P<0.05).冠心病合并糖尿病组Th1细胞比例明显高于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组,Th2细胞比例明显低于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组(P<0.05).冠心病合并糖尿病组γ干扰素水平明显高于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组,白细胞介素4、白细胞介素5、白细胞介素10水平明显低于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组(P<0.05).冠心病合并糖尿病组患者外周血单个核细胞水平明显低于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组(P<0.05);清除CD4+T细胞的外周血单个核细胞在各组间比较差异无统计学意义(P>0.05).空腹血糖、糖化血红蛋白、Th1细胞比例、Th2细胞比例对冠心病患者预后均具有较高的预测价值(P<0.05);其中各指标联合检测的预测价值最高(AUC=0.942),灵敏度、阳性预测值均明显高于各指标单独检测.结论高糖状态下冠心病患者外周血中Th1细胞比例升高,Th2细胞比例降低,能够加速血管内皮细胞损伤,与空腹血糖和糖化血红蛋白联合检测可用于患者预后评估.

结核性及恶性肿瘤性胸腔积液淋巴细胞亚群比例以及Th1／Th2免疫平衡研究

目的探讨Th1/Th2免疫应答平衡在结核性和恶性肿瘤性胸腔积液病理生理过程中的可能作用。方法对24例治疗前结核性胸腔积液以及28例患者恶性胸腔积液患者胸液标本进行有核细胞计数、分类和流式细胞仪检测淋巴细胞亚群,检测CD3+,CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞亚群比例,并计算CD4+/CD8+值;利用夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测胸液标本中INF-γ、IL-18、TNF-α以及IL-10的浓度。结果结核性胸腔积液患者胸水中T辅助淋巴细胞以CD3+CD4+细胞为主,其CD3+细胞比例、CD3+CD4+细胞比例以及CD4+/CD8+值均高于恶性肿瘤性胸腔积液组(P<0.01)。2组研究对象INF-γ、IL-18、TNF-α以及IL-10的浓度分别是(中位数):结核性胸腔积液组942.0、1 526、62 pg/ml和153 pg/ml;恶性胸腔积液组10.35、1 763、8.85 pg/ml和66.85 pg/ml。结核性胸腔积液中INF-γ、TNF-α以及IL-10均明显高于恶性肿瘤性胸腔积液中的水平(P<0.01),且平均分别高约90倍、7倍和2倍。IL-18在2组胸腔积液中的含量无显著性差异(P>0.05)。结核性胸腔积液IL-18/IL-10明显低于恶性肿瘤性胸腔积液组(P<0.01)。结论结核性胸腔积液表现为Th1免疫应答为主;而恶性肿瘤性胸腔积液患者存在明显的细胞免疫功能低下。这种低下可能主要以T辅助淋巴细胞受损、Thl免疫应答降低以及Th2免疫应答升高为主。IFN-γ可作为鉴别结核性胸腔积液和恶性肿瘤性胸腔积液特异性和敏感度较高的指标。

中医药调节Th1/Th2免疫失衡治疗变应性鼻炎的研究进展

变应性鼻炎(AR)是一种IgE介导的鼻黏膜慢性炎症性疾病,Th1/Th2分化失衡是其主要诱导因素,而Th2免疫反应占优势是AR的主要特点。中医药可通过不同作用机制调节Th1/Th2细胞分化和相关细胞因子表达或特异性抑制Th2免疫反应,调节Th1/Th2免疫失衡的状态,达到治疗AR目的。基于此,本文从该角度出发,对近年来中药单体、单味中药和中医经典复方调节Th1/Th2免疫失衡治疗AR作用机制进行综述,以期为中医药防治AR提供理论支持和科学依据。

Let-7e-5p调控Fas/FasL影响小鼠变应性鼻炎发病的机制研究

目的探讨let-7e-5p对小鼠变应性鼻炎的影响及机制。方法将18只BALB/c小鼠按随机数字表法均分为对照(Control)组、变应性鼻炎(AR)组、let-7e-5p激动剂阴性对照(AR+agomir-NC)组、let-7e-5p激动剂(AR+agomir)组、let-7e-5p抑制剂阴性对照(AR+antagomir-NC)组和let-7e-5p抑制剂(AR+antagomir)组。除Control组外,其余组应用卵白蛋白(OVA)致敏建立AR模型,AR+agomir组和AR+antagomir组同时给予let-7e-5p agomir或let-7e-5p antagomir进行干预,末次激发致敏后对小鼠变应性鼻炎进行评分,HE染色观察鼻黏膜组织,统计嗜酸性粒细胞数量,real-time PCR检测let-7e-5p、Fas、FasL m RNA表达,Western blot检测Fas、FasL蛋白表达,酶联免疫吸附试验检测血清免疫球蛋白E(IgE)、特异性IgE(sIgE)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-12、IL-4、IL-13水平,双荧光素酶实验分析let-7e-5p和Fas、FasL的靶向关系。结果与Control组比较,AR组小鼠变应性鼻炎评分升高,鼻黏膜增生明显,嗜酸性粒细胞数量增加,let-7e-5p mRNA表达及IFN-γ、IL-12水平下降,Fas、FasL表达及IgE、sIgE、IL-4、IL-13水平升高(均P<0.05)。与AR+agomir-NC组比较,AR+agomir组小鼠变应性鼻炎评分降低,鼻黏膜结构清晰,嗜酸性粒细胞数量减少,let-7e-5p mRNA表达及IFN-γ、IL-12水平升高,Fas、FasL表达及IgE、sIgE、IL-4、IL-13水平下降(均P<0.05)。与AR+antagomir-NC组比较,AR+antagomir组小鼠变应性鼻炎评分升高,鼻黏膜增厚,嗜酸性粒细胞数量增加,let-7e-5p mRNA表达减少,Fas、FasL表达及IgE、sIgE、IL-4、IL-13水平升高(均P<0.05),IL-12、IFN-γ水平差异无统计学意义。与NC+3’UTR-WT组比较,let-7e-5p agomir+3’UTR-WT组荧光素酶活性下降(P<0.05)。结论Let-7e-5p通过靶向调节Fas/FasL影响1型辅助性T细胞(Th1)/2型辅助性T细胞(Th2)平衡,从而参与AR小鼠变应性鼻炎发病的进展。

miR-148a-3p通过抑制IL-12/IL-12Rβ_(1)/IL-12Rβ_(2)/IFN-γ通路抑制Th1细胞极化

目的探讨miR-148a-3p调控1型辅助性T(Th1)细胞极化调控的分子机制。方法分离6周龄小鼠的脾单个核细胞,经免疫磁珠阴性分选获得初始CD4+(naïveCD4+)Th细胞,用流式细胞术测定naïve CD4+Th细胞CD62L表达水平。用小鼠白细胞介素12(IL-12)和IL-2及抗小鼠IL-4,CD28和CD3ε单克隆抗体的混合因子体外诱导naïveCD4+Th细胞向Th1细胞极化,同时在诱导体系中加入miR-148a-3p模拟物,诱导72 h。流式细胞术检测干扰素γ(IFN-γ)和CD4双阳性(IFN-γ+CD4+)细胞百分比,实时荧光定量PCR检测Th1细胞极化相关基因IFN-γ、信号转导与转录激活因子1(STAT1)、IL-12受体β_(1)(IL-12Rβ_(1))、IL-12Rβ_(2)、STAT4和T细胞介导的转录调节因子21(Tbx21)mRNA表达水平;Western印迹法检测Th1细胞极化关键转录因子STAT4和磷酸化STAT4(p⁃STAT4)蛋白表达水平。经生物信息学分析预测miR-148a-3p对IL-12/IL-12Rβ_(1)/IL-12Rβ_(2)/IFN-γ通路分子IL-12Rβ_(1),IL-12Rβ_(2),Tbx21和STAT4的调控靶标序列,用双荧光素酶载体psiCHECK2分别构建IL-12Rβ_(1),IL-12Rβ_(2),Tbx21和STAT4的3′UTR序列(psi-wt)及靶标点突变(psi-mutant)序列的克隆载体。将psi-wt和psi-mutant载体分别与miR-148a-3p模拟物共转染至人宫颈癌HeLa细胞,转染36 h后裂解细胞进行双荧光素酶报告基因检测。结果经免疫磁珠分选获得的naïveCD4+Th细胞高表达CD62L,表明naïveCD4+Th细胞分离成功;诱导后Th1细胞极化百分比为(71±5)%,miR-148a-3p模拟物转染后Th1细胞极化百分比下降至(61±3)%(P<0.05)。miR-148a-3p模拟物转染可下调Th1极化关键转录因子STAT1(P<0.01),Tbx21(P<0.01)和STAT4(P<0.01)mRNA表达水平,同时IL-12/IL-12Rβ_(1)/IL-12Rβ_(2)/IFN-γ通路的关键受体IL-12Rβ_(1)(P<0.05)和IL-12Rβ_(2)(P<0.01)及调控Th1极化关键细胞因子IFN-γ(P<0.01)mRNA表达水平亦显著下调。miR-148a-3p模拟物转染可显著下调Th1极化过程所必需的STAT4和p-STAT4蛋白表达水平。生物信息学预测miR-148a-3p靶标并用双荧光素酶报告载体构建含其psi-wt和psi-mutant序列的克隆载体;经双荧光素酶报告系统检测证实,miR-148a-3p可靶向下调IL-12/IL-12Rβ_(1)/IL-12Rβ_(2)/IFN-γ通路的多个关键分子STAT4(P<0.01),Tbx21(P<0.01),IL-12Rβ_(1)(P<0.01)和IL-12Rβ_(2)(P<0.01)表达。结论miR-148a-3p通过靶向抑制IL-12/IL-12Rβ_(1)/IL-12Rβ_(2)/IFN-γ通路中STAT4,Tbx21,IL-12Rβ_(1)和IL-12Rβ_(2)蛋白表达抑制Th1细胞极化。

Th17和Th9细胞参与自身免疫性疾病病理机制研究进展

CD46＋T细胞具有抗原识别特异性，是主要组织相容性复合物Ⅱ类分子限制性T细胞。CD4^＋T细胞受到抗原刺激而活化，活化后的效应T细胞根据产生细胞因子种类和生物学功能的不同，可以分为辅助性T细胞1型（Thelpcell1，Thl）、2型（Thelpcell2，Th2）和调节性T细胞（regulatory Tcells、Treg）。Thl细胞主要产生γ干扰素（Interferon-γ，IFN-γ）、白细胞介素2（Interleukin-2，

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者Th1/Th2漂移的研究

目的:研究阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者Th1/Th2的漂移。方法:连续选择OSAHS患者30例,健康志愿者30例,经多导睡眠仪进行连续7小时睡眠监测后于次日晨静脉采血。用ELISA法检测血清IFN γ和IL 4。结果:OSAHS患者IFN γ(9.26±2.82ng/L)较对照组(6.10±0.90ng/L)升高(P<0.01);IL 4无明显改变,IFN γ/IL-4(8.03±3.21)较对照组(5.01±1.47)升高(P<0.01),IFN γ/IL 4与AHI(呼吸紊乱指数)和最低血氧饱和度与持续时间之积呈正相关。结论:OSAHS患者Th1/Th2发生漂移,Th1细胞占优势;且与AHI和最低血氧饱和度与持续时间之积呈正相关。

Th17细胞与血液肿瘤

机体特异性免疫应答包括细胞免疫和体液免疫，其中T细胞介导的细胞免疫是机体抗肿瘤免疫的主体。依据T细胞表面抗原的不同，可将T细胞分为CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞。依据CD4^＋T细胞分化过程和功能特征的不同，传统意义上将CD4^＋T细胞分为辅助性T细胞1型（Th1细胞）、辅助性T细胞2型（Th2细胞）、

Treg/Th17在变应性鼻炎发病机制中作用的研究进展

变应性鼻炎(AR)是耳鼻喉科的常见疾病,过去发现Th1/Th2平衡与该疾病密切相关,其下游因子白细胞介素(IL)-4、IL-5和IL-13更是与疾病的发展密切相关。但是随着对人体免疫机制研究的不断深入,发现Th1/Th2平衡不足以完美诠释AR的发病,所以结合Th17/调节性T细胞(Treg)平衡提出了Th1/Th2/Th17/Treg平衡的理论体系,并发现Th17/Treg平衡在AR的免疫调节中有着重要作用。对Th17/Treg平衡在AR疾病发病中的作用进行研究,可完善AR发病的分子机制,为药物治疗分子机制的研究提供参考,本文就Treg/Th17在AR发病机制中的作用进行综述。

女性生殖道高危HPV感染患者阴道菌群微生态和免疫功能Th1/Th2失衡的相关性分析

目的分析女性生殖道高危人乳头瘤病毒(HPV)感染患者阴道菌群微生态和免疫功能1型辅助性T细胞(Th1)/2型辅助性T细胞(Th2)失衡的相关性。方法选取2019年3月—2021年3月期间因生殖道炎症于台州医院就诊的150例女性患者,根据HPV检测结果分为高危HPV阳性组和高危HPV阴性组。检测阴道菌群微生态菌群构成、密集度、多样性、免疫功能Th1/Th2细胞因子表达情况,分析两者相关性。结果与高危HPV阴性组相比,高危HPV阳性组乳杆菌异常率、沙眼衣原体、解脲支原体的阳性率较高,差异有统计学意义(P<0.05)。两组淋球菌、细菌性阴道病、霉菌、滴虫阳性率对比差异无统计学意义(P>0.05)。与高危HPV阴性组相比,高危HPV阳性组阴道菌群密集度异常率、阴道菌群多样性异常率较高,差异有统计学意义(P<0.05)。与高危HPV阴性组相比,高危HPV阳性组Th1、Th1/Th2、IFN-γ、IL-2表达水平降低,Th2、IL-4、IL-10表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。在高危HPV阳性患者中,与阴道菌群微生态正常患者相比,阴道菌群微生态异常患者Th1、Th1/Th2、IFN-γ、IL-2表达水平降低,Th2、IL-4、IL-10表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。阴道菌群微生态与Th1/Th2失衡相关(P<0.05)。结论女性生殖道高危HPV感染患者阴道菌群微生态异常,免疫功能Th1/Th2失衡,Th1向Th2漂移,且阴道菌群微生态异常与免疫功能Th1/Th2失衡密切相关。

新型免疫调节肽佐剂CEL-1000

CEL-1000是一种新型的免疫调节肽,它在抗疟疾、人类免疫缺陷病毒(H IV)、单纯疱疹病毒(HSV)感染和肿瘤疫苗的研制方面具有潜在的佐剂活性,能促进1型辅助性T淋巴细胞(Th1)型免疫应答。

头孢曲松联合苄星青霉素对梅毒患者免疫功能的影响及安全性分析

目的探讨头孢曲松联合苄星青霉素对梅毒患者免疫功能及1型辅助性T淋巴细胞/2型辅助性T淋巴细胞(Th1/Th2)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-10(IL-10)水平的影响。方法以随机数字表法将环江毛南族自治县疾病预防控制中心2020年1月至2022年3月收治的75例梅毒患者分为对照组(37例,单纯使用苄星青霉素治疗3周)、观察组(38例,头孢曲松治疗2周后停药2周,再使用苄星青霉素治疗3周)。比较两组患者治疗后3个月临床疗效,皮损症状消退时间,治疗后1、2、3个月甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)转阴情况,治疗前、治疗后3个月外周血CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)百分比、CD4^(+)/CD8^(+)比值,Th1、Th2百分比、Th1/Th2比值及血清IL-2、IL-10水平,以及不良反应发生情况。结果与对照组比,观察组患者的总有效率显著升高,与对照组比,观察组患者的皮损各种症状消退时间显著缩短;治疗后1~3个月两组TRUST转阴患者占比均逐渐升高,且不同时间点观察组均高于对照组;与治疗前比,治疗后3个月两组患者外周血CD3^(+)、CD4^(+)百分比、CD4^(+)/CD8^(+)比值,以及Th1百分比、Th1/Th2比值、血清IL-2均显著升高,观察组高于对照组;两组患者外周血CD8^(+)百分比、Th2百分比及血清IL-10水平均显著降低,观察组低于对照组(均P<0.05);对照组与观察组患者不良反应总发生率分别为16.22%(6/37)、21.05%(8/38),差异无统计学意义(P>0.05)。结论头孢曲松联合苄星青霉素可以提高梅毒患者治疗效果,缩短皮损症状消退时间,提高TRUST转阴率,并能够提高患者的免疫功能,且安全性良好。