重组AAV1-Luc病毒制备及体外转导培养细胞的特性

目的制备携带萤火虫荧光素酶基因的重组AAV1病毒(rAAV1-Luc),研究该病毒体外转导培养细胞的特性。方法通过"1株载体细胞/1株辅助病毒"的双因素包装策略制备出rAAV1-Luc,研究该重组病毒体外转导哺乳动物细胞的量效关系,肝素对转导的拮抗作用、rAAV1的竞争抑制作用及丁酸钠对表达水平的增强作用。结果在一定范围内,随着rAAV1-Luc感染细胞的感染复数(MOI,即每个细胞感染的病毒基因组数)值增高,荧光素酶的表达水平也增高;但更高的MOI(>107)反而使荧光素酶的表达水平下降。肝素不能特异性阻断rAAV1介导的荧光素酶表达。携带不同基因的2种rAAV1病毒相互具有明显的竞争抑制作用。丁酸钠可显著增强rAAV1介导的荧光素酶表达水平。结论该研究揭示了rAAV1载体一定的细胞转导特性,对应用rAAV1载体介导基因转移研究具有指导意义。

rAAV1介导的SER CA2a基因转移对犬心力衰竭心功能改善作用

目的探讨重组1型腺相关病毒(rAAV1)介导的SERCA2a基因转移对心力衰竭(HF)犬心功能的改善作用及机制。方法选取20只健康雄性比格犬,随机分为对照组、HF组、HF+EGFP组和HF+SERCA2a组,检测各组犬心功能,采用TUNEL法和免疫组织化学法检测心肌细胞凋亡及MMP-9表达。结果 HF组和HF+EGFP组左室舒张期内径(LVDD)、左室收缩期内径(LVSD)和左室后壁厚度(LVPWD)明显高于对照组和HF+SERCA2a组,而射血分数(EF)明显低于对照组和HF+SERCA2a组(P<0.05);HF组和HF+EGFP组左室收缩压峰值(LVSP)和左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)明显低于对照组和HF+SER-CA2a组,而左室舒张末压(LVEDP)和左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)明显高于对照组和HF+SERCA2a组(P<0.05);HF+SERCA2a组心肌细胞凋亡指数明显低于HF组和HF+EGFP组(P<0.05);HF+SERCA2a组MMP-9光密度值高于对照组(P<0.05)。结论 rAAV1介导的SERCA2a基因转移能有效改善HF犬心功能,其机制可能与抑制心肌细胞凋亡、下调MMP-9表达有关。