大豆分离蛋白接枝氨基封端聚2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸的合成及溶液性质研究

用巯基乙胺为链转移剂,过硫酸铵为引发剂合成了氨基封端的聚2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸(H2N-PAMPS).再用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)在室温下催化H2N-PAMPS的端氨基与大豆分离蛋白(SPI)的羧基反应形成酰胺键,得到接枝物SPI-g-NH-PAMPS.用1H-NMR、傅利叶红外光谱、13C-NMR对H2N-PAMPS和接枝物SPI-g-NH-PAMPS进行结构表征.用zeta电位仪、紫外可见光光谱,荧光光谱,动态激光光散射对SPI及其接枝物SPI-g-NH-PAMPS的水溶液性质进行了研究.结果表明,与SPI相比,SPI-g-NH-PAMPS的溶解性、表面疏水性、乳化性等有所改善,接枝物SPI-g-NH-PAMPS聚集体粒径增大,形成独特的核壳结构.

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(WSC·HC1)是由硫脲衍生物氧化制得的,目前只有日本的东洋化成业和大阪合成有机化学两个厂家生产。WSC·HC1主要用于有机合成,其特点是反应副产物(脲素衍生物)可用盐酸水溶液除去;在缩氨酸的部分缩合中,可防止外消旋作用。

大豆分离蛋白-乙二胺接枝物的合成及性质

探讨了以1-(3-二甲氨基丙基-3)-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)催化大豆分离蛋白(SPI)的羧基和乙二胺(EDA)的氨基进行接枝反应制备大豆分离蛋白-乙二胺接枝物(SPI-EDA)的最佳条件。利用激光粒度/Zeta电位仪、FT-IR、HPLC、PCD等对SPI-EDA接枝物进行结构与性质表征。确定适宜的合成条件:反应温度为室温,时间4h,SPI、EDC、EDA与NHS摩尔比1.0∶0.5∶0.6∶0.125。检测结果表明,EDA成功的接枝到SPI羧基基团上,与SPI相比,SPI-EDA的电荷密度、相对分子质量等都有所改善,接枝物SPI-EDA聚集体粒径增大且分布均一。

柠檬酸-EDC/NHS胶原凝胶修复破损纤维环

目的探讨利用柠檬酸-EDC/NHS一型胶原凝胶修复纤维环损伤,减缓椎间盘退变的效果。方法使用鼠尾肌腱一型胶原凝胶,柠檬酸(CA)、1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)作为交联剂,将一型胶原凝胶与交联剂按不同质量比混合制成一型胶原混合凝胶。建立鼠尾椎间盘纤维环穿刺模型。清洁级SD大鼠48只,分为假手术组(n=8)、CA-EDC/NHS凝胶(CA6)治疗组(n=10)、CA-EDC/NHS凝胶(CA3)治疗组(n=10)、EDC/NHS凝胶(CA0)治疗组(n=10)、穿刺未治疗组(n=10)。分别于1、2、4周行小动物X摄片、小动物MRI检查,统计分析不同时间点椎间隙高度系数、髓核像素值及Pfirrmann分级,于第4周时将大鼠处死行组织学切片观察。结果 4周后,CA-EDC/NHS凝胶(CA6)治疗组的鼠尾椎间盘对比假手术组仅发生了轻微的退变,基本保持了髓核组织的完整性,在椎间盘高度系数(均数79%)、髓核像素值(均数126.9)和Pfirrmann分级结果(平均1.3分)均优于其余两个治疗组和穿刺未治疗组(P<0.05)。CA-EDC/NHS凝胶(CA6)治疗组的组织学观察显示,针道的周围没有发现炎性细胞浸润和瘢痕组织,针道尽头可见一团凝胶状物质在断裂的纤维环组织之间形成了桥接使其闭合。结论柠檬酸-EDC/NHS胶原凝胶具有一定的修复破损纤维环,减缓椎间盘退变的能力,并且与柠檬酸剂量存在相关性。

不同浓度的碳二亚胺乙醇溶液处理对牙本质自酸蚀粘接剂粘接强度的影响

目的:采用微剪切方法分析不同浓度碳二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide,EDC]乙醇溶液处理牙本质表面对自酸蚀粘接剂粘接强度和断裂模式的影响。方法:收集离体健康智齿80颗,随机分为5组,每组16颗。低速切割机暴露牙合面中层牙本质后使用两步法自酸蚀粘接剂(Clearfil SE Bond)进行牙本质粘接,所有试件设计为粘接半径1 mm、高3 mm的树脂柱试件。粘接时除空白组按常规步骤完成粘接外,其余4组在Ⅰ液(底涂剂)处理后,分别采用3种浓度(0.01 mol/L、0.3 mol/L、0.5 mol/L)的EDC乙醇溶液和乙醇溶剂对牙本质表面处理1 min后涂布Ⅱ液(粘接剂)完成粘接。将所有试件放入含0.5%(质量分数)氯胺T生理盐水浸泡24 h后进行微剪切实验,并在体式显微镜下观察试件断裂模式。结果:0.01 mol/L、0.3 mol/L、0.5 mol/L EDC处理组、乙醇溶剂处理组的即刻微剪切粘接强度分别为(35.29±8.97)MPa、(40.24±9.68)MPa、(37.38±9.66)MPa、(37.49±7.76)MPa,高于空白组(33.81±7.98)MPa,各组差异均无统计学意义(P>0.05);断裂模式在各组间差异也无统计学意义(P>0.05)。结论:不同浓度的EDC乙醇溶液处理对牙本质自酸蚀粘接剂的即刻粘接强度、断裂模式没有影响。

基于羧基载体LX-1000IDA的脂肪酶固定化研究

本文利用碳二亚胺EDC作为羧基载体LX-1000IDA的活化剂,通过脂肪酶的表面氨基,将脂肪酶固定于羧基载体上,制成固定化海洋脂肪酶IDA-LIPASE。通过单因素实验、Plackett Burman试验和正交试验,对载体-酶液和交联剂的添加顺序、缓冲液浓度、温度、pH、载体量、时间和碳二亚胺EDC浓度等进行优化和筛选,得到的最佳固定化条件为:pH4.5、载体量0.2 g、时间6 h、温度25℃、EDC质量分数0.6%,制备得到酶活力为114 U/g的固定化酶。对该条件进行了10倍扩大固定化,制备得到的固定化脂肪酶IDA-LIPASE酶活力为210 U/g。对制备的固定化酶酶学性质鉴定表明:固定化酶与游离酶相比,最适反应温度提高10℃,最适反应pH向碱性方向移动0.5,重复使用7次还保留40%左右的酶活,具有优异的热稳定性;固定化酶在4℃保存30 d后保留84.6%酶活。该固定化酶IDA-LIPASE相比于游离酶更能适应工业生产环境,具备实际生产应用的潜力和价值。

UPLC-MS/MS法检测雷迪帕韦原料药中潜在基因毒性杂质残留量

目的:建立超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)检测雷迪帕韦原料药中潜在基因毒性杂质1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)的残留量。方法:色谱条件:采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(75 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液(50∶50),流速为0.3 ml·min^(-1),柱温为30℃,进样量为5μl。质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),多级反应监测(MRM),正离子扫描模式,离子喷雾电压为2 500 V,离子源温度为500℃,雾化气为379.0 k Pa,辅助气为275.6 k Pa,气帘气为137.8 k Pa,碰撞气为41.3 k Pa,离子碰撞能为15 V,扫描时间为100 ms,用于定量分析的MRM离子对为m/z→156.2/86.1。结果:EDC的线性范围为0.03~2.25μg·ml^(-1)(r=0.999 0);检测限为0.03 ng,定量限为0.08 ng;平均回收率为98.3%(RSD=5.7%,n=9)。结论:本方法操作简便、快捷、结果准确,可用于雷迪帕韦原料药中潜在基因毒性杂质EDC的质量控制。

甲基苯丙胺与蛋白质结合物的合成

目的:利用蛋白质连接法合成甲基苯丙胺人工全抗原。方法:以BSA蛋白做载体蛋白,用碳二亚胺法偶联合成甲基苯丙胺抗原,并用紫外扫描、蛋白电泳以及胶体金免疫层析等方法进行检测。结果:甲基苯丙胺与BSA连接成功,连接产物分子量增加,且每分子牛血清白蛋白连接的甲基苯丙胺分子数为21个;胶体金免疫层析检测结果显示,合成抗原与抗体有特异性反应,具有活性,交叉反应良好。结论:此抗原可作为甲基苯丙胺免疫用抗原。

EDC/NHS交联对胶原物理化学性能的影响

为了提高胶原的物理化学性能,采用1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)交联剂对胶原进行交联,考察了不同交联剂浓度对胶原物理化学性能的影响,并通过红外、差示扫描量热分析(DSC)、吸水率、膨胀动力学、抗酶解性能、扫描电镜(SEM)等技术手段对胶原交联前后的性能进行表征.研究结果表明,胶原经EDC/NHS交联后,热稳定性、形态稳定性增强,抵抗酶解的能力显著增加,胶原的显微结构由交联前的无序状态变为紧密有序的结构.说明EDC/NHS交联可有效改善胶原的物理化学性能.

EDC和NHS对玉米醇溶蛋白成膜性质的影响

为提高玉米醇溶蛋白膜的抗拉强度和伸长率,降低其水蒸气透过率和吸水率,研究交联剂1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)对成膜性质的影响。结果表明:以90%乙醇为溶剂,EDC和NHS的添加量分别为0.06 g/g时,制得的膜性能最佳,抗拉强度为83 MPa,较未添加交联剂的蛋白膜提高97.6%;伸长率为5.5%,提高57.1%;水蒸气透过率为2.5×10-8(g·m)/(m2·h·Pa),降低43.2%;吸水率为39.4%,降低24.4%;质量损失率为3.6%,增加20.0%;静态接触角为67.4°,表明膜表面仍为疏水表面。原子力显微镜观测显示,加入交联剂后,蛋白分子聚集体变小,以均一的小球型聚集体形式紧密有序排列。

EDC在有机合成中的应用研究进展

1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)是一种水溶性的新的碳二亚胺衍生物,可用作缩合剂、交联剂,本文详细综述了EDC在酰胺化、多肽合成、酯化、高分子合成等化学反应中的应用,这些反应具有反应条件温和、产率高、选择性好等优点。

具末端Boc氨基的硫代氨基甲酸酯的合成研究

用二环己基碳二酰亚胺(DCC)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)作为脱水缩合剂,分别催化具羧基末端的硫代氨基甲酸酯与N-Boc-乙二胺反应,合成具末端Boc氨基的硫代氨基甲酸酯,用1HNMR谱证明所得产物为预期结构。并对两种方法进行了比较研究,结果表明,EDC为脱水缩合剂时,实验操作简单、反应时间短、后处理无需加入有机溶剂,产率更高。

中药莪术中抗肿瘤成分莪术醇人工抗原的合成与鉴定

目的合成莪术醇全抗原并加以鉴定。方法先用莪术醇与琥珀酸酐为原料,以三氯甲烷为溶剂,4-二甲基氨基吡啶(DMAP)作催化剂,反应合成半抗原莪术醇琥珀酸单酯,然后,用1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺法将莪术醇琥珀酸单酯偶联到牛血清白蛋白,合成了莪术醇的人工抗原,并用激光解析飞行质谱(MALDI-TOF-MS)进行了鉴定,利用质谱特征求得了偶联物中莪术醇与牛血清白蛋白的量,计算出结合比。结果成功地合成了莪术醇人工抗原,其结合比为19.6。结论用1-乙基-3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺偶联法可合成莪术醇的完全抗原。

多肽在金纳米粒子表面偶联反应效率研究

通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化反应将多肽偶联到金纳米粒子表面,采用荧光光谱研究其形成的酰胺键的反应偶联效率。考察了实验条件,包括缓冲液的种类(HEPES、Tris-HCl、硼酸、PBS缓冲液)、pH值(pH 6.5~9.0)、缓冲液浓度(10,25,40和50 mmol/L)、NHS和EDC的浓度(NHS 0.2~1.0 mol/L,EDC 0.01~0.5 mol/L)及二者比例(0,0.5,1.0,2.0和2.5)、偶联反应时间(4,8,12,24和36 h)等对偶联效率的影响,筛选出最佳实验条件。实验结果表明,25 mmol/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液(pH 7.0),NHS/EDC浓度为0.4 mol/L/0.2 mol/L和24 h的反应时间为EDC-NHS活化反应将多肽偶联到金纳米粒子上的最佳实验条件。本研究结果可为相关研究提供技术参考。

吗啡与蛋白质结合物的合成

目的:利用蛋白质连接法合成吗啡人工全抗原。方法:混合酸酐法和碳二亚胺连接法,用BSA及OVA蛋白做载体蛋白,利用紫外光谱扫描及蛋白质电泳两种方法判断连接是否成功。结果:连接成功,连接产物分子量增加,且每分子牛血清白蛋白连接的吗啡分子数为40-48个,每分子卵清白蛋白(OVA)连接的吗啡分子数为13-16个。结论:此两种方法能成功合成吗啡人工抗原,且该抗原可作为吗啡免疫用抗原以及吗啡免疫检测方法建立所用包被抗原。

新型阳离子脂质体制备及其体外转基因特征

背景:阳离子脂质体及胶束、纳米粒等转基因载体是目前非病毒转基因载体领域研究热点;而目前市售转基因试剂盒价格昂贵,并且基本上都是进口商品,如果能够开发一种价廉,转基因效率高,具有自主知识产权的转基因试剂盒将展现广阔市场前景。目的:合成一种新型阳离子脂质复合物,并制备相应阳离子脂质体,对其体外转基因效率进行考察。方法:以1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺、胆固醇、丁二酸酐为原料合成阳离子脂质复合物,采用薄层色谱、红外光谱等方法对产物进行结构表征。然后用薄膜分散法,将适当比例的二油酰磷脂酰乙醇胺和阳离子脂质复合物混合制备成阳离子脂质体,并用其包封含绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFPC1,对人宫颈癌Hela细胞株进行体外转染。结果与结论:通过两步法合成了一种全新的阳离子脂质复合物——胆固醇-丁二酸酯-1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺,薄层色谱及红外光谱结果表明合成了预期产物。薄膜分散法制得阳离子脂质体,其中以这种阳离子脂质复合物和二油酰磷脂酰乙醇胺摩尔比为1:1左右所制备的脂质体颗粒较为均匀、细小,形态基本呈圆形。体外对质粒包裹实验结果表明,阳离子脂质体与质粒比为5:3,可完全包封质粒。用该阳离子脂质体对Hela细胞进行转染,24h后,瞬时转染效率达35.6%。从初步实验结果看,所合成的阳离子脂质复合物结构总体与市售阳性成分结构类似,合成方法简单、廉价,体外对质粒DNA有很好包裹性能,细胞毒性低,然而体外对Hela细胞的转染效率还明显偏低。

具有甲状腺素脱碘酶活性的抗体酶的化学修饰

The abzyme with deiodinase activity was modified with diethyl pyrocarbonate(DEPC) and carbodiimide(EDC) respectively. The modified abzymes were dialyzed and their activities were compared with that of the native abzyme. The results indicate that the histidine residue is one of the essential groups in the abzyme, and the modification causes the catalytic activity a loss of 70%. The modification of the residues containing carboxyl group with EDC leads to a loss of 50% activity, indicating that acid amino residues play important roles in the catalytic reaction.

导向农药

本文提出了导向农药的概念,从植物中可能存在的导向载体、导向载体与农药活性成分的拼接方法,导向农药用量、药害及导向载体的饱和性问题等方面论证了导向农药的可行性,阐明了导向农药的研究和应用意义。

丙烯酸接枝对酶法制备丝素基吸水材料的影响

为提高丝素表面接枝共聚乙烯基单体的效率从而通过酶法制备丝素蛋白基吸水复合材料,首先借助EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)/NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)交联体系进行丙烯酸(AA)与丝素蛋白(SF)的接枝,通过丙烯酸上的羧基与丝素蛋白上的氨基反应使丝素蛋白上引入双键,提高丝素蛋白表面的接枝聚合反应位点。之后再进行辣根过氧化物酶(HRP)体系催化丝素蛋白与丙烯酸、丙烯酰胺(AM)以及交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)的共聚反应,最终生成再生丝素吸水复合材料。通过多种方法测定丝素溶液中游离氨基含量的变化、接枝前后溶液中丙烯酸含量的变化,分析不同条件下制得的丝素膜材料的形态,评价复合材料的吸水、保水、重复吸水和缓释性能。实验结果表明,丝素蛋白能通过EDC/NHS接枝引入丙烯酸单体;丙烯酸接枝后的和未接枝的丝素蛋白与丙烯酸和丙烯酰胺共聚制得的吸水复合材料相比,具有更好的吸水、保水性和重复吸水性能,较快的包载能力和较好的热稳定性能。

不同交联剂对明胶静电纺丝膜性能的影响

采用静电纺丝法制备的明胶组织工程支架耐水性和力学性能较差,无法直接作为软骨组织工程支架使.用。为改善其物理化学性能,分别采用1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺(EDC)与戊二醛(GA)对明胶电纺膜进行交联。分析对比了两种交联方法对纤维形貌、溶胀比、交联度、力学性能、细胞毒性及降解性能的影响,并考察了不同交联剂浓度对明胶膜物理和化学性能的影响。结果表明,与GA交联相比,采用1.5%EDC交联可以维持明胶膜的表面形貌,交联度可以达到65%,并且无细胞毒性,更有利于其作为骨及软骨组织工程支架的生物学应用。体外降解实验结果表明,采用GA和EDC交联的明胶膜在降解60d时降解率均为70%左右,基本符合软骨的修复要求。