慢病毒介导RNA干扰心房区心肌细胞Kir2.2基因对Kv2.1钾通道及内向整流钾电流的影响

目的探讨慢病毒介导RNA干扰心房区心肌细胞Kir2.2基因对Kv2.1钾通道及内向整流钾电流的影响。方法构建携带Kir2.2基因干扰RNA的慢病毒载体(pGCSIL-Kir2.2-siRNA),并转染大鼠心房区心肌细胞,采用荧光显微镜观察携带报告基因GFP的慢病毒载体(pGCSIL-GFP-siRNA)在心肌细胞的转染情况,根据实验设计分为三组:Control组(不行慢病毒转染)、Ad-siRNA-null组(仅行空慢病毒转染)和Ad-siRNA-Kir2.2组(行pGCSIL-Kir2.2-siRNA慢病毒转染)。分别采用RT-PCR和Western印迹检测三组的Kir2.2基因的mRNA及Kv2.1钾通道的蛋白水平,采用膜片钳技术记录RNA干扰前后的心肌细胞内向整流钾电流(IK1)的变化情况。结果 pGCSIL-GFP/Kir2.2-siRNA慢病毒载体构建成功,且pGCSIL-GFP-siRNA转染心房肌细胞后,超过80%的细胞均可检测GFP(MOI=50),载体可正确表达;RT-PCR显示干扰后的细胞Kir2.2基因表达受到明显抑制,Ad-siRNA-Kir2.2组的Kir2.2基因的mRNA和Kv2.1钾通道的蛋白水平均下降,与其余两组相比均有差异(P<0.05);与Control组相比,Ad-siRNA-Kir2.2组的IK1减弱,电流密度降低,且电流-电压曲线上移,内向电流(-100 mV)和外向电流(-60 mV)均降低。结论慢病毒介导RNA干扰心房区心肌细胞Kir2.2基因可降低Kv2.1钾通道的表达并抑制内向整流钾电流。

shRNA靶向沉默Eag 1钾通道对骨肉瘤细胞增殖、细胞周期及cyclin D1/E表达的影响

目的探讨短发夹RNA(shRNA)靶向沉默Ethergo-go 1(Eag1)钾通道对骨肉瘤MG-63细胞增殖、细胞周期及cyclin D1/E表达的影响。方法使用成功构建的Ad5-Eag1-shRNA表达载体转染MG-63细胞(抑制组),同时设转染无义序列(Ad5-Control-shRNA)的空转染组及不进行任何处理的对照组。采用逆转录聚合酶链式反应和Western blotting检测Ad5-Eag1-shRNA转染骨肉瘤MG-63细胞后的Eag1 mRNA和蛋白水平,分别采用CCK-8法和克隆形成实验检测各组的细胞增殖情况,流式细胞仪和Western blotting分别检测各组的细胞周期变化和细胞周期蛋白(cyclin D1和cyclin E)的蛋白水平。建立裸鼠骨肉瘤异种移植模型并测量各组裸鼠肿瘤体积的变化情况。结果抑制组的Eag1 mRNA和蛋白水平均低于空转染组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与其余两组相比,抑制组的细胞增殖、克隆形成数、S期细胞比例及细胞周期蛋白水平均降低,而G_0/G_1期细胞比例升高,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。抑制组裸鼠的瘤体积小于空转染组和对照组(P<0.05)。结论通过shRNA抑制Eag1基因表达可抑制MG-63细胞的增殖并诱导G_0/G_1期阻滞,可能与调控cyclin D1/E通路有关,有望成为骨肉瘤治疗和诊断的新靶点。

敲低IK1钾通道抑制ClC-3氯通道的表达和功能

目的:探讨Cl C-3氯通道是否为IK1钾通道的调节靶点,重点研究鼻咽癌细胞IK1钾通道对Cl C-3氯通道功能及蛋白表达的影响。方法:采用siRNA转染技术抑制低分化鼻咽癌上皮细胞(CNE-2Z)IK1基因的表达;real-time PCR技术检测Cl C-3 mRNA的表达;Western blot检测Cl C-3的蛋白表达;细胞免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术检测Cl C-3和IK1蛋白在细胞内分布;全细胞膜片钳记录细胞氯电流。结果:IK1 siRNA可以成功转染CNE-2Z细胞,有效抑制鼻咽癌细胞IK1钾离子通道的表达;用IK1 siRNA抑制鼻咽癌细胞IK1钾离子通道的表达后,Cl C-3的mRNA表达上调而Cl C-3蛋白却表达减少:在低分化鼻咽癌上皮细胞,低渗刺激可激活氯通道,产生一个较大的氯电流,在成功转染IK1 siRNA的细胞,此氯电流明显减弱。结论:敲低IK1钾离子通道可抑制Cl C-3氯离子通道的表达和功能。

电压门控钾通道亚家族G成员1在肺癌中的表达及生物学作用

目的:探讨电压门控钾通道亚家族G成员1(potassium voltage-gated channel subfamily G member 1,KCNG1)在人肺癌组织中的表达水平和临床意义以及其在肺癌细胞恶性生物学行为中的作用。方法:通过TCGA数据库(The Cancer Genome Atlas)分析KCNG1 mRNA在人肺癌组织中的表达水平,探究其与肺癌患者临床病理特征及预后的关系;基于KCNG1 mRNA表达水平构建预测肺癌患者预后的列线图模型;采用基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书通路(KEGG)富集分析探究KCNG1潜在的生物学功能;采用基因集富集分析(GSEA)预测KCNG1相关差异表达基因参与调控的相关信号通路。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹分别检测肺癌A549和H1299细胞系以及正常肺上皮细胞中KCNG1 mRNA和蛋白表达水平;通过转染siRNA构建KCNG1敲减的细胞株,分别采用EdU,Transwell,Matrigel Transwell,细胞划痕愈合及血管生成拟态实验检测细胞株生物学行为变化。结果:KCNG1 mRNA在肺癌组织中显著高表达且与肺癌患者不良预后密切相关(P均<0.05);列线图模型初步证实KCNG1可能是肺癌潜在的生物标志物,并具有良好的预后评价功能;GO及KEGG富集分析提示KCNG1在调节激素分泌、离子转运、神经肽信号通路及细胞间黏附等生物学过程中发挥重要作用;GSEA结果提示KCNG1相关差异表达基因主要富集在KRAS,MTORC1,MYC,P53及WNT信号通路;KCNG1敲低的肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和成管能力明显受到抑制(P均<0.05)。结论:KCNG1 mRNA在肺癌中显著高表达且与患者不良预后密切相关;siRNA介导的KCNG1敲低可显著抑制肺癌细胞的恶性生长。

hERG1钾通道在结直肠癌中异常表达及红霉素诱导HT-29细胞凋亡的机制

目的:旨在检测hERG1钾通道蛋白在结直肠癌患者术后组织中的表达,分析其表达与临床病理特点的关系,并以其阻断药红霉素干预,以了解hERG1蛋白对结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响和机制。方法:免疫组化检测76例结直肠癌的癌组织与配对癌旁正常组织中hERG1蛋白表达。不同浓度红霉素干预HT-29细胞,MTT检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡、Boyden小室法检测细胞侵袭力的变化、Western印迹检测hERG1、P53和Bax蛋白表达。结果:免疫组化发现hERG1蛋白在正常大肠组织中无表达,在大肠癌组织异常表达(阳性率83%),其表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移和Dukes分期有关(P<0.05)。红霉素以浓度和时间依赖的方式抑制HT-29细胞增殖,可诱导细胞凋亡。递增剂量的红霉素刺激HT-29细胞,可逐渐减弱其侵袭力(P<0.05),下调hERG1蛋白表达、上调P53和Bax蛋白表达(P<0.05)。结论:hERG1蛋白在正常结肠组织中无表达,在结直肠癌中异常表达,可能参与了结直肠癌的恶性生物学行为。红霉素作为hERG1钾通道阻断药,能抑制结肠癌HT-29细胞增殖,促进细胞凋亡;其作用机制可能与阻断hERG1钾通道、上调P53和Bax的表达有关。

钾通道KCNQ1在大鼠胰腺发育过程中的表达

目的分析钾通道KCNQ1在不同发育阶段大鼠胰腺以及成年大鼠胰岛中的表达情况,为探悉其在胰腺B细胞发育及功能中可能的作用提供实验依据。方法采用高密度寡核苷酸芯片对胚胎第12.5天(E12.5)、E15.5、E18.5、新生和成年大鼠胰腺进行基因转录水平分析,并用RT-PCR对KCNQ1通道亚基在上述5个时期大鼠胰腺以及成年大鼠胰岛中的表达进行验证和分析。结果与胰腺内分泌细胞分化、成熟有关的转录因子分别于E15.5、E18.5达到表达高峰;E18.5胰腺中B细胞功能成熟标志基因的表达显著增加,而KCNQ1钾离子通道的编码基因KCNQ1及KCNE1此时才出现表达。成年胰腺及胰岛中均具有多种KCNQ1通道亚基的表达。结论 KCNQ1通道的表达出现于胰腺发育后期内分泌细胞功能逐渐成熟阶段,在成年胰岛中亦具有较高表达水平,提示KCNQ1通道可能表达于成熟B细胞并参与其内分泌功能。

TREK－1钾通道拮抗剂对抑郁模型大鼠行为学改善的影响

目的探讨TREK-1钾通道拮抗剂对抑郁模型大鼠行为学改善的影响。方法48只健康成年雄性SD大鼠分为正常＋生理盐水组（CON）、正常＋Fluoxetine组（CON＋FLU）、正常＋SIDl900组（CON＋SID）、抑郁模型＋生理盐水组（CUMS）、抑郁模型＋Fluoxetine组（CUMS＋FLU），抑郁模型＋SIDl900组（CUMS＋SID），每组8只。采用孤养结合慢性不可预见的温和性应激（Chronic unpredicted mild stress, CUMS）方法建立抑郁大鼠模型，建模4周后分别腹腔注射氟西汀10mg·kg^-1、SIDl9005．1mg·kg^-1以及等体积生理盐水，抑郁模型组持续给予应激刺激至实验结束。药物处理7d、14d、21d和28d后观察各组大鼠的体质量及行为学（包括蔗糖水偏好实验、旷场实验和强迫游泳实验）变化。结果药物干预对正常大鼠的体质量及行为学表现无明显影响（P〉0．05），应激刺激显著降低大鼠的体质量、蔗糖水消耗百分比以及在旷场实验中的运动距离及站立次数，增加强迫游泳实验中的不动时间（均P〈0．01）；药物干预14d，CUMS＋SID组蔗糖水消耗百分比及旷场实验中站立次数[分别为（62．03±6．99）％，（18．57±6．37）次]高于CUMS组[分别为（45．46±15．54）％，（5．83±3．06）次]，强迫游泳不动时间[（123．57±26．73）S]低于CUMS组[（174．33±40．68）s]，差异有统计学意义（P〈0．05）；28d后，CUMS＋FLU组蔗糖水消耗百分比及旷场实验中运动路程、站立次数[分别为（79．64±11．37）％，（13．18±3．17）m，（19．33＋3．33）次]高于CUMS组[分别为（48．06±17．10）％，（4．45±3．69）m，（5．17±2．99）次]，不动时间[（97．83±18．97）s]低于CUMS[（194．83±37．97）s]，差异有统计学意义（P〈0．05），CUMS＋SID组不动时间[（44．29±14．30）S]低于CUMS＋FLU组[（97．83±18．97）s]，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论拮抗TREK-1钾通道可快速改善大鼠的抑郁样行为。

二十二碳六烯酸下调心房颤动大鼠心房肌细胞双孔内向整流相关性钾通道-1的表达

目的:探讨二十二碳六烯酸(DHA)在大鼠心房颤动(房颤)模型中的作用及其对双孔内向整流相关性钾离子通道1(TREK-1)表达的影响。方法:将乙酰胆碱-氯化钙混合液敏感的雄性SD大鼠随机分为对照组(A组)、对照DHA处理组(B组)、房颤组(C组)、房颤DHA处理组(D组)。分别观察房颤发生时间和心房有效不应期(ERP);应用Western blot测定大鼠心房肌中TREK-1表达及反转录-聚合酶链反应测定大鼠心房肌中TREK-1 mRNA表达。结果:D组较C组大鼠房颤出现时间明显推迟,每天房颤持续时间显著缩短(P<0.01);与A组比较,C组大鼠心房ERP明显缩短,D组大鼠心房ERP较C组明显延长(P<0.01)。与A组比较,C组TREK-1 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01);与C组比较,D组TREK-1mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05和P<0.01)。结论:DHA具有抗房颤作用,其机制可能与下调双孔钾通道TREK-1表达有关。

电压门控性钾通道Q亚家族成员1基因多态性与淮海地区2型糖尿病的关联研究

目的探讨电压门控性钾通道Q亚家族成员1(KCNQ1)基因多态性与中国淮海地区汉族人群2型糖尿病(T2DM)的关系。方法选取2010年12月—2011年7月徐州医学院附属医院内分泌科住院及门诊的T2DM患者200例为病例组,另选取同时期同地区体检中心筛选的健康人群200例作为对照组。采用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法对两组受检者进行基因多态性检测。结果 (1)对照组中KCNQ1 rs2237892位点CC、CT、TT基因型分别占36.0%(72/200)、51.0%(102/200)和13.0%(26/200),C、T等位基因频率分别为61.5%(246/400)和38.5%(154/400);病例组中CC、CT、TT基因型频率分别为47.5%(95/200)、44.0%(88/200)和8.5%(17/200),C、T等位基因频率分别为69.5%(278/400)和30.5%(122/400)。两组受试者KCNQ1rs2237892位点基因型分布及等位基因频率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)对照组及病例组KCNQ1rs151290位点基因型分布及C、A等位基因频率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 KCNQ1 rs2237892位点多态性可能与中国淮海地区汉族人群T2DM的发病有关;而rs151290位点多态性可能与中国淮海地区汉族人群T2DM的发病无关。

烟草钾外流通道基因NTORK1的启动子克隆及激素诱导分析

为研究烟草钾外流通道基因NTORK1的启动子的表达特征,以烟草K326基因组DNA为模板,PCR扩增获得NTORK1的启动子片段,该启动子片段为2 111 bp,包含多个转录因子结合域。构建了NTORK1启动子驱动的GUS基因表达载体,在烟草K326叶片中进行瞬时表达分析。结果显示,NTORK1启动子受低浓度NAA(5.4μmol/L)和高浓度SA(500μmol/L)的诱导表达。

缺氧对人肺动脉平滑肌细胞双孔钾通道TASK-1影响及非受体酪氨酸激酶的调节作用

目的:探讨缺氧对人肺动脉平滑肌细胞内向整流酸敏感性双孔钾通道(TASK-1)的影响,及非受体酪氨酸激酶(c-Src)对该过程的调节作用。方法:培养人肺动脉平滑肌细胞(h PASMCs):分为正常组、缺氧30 min组、缺氧6 h组、缺氧48 h组及缺氧48 h+PP2组、缺氧48 h+PP3组和缺氧48 h+bp V组,应用流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR及Western blot方法测定不同组细胞TASK-1的mRNA及蛋白表达变化。结果:1细胞周期显示:与正常对照组相比,随缺氧时间延长,S期百分率增加;与缺氧48 h组相比,缺氧48 h+PP2组S期百分率下降;2急性缺氧6 h组TASK-1 mRNA表达增加,慢性缺氧组TASK-1 mRNA表达降低,急、慢性缺氧组TASK-1蛋白表达减少;c-Src抑制剂PP2可促进TASK-1 mRNA及蛋白表达,酪氨酸磷酯酶抑制剂bp V抑制TASK-1蛋白表达。结论:缺氧促进人肺动脉平滑肌细胞增殖,非受体酪氨酸激酶c-Src介导急、慢性缺氧对双孔钾通道TASK-1调控过程,可能与缺氧性人肺血管收缩存在一定的相关性。

钾离子通道相互作用蛋白1在大鼠脑中的分布及其与GABA能神经元的关系

目的与方法用免疫组织化学法结合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察钾离子通道相互作用蛋白1(KChIP1)免疫阳性神经元在大鼠脑中的分布及其与GABA能阳性神经元的定位关系,研究钾离子通道相互作用蛋白1(KChIP1)的功能。结果KChIP1免疫阳性神经元在大鼠皮层、海马均可见,海马部位KChIP1阳性神经元主要分布于锥体细胞层、齿状回颗粒细胞层;KChIP1阳性和GABA能阳性神经元在正常大鼠大脑顶叶皮层和海马部位的共存比例分别为63.94%、63.11%。结论在大鼠脑内,KChIP1主要与抑制性GABA能神经元共存发挥其调节神经元兴奋性的功能。

双孔钾通道TASK-1与缺氧性肺血管收缩的研究进展

缺氧性肺血管收缩是机体一项重要的代偿反应,K+通道在其发生中发挥重要作用,相关研究已成为当前热点。近期研究发现双孔钾通道亚型TASK-1在肺动脉平滑肌细胞上表达,并与缺氧性肺血管收缩存在一定相关性,此文拟从缺氧性肺血管收缩与TASK-1研究进展及其相关性研究作一综述。

钾离子通道相互作用蛋白1与γ-氨基丁酸能神经元在戊四唑致癫痫大鼠海马部位的改变

目的研究钾离子通道相互作用蛋白1(KChIP1)在癫痫发生过程中的变化及其与γ-氨基丁酸(GABA)能神经元的关系。方法成年大鼠制作急性戊四唑癫痫模型,免疫组织化学法结合激光扫描共聚焦显微镜技术观察大鼠脑中KChIP1免疫阳性神经元与GABA能阳性神经元在海马部位的表达及改变。结果急性戊四唑癫痫大鼠海马部KChIP1阳性神经元数较对照组明显增加(P<0.05),GABA能阳性神经元、KChIP1/GABA双标阳性神经元数与对照组无显著性差异(P>0.05);KChIP1和GABA能阳性神经元在海马部位的共存率约为63.9%。结论KChIP1在癫痫发生中可能起重要作用;KChIP1与GABA能神经元虽有密切的共存关系,但在功能上并不完全一致。

大电导钙激活钾通道β1亚基与子痫前期的相关性研究

目的:探讨胎盘组织和子宫平滑肌组织中大电导钙激活钾通道β1亚基(KCNMβ1)的表达,及其与子痫前期发病的关系。方法:轻、重度子痫前期组(研究组)和正常孕妇组(对照组)孕妇的胎盘组织及子宫平滑肌组织中KCNMβl mRNA的表达通过荧光定量PCR技术检测。采用ELISA法检测三组孕妇血清KCNMβl浓度变化水平。结果:各研究组中孕妇血清的KCNMβl水平、胎盘组织及子宫平滑肌中KCNMβl mRNA表达水平均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);而轻、重度子痫前期组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:孕妇血清中KCNMβl表达降低,胎盘组织和子宫平滑肌中KCNMβl mRNA的表达降低与子痫前期的发病密切相关,可能参与了子痫前期的病理生理过程。

低钾条件下TWIK-1双孔钾通道对小鼠心肌细胞膜电位的影响及其机制研究

目的:探讨在细胞外低钾条件下TWIK-1双孔钾通道对小鼠HL-1心肌细胞膜电位的影响及其分子机制。方法:构建载有人TWIK-1或TWIK-1-T118i突变体基因序列的慢病毒载体。通过病毒转染的方法使中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)或HL-1小鼠心肌细胞表达TWIK-1或TWIK-1-T118i突变体。通过膜片钳记录在细胞外正常钾(5.4 mmol/L)及低钾(2.7 mmol/L)条件下的膜电位及全细胞电流。结果:电流钳结果显示,在2.7 mmol/L钾条件下,表达人TWIK-1通道的CHO细胞及HL-1小鼠心肌细胞膜电位呈现去极化,当细胞外液的钠离子被替换为N-甲基-D-葡萄糖胺(NMDG)时,膜电位去极化现象消失;而表达人TWIK-1-T118i突变体通道的CHO细胞及HL-1小鼠心肌细胞膜电位呈现超极化。电压钳结果显示,在2.7 mmol/L钾条件下,在表达人TWIK-1通道的CHO细胞及HL-1小鼠心肌细胞可记录到内向阳离子电流,当细胞外液的钠离子替换为NMDG时,该内向阳离子电流消失。结论:在细胞外低钾条件下,TWIK-1通道介导的内向钠离子电流能够引起HL-1小鼠心肌细胞膜电位发生去极化。

子痫前期相关miR-210通过下调钾离子通道调控因子1(KCMF1)抑制滋养细胞的侵袭

目的研究子痫前期(PE)相关miR-210通过调控钾离子通道调控因子1(KCMF1)影响滋养细胞侵袭功能的机制。方法选取24例PE患者及25例同期健康产妇,实时荧光定量PCR检测其血清、胎盘组织miR-210相对表达量。采用脂质体转染法将miR-210抑制物(miR-210 inhibitor)及阴性对照、miR-210模拟物(miR-210 mimimc)及阴性对照转染至HTR8/Svneo细胞并设置空白对照组。转染48 h后,采用荧光显微镜观察转染效率;Transwell^(TM)小室实验测定各组细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR检测HTR8/Svneo细胞miR-210、KCMF1 mRNA水平、Western blot法检测KCMF1蛋白相对表达量;双荧光素酶实验检验miR-210与KCMF1的靶向关系。结果PE组血清及胎盘组织miR-210相对表达量均高于对照组。转染后48 h,各组细胞转染效率均>80%;与其他组比较,miR-210 mimics组穿膜细胞数减少,miR-210相对表达量增加,KCMF1 mRNA及蛋白相对表达量降低,相对荧光素酶活性降低;miR-210 inhibitor组miR-210相对表达量降低。结论PE血清及胎盘中miR-210异常高表达,上调miR-210引起KCMF1表达下调,抑制滋养细胞侵袭。

类KQT亚科-钾离子电压门控通道成员1基因多态性与赣州市居民2型糖尿病的相关性

目的探讨类KQT亚科-钾离子电压门控通道成员1(KCNQ1)基因单核苷酸多态性与赣州市居民2型糖尿病(T2DM)发病的关系。方法采用巢式病例对照研究方法,选择新发T2DM患者521例(T2DM组)、糖调节正常(NGT)者521例(NGT组)。应用多重PCR技术、MassARRAY iPLEX单碱基延伸技术和基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)技术,对KCNQ1基因rs2237892、rs151290位点进行基因分型,比较rs2237892、rs151290位点基因型和等位基因在2组中的差异。结果 rs2237892位点存在CC、CT、TT 3种基因型,其在T2DM组的分布频率分别为49.41%、43.48%、7.11%,NGT组的分布频率分别为43.26%、46.48%、10.26%,CC基因型在2组之间的频率分布差异有统计学意义(χ~2=4.502,P=0.034),OR(95%CI)值为1.647(1.036~2.620);等位基因C、T在T2DM组的分布频率分别为71.15%、28.85%,NGT组分别为66.50%、33.50%,等位基因C在2组之间的频率分布差异有统计学意义(χ~2=5.049,P=0.025),OR(95%CI)值为1.242(1.028~1.501)。rs151290位点存在CC、CA、AA 3种基因型,其在T2DM组的分布频率分别为39.09%、49.01%、11.90%,NGT组分别为36.57%、47.27%、16.16%,2组之间各基因型分布频率比较差异均无统计学意义(P>0.05);其等位基因C、A的分布频率在2组之间比较差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论 KCNQ1基因rs2237892位点多态性与赣州市居民T2DM的发病相关,而rs151290位点多态性可能与赣州市居民T2DM的发病无关。

LncRNA KCNQ1OT1靶向miR-9-5p对口腔癌细胞黏附性及活性的影响

目的探究长链非编码RNA钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1(LncRNA KCNQ1OT1)靶向miR-9-5p对口腔鳞状细胞癌细胞黏附性及活性的影响。方法体外培养口腔癌SCC25细胞,分别转染LncRNA KCNQ1OT1阴性对照、LncRNA KCNQ1OT1 siRNA、miR-9-5p阴性对照、miR-9-5p siRNA、LncRNA KCNQ1OT1 siRNA和miR-9-5p siRNA,分别记为KCNQ1OT1-NC组、KCNQ1OT1组、miR-9-5p-NC组、miR-9-5p组,KCNQ1OT1+miR-9-5p组及口腔癌组;采用RT-PCR检测各组细胞的LncRNA KCNQ1OT1及miR-9-5p水平,MTT法检测细胞吸光度(OD)值,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中CD44S及CD44V5蛋白表达;通过双荧光素酶报告证实LncRNA KCNQ1OT1与miR-9-5p靶向关系。结果KCNQ1OT1组LncRNA KCNQ1OT1水平低于口腔癌组(P<0.05),miR-9-5p组miR-9-5p水平低于口腔癌组(P<0.05);与口腔癌组相比,KCNQ1OT1组、miR-9-5p组、KCNQ1OT1+miR-9-5p组细胞OD值、CD44S及CD44V5蛋白降低,细胞凋亡率升高(P<0.05),且以KCNQ1OT1+miR-9-5p组效果最为显著(P<0.05);双荧光素酶报告结果显示,miR-9-5p是LncRNA KCNQ1OT1的靶基因。结论LncRNA KCNQ1OT1可通过调控miR-9-5p表达从而降低口腔鳞状细胞癌细胞黏附性,抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖,诱导其凋亡。

TWIK相关酸敏感钾离子通道在呼吸与睡眠调节中的研究进展

TWIK相关酸敏感钾离子通道(TASK)-1和TASK-3是双孔钾离子通道家族的重要成员,广泛表达于中枢神经系统和外周组织,对缺氧和细胞外液p H值变化极为敏感。TASK参与呼吸中枢的表达及呼吸运动的调节,同时在睡眠调节中也可发挥一定作用,本文总结了TASK在呼吸与睡眠调节中的相关研究进展。