基膜聚糖通过抑制1型辅助T细胞分化提高耐药性卵巢癌治疗效果

目的探讨基膜聚糖(LUM)在卵巢癌顺铂耐药中的作用机制,并初步探索其对1型辅助T(Th1)细胞分化的影响。方法通过基因表达数据集(GEO)筛选卵巢癌顺铂耐药株及敏感株中差异表达的基因,通过实时定量PCR检测其表达水平。利用小干扰RNA(siRNA)敲低人卵巢癌细胞中LUM表达,并用Western blot法验证敲低效率。通过流式细胞术检测敲低LUM对顺铂处理后的卵巢癌细胞系周期及凋亡的影响。通过蛋白质相互作用(PPI)网络筛选LUM潜在靶蛋白,并用分子对接验证其相互作用。肿瘤免疫评估资源数据库(TIMER)筛选LUM对卵巢癌系分泌细胞因子的影响,并利用ELISA与实时定量PCR验证。流式细胞术分析LUM对共培养的CD4^(+)T细胞分化的调控作用。结果GEO数据显示LUM在顺铂耐药株中显著上调,且其表达水平与患者预后相关。LUM在卵巢癌顺铂耐药细胞株中表达水平较高,且顺铂治疗能促进LUM的表达。敲低LUM增加顺铂诱导的卵巢癌细胞的凋亡和细胞周期阻滞,提高药物敏感性。靶基因筛选表明,LUM可能通过与Src同源域磷酸酶2(SHP2)相互作用调控卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。另外,TIMER分析结果提示高表达LUM抑制Th1细胞分化,在卵巢癌耐药株中敲低LUM促进Th1细胞分化,通过调控γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素12(IL-12)分泌影响免疫细胞的肿瘤杀伤力。结论LUM在卵巢癌顺铂耐药中表达上调,可能通过调控SHP2相关信号通路降低卵巢癌细胞顺铂敏感性。LUM还通过调控卵巢癌细胞细胞因子分泌,进而抑制Th1细胞分化,促进肿瘤耐药性产生,可能是卵巢癌治疗新的潜在靶点。

Th1/Th2、Th17/Treg型细胞因子群在稽留流产病因学中的研究进展

近年来稽留流产发病率逐年上升,然病因复杂,免疫相关因素是其病因学研究的热点。妊娠被看作是一次成功的同种异体移植,母体对胎儿形成免疫耐受,但母胎界面免疫微环境的任何失衡都可能导致妊娠失败。辅助型T细胞1(Th1)/辅助型T细胞2(Th2)、辅助型T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞因子共同构成的细胞因子网络对维持母胎界面免疫微环境的平衡至关重要,该文以Th1/Th2、Th17/Treg型细胞因子群为中心,对其在稽留流产病因学领域的研究概况进行综述。

T-bet重组腺病毒调节哮喘小鼠辅助性T细胞1型/2型免疫平衡

目的研究静脉注射T-bet重组腺病毒(AdT-bet)对小鼠哮喘模型过敏性气道炎症及辅助性T细胞1型/2型(Th1/Th2)免疫失衡的影响。方法随机将36只C57BL/6小鼠分为AdT-bet治疗(A)组、模型对照(B)组、正常对照(C)组。以卵蛋白、氢氧化铝免疫建立哮喘模型,A组激发前尾静脉注射1×10~8 pfu/100μL的AdT-bet,各组激发后进行肺泡灌洗分析细胞组分,分离肺T淋巴细胞测定细胞因子分泌水平,以流式细胞仪检测CD3^+、CD4^+T细胞比例及表达γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素(IL)-4、IL-5的比例,比较各组肺组织学改变。结果A组与B组相比:①明显抑制抗原激发后气道内嗜酸性粒细胞的浸润(0.004±0.003比0.221±0.067,P<0.01);②明显抑制肺T淋巴细胞产生IL-4[(22±12)pg/mL比(170±28)pg/mL]、IL-5[(16±13)pg/mL比(330±30)pg/mL],增加了IFN-γ[(2100±360)pg/mL比(60±50)pg/mL]的产生,差异均有统计学意义(P值均<0.01);③肺T淋巴细胞CD4^+IFN-γ%及IFN-γ^+/IL-4^+明显升高(P值均<0.01),而CD4^+IL-4^+%明显下降(P<0.01);④明显抑制哮喘鼠气道内及肺泡内的过敏性炎症反应。结论激发前静脉应用AdT-bet对哮喘小鼠过敏性气道炎症有明显的防治作用,其机制可能与表达的T-bet上调Th1/Th2比值,从而调整了免疫平衡有关。

食管鳞癌组织微小RNA-138、微小RNA-145表达水平与1型/2型辅助性T细胞漂移和预后的关系

目的 分析食管鳞癌组织中微小RNA(miR)-138、miR-145的表达水平及两者与1型辅助性T细胞(Th1)/2型辅助性T细胞(Th2)漂移和预后的关系。方法 2015年5月~2018年5月间我院收治的112例食管鳞癌病人为食管鳞癌组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测食管鳞癌组织及癌旁组织中miR-138、miR-145的表达水平。同期70例健康体检人群作为对照组,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测食管鳞癌组及对照组血清Th1型细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-2和Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平。分析癌组织中miR-138、miR-145表达水平与临床病理参数关系。Pearson相关性分析癌组织中miR-138、miR-145与Th1型、Th2型细胞因子的相关性。分析不同miR-138、miR-145表达情况食管鳞癌病人生存情况。结果 食管鳞癌组织中miR-138、miR-145的表达水平分别为(1.155±0.232)、(1.110±0.217),癌旁组织分别为(4.155±0.732)、(3.910±0.617),食管鳞癌组织中miR-138、miR-145的表达水平明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤分期的食管鳞癌组织中miR-138、miR-145表达水平差异具有统计学意义(P<0.05)。癌组织中miR-138、miR-145的表达水平均与IFN-γ、IL-2呈正相关(r=0.451、0.543;0.520、0.401,P<0.05),与IL-4、IL-10呈负相关(r=-0.391、-0.510;-0.402、0.553,P<0.05)。miR-138高表达病人的3年总体生存率(overall survival, OS)为58.49%(31/53),明显高于低表达病人17.24%(P<0.05);miR-145高表达3年OS为52.73%(29/55),明显高于低表达病人21.43%(12/56)(P<0.05)。结论 食管鳞癌组织中miR-138、miR-145表达水平降低,且与病人不良预后有关。miR-138、miR-145可能通过影响Th1/Th2漂移促进食管鳞癌恶性进展。

血必净注射液对脓毒症大鼠Claudin4蛋白和辅助性T淋巴细胞1型表达的影响

目的探讨血必净注射液对脓毒症大鼠肺组织Claudin4蛋白表达的影响。方法健康成年Sprague-Dawley大鼠100只,体重(250±25)g,随机分入4组,每组25只:假手术组大鼠只开腹、关腹和复苏,不行盲肠结扎穿孔术(CLP);脓毒症组大鼠行CLP;血必净3h组大鼠于CLP后3h腹腔内注射血必净注射液2mL/kg;血必净12h组大鼠于CLP后12h腹腔内注射血必净注射液2mL/kg。每组随机留取8只大鼠进行生存率分析。假手术组、脓毒症组、血必净3h组大鼠在术后6、15和24h,血必净12h组大鼠在术后15和24h各随机处死5只,分别留取血液和肺组织标本,测定肺组织湿/干质量比(肺水肿指数),对肺组织进行病理学观察并进行肺损伤病理学评分,测定血清促炎细胞因子IL-6和TNF-α水平,采用免疫组织化学方法测定肺组织骨架蛋白Claudin4蛋白表达情况,采用流式细胞术检测辅助性T淋巴细胞1型(Th1)在外周血单核细胞中的表达情况。结果假手术组、脓毒症组、血必净3h组和血必净12h组大鼠的术后72h存活率分别为8/8、0、1/8和0,血必净3h组显著高于脓毒症组(P<0.01),血必净12h组与脓毒症组的差异无统计学意义(P>0.05)。假手术组大鼠术后各项检测指标均基本不变。脓毒症组、血必净3h组和血必净12h组大鼠术后15和24h的肺水肿指数,以及术后6、15和24h的肺损伤病理学评分、血清IL-6和TNF-α水平、肺组织Claudin4蛋白表达阳性率均显著高于假手术组同时间点(P值均<0.01);脓毒症组大鼠术后6、15和24h,以及血必净12h组大鼠术后15和24h的肺水肿指数、肺损伤病理学评分、血清IL-6和TNF-α水平、肺组织Claudin4蛋白表达阳性率均显著高于血必净3h组同时间点(P值分别<0.05、0.01);脓毒症组与血必净12h组术后同时间点间上述指标的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。脓毒症组和血必净3h组大鼠术后各时间点的外周血单核细胞中Th1的表达率均显著高于假手术组同时间点(P值均<0.01);脓毒症组大鼠术后6和15h的外周血单核细胞中Th1的表达率均显著高于血必净3h组同时间点(P值均<0.01),术后24h的外周血单核细胞中Th1的表达率显著低于血必净3h组同时间点(P<0.05)。结论早期使用血必净治疗可以有效地抑制脓毒症大鼠肺组织的炎性反应,减轻肺损伤,提高大鼠存活率,其可能机制与抑制肺组织Claudin4蛋白表达,降低肺泡通透性有关。

克拉霉素对铜绿假单胞菌慢性肺部感染小鼠辅助性T淋巴细胞1型/辅助性T淋巴细胞2型免疫平衡的调节作用

目的探讨克拉霉素对铜绿假单胞菌(PA)慢性肺部感染小鼠肺组织辅助型T淋巴细胞(Th)1/Th2免疫平衡的调节作用。方法将54只小鼠随机分入克拉霉素组、0.9%氯化钠溶液组和对照组。克拉霉素组和0.9%氯化钠溶液组通过小鼠气道接种由包裹PA的琼脂糖珠方法建立的PA慢性肺部感染模型,自建模后第7天起分别给予克拉霉素和0.9%氯化钠溶液治疗,对照组小鼠经气道接种无菌琼脂糖珠给予0.9%氯化钠溶液。分别于建模后第7、10、14天处死小鼠。标本进行肺组织细菌培养、病理学检查、支气管肺泡灌洗液(BALF)中γ-干扰素(IFN-γ)/白细胞介素(IL)-4水平测定和肺组织转录因子T-betmRNA/GATA-3mRNA表达水平分析。结果克拉霉素组小鼠在治疗后慢性肺部感染的症状明显改善。经气道接种后第7天,0.9%氯化钠溶液组和克拉霉素组BALF中IFN-γ、IL-4水平均显著高于对照组(P值均<0.05)。气道接种后第14天,克拉霉素组的IFN-γ水平显著低于0.9%氯化钠溶液组(P<0.05)。气道接种后第10、14天,克拉霉素组BALF中IL-4水平均显著高于0.9%氯化钠溶液组和对照组同时间点(P值均<0.05),而IFN-γ/IL-4比值均显著低于0.9%氯化钠溶液组同时间点(P值均<0.05)。气道接种后第7、10天,克拉霉素组与0.9%氯化钠溶液组的Th1、Th2细胞转录因子T-betmRNA、GATA-3mRNA表达水平相近,均显著高于对照组(P值均<0.05)。气道接种后第14天,克拉霉素组T-betmRNA表达水平、T-betmRNA/GATA-3mRNA比值均显著低于0.9%氯化钠溶液组(P值均<0.05)。结论在PA慢性肺部感染初期采用克拉霉素治疗可使小鼠肺组织的Th1/Th2平衡向Th2偏移,有利于缓解气道炎症。

运用胸腔镜技术探索细支气管肺泡细胞癌中医证型与Th1/Th2关系

目的研究细支气管肺泡细胞癌(bronchioloalveolar carcinoma,BAC)中医证型与1型T细胞辅助细胞/2型T细胞辅助细胞(Th1/Th2)的相关性。方法 60例BAC患者按照中医辨证分为气阴两虚证组和气滞痰瘀证组,每组30例;同期收集肺部结节体检良性者30例设为对照组。运用胸腔镜技术检测3组肿瘤组织γ干扰素(INF-γ)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素2(IL-2)及白细胞介素5(IL-5)含量。结果 Th1(INF-γ、IL-2),对照组>气滞痰瘀证组>气阴两虚证组(P<0.05);Th2(IL-4、IL-5),气阴两虚证组>气滞痰瘀证组>对照组(P<0.05);Th1/Th2(INF-γ/IL-4,IL-2/IL-5),对照组>气滞痰瘀证组>气阴两虚证组(P<0.05)。结论 BAC患者肿瘤组织较良性结节体检者组织,Th1功能低下,Th2功能亢进;BAC中医证型与Th1/Th2存在一定相关性,实证患者细胞免疫较强,Th1/Th2左偏;虚证患者则偏向于体液免疫,Th1/Th2右偏。

原发性舍格伦综合征患者血浆弗林蛋白酶和Th1型细胞因子水平表达与唇腺损害及相关腺体功能的关系研究

目的探讨原发性舍格伦综合征(pSS)患者血浆弗林蛋白酶(FURIN)和辅助性T细胞1(Th1)型细胞因子水平表达与唇腺损害及相关腺体功能的关系。方法将邯郸市中心医院2017年8月~2019年8月收治的pSS患者109例作为pSS组,选取同期于邯郸市中心医院体检的健康志愿者90例作为对照组。比较两组血浆FURIN水平及Th1型细胞因子[白介素(IL)-2,IL-7,γ干扰素(INF-γ)]与Th2型细胞因子(IL-4,IL-13)水平。根据欧洲抗风湿联盟舍格伦综合征疾病活动指数(ESSDAI)将患者分成轻度组(n=37)、中度组(n=48)和重度组(n=24),比较三组上述各指标水平与唇腺损害及相关腺体功能指标(唾液流率、唇腺病理分级和Schirmer试验)水平。分析pSS患者抗SSA抗体、抗SSB抗体、血浆FURIN及Th1和Th2型细胞因子的关系,并观察血浆FURIN水平和Th1,Th2型细胞因子水平与唇腺损害及相关腺体功能指标的相关性。结果pSS组血浆FURIN及血清IL-2,IL-7,INF-γ,IL-4,IL-13水平均高于对照组(t=8.054~156.875,均P<0.05),Th1/Th2低于对照组(t=3.624,P=0.000)。中、重度组血浆FURIN及血清IL-2,IL-7,INF-γ,IL-4,IL-13水平、唇腺病理评分高于轻度组(t=5.339~36.092,均P<0.05),且重度组高于中度组(t=4.240~13.707,均P<0.05),而中、重度组Th1/Th2,唾液流率及左、右眼Schirmer试纸浸湿长度低于轻度组(t=3.013~42.715,均P<0.05),且重度组低于中度组(t=3.178~18.641,均P<0.05),差异均有统计学意义。抗SSA抗体、抗SSB抗体阳性患者的血浆FURIN水平及血清IL-2,IL-7,INF-γ,IL-4,IL-13水平高于阴性患者(t=2.560~14.333,均P<0.05),Th1/Th2低于阴性患者(t=2.363~4.604,均P<0.05),差异有统计学意义。血浆FURIN水平与血清IL-2,IL-7,INF-γ,IL-4,IL-13水平及唇腺病理评分呈正相关(r=0.362~0.640,均P<0.05),与Th1/Th2,唾液流率及左、右眼Schirmer试纸浸湿长度呈负相关(r=-0.715~-0.404,均P<0.05)。结论pSS患者血浆FURIN水平明显升高,且其水平变化和Th1及Th2型细胞因子水平与唇腺损害及相关腺体功能指标相关,临床可能通过测定血浆FURIN水平,进一步了解pSS的发病机制。

生血合剂对慢性再生障碍性贫血患者T-bet/GATA-3、相关信号分子、细胞因子表达及Th_1/Th_2的影响

目的研究转录因子T-bet(T-box expressed in T cells)、GATA-3(GATA binding protein3)及相关信号通路在慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anemia,CAA)免疫发病中的作用,从辅助性T(helper T,Th)细胞失衡、转录因子及相关信号通路水平探讨生血合剂治疗CAA的免疫调控机制。方法 40例CAA患者均来自上海中医药大学附属岳阳医院,随机分为治疗组20例和对照组20例,选取体检健康者20名为正常组。治疗组患者辨证分为脾肾阳虚型和脾肾阴虚型,脾肾阳虚型患者服用生血合剂1号,脾肾阴虚型患者服用生血合剂2号,对照组服用环孢菌素A(CsA),采用实时荧光定量PCR(Realtime FQ-PCR)检测CAA患者治疗前后外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMNC)、T-bet、GATA-3及信号转导子及转录激活因子4(signal transducer and activator of transcription 4,STAT4)、STAT6 mRNA表达,采用流式细胞术、酶联免疫吸附法(ELISA)检测CAA患者治疗前后PBMNC Th_1、Th_2比例及PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12、IL-4水平。结果 CAA患者PBMNC T-bet、STAT4 mRNA表达、T-bet/GATA-3比值、Th_1比例、Th_1/Th_2比值、PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12表达均明显高于正常组(P<0.01),采用生血合剂或CsA治疗后,患者T-bet、STAT4表达、T-bet/GATA-3比值、Th_1比例、IFN-γ、IL-12表达均有所下降(P<0.01),但T-bet、STAT4、T-bet/GATA-3比值、Th_1比例、IFN-γ表达仍未达到正常水平,治疗组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而GATA-3、STAT6 mRNA表达、Th_2比例、IL-4表达治疗前后与正常组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路的异常活化,及Th_1/Th_2平衡向Th_1型偏移,在CAA免疫异常的发病过程中起关键的作用。生血合剂和CsA能通过下调IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路的异常活化,并纠正Th_1过度极化,从而减轻CAA异常亢进的细胞免疫,解除造血抑制。

miR-148a-3p通过抑制IL-12/IL-12Rβ_(1)/IL-12Rβ_(2)/IFN-γ通路抑制Th1细胞极化

目的探讨miR-148a-3p调控1型辅助性T(Th1)细胞极化调控的分子机制。方法分离6周龄小鼠的脾单个核细胞,经免疫磁珠阴性分选获得初始CD4+(naïveCD4+)Th细胞,用流式细胞术测定naïve CD4+Th细胞CD62L表达水平。用小鼠白细胞介素12(IL-12)和IL-2及抗小鼠IL-4,CD28和CD3ε单克隆抗体的混合因子体外诱导naïveCD4+Th细胞向Th1细胞极化,同时在诱导体系中加入miR-148a-3p模拟物,诱导72 h。流式细胞术检测干扰素γ(IFN-γ)和CD4双阳性(IFN-γ+CD4+)细胞百分比,实时荧光定量PCR检测Th1细胞极化相关基因IFN-γ、信号转导与转录激活因子1(STAT1)、IL-12受体β_(1)(IL-12Rβ_(1))、IL-12Rβ_(2)、STAT4和T细胞介导的转录调节因子21(Tbx21)mRNA表达水平;Western印迹法检测Th1细胞极化关键转录因子STAT4和磷酸化STAT4(p⁃STAT4)蛋白表达水平。经生物信息学分析预测miR-148a-3p对IL-12/IL-12Rβ_(1)/IL-12Rβ_(2)/IFN-γ通路分子IL-12Rβ_(1),IL-12Rβ_(2),Tbx21和STAT4的调控靶标序列,用双荧光素酶载体psiCHECK2分别构建IL-12Rβ_(1),IL-12Rβ_(2),Tbx21和STAT4的3′UTR序列(psi-wt)及靶标点突变(psi-mutant)序列的克隆载体。将psi-wt和psi-mutant载体分别与miR-148a-3p模拟物共转染至人宫颈癌HeLa细胞,转染36 h后裂解细胞进行双荧光素酶报告基因检测。结果经免疫磁珠分选获得的naïveCD4+Th细胞高表达CD62L,表明naïveCD4+Th细胞分离成功;诱导后Th1细胞极化百分比为(71±5)%,miR-148a-3p模拟物转染后Th1细胞极化百分比下降至(61±3)%(P<0.05)。miR-148a-3p模拟物转染可下调Th1极化关键转录因子STAT1(P<0.01),Tbx21(P<0.01)和STAT4(P<0.01)mRNA表达水平,同时IL-12/IL-12Rβ_(1)/IL-12Rβ_(2)/IFN-γ通路的关键受体IL-12Rβ_(1)(P<0.05)和IL-12Rβ_(2)(P<0.01)及调控Th1极化关键细胞因子IFN-γ(P<0.01)mRNA表达水平亦显著下调。miR-148a-3p模拟物转染可显著下调Th1极化过程所必需的STAT4和p-STAT4蛋白表达水平。生物信息学预测miR-148a-3p靶标并用双荧光素酶报告载体构建含其psi-wt和psi-mutant序列的克隆载体;经双荧光素酶报告系统检测证实,miR-148a-3p可靶向下调IL-12/IL-12Rβ_(1)/IL-12Rβ_(2)/IFN-γ通路的多个关键分子STAT4(P<0.01),Tbx21(P<0.01),IL-12Rβ_(1)(P<0.01)和IL-12Rβ_(2)(P<0.01)表达。结论miR-148a-3p通过靶向抑制IL-12/IL-12Rβ_(1)/IL-12Rβ_(2)/IFN-γ通路中STAT4,Tbx21,IL-12Rβ_(1)和IL-12Rβ_(2)蛋白表达抑制Th1细胞极化。

结核性及恶性肿瘤性胸腔积液淋巴细胞亚群比例以及Th1／Th2免疫平衡研究

目的探讨Th1/Th2免疫应答平衡在结核性和恶性肿瘤性胸腔积液病理生理过程中的可能作用。方法对24例治疗前结核性胸腔积液以及28例患者恶性胸腔积液患者胸液标本进行有核细胞计数、分类和流式细胞仪检测淋巴细胞亚群,检测CD3+,CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞亚群比例,并计算CD4+/CD8+值;利用夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测胸液标本中INF-γ、IL-18、TNF-α以及IL-10的浓度。结果结核性胸腔积液患者胸水中T辅助淋巴细胞以CD3+CD4+细胞为主,其CD3+细胞比例、CD3+CD4+细胞比例以及CD4+/CD8+值均高于恶性肿瘤性胸腔积液组(P<0.01)。2组研究对象INF-γ、IL-18、TNF-α以及IL-10的浓度分别是(中位数):结核性胸腔积液组942.0、1 526、62 pg/ml和153 pg/ml;恶性胸腔积液组10.35、1 763、8.85 pg/ml和66.85 pg/ml。结核性胸腔积液中INF-γ、TNF-α以及IL-10均明显高于恶性肿瘤性胸腔积液中的水平(P<0.01),且平均分别高约90倍、7倍和2倍。IL-18在2组胸腔积液中的含量无显著性差异(P>0.05)。结核性胸腔积液IL-18/IL-10明显低于恶性肿瘤性胸腔积液组(P<0.01)。结论结核性胸腔积液表现为Th1免疫应答为主;而恶性肿瘤性胸腔积液患者存在明显的细胞免疫功能低下。这种低下可能主要以T辅助淋巴细胞受损、Thl免疫应答降低以及Th2免疫应答升高为主。IFN-γ可作为鉴别结核性胸腔积液和恶性肿瘤性胸腔积液特异性和敏感度较高的指标。

Let-7e-5p对变应性鼻炎小鼠Treg/Th17细胞失衡的影响

目的:探讨let-7e-5p对变应性鼻炎(AR)小鼠调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)失衡的影响。方法:12只BALB/c小鼠,3只为正常组,余9只小鼠采用卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝[Al(OH)3]建立AR模型后随机均分为模型组(仅造模)、let-7e-5p激动剂对照组(鼻内滴注let-7e-5p agomir阴性对照)及let-7e-5p激动剂组(鼻内滴注let-7e-5p agomir);采用行为学评分考察各组小鼠的过敏症状,酶联免疫吸附法检测各组小鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素17-A(IL-17A)和白细胞介素-10(IL-10)水平,HE染色观察各组小鼠鼻黏膜组织学变化,采用实时荧光定量PCR检测各组小鼠鼻黏膜组织let-7e-5p的表达、蛋白印迹法检测RORγt和Foxp3蛋白的表达,采用流式细胞术检测各组小鼠外周血CD4^+Foxp3^+Treg和CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群变化。结果:模型组小鼠较正常组的行为学评分、血清IgE及IL-17A水平明显增高、IL-10水平明显降低(P<0.01),let-7e-5p激动剂组较模型组的行为学评分、IgE及IL-17A水平明显下降、IL-10水平明显升高(P<0.01);同模型组比较,let-7e-5p激动剂组小鼠鼻黏膜基底层结构清晰,炎性细胞浸润明显减少;模型组小鼠鼻黏膜组织let-7e-5p基因的表达较正常组减少,let-7e-5p激动剂组则较模型组升高(P<0.05);模型组小鼠鼻黏膜组织RORγt蛋白表达较正常组增加、Foxp3蛋白表达减少,let-7e-5p激动剂组小鼠鼻黏黏膜组织RORγt蛋白表达较模型组减少、Foxp3蛋白表达增加(P<0.05);模型组小鼠较正常组外周血中CD4^+Foxp3^+Treg细胞亚群比例明显降低,CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群比例明显升高(P<0.01);let-7e-5p激动剂组小鼠较模型组的CD4^+Foxp3^+Treg细胞亚群比例显著升高,CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群比例明显降低(P<0.01)。结论:Let-7e-5p可能通过调节AR小鼠Foxp3和RORγt蛋白的表达,介导Treg/Th17细胞平衡,减轻炎症反应,从而改善AR小鼠鼻部过敏症状。

Th17和Th9细胞参与自身免疫性疾病病理机制研究进展

CD46＋T细胞具有抗原识别特异性，是主要组织相容性复合物Ⅱ类分子限制性T细胞。CD4^＋T细胞受到抗原刺激而活化，活化后的效应T细胞根据产生细胞因子种类和生物学功能的不同，可以分为辅助性T细胞1型（Thelpcell1，Thl）、2型（Thelpcell2，Th2）和调节性T细胞（regulatory Tcells、Treg）。Thl细胞主要产生γ干扰素（Interferon-γ，IFN-γ）、白细胞介素2（Interleukin-2，

Th17细胞与血液肿瘤

机体特异性免疫应答包括细胞免疫和体液免疫，其中T细胞介导的细胞免疫是机体抗肿瘤免疫的主体。依据T细胞表面抗原的不同，可将T细胞分为CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞。依据CD4^＋T细胞分化过程和功能特征的不同，传统意义上将CD4^＋T细胞分为辅助性T细胞1型（Th1细胞）、辅助性T细胞2型（Th2细胞）、

CD4^(+)T细胞亚群在皮肌炎发病机制中的研究进展

目的探讨皮肌炎(DM)的免疫学发病机制,特别关注CD4^(+)T细胞亚群在其发病过程中的作用。方法从免疫失衡的角度,通过分析近10年来的文献,深入探讨了DM与CD4^(+)T细胞亚群的关联,全面梳理了细胞因子及相关信号分子等方面的信息。结果主导免疫反应的CD4^(+)T细胞亚群,在DM的发病过程中有显著影响。其中,辅助性T细胞1型(Th1)与Th2和Th17与调节性T细胞(Tregs)比值的不平衡在DM的病理过程中起着核心作用。新发现的CD4^(+)T细胞亚群,Tph细胞(PD-1hiCXCR5−CD4^(+))可能也参与DM的发病过程。结论CD4^(+)T细胞因子的异常表达及其网络失衡参与了DM的免疫学发病机制,为治疗DM提供了新的视角。

不同血糖水平的冠心病患者外周血中Th1、Th2细胞比例变化分析

目的探讨不同血糖水平的冠心病患者外周血中1型辅助性T细胞(Th1)、2型辅助性T细胞(Th2)的细胞比例变化.方法选取冠心病患者86例,根据血糖检测结果分为冠心病血糖正常组34例,冠心病合并糖耐量异常组20例,冠心病合并糖尿病组32例;另收集同期健康志愿者25名为健康对照组.采集空腹外周静脉血,检测空腹血糖、糖化血红蛋白、γ干扰素、白细胞介素4、白细胞介素5、白细胞介素10水平.分离外周血单个核细胞,流式细胞仪检测Th1、Th2细胞比例.分离并培养人脐静脉内皮细胞,并使用免疫磁珠清除外周血单个核细胞中CD4+T细胞,进行人脐静脉内皮细胞毒性试验.出院后对冠心病患者进行1 a的随访,记录主要不良心血管事件发生情况.结果冠心病合并糖尿病组患者空腹血糖、糖化血红蛋白水平明显高于健康对照组、冠心病血糖正常组、冠心病合并糖耐量异常组(P<0.05).冠心病合并糖尿病组Th1细胞比例明显高于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组,Th2细胞比例明显低于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组(P<0.05).冠心病合并糖尿病组γ干扰素水平明显高于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组,白细胞介素4、白细胞介素5、白细胞介素10水平明显低于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组(P<0.05).冠心病合并糖尿病组患者外周血单个核细胞水平明显低于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组(P<0.05);清除CD4+T细胞的外周血单个核细胞在各组间比较差异无统计学意义(P>0.05).空腹血糖、糖化血红蛋白、Th1细胞比例、Th2细胞比例对冠心病患者预后均具有较高的预测价值(P<0.05);其中各指标联合检测的预测价值最高(AUC=0.942),灵敏度、阳性预测值均明显高于各指标单独检测.结论高糖状态下冠心病患者外周血中Th1细胞比例升高,Th2细胞比例降低,能够加速血管内皮细胞损伤,与空腹血糖和糖化血红蛋白联合检测可用于患者预后评估.

特异性免疫治疗通过改善Th1/Th2免疫失衡减轻哮喘小鼠肺部炎症

目的:探讨特异性免疫治疗(SIT)对哮喘小鼠肺部炎症反应的影响及其机制。方法:小鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、SIT组及地塞米松组。模型组、SIT组及地塞米松组均建立哮喘小鼠模型,建模激发阶段后SIT组注射1 mg的卵白蛋白(OVA),地塞米松组灌胃0.075 mg/mL地塞米松溶液,其余小鼠注射等体积的PBS溶液,后进入雾化阶段。采用肺功能仪检测气道反应;瑞氏-吉姆萨染色观察肺泡灌洗液(BALF)中的炎症细胞;ELISA检测BALF中细胞因子IL-13、IL-4、IL-5及干扰素-γ(IFNγ);H-E染色观察肺组织病理形态;过碘酸雪夫(PAS)染色观察肺气道上皮杯状细胞;流式细胞术检测肺组织中IFNγ及IL-4占比。结果:在6.25、12.50、25.00μg/kg及50.00μg/kg的乙酰胆碱作用下,模型组小鼠气道反应高于对照组,SIT组及地塞米松组的气道反应均低于模型组,但SIT组及地塞米松组间差异无统计学意义。与对照组相比,模型组小鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞(%)、嗜酸性粒细胞(%)、IL-4、IL-5、IL-13、气道上皮杯状细胞、辅助型T细胞2(Th2)均升高,IFNγ降低;与模型组相比,SIT组BALF中细胞总数、中性粒细胞(%)、嗜酸性粒细胞(%)、IL-4、IL-5、IL-13、气道上皮杯状细胞降低,IFNγ升高,SIT组与地塞米松组间差异无统计学意义。对照组小鼠肺泡及气道结构规整,气道壁较薄,管腔无狭窄;模型组小鼠肺组织结构破坏显著,气道壁较厚,肺泡结构破坏显著,炎症浸润明显且血管周围存在水肿。SIT组及地塞米松组小鼠肺组织炎症浸润改善,血管水肿程度降低,管腔狭窄缓解。结论:SIT可缓解哮喘小鼠气道高反应性,抑制BALF中炎症细胞及炎症因子活性,通过抑制气道上皮杯状细胞增生而改善通气,其机制与改善肺组织中辅助型T细胞1/辅助型T细胞2免疫失衡相关。

寿胎丸对不明原因复发性流产患者外周血Th1/Th2细胞的影响

复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)是产科中常见的疾病,其中约50%不清楚原因,称不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)。因病因不明确,治疗缺乏循证依据,多数治疗存在争议。中医药在URSA治疗中初现优势,寿胎丸在该疾病中有显著疗效。

桂枝汤通过抑制淋巴细胞向Th2细胞分化抑制变应性接触性皮炎

目的利用异硫氰酸荧光素(FITC)诱导的小鼠变应性接触性皮炎模型以及小鼠脾淋巴细胞,探讨桂枝汤对变应性接触性皮炎的治疗作用和机制。方法BALB/c小鼠腹部刮毛后,在d1、2用质量分数为1.5%FITC溶液涂抹腹部致敏,d6用质量分数为0.6%FITC溶液涂抹小鼠右耳进行激发,d1~7灌胃给予桂枝汤。激发24h后测定小鼠左右耳厚,打耳圆片;检查耳组织的病理。测定耳匀浆中IL-4、IL-5、IL-9、IFNγ,以及血清中IgE的水平。利用ConA刺激小鼠脾淋巴细胞,检测IL-4、IL-10、GATA3以及IFNγ、T-bet的表达水平。结果桂枝汤明显抑制小鼠耳肿胀度,缓解耳组织中炎性细胞浸润和水肿;降低耳匀浆中IL-4、IL-9、IFNγ以及血清中IgE的水平;抑制ConA刺激下脾淋巴细胞中IL-4、IL-10、GATA3及IFNγ的表达。结论桂枝汤能明显抑制FITC诱导的小鼠变应性接触性皮炎,其机制可能与直接抑制淋巴细胞向Th2细胞分化有关。

脑梗死合并肺部感染病人Th1/Th2、CRP/ALB比值和NLR变化及临床意义

目的探讨脑梗死合并肺部感染病人辅助型T细胞1/辅助型T细胞2(Th1/Th2)、C反应蛋白与白蛋白(CRP/ALB)比值和中性粒细胞/淋巴细胞计数比值(NLR)变化及临床意义。方法选取2016年7月—2019年6月石家庄市第五医院就诊的单纯脑梗死病人238例作为脑梗死组,脑梗死合并肺部感染109例病人作为感染组,另选取健康体检者71名作为对照组。比较3组Th1/Th2比值、CRP/ALB比值和NLR差异,分析3项指标是否为脑梗死发生肺部感染的危险因素,并采用受试者工作特征曲线(ROC)判断Th1/Th2、CRP/ALB和NLR预测脑梗死发生肺部感染的临床价值。结果感染组Th1/Th2比值低于脑梗死组和对照组,CRP/ALB和NLR比值高于脑梗死组和对照组(P<0.05);肺部感染评分(CPIS)高分组病人Th1/Th2比值低于低分组,CRP/ALB和NLR比值高于低分组(P<0.01);死亡组Th1/Th2比值低于生存组,CRP/ALB和NLR比值高于生存组(P<0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示:CRP/ALB、NLR是脑梗死发生肺部感染的相关危险因素,而Th1/Th2是保护性因素。进一步ROC曲线分析结果显示:CRP/ALB的ROC下面积为0.725,NLR的ROC下面积为0.621。结论Th1/Th2比值、CRP/ALB比值和NLR是脑梗死合并肺部感染的相关因素,CRP/ALB和NLR比值可一定程度预测脑梗死合并肺部感染的发生。