1α,25二羟维生素D_3对1型糖尿病Th1/Th2平衡的调节作用

目的探讨1α,25二羟维生素D3_1,25D3)对经典1型糖尿病(T1DM)Th1/Th2比值平衡的免疫调节作用。方法选择6例新发病、GAD-Ab阳性的T1DM患者,6名年龄、性别匹配的健康志愿者为对照(NC);间接免疫荧光鉴定细胞维生素D受体(VDR)的表达;免疫印迹法分析VDR蛋白的表达;连续梯度离心法分离人外周单个核细胞(PBMC);酶联免疫斑点法定量检测GAD65反应性分泌IFN-γ、IL-4细胞,分别代表Th1、Th2细胞。结果(1)T1DM的PBMC胞核表达VDR;(2)T1DM组Th1、Th2、Th1/Th2均值分别为18.0、3.0、6.0,NC组为2.5、3.5、0.71,T1DM组1,25D3作用后则分别为5.6、4.5、1.22,溶剂(无水乙醇)对照组分别为1.5、3.2、4.8。T1DM组的Th1及Th1/Th2均明显高于NC组(P<0.01);与溶剂组比较,T1DM组1,25D3作用后的Th1及Th1/Th2均明显降低(P<0.05);三组间的Th2值差异无统计学意义(P>0.05)。结论1,25D3对T1DM患者的GAD65反应性分泌IFN-γ的Th1细胞具有直接抑制作用,显著改善Th1/Th2的免疫失衡状态。

1α,25-二羟维生素D_3对成骨细胞增殖分化和OPG mRNA/RANKL mRNA表达的影响

目的研究1α,25-二羟维生素D3[1α,25-(OH)2D3]对体外培育SD大鼠成骨细胞(OB)增殖、分化和细胞核因子κ配体(RANKL)及骨保素(OPG)mRNA表达的影响。方法采用胰蛋白酶和胶原酶消化法从24 h新生SD乳鼠颅盖骨分离得到的OB,经1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L的1α,25-(OH)2D3干预24 h、48 h和72 h后,MTT比色法检测OB增殖率;PNPP法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;应用RT-PCR法检测细胞中OPG和RANKL的mRNA表达。结果 1 nmol/L组成骨细胞A值在干预24 h、48 h、72 h后,分别为(0.335±0.080)、(0.451±0.086)、(0.545±0.085);100 nmol/L组OB ALP活性分别增加至(6.274±1.561)U/g、(5.021±1.703)U/g、(6.854±1.468)U/g;OPG mRNA表达分别降低至(0.365±0.068)、(0.340±0.046)、(0.381±0.051);RANKL mRNA表达分别增加至(0.622±0.089)、(0.550±0.064)、(0.468±0.062);与0 nmol/L组比较,RANKL/OPG比值分别增加138.53%、153.45%、157.71%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论高浓度1α,25-(OH)2D3可抑制OB增值和OPG mRNA表达,促进其分化和矿化,上调RANKL/OPG的基因表达,从而促进破骨细胞介导的骨吸收,增强骨更新。

1α,25-双羟维生素D_3作用于靶细胞的机制

1α,2 5-双羟维生素 D3 [1 α,2 5(OH) 2 D3 ]作用于靶细胞后产生 2种不同的信号传导系统 :基因效应和非基因效应。前者是指 1α,2 5(OH) 2 D3 与维生素 D核受体 (n VDR)结合 ,n VDR再与视黄酸 X受体 (RXR)发生异二聚化反应 ,在转录因子 (TF)的作用下 ,促使靶基因转录。后者是指 1 α,2 5(OH) 2 D3 与维生素 D膜受体 (m VDR)结合 ,随之引发一系列信号传导 ,促使细胞膜上的 Ca2 +-通道迅速打开。探讨 1α,2 5(OH) 2 D3 的作用机制有利于开发治疗维生素 D内分泌系统疾病的新药。本文就目前有关 1 α,2 5(OH) 2 D3 作用于靶细胞的机制的研究成果进行综述。

1α,25-二羟维生素D_3对体外培养人输卵管上皮细胞VDR、CaBP-D28k表达的影响

目的:探讨1α,25-二羟维生素D3[1α,25-(OH)2D3]对体外培养人输卵管上皮细胞活性及细胞维生素D受体(VDR)、钙结合蛋白calbindin-D28k(CaBP-D28k)表达的影响。方法:以不同浓度(0,10-10,10-9,10-8,10-7mol/L)1α,25-(OH)2D3处理体外培养人输卵管壶腹部上皮细胞,分别于不同时间收集细胞。应用溴化四唑蓝比色法检测细胞活性,逆转录聚合酶链反应法、免疫印迹法检测细胞VDR、CaBP-D28k mRNA及其蛋白表达。结果:1α,25-(OH)2D3对体外培养人输卵管上皮细胞增殖无影响。以不同浓度1α,25-(OH)2D3处理细胞12 h,与对照组比较,10-7mol/L 1α,25-(OH)2D3组细胞VDR、CaBP-D28k mRNA表达显著增加(P均<0.05)。以10-7mol/L1α,25-(OH)2D3处理细胞不同时间,与对照组比较,处理6h,12h后细胞VDR、CaBP-D28k mRNA表达显著增加(P均<0.05);处理24h,48h后细胞VDR、CaBP-D28k蛋白表达显著增加(P均<0.05)。结论:在体外培养条件下,1α,25-(OH)2D3不影响人输卵管上皮细胞增殖,1α,25-(OH)2D3可能通过VDR上调人输卵管上皮细胞CaBP-D28k的表达。

1α，25-二羟维生素D3对体外培养的成骨细胞分化及矿化成熟影响

目的：探讨1α，25-二羟维生素D3（1α，25-（OH）2D3）对体外培育SD大鼠成骨细胞（OB）增殖、分化和成熟矿化的影响。方法采用胰蛋白酶和胶原酶消化法从24h新生SD乳鼠颅盖骨分离得到的OB，设置0nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L的1α，25-（OH）2D3为空白对照、低、中、高干预组，干预24h、48h和72h后分别采用噻唑蓝（MTT）比色法检测OB增殖率、PNPP法测定碱性磷酸酶（ALP）活性、放射免疫法检测骨钙素（OC）含量、RT-PCR检测BMP-2 mRNA表达；3d和6d后测定钙盐沉积量；10d和20d后茜素红染色法检测细胞钙化结节数。结果与空白组比较，在干预24h、48h、72h后低干预组成骨细胞A值分别增加20.50%、38.77%、18.22%，高干预组ALP分别增加（3.068±1.137）%、（0.505±0.156）%、（1.115±0.382）%，OC含量分别增加（0.285±0.097）%、（0.469±0.134）%、（0.734±0.225）%；高干预组成骨细胞钙沉积量在干预3d和6d后分别增加（0.968±0.236）%和（0.929±0.307）%，成骨细胞矿化结节在干预10 d和20d后，分别增加（13.889±3.973）%和（10.472±0.263）%，均呈正相关（P〈0.05）。结论在本实验浓度范围内，中、高剂量1α，25-（OH）2D3可促进体外成骨细胞分化和矿化，刺激成骨细胞分泌骨钙素，发挥着促进骨形成的作用。

1α,25-二羟维生素D_3的免疫抑制作用

1α, 25 二羟维生素D3 [1α, 25 (OH)2D3 ]是主要调节钙磷代谢的激素,近年来它的免疫抑制作用已受到医学界的广泛关注,其作用主要在于影响免疫细胞的功能和对细胞因子分泌的影响。本文就1α, 25(OH)2D3 的免疫调节作用及其应用作一综述。

1α,25-二羟维生素D_3对早期角膜移植小鼠Th17细胞的免疫调控作用

目的:观察在同种异体角膜移植的小鼠模型中,1α,25-二羟维生素D3对Th17细胞及其相关细胞因子的影响。方法:C57BL/6小鼠作为受体,BALB/c小鼠作为供体,建立小鼠穿透性角膜移植术模型。术后隔日对角膜移植小鼠腹腔注射1.0μg 1α,25二羟维生素D3(维生素D3干预组),模型组和正常对照组腹腔注射等量大豆油。在裂隙灯活组织镜下观察角膜移植物的透明情况,评估排斥反应的发生情况,并取角膜移植物做病理学检测。采用实时荧光定量PCR检测脾脏中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平,Western blotting分析外周血中RORγt及IL-17的蛋白含量,流式细胞术检测外周血IL-17和IFN-γ细胞因子的表达情况。结果:1α,25-二羟维生素D3显著地抑制了同种异体角膜移植排斥反应,同时减少了角膜移植物的炎性渗出。应用1α,25-二羟维生素D3治疗后,小鼠脾脏中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平降低;外周血中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平被下调。结论:1α,25-二羟维生素D3抑制小鼠同种异体角膜排斥反应的作用与IL-17及相关细胞因子RORγt细胞调节密切相关。

1α-羟维生素D_3治疗老年性腰背及关节痛

对1α-羟维生素D_3(法能)治疗老年腰背痛、关节痛的临床疗效及安全性进行观察,结果表明,该药与单纯钙剂治疗组相比,能显著缓解临床疼痛症状,有效率达73%,显著高于对照组。且无一例出现不良反应。说明法能是目前较理想的治疗老年骨质疏松症引起的腰背、关节痛的活性维生素D_3制剂。

2型糖尿病患者TLRs的表达以及1α,25-二羟维生素D_3的干预作用

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)患者外周血单个核细胞上果蝇样受体(TLRs)的表达以及1α,25-二羟维生素D3对TLRs表达的干预作用。方法:30例T2DM患者[其中伴有动脉粥样硬化(AS)者15例]和15名健康志愿者均抽取外周血,采用Ficol密度梯度离心法提取外周血单个核细胞(PBMCs),在不加或加入不同浓度1α,25-二羟维生素D3(10-8 mol/L、10-9 mol/L、10-10 mol/L)的情况下孵育48 h后,收集培养细胞,分别用流式细胞仪和定量RT-PCR检测细胞TLR2、TLR4表达水平。结果:与健康对照组相比,T2DM组PBMCs上TLR4水平增高,尤以伴有AS组明显,各组间TLR2表达差异无统计学意义。加入不同浓度1α,25-二羟维生素D3后,各组TLR4水平均有不同程度的下降,并呈现一定的剂量依赖性。结论:T2DM及其AS可能与TLR4水平增高有关;1α,25-二羟维生素D3能抑制体外培养的T2DM患者PBMCs TLR4的表达。

25-羟维生素D_3-1α-羟化酶质粒转染对角质形成细胞增殖分化和凋亡的影响

目的:研究25-羟维生素D3-1α-羟化酶(1α-羟化酶)质粒转染对角质形成细胞增殖、分化和凋亡的影响。方法:体外培养小鼠角质形成细胞(KC)转染1α-羟化酶后,观察细胞在形态上的变化对分化进行研究;利用Giemsa染色法和Tunel荧光素原位末端标记法对凋亡诱导作用进行观察。利用小鼠阴道上皮有丝分裂模型和小鼠尾部鳞片表皮模型对1α-羟化酶质粒转染对KC增殖和分化的影响进行研究。结果:携带1α-羟化酶的质粒转染KC可以非常显著的促进其分化,剂量与效应呈正相关;10-6mol/L的维生素D3和0.015μg/μL1α羟化酶质粒转染联合应用即可诱导KC细胞凋亡。1α-羟化酶质粒转染可以非常显著的抑制小鼠阴道上皮有丝分裂(P<0.01),显著促进小鼠尾部鳞片表皮模型中颗粒层的形成(P<0.05)。结论:1α-羟化酶质粒转染角质形成细胞可以明显抑制其增殖,促进其分化,诱导其凋亡。1α-羟化酶质粒转染为以增殖过渡分化不全为特征的皮肤病比如银屑病以及某些肿瘤的基因治疗提供了新思路。

维生素D_3靶控雌激素受体α表达载体的构建及其对乳腺癌作用的研究

目的构建受1α,25二羟维生素D3调控的雌激素受体α表达载体(VDRE-Tk-ERα),并观察其对雌激素受体阴性乳腺癌细胞的增殖抑制效应。方法利用PCR法得到含有4个拷贝VDRE和Tk启动子的序列并用其替换掉雌激素受体α载体的CMV启动子从而得到VDRE-Tk-ERα表达载体。利用脂质体法将其转染入雌激素受体阴性乳腺癌细胞中并利用MTT法观察其对乳腺癌细胞的抑制效应。结果一定剂量的1α,25二羟维生素D3能够通过VDRE调控下游报告基因的表达,同时在加入他莫西芬后能够显著抑制转染了VDRE-Tk-ERα表达载体的雌激素受体阴性乳腺癌细胞的增殖活性。结论通过该方法能够显著恢复和增强雌激素受体阴性乳腺癌细胞对他莫西芬和1α,25二羟维生素D3的化疗敏感性。

丁酸钠和1,25-(OH)_2D3对人结肠癌细胞增殖和hTERT表达的影响

背景:端粒酶在肿瘤细胞永生化过程中起重要作用.人端粒酶逆转录酶(hTERT)是调节端粒酶活性的关键因素。有研究发现生物活性制剂丁酸钠和1α,25.二羟维生素D3[1.25-(OH)_2D3]具有潜在抗肿瘤效应。目的:观察丁酸钠和1.25-(OH)_2D3对人结肠癌细胞增殖的影响及其可能机制。方法:以不同浓度丁酸钠(0.5～2.0 mmol/L)、1.25-(OH)_2D3(10^(-8)～10^(-6)mol/L)或两者联合[1.0 mmol/L.丁酸钠+10^(-7)mol/L 1,25.(OH)_2D3]诱导人结肠癌细胞株HT29.MTT法检测细胞生长抑制率.流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,RT-PCR检测hTERTmRNA表达:结果:丁酸钠和1.25-(OH)_2D3能剂量和时间依赖性地抑制HT29细胞生长:1.0 mmol/L丁酸钠和10^(-7)mol/L1,25-(OH)_2D3能诱导HT29细胞G0/G1期阻滞和细胞凋亡.抑制hTERTmRNA表达。联合用药组的上述作用较两者单用更为明显(P<0.05).结论:丁酸钠和1.25-(OH)_2D3抑制人结肠癌细胞增殖的作用与其通过下调hTERT基因表达而抑制端粒酶活性、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡有关:两者联合可产生协同作用。

低剂量1α羟维生素D_3治疗骨质疏松症的疗效观察

目的 探讨低剂量 1α羟维生素D3 每日 0 2 5 μg是否与常用量每日 0 5 μg同样能有效防治绝经后骨量减少及骨质疏松妇女的骨量继续丢失。 方法 随机将患者分为 1α羟维生素D3 低剂量 (41例 )、常用量 (38例 )和单纯钙剂 (32例 ) 3组 ,每组均服元素钙 5 0 0mg ,疗程 12个月。主要观察指标为腰椎和股骨上端骨密度 (BMD)值的改变。 结果 低剂量和常用量两组 2～ 4腰椎 (L2～ 4)BMD较用药前均见有显著增加 ,分别为 1 9%和 1 7% (6个月 )及 1 9%和 1 6 % (12个月 ) ;单纯钙剂组则下降 0 1%和 0 5 %。 1α羟维生素D3 两组与单纯钙剂组间治疗 6个月和 12个月相比较差异均有显著性 (分别为P <0 0 5和P <0 0 1)。低剂量 1α羟维生素D3 组于服药 12个月时 ,股骨颈和Ward’s三角区的BMD也较单纯钙剂组有增加 ,前组为 0 7%和 4 6 % ,后组为 - 1 6 %和 - 2 4 % (P <0 0 5和P <0 0 1)。低剂量组未见不良反应发生 ,常用量组 4例有轻度消化道不良反应。 结论 1α羟维生素D3每日 0 2 5 μg或 0 5 μg和元素钙同服都可以预防绝经后骨量减少、骨质疏松妇女的骨量丢失 ,并使BMD有轻度增加 ,不良反应的发生低剂量组低于常用量组。

1α,25-二羟维生素D3通过NF-κB信号通路抑制肿瘤坏死因子-α诱导的人脐静脉内皮细胞活化

目的体外观察1α,25-二羟维生素D3[1α,25-(OH)2D3]对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活化的影响,并探讨其机制。方法体外培养HUVECs,采用血管细胞黏附分子(VCAM)、E选择素(E-selectin)作为内皮细胞活化标志物,以TNF-α(40 ng/ml),1α,25-(OH)2D3(10-8 mol/L)以及特异性NF-κB阻断剂SN50干预,Western印迹法、实时定量PCR(RT-PCR)法检测VCAM、E-selectin表达水平。在机制研究中,以NF-κB信号通路为切入点,分别采用Western印迹、RT-PCR、免疫荧光法、染色质免疫共沉淀(ChIP)法观察1α,25-(OH)2D3对其早期活化、核转运及与VCAM、E-selectin启动子结合的影响。结果(1)Western印迹及RT-PCR显示TNF-α可明显上调HUVECs VCAM及E-selectin的表达,该效应可被特异性NF-κB阻断剂SN50抑制,1α,25-(OH)2D3可下调TNF-α诱导的VCAM及E-selectin的表达。(2)Western印迹显示TNF-α可诱导I-κBα磷酸化,从而活化NF-κB p65亚基。免疫荧光显示1α,25-(OH)2D3对NF-κB p65亚基核转运有明显抑制作用。ChIP法分析显示1α,25-(OH)2D3可抑制NF-κB p65与VCAM及E-selectin启动子的结合从而影响基因表达。结论TNF-α通过NF-κB信号通路上调HUVECs VCAM和E-selectin表达,1α,25-(OH)2D3可抑制NF-κB早期活化、核转运及NF-κB p65与VCAM及E-selectin启动子的结合,进而抑制TNF-α诱导的内皮细胞活化。

活性维生素D对高糖诱导的足细胞自噬相关蛋白Beclin-1和空泡分选蛋白34的调控作用研究

目的探讨活性维生素D(VitD)对高糖诱导的足细胞自噬相关蛋白Beclin⁃1和空泡分选蛋白34(Vps34)的调控作用。方法(1)体外培养永生化小鼠足细胞,用高糖30 mmol/L培养0、3、6、12、24、36、48 h后,采用Western blot检测微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3⁃Ⅱ)、Beclin⁃1和Vps34的蛋白表达,激光共聚焦观察足细胞骨架蛋白Synatopodin、微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达变化;(2)1α,25二羟维生素D3[1α,25(OH)2D3](1、10、100 nmol/L)和高糖(HG,30 mmol/L)培养足细胞48 h,激光共聚焦观察Synatopodin、LC3⁃Ⅱ的表达变化,透射电镜下观察足细胞内自噬体的形成,Western blot及RT⁃qPCR半定量检测LC3⁃Ⅱ、Beclin⁃1和Vps34的蛋白和mRNA表达;(3)加入自噬抑制剂3⁃甲基腺嘌呤(3⁃MA,10 mmol/L)作用48 h后,Western blot检测LC3⁃Ⅱ、Beclin⁃1和Vps34的蛋白表达。结果足细胞经高糖处理后LC3⁃Ⅱ表达增强,Beclin⁃1和Vps34的蛋白和mRNA水平也逐渐升高,24 h达高峰,随后表达逐渐降低(P<0.05)。与高糖组相比,高糖+1α,25(OH)2D3(HG+VitD)组Beclin⁃1、Vps34蛋白和mRNA的表达呈浓度依赖性上调,抑制高糖长时刺激导致的自噬活性下降(P<0.05);与HG+VitD组相比,HG+VitD+3⁃MA组足细胞Beclin⁃1、Vps34蛋白和mRNA的表达明显降低(P<0.05)。结论足细胞在高糖刺激下早期自噬活性增强,长期刺激自噬抑制;1α,25(OH)2D3可能是一种自噬活化剂,通过调控自噬相关蛋白Beclin⁃1、Vps34水平,促进自噬溶酶体形成,改善高糖诱导的足细胞损伤。

活性维生素D类似物对炎症性肠病的治疗作用

1971年DeLuca[1]发现1α,25-二羟维生素D3（1α,25-（OH）2-D3,125D）是维生素D中最具有生理活性的代谢产物之后,立刻引起了医学界及化学界的关注。125D通过与维生素D受体（vitamin D receptor,VDR）特异性结合发挥作用,除了能调节体内钙磷平衡之外,还能促进细胞分化、抑制细胞增生,与人体的免疫系统也密切相关[2]。

新疆乌鲁木齐地区汉族与维吾尔族绝经后女性骨质疏松患者发病特点的研究

目的探讨新疆乌鲁木齐地区汉族与维吾尔族绝经后女性骨质疏松患者发病特点。方法将确诊为绝经后女性骨质疏松症患者汉族(118例),维吾尔族(39例)进行分组,分析对比两组患者骨密度测定值,骨特异性碱性磷酸酶(BAP)、骨钙素(BGP)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)、1-(OH)维生素D3以及血清Ca、P、Mg水平。结果维吾尔族女性原发性骨质疏松症患者发病年龄小于汉族患者,维吾尔族女性原发性骨质疏松症患者的绝经年龄早。维吾尔族1-(OH)维生素D3水平明显低于汉族组(P<0.01),骨钙素(BGP)检测值维吾尔族原发性骨质疏松症患者高于汉族(P<0.05)。结论维吾尔族原发性骨质疏松症患者,可能与汉族有着不同的骨质疏松症发病机制。维吾尔族原发性骨质疏松症患者更应补充足量的活性维生素D。

蜕皮甾酮在Caco-2细胞模型中的摄取和跨膜转运研究

目的以Caco-2细胞单层模型,首次研究了蜕皮甾酮的口服吸收与转运特性。方法采用普通Caco-2细胞模型、表达活性CYP3A4酶的Caco-2细胞模型,分别从AP→BL方向和BL→AP方向研究蜕皮甾酮的摄取和跨膜转运规律。结果蜕皮甾酮在2种模型中的表观渗透系数(Papp)在0.1×10-6～1×10-6cm.s-1之间,药物吸收情况为1%～10%;在4 h的实验过程中,4种浓度蜕皮甾酮的ER值均小于1.5。结论研究表明,蜕皮甾酮主要以被动扩散的方式被细胞摄取和转运,其跨膜转运特性未受到CYP3A4-介导机制的影响。