水稻OsAMT1;1过表达提升氮肥减施情境下的氮素利用效率

水稻铵转运蛋白AMT1;1是根系获取土壤氮素(铵态氮)的重要组分,同时参与氮素向地上部的转运。针对稻田施氮过量导致的环境风险和氮素利用效率趋缓的现状,亟需探究既能减少氮肥投入又能维持现有生产水平的调控策略。本研究利用OsAMT1;1基因过表达水稻材料,设置氮缺乏(LN,不施氮)、减氮(MN,N 200kg/hm^(2))和过量施氮(HN,N350kg/hm^(2))3个氮水平的田间试验,用以评估OsAMT1;1基因过表达株系在关键生育期的氮素生产特性。结果表明:相比野生型,OsAMT1;1基因过表达在LN条件下能够明显改善水稻植株和剑叶的氮素营养状态,有利于植株生物量的积累和产量形成;在MN条件下,能够促进植株在齐穗期至完熟期的生长速率和生物量积累,其灌浆期的单株和剑叶含氮量分别增加19.84%和24.30%、光合速率(Pn)和气孔导度(Gs)分别增加40.71%和19.39%,千粒重和产量分别增加10.26%和17.86%,同时氮肥吸收效率(REN)显著提升,氮素生理效率(PEN)和氮肥农学效率(AEN)稍有提升但并不显著;在HN条件下,其灌浆期的植株含氮量增加24.38%、植株生物量和Pn趋于饱和,REN显著提高,PEN和AEN显著降低。可见,与过量施氮(当前施氮习惯)相比,OsAMT1;1基因过表达株系在减少氮肥投入时更有利于协同植株高氮的内部环境实现相当的产量水平,提高水稻氮素利用效率。

MST1过表达对棕榈酸诱导非酒精性脂肪肝细胞模型脂滴生成的影响

目的通过构建哺乳动物STE20相关激酶(mammalian sterile 20-like kinase 1,MST1)过表达慢病毒,探讨MST1对棕榈酸孵育的HepG2细胞内脂滴生成的影响。方法构建MST1过表达载体,与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,获取慢病毒颗粒并检测其滴度。利用250μM棕榈酸诱导HepG2细胞,将MST1过表达慢病毒(LV-MST1)和对照慢病毒(LV-control)分别感染细胞。Western blot检测感染细胞中MST1的表达水平;利用油红O染色观察与检测细胞中脂滴的生成情况;利用细胞甘油三酯酶法检测细胞中甘油三酯的含量。结果成功获得MST1过表达慢病毒,其滴度达1×10~6TU/μL以上。Western blot检测显示MST1过表达的HepG2细胞中MST1的表达水平明显升高,脂滴生成和甘油三酯含量比对照组明显减少(P<0.05或<0.01)。结论成功构建MST1过表达慢病毒,MST1过表达明显抑制棕榈酸诱导的非酒精性脂肪肝细胞模型的脂滴生成。

ENO1过表达对籽鹅卵泡颗粒细胞凋亡基因Bcl-2表达的影响

本试验将原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞转染ENO1腺病毒过表达载体,应用实时荧光定量PCR方法检测ENO1过表达对颗粒细胞Bcl-2mRNA表达量的影响。结果发现ENO1过表达使卵泡颗粒细胞Bcl-2mRNA表达量极显著增加(P<0.01)。提示ENO1可能通过使Bcl-2基因表达量增加,从而抑制籽鹅卵泡颗粒细胞凋亡,促进卵泡的发育。

SOCS1过表达的树突细胞对慢性阻塞性肺疾病小鼠肺组织中Th17及Treg相关细胞因子的影响

目的检测Th17及Treg相关细胞因子在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)小鼠肺组织中的变化及SOCS1过表达的树突细胞(dendritic cells overexpressing suppressor of cytokine signaling 1,DC SOCS1)的影响。方法以过表达SOCS1的慢病毒转染骨髓源性未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)并用Western blot测SOCS1表达。于COPD烟熏造模的第1、7天将DC SOCS1(1×10^6)、DC SOCS1(2×10^6)、imDCs(1×10^6)经尾静脉过继至小鼠,生理盐水为对照,造模第28天后提取肺组织。IL 17、IL 23及IL 10、TGF β的指标变化行ELISA检测。结果ELISA示与生理盐水组比,imDCs和DC SOCS1均减少COPD小鼠肺组织IL 17和IL 23表达,增加IL 10和TGF β表达,且第1天较第7天干预效果显著。此外,高浓度(2×10^6 DC SOCS1)效果优于低浓度(1×10^6 DC SOCS1)。以上结果差异均具有统计学意义。结论过表达SOCS1的DCs干预COPD小鼠,能减少肺组织Th17相关细胞因子IL 17和IL 23表达,增加Treg相关细胞因子IL 10和TGF β表达,可能与浓度和干预时间有关。

Adk1过表达和柠檬酸钠补料促进酵母S-腺苷甲硫氨酸的合成

S-腺苷甲硫氨酸(SAM)是参与生物体众多生化反应的生理活性物质,酵母胞内ATP的水平是限制胞内SAM合成的因素之一。在酿酒酵母CGMCC 2842中克隆并过表达Adk1基因,发现Adk1基因的过表达使得酵母胞内ATP水平提高47.1%,SAM积累量提高47%;发酵16 h向发酵液中添加6 g·L^-1柠檬酸钠,异柠檬酸脱氢酶基因mRNA水平和IDH酶活显著提高,在发酵24 h时胞内ATP水平提高39.4%,与对照相比,SAM积累量和对生物量得率分别提高79%和78.8%,表明胞内ATP水平的提高促进Met转化为SAM,这为ATP代谢调控而改善SAM合成提供有力的理论依据。

p27^(KIP1)过表达对人胃癌细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响

目的 研究 p2 7KIP1基因对胃癌细胞的细胞周期和细胞凋亡的潜在作用。方法 采用脂质体转染法将 p2 7KIP1全长cDNA转入胃癌细胞系SCG790 1中 ,通过WesternBlot以及RNA斑点杂交检测 p2 7KIP1基因在蛋白质和mRNA水平的表达 ;细胞活力实验和软琼脂集落形成实验显示转染p2 7KIP1基因对细胞增殖的作用 ;DNA电泳、流式细胞仪、TUNEL染色及透射电镜等方法观察目的基因对该细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果 转染 p2 7KIP1的SCG790 1细胞在mRNA和蛋白质水平均有高水平p2 7KIP1的表达。细胞活力检测显示在外加Zn离子 4 8h后细胞生长被抑制 4 2 % ;软琼脂集落形成率明显少于亲代细胞(P <0 .0 1) ;p2 7KIP1的过表达能够显著地增加G1期的细胞数 ,由 33.6 8%增加到 6 9.2 9% ,P <0 .0 1;在G1期前出现 1个亚二倍体的凋亡峰 ,占 14 .6 8% ,并且凋亡指数也显著增加 (P <0 .0 1)。结论 p2 7KIP1基因能够诱导SCG790 1细胞凋亡和细胞周期在G1期延长。因此 ,p2 7KIP1基因可能成为肿瘤基因治疗的靶基因。

过表达PINK1改善SCA3/MJD转基因果蝇模型的线粒体功能

脊髓小脑性共济失调3型(SCA3/MJD),是一种因致病基因MJD1编码区内CAG异常重复扩增所致的常染色体显性遗传迟发性神经退行性疾病.已知PINK1蛋白可通过抗氧化稳定线粒体,阻止帕金森疾病的发生,但其在SCA3/MJD中的作用尚不清楚.本文旨在探索过表达PINK1对SCA3/MJD转基因果蝇模型的保护作用.本研究利用Mhc-Gal4启动子表达致病蛋白质片段(MJDtr-Q78)获得SCA3/MJD果蝇模型,分别运用过表达PINK1和RNA干扰PINK1研究其在SCA3/MJD果蝇模型中的功能.结果显示,疾病模型组翅膀异常率增高,线粒体呈过度融合状态,ATP值降低;PINK1 RNA干扰组翅膀异常率明显增高,线粒体呈显著过度融合状态,ATP值明显降低;PINK1过表达组翅膀异常率明显降低,线粒体清晰、完整,ATP值明显升高.本文的结果提示,过表达PINK1对SCA3/MJD转基因果蝇模型起保护作用,而RNA干扰PINK1表达加重SCA3/MJD转基因果蝇模型病情.PINK1在SCA3/MJD果蝇模型中的功能可能通过改善细胞内线粒体功能实现.

PTOV1在Ⅰ型子宫内膜癌表达的临床病理意义及分子机制研究

目的探讨前列腺肿瘤过表达基因1(PTOV1)在Ⅰ型子宫内膜癌组织中检测的意义及表达调控的分子机制。方法收集本院住院治疗的46例Ⅰ型子宫内膜癌患者手术切除肿瘤组织及癌旁组织,免疫组化法检测组织中PTOV1蛋白的表达,比较瘤组织与癌旁组织的差异,亚硫酸氢盐测序法检测PTOV1启动子甲基化状态,比较瘤组织与癌旁组织的差异,统计分析PTOV1蛋白表达与Ⅰ型子宫内膜癌患者临床参数的关系,PTOV1启动子甲基化与蛋白表达的关系及其与患者临床参数的关系。结果 PTOV1在Ⅰ型子宫内膜癌组织中高表达且启动子低甲基化;PTOV1高表达与Ⅰ型子宫内膜癌患者年龄、肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移无关,与浸润深度呈正相关;PTOV1启动子低甲基化与Ⅰ型子宫内膜癌组织中PTOV1表达呈正相关。结论 PTOV1与Ⅰ型子宫内膜癌浸润密切相关,其高表达的机制可能为启动子发生低甲基化。

口腔癌过表达蛋白1在结肠癌中的表达及其对细胞增殖、周期、凋亡的影响

目的研究口腔癌过表达蛋白1(oral cancer overexpressed protein 1,ORAOV1)在人结肠癌组织中的表达变化并探讨其对结肠癌细胞增殖能力、细胞周期及早期凋亡的影响。方法收集人结肠癌及癌旁组织标本,分别以qRT-PCR及Western blot检测ORAOV1在mRNA及蛋白水平的表达变化情况;采用RNAi技术获得ORAOV1低表达的Lo Vo及SW480细胞株,并使用Western blot对干扰结果进行鉴定;采用CCK-8检测干扰ORAOV1表达后两种结肠癌细胞增殖能力的变化;并采用流式细胞术检测干扰ORAOV1表达对结肠癌细胞周期及早期凋亡的影响。结果 qRT-PCR及Western blot结果分别显示结肠癌组织中的ORAOV1 mRNA及蛋白水平高于癌旁组织(P<0.05);Western blot检测证实Lo Vo及SW480细胞中ORAOV1干扰成功;在这两种结肠癌细胞株中,CCK-8检测结果显示,干扰ORAOV1可抑制细胞增殖能力;流式细胞术结果显示,干扰ORAOV1可使处于S期比例增加(P<0.05)、早期凋亡比例增加(P<0.05)。结论结肠癌组织中的ORAOV1表达增加,干扰ORAOV1可降低结肠癌细胞的增殖能力,可能与S期阻滞及细胞早期凋亡增加有关。

食管鳞状细胞癌组织PTOV1,IGBP1的表达与临床病理特征和预后相关性研究

目的探讨食管鳞状细胞癌组织前列腺肿瘤过表达蛋白1(prostate tumor overexpressed 1,PTOV1)、免疫球蛋白结合蛋白1(immunoglobulin binding protein,IGBP1)的表达及与临床病理特征和预后不良的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测70例食管鳞状细胞癌组织及其癌旁组织PTOV1,IGBP1蛋白表达,分析PTOV1,IGBP1蛋白表达与患者临床病理特征的关系,所有患者随访5年,比较不同PTOV1,IGBP1蛋白表达患者的预后情况,并分析患者预后不良的影响因素。结果食管鳞状细胞癌组织PTOV1,IGBP1蛋白阳性率分别为72.86%,67.14%,显著高于癌旁组织的12.86%,11.43%,差异均有统计学意义(χ^(2)=51.450,45.549,均P<0.05)。组织学低分化,TNM分期Ⅲ期食管鳞状细胞癌组织PTOV1,IGBP1蛋白阳性率分别为92.11%,86.84%及87.50%,93.75%,显著高于组织学中高分化,TNM分期Ⅰ~Ⅱ期食管鳞状细胞癌组织的50.00%,43.75%及60.53%,44.74%,差异均有统计学意义(χ^(2)=6.391~15.573,均P<0.05)。随访5年,患者存活36例,死亡34例。PTOV1蛋白阳性表达患者5年生存率低于PTOV1蛋白阴性表达患者,IGBP1蛋白阳性表达患者5年生存率低于IGBP1蛋白阴性表达患者(Log-rankχ^(2)=8.122,6.987,均P<0.05)。COX比例风险回归模型分析结果显示:组织学低分化,TNM分期Ⅲ期,PTOV1蛋白阳性,IGBP1蛋白阳性均是食管鳞状细胞癌患者预后不良的危险因素(HR=2.853,2.026,1.829,1.563,均P<0.05)。结论PTOV1,IGBP1蛋白表达与食管鳞状细胞癌的组织分化程度、TNM分期及预后有一定关系,组织学分级、TNM分期、PTOV1蛋白阳性、IGBP1蛋白阳性是食管鳞状细胞癌患者预后不良的危险因素。

大麻素1型受体过表达对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的免疫调节

目的探讨大麻素1型受体(cannabinoid 1 receptor,CB1R)过表达对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠细胞免疫调节的影响。方法选用C57B/L6小鼠制备EAE小鼠模型,采用质粒转染技术制备CB1R过表达组。观察假手术组和CB1R过表达组小鼠的神经功能缺损症状和体质量变化;用ELISA法检测EAE小鼠脊髓、脾脏中细胞因子INF-γ、IL-6、IL-10、IL-17、IL-1β、TNF-α浓度的变化。结果与相同时间点的假手术组相比,CB1R过表达组出现神经功能缺损的时间及症状严重程度和体质量减轻程度显著降低(P<0.05)。假手术组和CB1R过表达组中,细胞因子在中枢神经系统和外周免疫组织的分布不相同。与假手术组相比,CB1R过表达组EAE小鼠脊髓组织中IL-10的浓度显著升高(P<0.01),而INF-γ、IL-6、IL-17、IL-1β、TNF-α的浓度显著降低(P<0.05)。结论 CB1R过表达对EAE小鼠中枢神经系统炎性损伤的保护作用,可能通过上调抑炎因子,下调促炎因子的表达实现。

过表达HMGB1蛋白的K562稳定细胞株的建立

本研究目的建立过表达HMGB1蛋白的K562稳定细胞株(K562-HMGB1)及不表达该蛋白的对照细胞株(K562-pcDNA3.1),为研究hm gb1基因在白血病发生及进展中的作用与机制建立基础。从U937白血病细胞提取总RNA,逆转录合成cDNA。以cDNA为模板应用PCR技术扩增hm gb1编码基因,将其连接入PMD18-T vector(PMD18-T-HM BG1vector),并转化至大肠杆菌DH5a中。对氨苄青霉素筛选的阳性克隆进行扩增、质粒抽提,应用限制性内切酶KpnI/XhoI酶切鉴定,最终应用DNA测序得到序列正确的阳性克隆;然后将PMD18-T-HM BG1vector克隆中的hm gb1基因应用限制性内切酶KpnI/XhoI切出,并连接入真核表达载体pcDNA3.1(+),得到重组质粒pcDNA3.1-HM BG1。将pcDNA3.1-HM BG1、pcDNA3.1质粒分别电转染至K562细胞,电转染后48小时后加入终浓度800μg/m l的G418进行药物加压筛选,2周后得到有效转染pcDNA3.1-HM BG1及pcDNA3.1载体的K562细胞株(K562-HM BG1,K562-pcDNA3.1)。通过RT-PCR和W estern b lot技术分别在转录及蛋白表达水平检测K562稳定细胞株中HMGB1蛋白过表达情况,验证建立的K562稳定株的功能。结果表明,成功构建pcDNA3.1-HM BG1表达载体,并转染至K562细胞中,建立了过表达HMGB1蛋白的K562稳定细胞株(K562-HM BG1)。在转录及蛋白水平上验证了该稳定细胞株过表达HMGB1蛋白。结论:已成功建立了过表达HMGB1蛋白的K562稳定细胞株及对照细胞株即K562-HM BG1细胞及K562-pcDNA3.1细胞,为研究hm gb1基因在白血病发生及进展中的作用及机制建立了基础。

过表达INO1基因提高酿酒酵母乙醇耐受性

为获得燃料乙醇生产菌株,通过基因工程改造,构建能够利用能源甘蔗汁发酵、乙醇产率高的酿酒酵母工程菌株。即过表达肌醇-3-磷酸合成酶基因ino1,敲除kanMX抗性基因,获得重组菌。对过表达菌株的乙醇耐受性进行分析。利用甘蔗汁进行发酵培养,采用气相色谱(GC)对发酵产物乙醇进行检测。结果显示过表达菌株YI2-1能够耐19%(V/V)的乙醇,利用20oBx甘蔗汁厌氧发酵乙醇积累量为13.10%(V/V),较出发菌提高了8.55%。而过表达菌株YI2-1△KP的最大乙醇积累量为13.17%(V/V),较出发菌提高了9.16%。研究表明通过过表达酿酒酵母ino1基因能够有效提高菌株细胞活力、乙醇耐受性。构建的工程菌可利用甘蔗汁发酵,具有较高的乙醇产量。

Bmi-1促进人诱导多能干细胞分化的神经元存活的作用与机制研究

在神经退行性疾病的干细胞治疗研究中,人诱导多能干细胞(human induced Pluripotent Stem Cell,hiPSC)体外分化的神经元比较脆弱,移植到体内后容易死亡,是干细胞治疗亟需攻克的难题.条件性表达Bmi-1(BlymphomaMo-MLVinsertionregion1)的hiPSC细胞系(UH10-Dsred+Bmi-1)能够有效抵抗细胞凋亡、显著提高种间嵌合效率,为检测Bmi-1对hiPSC诱导的神经元存活率的影响,本研究在UH10-Dsred+Bmi-1细胞系基础上,转入Tet-on系统调控运动神经元转录因子Ngn2-Isl1-Lhx3(NIL)的表达.在加入强力霉素(Doxycycline,Dox)后,同时诱导Bmi-1和NIL的表达,获得过表达Bmi-1的神经元.研究表明,过表达Bmi-1的神经元能够抵抗传代应激引起的神经元凋亡、降低肌萎缩侧索硬化症(Amyotrophiclateral sclerosis,ALS)基因突变的小鼠神经胶质细胞(Glia)诱导的神经元毒性,从而有效提高神经元的存活率.

前列腺癌过表达蛋白1作为鼻咽癌患者疾病预后不良生物标志物的可行性研究

目的前列腺癌过表达蛋白1（prostate tumor overexpressed 1,PTOV1）对多种肿瘤的增生具有促进作用,然而其在鼻咽癌（NPC）患者临床疾病的发生和发展中的作用尚未见报道,本研究旨在探讨PTOV1在NPC中表达情况及其与患者临床病理学特征相关性。方法以NPC细胞系为对照,采用Western blotting和real-time PCR对NPC患者和健康人群进行PTOV1蛋白和基因检测。采用免疫组织化学方法对123例患者的肿瘤病灶进行检测,对PTOV1的表达结果进行显著性统计检验。结果 NPC细胞系和NPC患者临床样本中PTOV1 mRNA和蛋白表达水平明显升高。免疫组织化学结果表明,NPC患者中PTOV1高表达患者68例（55.3%）,统计结果表明,PTOV1的表达与患者疾病临床分期（P〈0.001）、T分期（P=0.042）和N分期（P=0.001）密切相关。PTOV1高表达患者的总生存期显著短于低表达患者。多变量分析表明PTOV1表达是NPC患者生存的独立诊断标志物。结论 PTOV1过表达与患者预后不良密切相关,特别是对于N0-1患者。因此,PTOV1可以帮助检测鼻咽癌患者早期淋巴结转移,作为鼻咽癌的独立的预后标志物。

ORAOV1和Vasohibin1在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的:检测乳腺浸润性乳腺癌(infiltrating breast carcinoma,IBC)中口腔癌过表达蛋白1(oral cancer overexpressed protein 1,ORAOV1)和血管生成抑制因子1(vasohibin1,VASH1)的表达情况及其相互之间的关系,并分析它们在IBC中的临床意义。方法:通过免疫组织化学方法检测239例IBC和100例相应的正常乳腺组织中ORAOV1和VASH1蛋白的阳性表达情况。结果:在IBC组织中,ORAOV1和VASH1蛋白的阳性率分别为58.2%和56.9%;对照组中,ORAOV1和VASH1蛋白的阳性率分别为13.0%和12.0%,其表达差异在2组间均有统计学意义(P<0.01)。ORAOV1和VASH1蛋白阳性率的差异在IBC病人肿瘤组织的不同分化程度之间、淋巴结转移与否之间、肿瘤大小之间及不同TNM分期之间差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01);且ORAOV1蛋白的阳性率与VASH1蛋白的阳性率之间呈正相关关系(P<0.01)。在IBC病人中ORAOV1和VASH1蛋白阳性组术后的生存时间明显低于阴性组(P<0.05~P<0.01)。多因素回归分析显示阳性表达的ORAOV1和VASH1蛋白、肿瘤组织的大小及TNM分期高低均是影响IBC病人术后生存时间的独立预后因子(P<0.05~P<0.01)。结论:表达异常增高的ORAOV1和VASH1可能参与IBC的发生、发展,并促进其浸润和转移;在IBC病人肿瘤组织中联合检测ORAOV1和VASH1蛋白的表达情况对预测其发展和预后均有重要意义。

过表达Cofilin-1对人胶质瘤细胞侵袭和增殖与凋亡的影响研究

探讨过表达切丝蛋白-1(Cofilin-1)对人胶质瘤细胞侵袭与增值及凋亡的影响。方法 通过构建过表达Cofilin-1质粒,转染人胶质瘤细胞,验证Cofilin-1转染效果,同时检测细胞增殖能力与侵袭能力及凋亡情况。结果 人胶质瘤转染过表达Cofilin-1质粒后,Cofilin-1表达水平明显升高,且其过表达水平促进了瘤细胞的增殖与侵袭,在细胞培养血清中检出VEGFA与MMP-9水平升高,凋亡相关蛋白检测结果显示bax表达降低,而Bcl-2与p-AKT表达增强。结论 过表达Cofilin-1可能参与人胶质瘤发生与发展,其促进了细胞侵袭及增殖,可经AKT通路活化发挥作用,临床可将过表达Cofilin-1作为靶点开展人胶质瘤的治疗探索。

多药耐药1基因法尼醇促氟康唑耐药白念珠菌凋亡机制初探

目的:进一步研究多药耐药1(multidrug resistance 1,MDR1)基因过表达在法尼醇促进氟康唑耐药白念珠菌凋亡过程中的机制。方法:从美国国家生物技术信息中心搜索获得MDR1基因的mRNA,利用双酶切法将MDR1基因的ORF插入质粒pCaEXP的MET3启动子后面,构建可过表达MDR1基因的pCaEXP-MDR1重组质粒。利用醋酸锂法将重组质粒转染至白念珠菌,制备MDR1过表达的白念珠菌作为实验组,转染pCaEXP空质粒的白念珠菌作为对照组。在2组中加入200μmol/L浓度的法尼醇培养后,采用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测2组生长曲线,应用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测并比较2组菌株的胱天蛋白酶3(caspase 3)的活化程度,菌株内谷胱甘肽(glutathione,GSH)的含量及细胞内活性氧类(reactive oxygen species,ROS)含量,进而比较不同组菌株在细胞凋亡、细胞内氧化还原及氧化应激水平上的差异。结果:与对照组比较,加入法尼醇后,MDR1过表达的实验组白念珠菌的繁殖生长曲线明显下降,其差异在24 h后有统计学意义(P=0.0392)。实验组细胞内还原型GSH的含量(P=0.0001)及氧化型GSH含量(P=0.0044)下降,ROS含量(P=0.0038)及胱天蛋白酶3活性(P=0.0290)上升。结论:MDR1表达的增加使法尼醇显著减少白念珠菌细胞内GSH的含量,增加细胞内ROS含量,细胞抗氧化能力下降,胱天蛋白酶3活性增加,促使白念珠菌凋亡。

LC-MS分析CmSnf1基因过表达对蛹虫草代谢组的影响

Sucrose-nonfermenting 1(SNF1)蛋白激酶调节大量基因的转录,改变代谢酶的活性,并控制各种营养反应性细胞发育过程。本研究通过LC-MS非靶向代谢组学技术比较蛹虫草Cordyceps militaris野生型菌株Cm01和CmSnf1基因过表达菌株菌丝体的化学成分,从整体代谢物水平阐明CmSnf1基因过表达对蛹虫草代谢产物积累的影响。研究表明:CmSnf1基因过表达后,在LC-MS正负离子模式下检测出547种差异代谢物,同野生型菌株相比,220种产物上调和327种下调。尤其显著的是黄酮类物质2-香叶基-3,4,2′,4′-四羟基二氢查耳酮上调了140.55倍,甘油磷脂代谢中的磷脂酰丝氨酸(PS)下调了47.53倍。差异代谢产物参与甘油脂代谢、氨基酸生物合成和降解、半乳糖代谢、丙酮酸和酮类化合物代谢等多种途径。CmSnf1过表达菌株与野生型相比在酮类化合物代谢上具有优势,推测CmSnf1基因在蛹虫草药用功效中发挥着重要的作用。

山羊骨骼肌特异性基因α-actin启动子驱动的Fat-1表达载体及其构建方法

试验旨在构建山羊骨骼肌特异性基因α-actin启动子驱动的Fat-1表达载体。将Fat-1基因克隆入pEGFP-N1载体,构建成为pEGFPN1-Fat-1载体;插入CMV增强子和骨骼肌特异性基因α-actin启动子,构建成为α-actin promoter-pEGFPN1-Fat-1表达载体;最后通过流式细胞仪检测转Fat-1基因对山羊耳成纤维细胞周期和凋亡的影响。双酶切和测序证实,已成功构建了肌肉组织特异性表达载体α-actin promoter-pEGFPN1-Fat-1;与对照组相比,转Fat-1基因促进羊耳成纤维细胞增殖,抑制凋亡。试验结果为动物转基因工程的研究和应用提供了参考依据。