乳腺癌易感蛋白BRCA1的BRCT1结构域染色质伸展活性的定位

乳腺癌易感基因BRCA1(Breastcancersusceptibilitygene 1)在乳腺癌的发生、发展中起重要作用。BRCA1C末端含有 2个BRCT结构域 (BRCT1和BRCT2 ) ,许多乳腺癌易感突变发生在BRCA1的BRCT结构域中。利用染色质结构检测技术表明 ,BRCT结构域具有染色质伸展活性。本文利用缺失突变技术构建了 6种BRCT1结构域 (16 42 1736aa)缺失突变体并将BRCT1结构域中与染色质伸展相关的重要区域定位到 16 91 172 1之间的氨基酸残基 ;用丙氨酸扫描技术构建了 10种BRCT1结构域丙氨酸扫描突变体并将重要氨基酸残基序列定位到 170 7 1711之间的IAGGK。利用定位的重要区域进行Blast分析 ,结果找到一新型同源蛋白质。BRCT1结构域的定位有助于预测BRCT1结构域突变后发生乳腺癌的风险 。

裸子植物中光敏色素PHY-PAS1结构域的适应性进化

光敏色素是一类红光/远红光受体,在植物种子萌发到成熟的整个生长发育过程中均起重要的调节作用。光敏色素PHY-PAS1结构域存在于光敏色素基因家族的所有成员中,对调节发色团的光谱特性和光信号转导非常关键。光敏色素基因家族通过基因重复产生,而基因重复可能与物种形成有关。PHYP基因是裸子植物光敏色素基因家族发生第1次重复后产生的,并且以单拷贝形式存在。为了研究不同裸子植物PHYP基因编码蛋白的PHY-PAS1结构域在进化过程中是否受到相同的选择压力以及是否发生了适应性进化,该研究利用分支模型、位点模型以及分支-位点模型对裸子植物31条PHYP基因序列编码蛋白的PHY-PAS1结构域所受到的选择压力进行了分析。结果表明,在由PHY-PAS1结构域序列构建的系统树中,多数分支处于强烈的负选择压力下(ω<1);有14个分支处于正选择压力下(ω>1),其中13个分支发生在属内种间;与之相比,在较为古老的谱系中相对缺少这种正选择压力。

TBC1结构域家族成员15蛋白、最小表观扩散系数对脑胶质瘤恶性程度及预后的预测价值

目的探讨TBC1结构域家族成员15蛋白(TBC1D15)、最小表观扩散系数(ADC)对脑胶质瘤恶性程度及预后的预测价值。方法选取132例脑胶质瘤患者,其中低级别胶质瘤患者56例,高级别胶质瘤患者76例,分析不同分级脑胶质瘤组织中TBC1D15蛋白、最小ADC值差异。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估TBC1D15、最小ADC值对脑胶质瘤恶性程度及预后的预测价值。结果高级别脑胶质瘤组织中TBC1D15蛋白积分光密度(IOD)明显高于低级别脑胶质瘤组织(P﹤0.01),最小ADC值明显低于低级别脑胶质瘤组织(P﹤0.01)。截至2021年6月,132例脑胶质瘤患者中,死亡52例,生存80例,死亡脑胶质瘤患者脑胶质瘤组织中TBC1D15蛋白IOD值明显高于生存患者(P﹤0.01),最小ADC值明显低于生存患者(P﹤0.01)。TBC1D15蛋白IOD值、最小ADC值预测高级别脑胶质瘤的AUC分别为0.883和0.848,此时的最佳截断值为0.99和1.11×10^(-3) mm^(2)/s。TBC1D15蛋白IOD值、最小ADC值预测脑胶质瘤患者死亡的AUC分别为0.913和0.888,此时的最佳截断值分别为1.12和0.95×10^(-3) mm^(2)/s。结论高级别脑胶质瘤组织TBC1D15蛋白表达上调,但最小ADC值较低,在预测脑胶质瘤恶性程度及预后方面有一定价值。

应用ABEEMσπ/MM模型对重组人纤溶酶原Kringle 1结构域与配体分子的对接计算

应用原子-键电负性均衡方法的浮动电荷分子力场(ABEEMσπ/MM),对重组人纤溶酶原Kringle1结构域(K1Pg)与配体ε-Aminocaproic acid(EACA),trans-4-(Aminomethyl)cyclohexane-1-carboxylic acid(AMCHA),L-Lysine(Lys),7-Aminoheptanoic acid(7-AHA)和Benzylamine进行了半柔性对接计算.用ABEEMσπ/MM模型优化得到的复合物K1Pg/EACA和K1Pg/AMCHA的结构很接近实验晶体结构.此外通过对5种配体与K1Pg结合能的计算,得出5种配体与K1Pg结合能的大小顺序为AMCHA>EACA>7-AHA>Lys>Benzy-lamine,与实验中测得5种配体与K1pg的平衡结合常数K值大小顺序相一致.

P-loop,Bet v 1结构域的缺失及突变对GmPR10和Gly m 4l抑制大豆疫霉菌能力的影响

大豆疫霉根腐病是由大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)引起的危害大豆生长的严重病害。课题组前期研究表明具有P-loop结构域的GmPR10(Gene Bank accession no.FJ960440)和具有P-loop、Bet v1结构域的Gly m 4l(Gene Bank accession no.HQ913577.1)抑制大豆疫霉菌生长,并且过表达GmPR10和Gly m 4l的转基因大豆植株可以提高对大豆疫霉根腐病的抗性。为研究GmPR10和Gly m 4l抑菌机理,本研究利用点突变技术,获得了GmPR10的P-loop结构域突变体(Gly48/Thr48和Gly^51/Arg^51)、Gly m 4l的P-loop结构域突变体(Gly^49/Ile^49和Lys^55/Pro^55)、GmPR10和Gly m 4l的P-loop结构域以及Gly m 4l的Bet v1结构域缺失突变体,并纯化回收相应突变体蛋白,进行体外抑制大豆疫霉菌试验。结果表明,突变或缺失P-loop,Bet v1结构域的GmPR10和Gly m 4l失去了抑制大豆疫霉菌(Race 1)生长的能力,说明P-loop、Bet v 1结构域对GmPR10和Gly m 4l行使抑菌功能至关重要。

烟草微丝结合蛋白Fimbrin-ABD1结构域的表达及纯化

微丝骨架在细胞生命活动中发挥着重要作用,微丝结合蛋白通过调控微丝骨架达到调节细胞生理过程的作用,Fimbrin是重要的微丝结合蛋白,目前对其调控机制还不清楚。以烟草Fimbrin基因为模板,首先通过PCR技术获得了其肌动蛋白结合域(actin-binding domain,ABD1)基因,随后构建了蛋白表达载体pET28a-Fimbrin-ABD1,经IPTG诱导获得了Fim-brin-ABD1包涵体,通过摸索包涵体复性的条件得到了有活性Fimbrin-ABD1结构域,并对其功能进行了初步研究,为进一步探讨其作用机制奠定了基础。

TBC1结构域家族成员4与心肌胰岛素抵抗的研究进展

体外循环是心血管外科开胸心内直视手术必需的重要辅助手段,而体外循环术后常见的严重并发症是心肌缺血再灌注损伤(MIRI)。MIRI的发生机制复杂,心肌胰岛素抵抗(IR)是其重要发病机制之一,其中心肌细胞葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达和转位异常是心肌IR发生的主要原因。TBC1结构域家族成员4是TBC家族蛋白的重要成员,可通过Rab蛋白调控GLUT4的囊泡转运,是磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路和AMP活化的蛋白激酶信号通路重要的下游靶点,与IR的发生密切相关。

抑制lncRNA TUG1下调核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白1炎症小体在延缓阿尔茨海默病进展的作用

目的探讨敲低长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)抑制核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白1(NLRP1)炎症小体在缓解阿尔茨海默病进展中的作用。方法选取9~10周龄遗传背景为C57/BL6的野生型小鼠(WT组,10只)或淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)转基因小鼠(30只)。APP/PS1转基因小鼠随机分为模型(model)组,模型+敲低lncRNA TUG1组[model+lncRNA TUG1短发夹RNA(shRNA)组]和model+shRNA非靶标(NT)组,每组10只。分别采集12周龄第1天(3月龄)和32周龄第1天(8月龄)小鼠外周血和脑皮质组织,并分离皮质中的原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞,每个时间点每组5只小鼠。Real-time PCR分别测定3月龄和8月龄上述4个分组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)mRNA的水平,以及原代星形胶质细胞中补体蛋白C1r和C1s mRNA的水平。ELISA法测定其外周血浆中MIF含量。对3月龄和8月龄小鼠脑皮质原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞共培养。CCK-8法测定上述2种细胞的增殖能力。Western blotting分别测定3月龄和8月龄上述4个分组小鼠脑皮质组织中MIF、白细胞介素1β前体(pro-IL-1β)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)、NLRP1及NLRP3蛋白的表达水平。采用免疫荧光染色法测定8月龄各分组小鼠脑皮质组织中β淀粉样蛋白(Aβ)表达。结果3月龄和8月龄时,与WT组小鼠相比,model组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF相对表达水平显著上调,原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞增殖能力增强(P<0.05)。与model组相比,model+lncRNA TUG1 shRNA组小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF的相对表达水平显著降低,原代小胶质细胞和原代星形胶质细胞增殖能力降低(P<0.05)。与WT组相比,model组小鼠外周血浆中MIF含量显著升高;小鼠脑皮质组织中pro-IL-1β、ASC、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)、NLRP1以及NLRP3的蛋白表达水平显著升高;Aβ免疫荧光强度明显增强(P<0.05)。与model组相比,model+lncRNA TUG1 shRNA组小鼠外周血浆中MIF含量显著降低;小鼠脑皮质组织中pro-IL-1β、ASC、Caspase-1(p20)、Caspase-1(full)和NLRP1的蛋白表达水平显著降低,Aβ免疫荧光强度明显降低(P<0.05),而NLRP3蛋白质的表达水平无明显变化(P>0.05)。与model组相比,model+shRNA NT组小鼠上述所有检测指标差异均无显著性(P>0.05)。结论APP/PS1转基因小鼠脑皮质组织和原代小胶质细胞中lncRNA TUG1和MIF因子表达上调与脑皮质内NLRP1炎症小体激活成正相关,敲低lncRNA TUG1可缓解阿尔茨海默病的进展。

菱形结构域蛋白1、肝癌缺失基因1、β-连环蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨菱形结构域蛋白1(RHBDD1)、肝癌缺失基因(1DLC1)、β-连环蛋白在结直肠癌(CRC)与癌旁组织中表达水平的差异,分析三者在CRC组织中表达的相关性及与临床病理特征的关系。方法 以2021—2022年内蒙古包钢医院经外科手术切除且病理类型为腺癌的结直肠癌患者30例为研究对象,采用定量反转录聚合酶链式反应及蛋白质印迹法测定RHBDD1、DLC1和β-连环蛋白在CRC和癌旁组织中的表达情况,并分析三者在CRC中表达的相关性及与临床病理特征的关系。结果 RHBDD1、β-连环蛋白在癌组织中的表达高于癌旁组织,DLC1在癌组织中的表达低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。在CRC中,RHBDD1和β-连环蛋白的表达呈正相关。RHBDD1、β-连环蛋白均与DLC1的表达呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05);RHBDD1、β-连环蛋白的表达量与组织分化程度呈负相关,与TNM分期、淋巴结转移呈正相关;DLC1与组织分化程度呈正相关,与TNM分期、淋巴结转移呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RHBDD1和β-连环蛋白在CRC中高表达,DLC1在CRC中低表达;RHBDD1、β-连环蛋白、DLC1与组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关,且三者之间具有相关性,提示三者联合检测可能为CRC的诊断提供理论依据。

己糖激酶结构域成分1基因敲除对人结直肠癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨己糖激酶结构域成分1(HKDC1)对人结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法 HT-29、SW480细胞进行瞬时转染,设置HKDC1-si RNA组、阴性对照组及空白组。同时收集2020年3月至2022年5月河北北方学院附属第一医院接受手术的50例患者的结直肠癌组织和癌旁正常组织。RT-q PCR实验检测HKDC1 m RNA表达;Western blot实验检测HKDC1蛋白表达;CCK-8实验、划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果 HT-29细胞HKDC1 m RNA的表达量高于SW480细胞(P<0.05),故选取HT-29细胞株用于后续实验。结直肠癌组织中HKDC1 m RNA、光密度值高于癌旁正常组织(P<0.05)。空白组与阴性对照组HKDC1 m RNA、蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);HKDC1-si RNA组HKDC1 m RNA、蛋白表达水平低于阴性对照组(P<0.05)。空白组与阴性对照组光密度值比较,差异无统计学意义(P>0.05);HKDC1-si RNA组光密度值低于阴性对照组(P<0.05)。空白组与阴性对照组细胞迁移率比较,差异无统计学意义(P>0.05);HKDC1-si RNA组细胞迁移率低于阴性对照组(P<0.05)。空白组与阴性对照组细胞迁移数目比较,差异无统计学意义(P>0.05);HKDC1-si RNA组细胞迁移数目低于阴性对照组(P<0.05)。结论 HKDC1在结直肠癌组织及细胞中高表达,可促进结直肠癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,有望成为结直肠癌基因治疗的新靶点。

含GATA锌指结构域1对结肠癌细胞迁移的影响

目的探讨含GATA锌指结构域1(GATAD1)对结肠癌细胞迁移的影响及其机制。方法采用限制性内切酶连接法构建GATAD1干扰质粒SiRNA-GATAD1(Si-GATAD1)。取培养的人正常结肠上皮细胞NCM460及结肠癌细胞Caco-2、HCT-116、HCT-8、HT-29、RKO,应用Western blot法检测细胞中GATAD1蛋白相对表达量,选择其中GATAD1表达水平相对较高的结肠癌细胞HCT-116、RKO用于转染GATAD1干扰质粒Si-GATAD1,另选择其中GATAD1表达水平最低的结肠癌细胞Caco-2用于转染过表达pMZ-GATAD1质粒。取HCT-116、RKO细胞随机分为阴性对照(NC)组和转染Si-GATAD1质粒组(Si-GATAD1组),取Caco-2细胞随机分为NC组、转染过表达pMZ-GATAD1质粒组(pMZ-GATAD1组),Si-GATAD1组HCT-116和RKO细胞分别转染Si-GATAD1质粒,pMZ-GATAD1组Caco-2细转染过表达pMZ-GATAD1质粒,同时将空载体pMZ-MO3质粒转染至NC组HCT-116、RKO和Caco-2细胞。采用细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合率;采用Western blot法检测各组细胞磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白PI3K、Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、细胞周期蛋白-D1(cyclin D1)的相对表达量。结果结肠癌细胞HCT-8、HCT-116、RKO、HT-29、Caco-2中GATAD1蛋白相对表达量均显著高于人正常结肠上皮细胞NCM460(P<0.05);结肠癌HCT-116、RKO细胞中GATAD1蛋白相对表达量显著高于HCT-8、HCT-29和Caco-2细胞(P<0.05),结肠癌Caco-2细胞中GATAD1蛋白相对表达量显著低于结肠癌HCT-8、HCT-29细胞(P<0.05)。Si-GATAD1组HCT-116、RKO细胞中GATAD1蛋白相对表达量均显著低于NC组(P<0.05),pMZ-GATAD1组Caco-2细胞中GATAD1蛋白相对表达量显著高于NC组(P<0.05)。培养12、24 h,Si-GATAD1组HCT-116、RKO细胞的划痕愈合率均显著低于NC组(P<0.01);pMZ-GATAD1组Caco-2细胞的划痕愈合率均显著高于NC组(P<0.01)。Si-GATAD1组RKO、HCT-116细胞中PI3K、p-Akt、cyclin D1蛋白相对表达量均显著低于其NC组(P<0.05);pMZ-GATAD1组Caco-2细胞中PI3K、p-Akt、cyclin D1蛋白相对表达量均显著高于NC组(P<0.05);Si-GATAD1组RKO、HCT-116细胞及pMZ-GATAD1组Caco-2细胞中Akt蛋白相对表达量与NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论GATAD1高表达于结肠癌细胞中,且通过调控PI3K/Akt信号通路促进结肠癌细胞的迁移。

盘状结构域受体1通过调控NF-κB/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡对高糖诱导血管内皮功能障碍的影响

目的 探究盘状结构域受体1 (discoidin domain receptor 1,DDR1)对高糖诱导血管内皮细胞功能障碍的作用机制。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HU VECs),首先分为对照组(Control)、高糖诱导组(high glucose,HG),采用33 mmol·L^(-1) D-glucose处理48 h构建HUVECs功能障碍。碘化丙啶染色(PI)检测细胞焦亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、IL-1β、IL-18水平;Western blot检测DDR1、NF-κB/NLRP3信号通路蛋白及细胞焦亡相关蛋白表达;随后,实验分为C ontrol组、HG组、HG+DDR1 NC组、HG+DDR1 siRNA组。转染DDR1 siRNA 24 h后观察HG对HUVECs增殖和迁移能力的影响;ELISA检测内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1 (intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)及LDH、IL-1β、IL-18水平;PI检测细胞焦亡情况;Western blot检测DDR1、NF-κB/NLRP3信号通路蛋白及细胞焦亡相关蛋白表达。结果 与Control组相比,HG组细胞eNOS含量降低,VCAM-1、ICAM-1含量升高,细胞活力及迁移能力降低,DDR1、p-NF-κB、NLRP3及细胞焦亡相关蛋白表达均明显升高,且LDH、IL-1β、IL-18水平及细胞焦亡率均增加(P<0.05)。与HG组相比,DDR1siRNA能够促进eNOS分泌,降低VCAM-1、ICAM-1、LDH、IL-1β、IL-18水平,增加细胞活力和迁移能力,降低p-NF-κB、NLRP3及细胞焦亡相关蛋白表达,抑制高糖诱导的HU VECs焦亡(P<0.05)。结论基因沉默DDR1能够改善高糖诱导的血管内皮细胞功能障碍,其机制与抑制NF-κB/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡相关。

单次鞘内注射mLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂对骨癌痛小鼠痛行为学的影响

目的 探讨单次鞘内注射mLin 10-PDZ1（PSD-95,Drosophila disks-large,ZO-1）结构域小肽抑制剂对骨癌痛小鼠痛行为学的影响. 方法 40只雄性C3H/HeJ小鼠完全随机分为肿瘤组（T组）32例和假手术对照组（S组）8例.将含有2×105个纤维肉瘤细胞NCTC2472的最小必需培养基（α-MEM）接种到T组小鼠右侧股骨远端骨髓腔,建立骨癌痛模型；S组小鼠骨髓腔注入不含有NCTC2472细胞的α-MEM.于接种前1d、接种后3、5、7、10、14d测定痛行为学指标：自发性抬足次数、机械缩足阈值（paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）.T组小鼠在接种后第14天,进一步按照随机数字表法分为对照control组（C组）8例和mLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂2.5μg/5μl、5μg/5μl、10 μg/5μl组（G1组8例,G2组8例,G3组8例）.G1～G3组分别鞘内注射相应剂量的mLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂,S组和C组鞘内注射等体积的溶媒10％二甲基亚砜（DMSO）.在给药后的2、12、24 h分别测定各组小鼠的痛行为学指标. 结果 与S组[（2.1±0.7）次]和术前基础值[（1.8±0.7）次]比较,肿瘤细胞接种后第14天T组小鼠自发性抬足次数[（13.5±1.4）次]显著增多（P＜0.05）,PWMT[（0.47±0.19）g]较S组[（1.7±0.3）g]和基础值[（1.83±0.23）g]降低（P＜0.05）.给药后2h,与C组及14 d给药前比较,G1、G2组和G3组自发性抬足次数减少,PWMT增高（P＜0.05）,且G3组较G1和G2组痛行为学改善更明显（P＜0.05）.至12 h,与C组比较,G2和G3组自发抬足次数减少（P＜0.05）,PWMT增高（P＜0.05）；而G1组给药后痛行为学差异无统计学意义（P＞0.05）.给药后24 h,G3组与C组比较,自发抬足次数减少,PWMT升高,差异有统计学意义（P＜0.05）. 结论 鞘内单次注射mLin10-PDZ1结构域小肽抑制剂能够改善骨癌痛小鼠的痛行为.

胶原Ⅳα_1链NC1结构域基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

胶原中多个成分如ⅩⅤ ,ⅩⅤⅢ的NC结构域能抑制血管内皮细胞增殖和迁移 ,具有抑制肿瘤生长和转移的活性 .从胎盘组织中提取总RNA ,根据文献报道的胶原Ⅳα1链cDNA序列 ,设计一对特异性引物 ,应用RT -PCR方法扩增出胶原Ⅳα1链NC1结构域基因 .DNA序列测定发现 ,扩增得到的基因与文献报道序列存在单个核苷酸变异 (A132C) ,编码氨基酸 (Gly)不变 .将扩增得到的胶原Ⅳα1链NC1结构域基因克隆到原核表达载体 pPROEXHTb上 ,并在大肠杆菌BL2

RUN和FYVE结构域蛋白1在胰腺癌中的表达特征及功能作用

目的探究RUN和FYVE结构域蛋白1(RUFY1)在胰腺癌中的表达特征及功能作用。方法通过分析癌症基因组图谱、临床蛋白质组肿瘤分析协作组、基因表达综合数据库等,探究RUFY1在胰腺癌中mRNA、蛋白的表达水平以及与胰腺癌患者预后关系。采用免疫组织化学染色比对胰腺癌患者肿瘤组织与正常胰腺组织中RUFY1蛋白表达水平。在胰腺癌细胞系中敲低RUFY1,并通过肿瘤成球、CCK-8、克隆形成实验验证RUFY1在胰腺癌细胞系中发挥的功能与作用。联合CTRP和PRISM等数据库探究RUFY1与部分抗肿瘤药物敏感性的关系。结果通过分析公共数据库发现,与正常胰腺组织相比,胰腺癌肿瘤组织中RUFY1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01);RUFY1的高表达与胰腺癌患者的预后呈显著负相关(P<0.05)。免疫组织化学染色结果表明,相较于癌旁组织,RUFY1蛋白表达水平在胰腺癌肿瘤组织中升高。肿瘤成球、CCK-8、克隆形成实验结果显示RUFY1敲低会显著抑制胰腺癌细胞系的增殖功能(P<0.01)。由CTRP和PRISM数据库分析得出,低RUFY1表达的患者对PD318088(P<0.01)、RITA(P<0.01)、selumetinib(P<0.05)、AZD8931(P<0.01)等药物更加敏感。结论RUFY1 mRNA及蛋白水平在胰腺癌肿瘤组织中升高,RUFY1的高表达与胰腺癌患者的预后呈负相关,敲低RUFY1可抑制胰腺癌细胞系的增殖能力,RUFY1有望成为用来预测临床用药治疗敏感性的靶点。

抑制盘状结构域受体1蛋白表达对前列腺癌LNCaP细胞恶性生物学行为的影响

目的观察短发夹RNA(shRNA)靶向抑制盘状结构域受体1(DDR1)蛋白表达对前列腺癌LNCaP细胞生物学行为的影响。方法将DDR1-shRNA(实验组)与正常对照shRNA(对照组)转染LNCaP细胞,采用Western blot法检测DDR1蛋白的表达,Transwell实验检测细胞迁移能力,CCK-8法检测细胞增殖能力,Western blot法检测雄激素受体(AR)、B细胞淋巴瘤/白血病-xL(Bcl-xL)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果实验组LNCaP细胞中DDR1蛋白表达水平低于对照组(t=16.293,P<0.001)。抑制DDR1的表达可减弱细胞的迁移能力(t=23.142,P<0.001);降低LNCaP细胞24、48、72和96 h的增殖能力(t=9.363,P<0.001;t=11.261,P<0.001;t=13.562,P<0.001;t=14.332,P<0.001);降低AR、Bcl-xL、PCNA蛋白的表达水平(t=19.131,P<0.001;t=23.192,P<0.001;t=13.235,P<0.001)。结论抑制DDR1蛋白可能通过下调LNCaP细胞中的AR表达,抑制其迁移、增殖能力,作用机制可能与Bcl-xL和PCNA表达降低有关。

白内障超声乳化人工晶体植入术对患者泪液叉头框蛋白O3、核苷酸结合寡聚化结构域样受体1表达的影响及与术后干眼症的关系

目的探讨白内障超声乳化人工晶体植入术患者泪液中叉头框蛋白O3(FOXO3)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体1(Nod-1)表达及与术后干眼症的关系。方法选取2022年3月至2023年8月接受白内障超声乳化人工晶体植入术的患者96例,均单眼行手术,以术眼为观察组(n=96),非术眼为对照组(n=96)。比较观察组手术前后与对照组泪液中FOXO3、Nod-1的变化情况。根据术后1个月术眼是否出现干眼症分为干眼组34例与非干眼组62例,比较干眼组与非干眼组临床资料及泪液中FOXO3、Nod-1表达水平,分析影响患者术后发生干眼症的危险因素及FOXO3、Nod-1水平检测对术后发生干眼症的预测价值。结果术后观察组FOXO3水平较术前降低且低于对照组,Nod-1水平较术前升高且高于对照组(P<0.05)。干眼组与非干眼组术后FOXO3水平均较术前降低,Nod-1水平均较术前升高,且干眼组术后FOXO3水平低于非干眼组,Nod-1水平高于非干眼组(P<0.05)。干眼组中糖尿病、睑板腺功能障碍患者占比高于非干眼组(P<0.05)。糖尿病、睑板腺功能障碍、FOXO3、Nod-1水平是白内障超声乳化人工晶体植入术后发生干眼症的独立影响因素(P<0.05,P<0.01)。FOXO3、Nod-1及联合检测对患者术后发生干眼症预测的曲线下面积分别为0.717、0.764、0.877。结论白内障超声乳化人工晶体植入术后泪液中FOXO3低表达、Nod-1高表达是白内障患者术后发生干眼症的独立危险因素,检测FOXO3、Nod-1的表达水平,对术后是否发生干眼症具有一定的预测价值。

PB1结构域与细胞信号转导

PB1(Phox and Bem1)结构域是一种约由80个氨基酸残基组成的功能性结构域,主要有3种类型。它存在于许多信号转导蛋白中,并介导这些蛋白之间的二聚化。这些PB1结构域蛋白主要参与两条信号转导通路,即丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路和细胞核因子κB(NF-κB)信号通路。同时,PB1结构域与许多肿瘤如乳腺癌、肺癌的发生发展密切相关。

腺相关病毒介导的肝细胞生长因子Kringle 1结构域对人前列腺癌裸鼠骨移植瘤生长的影响

目的:探讨肝细胞生长因子Kringle1结构域(kringle1domain of hepatocyte growth factor,HGFK1)基因对人前列腺癌裸鼠骨移植瘤生长的影响。方法:通过向裸鼠胫骨骨髓腔内注射人前列腺癌PC-3细胞,建立人前列腺癌裸鼠骨移植瘤模型;分别向移植瘤和裸鼠尾静脉内注射PBS、携带有HGFK1基因或增强型绿色萤光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的腺相关病毒载体的病毒上清液rAAV-EGFP和rAAV-HGFK1,观察肿瘤生长、体内转移和裸鼠生存时间,免疫组织化学法检查移植瘤组织中Ki67、E-cadherin和CD31的表达。结果:成功建立了人前列腺癌裸鼠骨移植瘤模型,rAAV-HGFK1组的肿瘤体积和质量明显小于PBS和rAAV-EGFP组(P<0.05),抑瘤率达46.69%;rAAV-HGFK1组裸鼠的中位生存时间比PBS和rAAV-EGFP组明显延长(P<0.05);PBS和AAV-EGFP组腹主动脉旁淋巴结转移发生率高于rAAV-HGFK1组(P<0.05);rAAV-HGFK1组肿瘤组织中Ki67和CD31的表达明显低于PBS和AAV-EGFP组(P<0.05),E-cadherin的表达明显高于PBS和AAV-EGFP组(P<0.05)。结论:HGFK1具有抑制人前列腺癌裸鼠骨移植瘤生长、转移和血管生成的作用,并可延长荷瘤裸鼠的生存时间。

重组人β_2糖蛋白1第一结构域对抗磷脂抗体综合征患者血清诱导人脐静脉内皮细胞产生ICAM-1、MCP-1的影响

目的:探讨重组人β2糖蛋白1第一结构域(hrβ2GPⅠDⅠ)对抗磷脂抗体综合征(APS)患者血清诱导人脐静脉内皮细胞产生细胞间黏附分子1(ICAM1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP1)的影响。方法:应用hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理前后的APS患者血清分别与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共孵育,细胞ELISA和RTPCR方法分析处理前后HUVEC表达ICAM1、MCP1的变化。结果:hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理后的APS患者血清较处理前相比,与其孵育的HUVEC表达ICAM1、MCP1在蛋白和mRNA水平均明显降低。结论:hβ2GPⅠDⅠ可中和APS患者血清中的大部分致病性抗β2GPⅠ抗体(anti-β2GPⅠ)。