临床分离志贺菌耐药性分析及1类整合子的检测

目的了解2007年至2010年安徽省临床分离志贺菌耐药性和1类整合酶基因(intⅠ1)、qacE△1-sul1基因及整合子携带的耐药基因盒的分布。方法琼脂稀释法检测21种抗菌药物对志贺菌的最低抑菌浓度。PCR扩增intⅠ1和qacE△1-sul1基因,对阳性菌株可变区基因盒序列进行分析。结果 137株志贺菌对萘啶酸、氨苄西林、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率均80.0%以上,且多重耐药率达94.2%,但对三代头孢菌素和氟喹诺酮类耐药率在33.0%以下。intⅠ1的检出率为89.1%(122/137),检出dfrA17-aadA5和aar-3-aacA4两种基因盒,首次在志贺菌中检测到aar-3-aacA4基因,GenBank登录号JF271916。结论安徽省临床分离志贺菌多重耐药现象严重。临床仍可选用氟喹诺酮类和三代头孢菌素作为本地区细菌性痢疾的经验性治疗。1类整合子与志贺菌的耐药具有一定的相关性。

食品中变形杆菌第1类整合子鉴定和特征

目的探讨肉类食品中变形杆菌第1类整合子的分布、特征及所含基因盒的种类。方法常规方法分离变形杆菌;纸片扩散法对9种抗生素进行耐药性监测和分析;PCR鉴定1类整合子;阳性株PCR产物测序并对结果进行分析。结果91份标本中共鉴定出27株变形杆菌,有13株(48.1%)对至少4种以上抗生素表现多重耐药,耐药谱为复合磺胺-氨苄西林-红霉素-四环素-链霉素。13株中有3株鉴定出1类整合子,2株携带0.75和1.8 kb 2个整合子。1株携带1.0 kb整合子,PCR产物测序,1.0 kb整合子携带aadA2基因盒,传递对氨基糖苷类抗生素的耐药性。结论肉类食品中变形杆菌携带第1类整合子,1.8 kb整合子携带pse-1-aadA1-dfrA14基金盒,传递对β-内酰胺类、磺胺类、氨基糖苷类抗生素的耐药性。携带复杂的基因盒,决定着对β-内酰胺类、氨基糖苷类和磺胺类抗生素的耐药性。

健康学生大肠埃希菌第1类整合子的鉴定及特征

目的:探讨健康学生肠道大肠埃希菌携带第1类整合子的分布及所含基因盒的特征。方法:常规方法分离大肠埃希菌;纸片扩散法对10种抗生素进行耐药性监测和分析;PCR鉴定第1类整合子阳性株;PCR产物测序并对结果进行分析。结果:从97份标本中鉴定出大肠埃希菌76株,其中25株(32.8%)为多重耐药,耐药谱为复合磺胺-氨苄西林-四环素-红霉素-链霉素。25株中有14株(56.0%)鉴定出1类整合子,1 800 bp10株,750 bp 4株。PCR产物测序得知1 800 bp整合子携带aadA1-dfrA14-orf基因盒,传递对氨基糖苷类-磺胺类抗菌药物的耐药性;750 bp整合子携带dfrA14基因盒,传递对磺胺类抗菌药物的耐药性。结论:不同种类的1类整合子存在于健康人大肠埃希菌中,携带耐药基因盒,决定多重耐药性。

在铜绿假单胞菌临床分离株1类整合子中发现携带新型耐药基因盒

目的:研究铜绿假单胞菌中1类整合子的分布和结构特征及与多重耐药的关系。方法:应用聚合酶链反应(PCR)检测铜绿假单胞菌1类整合酶基因(intⅠ)并扩增其可变区;DNA测序技术分析1类整合子可变区的耐药基因;对1类整合子阳性菌采用琼脂平皿稀释法测定其MIC并进行转移接合明确其耐药基因转移情况;脉冲场凝胶电泳法(PFGE)了解这些阳性菌的遗传相关性。结果:47株铜绿假单胞菌临床分离株中,29株携带1类整合子,未检测到3类整合子。这29株包含的整合子均扩增出长度约4.3kb的可变区,核酸序列分析发现存在新型耐药基因盒组合形式aac(6’)-Ⅱ-aadA13-cmlA8-oxa-10,Genbank基因号为EU182575。其中基因盒aadA13以往未在铜绿假单胞菌中发现。同时第3个开放阅读框与已知基因cmlA5有95%的同源性,为编码氯霉素外排泵的基因盒,将其命名为cmlA8。PFGE结果分析显示29株阳性菌株具有高度的同源性。结论:本院流行的铜绿假单胞菌携带包含新型基因盒及组合形式的Ⅰ类整合子,再次证实1类整合子参与了铜绿假单胞菌的耐药和多重耐药。

159株志贺菌耐药及非典型1类整合子基因盒携带情况分析

目的观察志贺菌临床耐药情况及非典型1类整合子基因盒的携带情况。方法采用K-B纸片法对天津地区3所三级甲等医院分离的159株志贺菌进行药敏试验,分析其耐药情况。采用RT-PCR法检测志贺菌1类整合子基因盒携带情况,并进行基因测序分析其耐药基因盒类型。结果 159株志贺菌中,对3种及3种以上抗菌药耐药148株(93.1%),抗生素耐药情况分别为四环素85.5%、复方新诺明82.4%、氨苄西林82.4%;携带1类整合子基因盒134株,其中非典型1类整合子106株(66.7%);非典型1类整合子可变区携带的耐药基因盒blaox a-30-aad A1(6.6%)、aad A5R(4.7%)、dfr A12R(57.5%)。结论志贺菌多药耐药现象较明显,菌株携带非典型1类整合子比例较高,其主要可变区耐药基因盒种类为dfr A12R。

志贺菌属非典型1类整合子与耐多药关系

目的研究志贺菌属中非典型1类整合子的分布及其与耐多药性的关系。方法对实验室保存的90株志贺菌属进行8种抗生素药敏实验,针对非典型1类整合子的耐药基因盒区域设计引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增和限制性片段长度多态性(RFLP)分析,对代表性菌株进行测序分析。结果 90株志贺菌属中有86株(95.6%)对≥3种抗生素耐药;有66株(73.3%)对氨苄青霉素(AMP)、四环素(TET)和氯霉素(CHL)联合耐药;非典型1类整合子分布于65株(72.2%)志贺菌属中;RFLP分析结果表明,所有酶切产物的带型均一,测序分析发现序列为blaoxa-30-aadA1;非典型1类整合子阳性菌株对AMP-TET-CHL联合耐药率(81.5%)高于阴性菌株(52.0%),经双侧χ2检验发现差异有统计学意义(P<0.05)。结论志贺菌属非典型1类整合子阳性与其对AMP-TET-CHL联合耐药有关,可能参与耐多药性的形成。

食源性沙门氏菌第Ⅰ类整合子检测及其耐药基因盒分析

目的:了解食源性沙门氏菌的耐药性、Ⅰ类整合子分布及其耐药基因盒的结构序列,为Ⅰ类整合子的分子进化提供理论基础。方法:采用K-B纸片法检测食源性沙门氏菌对14种抗生素的敏感性;利用聚合酶链式反应(PCR)扩增整合酶基因intI1检测食源性沙门氏菌中Ⅰ类整合子携带率及可变区耐药基因盒。结果:食源性沙门氏菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类和磺胺类的最高耐药率分别为18.75%、12.5%、6.25%和25%。59.4%(19/32)的食源性沙门氏菌检测出第Ⅰ类整合子。PCR扩增Ⅰ类整合子耐药基因盒,扩增产物大小为1009和1664bp,携带aadA5、dfr17和aadA2耐药基因,可分别介导对氨基糖苷类抗生素壮观霉素、链霉素和磺胺类药物甲氧苄氨嘧啶的耐药。结论:食源性沙门氏菌中也检测到较高的耐药率及整合子携带率,提示我们应该从基因水平上对食源性致病菌耐药及其传播进行监测。

肺炎克雷伯菌blaCARB-2基因的分布及结构分析

为探讨β-内酰胺酶基因在临床分离肺炎克雷伯菌的分布及其相关可移动遗传元件的结构,本文利用基因组测序、PCR、分子克隆、接合转移和基因组学分析等方法,在对240株临床分离的肺炎克雷伯菌进行混合基因组测序的基础上,着重研究了bla_(CARB-2)等耐药性基因相关可移动遗传元件的结构及其在肺炎克雷伯菌基因组的定位,克隆获得耐药性质粒携带的若干耐药性基因并测定了它们的功能。结果显示,在240株肺炎克雷伯菌中检出11种β-内酰胺酶基因,其中1株肺炎克雷伯菌(KP1276)被检出bla_(CARB-2)基因,阳性率为0.42%(1/240);bla_(CARB-2)位于一个大小为182,450 bp的可接合转移质粒(pKP1276-182),pKP1276-182共编码222个基因,包含7个耐药性基因,分别是bla_(CARB-2)、bla_(KLUC)、aadA1、aadA2、cmlA1、dfrA1和sul2。bla_(CARB-2)是首次在肺炎克雷伯菌中被检出,且bla_(CARB-2)与其他3个耐药性基因一起构成一个新型结构的1型整合子(int-bla_(CARB-2)-aadA2-cmlA1-aadA1);对其中的3个耐药性基因bla_(CARB-2)、aadA2和CmlA1进行了分子克隆和耐药性测定,结果显示它们对相应药物都具有一定的耐药性,其中bla_(CARB-2)对青霉素类β-内酰胺药物具有较高的耐药性。本研究结果表明,bla_(CARB-2)基因已经在肺炎克雷伯菌中出现,其由1型整合子携带编码位于一个可接合转移的质粒上,bla_(CARB-2)基因有可能在相同及不同种属肠杆菌之间进行水平转移,引起耐药性播散。

急性腹泻患者奇异变形杆菌对抗菌药物的耐药研究

目的了解分离自急性腹泻患者奇异变形杆菌的耐药状况,为防治其感染与合理使用抗菌药物提供依据。方法收集2013—2014年天津医科大学第二医院和天津医科大学总医院肠道门诊急性腹泻患者粪便标本进行分离培养和生化鉴定,对鉴定得到的奇异变形杆菌进行抗菌药物敏感性试验和1类整合子聚合酶链式反应(PCR)扩增,对部分可疑菌株进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型确证试验和PCR扩增ESBLs基因(TEM、OXA和CTX-M)并测序,对ESBLs阳性菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型。结果共非重复分离到奇异变形杆菌277株,对其中268株进行了药敏试验(其余9株未能复苏成功)。耐药率较高的为甲氧苄啶/磺胺甲噁唑(30.2%)、氨苄西林(25.4%)、萘啶酸(25.7%)、链霉素(21.6%)和氯霉素(21.3%),多重耐药率为24.6%(66/268)。对三代头孢、环丙沙星和亚胺培南等的耐药率小于10%,但有4株菌对亚胺培南、三代头孢、氟喹诺酮、复方磺胺和氯霉素均不敏感。1类整合子阳性率为22.8%(61/268)。在头孢噻肟耐药株中随机选取的3株菌(1062、1505和1650)ESBLs表型均阳性,均携带CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因,其中2株还同时携带TEM和(或)OXA非超广谱β-内酰胺酶基因。PFGE聚类分析显示,1505和1650相似度为85.7%,前两者与1062相似度为58.1%。结论本地区急性腹泻患者分离的奇异变形杆菌呈现明显多重耐药,1类整合子携带率较高,出现ESBLs阳性且同时对碳青霉烯和氟喹诺酮均耐药的菌株,对公众健康构成威胁,临床和非临床领域均需要合理使用抗菌药物。

肉鸡屠宰加工生产链中沙门菌耐药基因检测与耐药性分析

利用聚合酶链式反应(PCR)扩增整合酶基因intⅠ检测沙门菌中Ⅰ类整合子携带率及可变区耐药基因盒并从β-内酰胺类、磺胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类和酰胺醇类等5类抗生素的15种耐药基因进行检测,微量肉汤稀释法(MIC法)测定菌株对8类13种抗菌药的敏感程度。结果显示:肉鸡屠宰加工生产链中分离的沙门菌共检测12种耐药基因,未检测到β-内酰胺类的blaoxA-1group、blapse-1、四环素类的tetB和tet X基因。其中,以耐药基因catⅠ的检出率最高,87%(59/68);其次是tet G,检测率是85%(58/68);blatem耐药基因69%(47/68)。69%(47/68)的沙门菌检测出第Ⅰ类整合子。PCR扩增Ⅰ类整合子耐药基因盒,检测率为73%(35/47),扩增产物大小为1 009,1 664bp,携带aadA5、dfrl7和aadA2耐药基因,可分别介导对氨基糖苷类抗生素壮观霉素、链霉素和磺胺类药物甲氧苄氨嘧啶的耐药。68株菌中对AM的耐药率最高,多重耐药(≥2)菌株高达85%。结果表明:肉鸡屠宰加工生产链中沙门菌检测到较高的耐药基因及整合子携带率,对常见抗生素具有不同程度的耐药性,且耐药基因在耐药药敏试验结果与耐药基因的检测结果具有一致性。