1-磷酸神经酰胺转运蛋白对人口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞生物学行为的影响

目的:探讨1-磷酸神经酰胺转运蛋白(CPTP)对人口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞生物学行为的影响,阐明其相关作用机制。方法:体外培养HSC-3细胞,分为对照组和实验组,分别采用pFlag-CMV4和pFlag-CPTP质粒进行转染,采用抗性筛选法构建稳定转染(稳转) CPTP的细胞。采用Western blotting法和免疫荧光法检测2组细胞中CPTP蛋白表达水平,采用克隆形成实验和CCK-8法检测各组细胞中克隆形成数和细胞增殖活性,细胞划痕实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell小室实验检测2组细胞中侵袭细胞数。小鼠随机分为对照组和实验组,分别注射pFlag-CMV4稳转HSC-3细胞和pFlag-CPTP稳转HSC-3细胞,制备小鼠皮下移植瘤模型,检测2组小鼠移植瘤体积和质量。采用生物信息学方法对头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)组织中CPTP差异表达基因进行富集分析。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组细胞中p53、血小板反应蛋白1 (THBS1)和细胞周期蛋白G2 (CCNG2) mRNA表达水平。结果:与对照组比较,实验组细胞中CPTP蛋白表达量明显增加。与对照组比较,实验组细胞中克隆形成数明显增加(P<0.01),细胞增殖活性和划痕愈合率明显升高(P<0.05或P<0.01),侵袭细胞数明显增加(P<0.01)。注射肿瘤细胞2、3和4周,与对照组比较,实验组小鼠移植瘤体积明显增加(P<0.05或P<0.01);注射肿瘤细胞4周,与对照组比较,实验组小鼠移植瘤质量明显增加(P<0.05)。生物信息学分析,在HNSCC组织中CPTP的作用可能是通过p53等信号通路介导。与对照组比较,实验组细胞中p53、THBS1和CCNG2 mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。结论:过表达CPTP能促进HSC-3细胞增殖、迁移、侵袭和成瘤能力,CPTP通过抑制p53信号通路促进口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞生长。

人类炎症、肿瘤相关1-磷酸神经酰胺转运蛋白的生物信息学分析

人类1-磷酸神经酰胺转运蛋白(ceramide-1-phosphate transfer protein, CPTP)能在细胞内膜间运输1-磷酸神经酰胺(ceramide-1-phosphate, C1P)。为深入研究人类CPTP的功能,本研究通过STRING、Coexpedia、Metascape等在线生物信息学分析工具,分析人类CPTP蛋白的潜在相互作用蛋白、共表达蛋白及其在肿瘤发生发展中的作用。结果表明,人类CPTP蛋白可能参与磷酸酯水解酶活性、膜脂代谢及多种肿瘤发生发展等过程。ceRNA调控分析结果表明多种miRNA、lncRNA可相互作用并调控人类CPTP的表达。本研究结果为进一步研究人类CPTP的功能及调控机制提供了重要的参考。

神经酰胺激酶(CerK)催化反应的肿瘤生物学意义

神经酰胺激酶(ceramide kinase,CerK)是唯一已知的在哺乳动物细胞中催化神经酰胺(ceramide,Cer)磷酸化为1-磷酸神经酰胺(ceramide-1-phosphate,C1P)的脂蛋白酶。作为该酶促反应底物的Cer在神经鞘脂代谢和信号转导途径中起着中心介质的作用,调节许多基础的细胞反应;而C1P作为该酶促反应产物,同样是与细胞功能和命运密切相关的生物活性脂质。现有研究表明,CerK、Cer及C1P均参与调控肿瘤细胞增殖、存活、凋亡与迁移/转移,与肿瘤发生和发展密切相关,是抗肿瘤治疗的潜在靶点。

酒精诱导小鼠海马齿状回神经细胞的增殖:神经酰胺的可能作用

本文旨在探讨神经酰胺(ceramide,Cer)在酒精诱导神经细胞增殖及新生神经元形成过程中的作用及机制。因为Cer主要的代谢途径是经神经鞘磷脂合成酶(sphingomyelin synthase,SMS)作用转化成神经鞘磷脂(sphingomyelin,SM),所以我们用SMS2基因敲除(sphingomyelin synthase2knockout,SMS2/)和野生型(wild type,WT)雌性小鼠建立孕期酒精暴露模型,将模型孕鼠所生仔鼠作为研究对象。用酶学法检测仔鼠SM水平,利用免疫荧光染色法观察各组仔鼠齿状回神经细胞增殖、新生神经元及蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα)在脑组织中的表达,免疫印迹技术检测出生后7天(postnatal day7,P7)仔鼠海马组织PKCα蛋白的相对表达量。结果显示,由于SMS2基因的缺失,SMS2/P0仔鼠血液SM水平明显低于WT仔鼠(P<0.01)。无论SMS2/还是WT P0仔鼠,酒精暴露剂量依赖性地降低其血液SM水平降低。无论SMS2/仔鼠还是WT仔鼠,其齿状回神经细胞增殖的数量及新生神经元随年龄的增长而减少且一直持续到成年。在P0、P7、P14和P30时间点,与WT仔鼠相比,SMS2/仔鼠齿状回神经细胞增殖的数量及新生神经元较多(P<0.05);酒精暴露可剂量依赖性地增加两基因型仔鼠齿状回神经细胞增殖的数量及新生神经元。PKCα是神经酰胺-神经酰胺-1-磷酸(Cer-C1P)通路中重要的激活蛋白,其表达于胞膜及胞核,在海马、齿状回、脑皮质中均有表达;与WT P7仔鼠相比,SMS2/P7仔鼠海马组织PKCα蛋白的表达量较低(P<0.05);而酒精暴露可剂量依赖性地增加两基因组仔鼠海马组织PKCα蛋白的表达量。以上结果提示,孕期酒精暴露能够诱导神经细胞发生代偿性增殖及新生神经元的形成,Cer-C1P通路参与酒精诱导细胞增殖的过程;同时,PKCα是Cer-C1P通路中重要的激活蛋白,可上调C1P调控酒精诱导神经细胞增殖及新生神经元形成的作用。

河蟹肝胰腺中4种脂类对细胞生长和亚细胞结构的影响

目的:研究河蟹肝胰腺中C-8神经酰胺-1-磷酸、N-十二烷醇-L-高丝氨酸内酯、磷酰胆碱和棕榈酰肉碱对细胞生长和亚细胞结构的影响.方法:利用细胞计数试剂盒和乳酸脱氢酶试验,检测不同质量浓度的4种脂类对斑马鱼胚胎成纤维细胞所表现的细胞增殖和细胞代谢的影响,并通过溶酶体和线粒体染色分析4种脂类对细胞溶酶体和线粒体形态结构的影响.结果:N-十二烷醇-L-高丝氨酸内酯表现为促进细胞增殖,并保持线粒体和溶酶体形态结构的完整;C-8神经酰胺-1-磷酸、磷酰胆碱、棕榈酰肉碱表现为抑制细胞增殖,并引起线粒体和溶酶体的结构发生不同程度的改变.结论:河蟹肝胰腺中的4种脂类物质不仅是食物的营养成分,还具有明显生物活性,能影响细胞代谢和亚细胞结构的完整性.