1-磷酸鞘氨醇受体2抑制脂多糖诱导的急性肺损伤

目的:探讨1-磷酸鞘氨醇受体2(S1P2R)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)中的作用及机制。方法:野生小鼠和S1pr2-/-小鼠经气管滴注LPS,建立急性肺损伤动物模型。LPS注射24 h时观察肺组织的病理改变,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白浓度、总细胞数、中性粒细胞的比值及TNF-α、IL-6细胞因子的表达。为了观察S1P2R在肺损伤中的作用机制,LPS注射10 min前野生小鼠和S1pr2-/-小鼠经尾静脉注射一氧化氮合酶抑制剂L-NAME,LPS注射12 h时,再观察肺的病理组织学变化以及BALF中的蛋白浓度,总细胞数及TNF-α、IL-6细胞因子表达的变化。结果:与野生小鼠比较,S1pr2-/-小鼠恶化LPS诱导的急性肺损伤,BALF中的蛋白浓度、总细胞数,中性粒细胞比值及炎症细胞因子表达显著增加。而L-NAME的预处理显著抑制在S1pr2-/-小鼠LPS诱导加重的急性肺损伤。结论:S1P2R通过抑制NO合成,维持血管屏障,从而抑制急性肺损伤。

1-磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)通过保护肠黏膜屏障功能缓解炎症性肠病的作用

目的研究1-磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)通过保护肠黏膜屏障缓解炎症性肠病的作用。方法构建S1PR2基因敲除鼠。用硫酸葡聚糖钠盐(DSS)诱导结肠炎。血清荧光素异硫氰酸酯(FITC)浓度测定体内外小鼠肠道渗透性。酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞悬液中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和干扰素-γ(IFN-γ)水平。结果野生型(WT)小鼠存活率及体重高于S1PR2-/-小鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。S1PR2-/-小鼠的结肠缩短比WT小鼠更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。DSS处理组小鼠结肠细胞悬液中IFN-γ、IL-6和TNF-α浓度较对照组水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论S1PR2通过保护肠黏膜屏障功能缓解炎症性肠病。

鞘氨醇激酶1和1-磷酸鞘氨醇受体2在癫痫大鼠海马组织中表达的变化

目的:检测鞘氨醇激酶1(SphK1)和1-磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)在癫痫大鼠海马中的表达,探讨SphK1和S1PR2在癫痫中的作用机制。方法:成年雄性SD大鼠108只,随机分为对照(Control)组(n=48)和癫痫(PILO)组(n=60)。癫痫组腹腔注射氯化锂(127mg/kg),18~20h后注射匹罗卡品,首剂量为30mg/kg,发作<IV级的大鼠重复注射匹罗卡品(10mg/kg);对照组给予等剂量的生理盐水代替匹罗卡品。根据造模后观察时间和行为学改变,随机分为3个大组,6个亚组:急性期组(E6h、E1d、E3d)、潜伏期组(E7d)和慢性期组(E30d、E56d),每个亚组中对照大鼠和癫痫大鼠各8只。每组取4只大鼠麻醉取海马,另4只取大脑组织。运用Western blot检测SphK1、S1PR2在大鼠海马组织中的表达变化,免疫荧光检测星形胶质细胞活化增生情况及SphK1、S1PR2在星形胶质细胞中的定位表达。结果:与Control组比较,SphK1在造模后急性期(E3d)、潜伏期(E7d)和慢性期(E30d、E56d)海马中的表达均明显升高(P<0.05或P<0.01);S1PR2在急性期(E3d)、潜伏期(E7d)和慢性期(E30d、E56d)海马组织中的表达均明显下降(P<0.05或P<0.01);癫痫大鼠(E7d)海马星形胶质细胞活化、增生明显(P<0.05),SphK1和S1PR2在E7d的表达到位为海马星形胶质细胞中。结论:SphK1和S1PR2可能通过调控海马星形胶质细胞活化增生和影响神经元兴奋性参与了癫痫的发病。

1-磷酸鞘氨醇受体2介导PI3K/AKT/eNOS通路抑制甲型流感病毒诱导的病毒性肺炎

目的:探讨1-磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)对甲型流感病毒诱导的病毒性肺炎的作用及机制。方法:采用甲型流感病毒鼠肺适应株FM1滴鼻感染野生C57BL/6小鼠和S1pr2^(-/-)小鼠,建立甲型流感病毒性肺炎动物模型。病毒感染4和6 d时观察比较对照组(模型组的野生小鼠)、JTE-013(S1PR2高效拮抗剂)处理的小鼠及S1pr2^(-/-)小鼠肺组织的病理改变,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白浓度、细胞总数及细胞因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)]的表达,Western blot法检测小鼠肺组织的AKT和e NOS的磷酸化水平。结果:与模型对照组的野生鼠比较,JTE处理组和S1pr2^(-/-)组甲型流感病毒性肺炎更加严重;BALF中的蛋白浓度,总细胞数及炎性细胞因子表达显著增加;且PI3K下游靶点AKT和e NOS磷酸化显著增高(P<0.01)。结论:S1PR2通过介导PI3K/AKT/e NOS信号转导通路,调节NO生成,抑制血管通透性和炎性细胞因子释放,从而减轻甲型流感病毒诱导的病毒性肺炎。

1-磷酸鞘氨醇、1-磷酸鞘氨醇受体2在急性主动脉夹层患者外周血中的表达及其与预后的关系

目的 探究1-磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)、1-磷酸鞘氨醇受体2(sphingosine 1-phosphate receptor 2,S1PR2)在急性主动脉夹层(acute aortic dissection,AAD)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的表达及其与患者预后的关系。方法 选取2015年1月至2018年1月青海省心脑血管病专科医院诊治的85例AAD患者为AAD组,并选取同期本院85名体检健康者为对照组。采用实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测所有受试者PBMC中S1P、S1PR2、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达。Pearson法分析AAD患者PBMC中S1P、S1PR2表达与MMP-9的相关性。比较两组不同预后AAD患者临床资料及PBMC中S1P、S1PR2、MMP-9表达。Logistic回归分析对AAD患者预后的影响因素进行分析。采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)评价PBMC中S1P、S1PR2、MMP-9表达对AAD患者预后的预测价值。结果 AAD组患者PBMC中S1P表达明显低于对照组,S1PR2、MMP-9表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。AAD患者PBMC中S1P表达与MMP-9呈负相关(P<0.05),S1PR2表达与MMP-9呈正相关(P<0.05)。死亡组AAD患者冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)比例、S1PR2表达、MMP-9表达均显著高于存活组,S1P表达明显低于存活组,差异具有统计学意义(P<0.05)。S1PR2、MMP-9为AAD预后的危险因素(P<0.05),S1P为AAD预后的保护因素(P<0.05)。PBMC S1P、S1PR2表达预测AAD不良预后的曲线下面积(AUC)分别为0.866、0.875,截断值分别为0.54、1.97,此时对应灵敏度分别为80.0%、76.5%,特异度分别为81.2%、88.2%;两者联合预测AAD不良预后的曲线下面积为0.927,其灵敏度、特异度分别为90.6%、83.5%。结论 AAD患者PBMC中S1P表达下调,S1PR2表达上调,两者可能与MMP-9相互作用,从而共同影响AAD发展,检测S1P、S1PR2表达有助于判断AAD患者的预后情况。

鞘氨醇-1-磷酸受体4在口腔鳞状细胞癌中的表达及生物学功能

目的 :探讨鞘氨醇-1-磷酸受体4(sphingosine-1-phosphate receptor 4,S1PR4)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达及生物学功能。方法 :通过实时荧光定量PCR (RT-qPCR)、免疫印迹实验(Western blot)和免疫组织化学染色,分析OSCC组织样本及细胞系(WSU-HN4、WSU-HN6、CAL27、WSU-HN30)中S1PR4的表达。通过S1PR4拮抗剂(CYM50358)抑制S1PR4活性,利用CCK-8以及克隆形成实验检测CYM50358对OSCC细胞增殖的影响。通过流式细胞术分析CYM500358对OSCC细胞凋亡的影响。采用SPSS 23.0软件包对数据进行统计学分析。结果:OSCC中的S1PR4转录及表达显著上调,CYM50358处理组OSCC细胞增殖活性显著低于空白对照组(P<0.05),CYM50358处理组OSCC细胞克隆形成能力显著低于空白对照组(P<0.05),CYM50358处理组OSCC细胞凋亡比例显著高于空白对照组(P<0.05)。结论:S1PR4在OSCC中表达上调,S1PR4拮抗剂可抑制OSCC细胞生长并促进细胞凋亡,或为OSCC的治疗提供新的潜在靶点。

1-磷酸鞘氨醇受体3对脂多糖处理大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的探讨1-磷酸鞘氨醇受体3(S1PR3)对脂多糖(LPS)处理大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法将培养好的大鼠肾小管细胞(NRK-52E)分为对照组、LPS组、S1PR3激动剂+LPS组。对照组不做处理;LPS组予LPS(20μg/ml)刺激12h后做离心收集待检;S1PR3激动剂+LPS组先用S1PR3激动剂KRX-725预处理2 h后再予LPS(20μg/ml)刺激12 h后做离心收集待检。流式细胞术检测各组细胞凋亡率、钙离子表达及caspase-3表达的差异,ELISA试剂盒检测Calpain 1、Calpain 2的表达差异,Western Blot检测各组细胞中S1PR3的表达差异。结果LPS处理后脓毒症NRK-52E细胞模型成功建立,相比于对照组,LPS组和S1PR3激动剂+LPS组的细胞凋亡率、S1PR3表达、钙离子浓度、Calpain 1与Calpain2的表达、caspase-3表达均显著增加(均P<0.05);与LPS组相比,S1PR3激动剂+LPS组的细胞凋亡率、钙离子浓度、Calpain 1与Calpain2的表达、caspase-3表达均显著增加(均P<0.05),S1PR3表达显著增加(P<0.05)。结论S1PR3的激活能够增加肾小管上皮细胞内的钙离子浓度,从而激活caspase-3细胞凋亡信号通路,导致脓毒症肾小管上皮细胞凋亡增加。

血清1-磷酸鞘氨醇联合透明质酸检测对结直肠癌的诊断及预后价值

目的:观察分析结直肠癌(CRC)患者血清1-磷酸鞘氨醇(S1P)和透明质酸(HA)的水平变化及相关性,探讨其对结直肠癌诊断和预后评估的临床价值。方法:收集47例结直肠癌患者(结直肠癌组)、30例肠道良性疾病患者(良性疾病组)和38名健康的体检者(健康对照组)的临床资料,并检测所有受试者的血清S1P和HA水平。利用Spearman相关性分析评估两者相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估S1P、HA、癌胚抗原(CEA)和糖类抗原19-9(CA19-9)单独和联合诊断CRC的效能。结果:血清S1P水平在健康对照组、良性疾病组及结直肠癌组中逐次升高(P<0.05)。结直肠癌组血清HA水平高于健康对照组(P<0.05),然而良性疾病组的血清HA水平与结直肠癌组和健康对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。根据Spearman相关性分析结果,结直肠癌组血清S1P水平和HA水平之间存在正相关关系(r=0.406,P<0.05)。ROC曲线结果显示,S1P、HA、CEA、CA19-9单独和联合诊断CRC的曲线下面积分别为0.871、0.642、0.694、0.593及0.916。术后CRC患者血清HA水平显著降低(P<0.001),但术后血清S1P水平与术前差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血清S1P与HA结合检测在结直肠癌的辅助诊断及预后评估中具有一定的临床价值。

不同来源的人血清白蛋白对1-磷酸鞘氨醇的结合运载作用研究

目的研究不同来源的人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)对1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)的结合运载作用。方法以人血浆来源HSA(plasma derived HSA,pHSA)和基因重组HSA(recombinant HSA,rHSA)样本为研究对象,首先利用LC-MS/MS技术,比较分析上述样本中S1P含量的差异;其次,在生理浓度条件下,向HSA样本中直接添加S1P进行负载处理,比较不同来源的HSA对S1P结合作用;在无血清培养条件下,将不同来源HSA样本与HUVEC细胞进行共培养,分析不同处理组的细胞培养上清中S1P含量的变化,比较不同来源的HSA对细胞中S1P的运载作用。利用表面等离子体共振SPR技术分析不同来源HSA与S1P分子的相互作用情况并计算其亲和力大小。利用AutoDock Vina软件和Molprophet平台,对HSA和S1P进行分子对接分析,并预测HSA中S1P的关键结合口袋域。结果S1P含量检测结果显示,所有pHSA样本中均含有一定水平的S1P(3.31±0.03~30.35±0.07)μg/L,且不同厂家生产的pHSA样本中的S1P含量差异显著(P<0.001);然而所有rHSA样本中均未检测出S1P。负载处理结果显示,不同来源HSA对S1P的结合作用存在显著差异(P<0.001),且rHSA对S1P平均负载量约为pHSA的2倍(ΔC_(rHSA)=801.75±142.45μg/L vsΔC_(pHSA)=461.94±85.73μg/L;P<0.001,t=5.006)。共培养处理结果显示,所有HSA样本处理组与HUVEC细胞共培养处理6h后上清中的S1P浓度均明显升高,而空白对照组上清中S1P浓度无变化;处理6 h、12 h和24 h后各处理组间上清中S1P浓度均存在显著差异(P<0.001)。SPR分析结果显示,与rHSA相比,pHSA与S1P之间的亲和力更高(KD_(pHSA-S1P):2.38E-06,KD_(rHSA-S1P):3.72E-06)。分子对接分析和结合口袋预测发现,HSA与S1P的关键结合口袋可能位于HSA分子的IB亚结构域。结论不同来源的HSA对S1P均具有一定的结合运载作用,但这种作用差异具有统计学意义,与HSA分子的IB亚结构域存在关联。

血清1-磷酸鞘氨醇水平对老年急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块形成有一定预测价值

目的:探讨血清1-磷酸鞘氨醇(S1P)水平对老年急性脑梗死(ACI)患者颈动脉粥样硬化(CAS)斑块形成的预测价值。方法:采用横断面法选取入院24 h内接受颈部血管超声检查的老年ACI患者223例,根据有无CAS斑块分为内膜增厚组(72例)和斑块组(151例),另选取同期健康体检者70例作为对照组。检测3组受试者血清S1P水平,采用单因素和多因素Logistic回归分析S1P与老年ACI患者CAS斑块形成的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析S1P对颈动脉不稳定斑块的预测价值。结果:单因素分析显示,患者年龄、胆固醇(TC),甘油三酯(TG)、血清S1P水平与CAS斑块的形成有关(P均<0.05)。斑块组S1P水平显著高于内膜增厚组[(712.63±132.34)ng/mL vs.(656.86±130.58)ng/mL,P<0.05]。多因素Logistic回归显示,S1P是影响CAS斑块形成的独立危险因素(OR>1,P<0.05)。ROC曲线显示,当S1P截断值为685 ng/mL时,曲线下面积为0.97(95%CI:0.970~0.980,P=0.001),敏感度为95.8%,特异性为89.4%。结论:血清S1P水平是老年ACI患者CAS斑块形成的独立危险因素。

1-磷酸鞘氨醇2受体缺失对全身过敏反应小鼠血管通透性的影响

[目的]探讨1-磷酸鞘氨醇(S1P)2受体对全身过敏反应小鼠血管通透性的调节作用及其机制.[方法]选取S1P2-/-鼠、eNOS-/-鼠及S1P2-/-/eNOS-/-鼠,建立血小板活化因子(PAF)诱导的全身过敏反应小鼠模型.利用伊文思蓝色素漏出法测定血管通透性,采用温氏法测定红细胞压积,并观察肺组织病理学改变及小鼠死亡率.[结果]与野生鼠比较,S1P2-/-鼠肺血管通透性、红细胞压积及死亡率均显著增高(P<0.01),eNOS基因敲除的S1P2-/-鼠的红细胞压积及死亡率均明显降低(P<0.01).[结论]S1P2受体缺失可增加全身过敏反应小鼠的血管通透性,此效应通过eNOS途径实现.

老年男性初发2型糖尿病患者鞘氨醇-1-磷酸与骨代谢的相关性

目的 探讨鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate, S1P)与骨转换标志物、骨密度和骨折发生风险的相关性。方法 纳入59例老年男性初发2型糖病患者作为2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)组,49例非糖尿病居民作为非糖尿病(non diabetes mellitus, NDM)组,收集临床资料,采集静脉血,检查骨密度,计算FRAX评分,比较两组一般资料、糖脂代谢和骨代谢生化指标、骨密度、骨折发生风险及S1P水平的差异,分析S1P与骨转换标志物、骨折发生风险和糖代谢指标的相关性。结果 与NDM组比较,T2DM组空腹血糖(fasting plasma glucose, FPG)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin Alc, HbAlc)、游离脂肪酸(free fatty acids, FFA)显著升高(P<0.01),总胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglycerides, TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol, HDL-C)差异无统计学意义(P≥0.05);T2DM组甲状旁腺激素(parathyroid hormone, PTH)显著降低(P<0.01),钙(calcium, Ca)、磷(phosphorus, P)差异无统计学意义(P≥0.05);T2DM组骨钙素(osteocalcin, OC)、骨型碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase, BALP)、β-Ⅰ型胶原C端肽(β cross-linked c-telopeptide, β-CTX)显著降低(P<0.01),Ⅰ型胶原氨基端延长肽(procollagen type 1 n-terminal propetide, PlNP)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(tartrate-resistant acid phosphatase-5b, TRACP-5b)和不同部位骨密度差异无统计学意义(P≥0.05);T2DM组10年内主要骨质疏松性骨折风险FRAX评分(FRAX 10-year major osteoporotic fracture risk score, FRAXM)和10年内髋部骨折风险FRAX评分(FRAX 10-year hip fracture risk score, FRAXH)显著升高(P<0.01);T2DM组血清S1P显著高于NDM组(P<0.01)。NDM组S1P与TRACP-5b呈正相关(P<0.05);T2DM组S1P与5种传统骨代谢标志物均无相关性(P≥0.05)。两组血清S1P与骨密度、FRAXM和FRAXH均无相关性(P≥0.05)。两组血清S1P与FPG和HbAlc均无相关性(P≥0.05)。结论 老年男性T2DM组血清S1P水平升高,S1P与传统骨转换标志物、骨密度、FRAXM和FRAXH无相关性。NDM组血清S1P与TRACP-5b呈正相关。

FTY720诱导1型1-磷酸鞘氨醇受体内化与其保守基序的关系研究

目的:研究FTY720诱导1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1P1)内化与后者保守基序之间的关系。方法:以HA-S1P1(WT)-Myc-EGFP-N1融合表达载体为模板,应用重叠PCR的方法,将S1P1保守基序ERY突变为ENY,构建HA-S1P1(R142N)-Myc-EGFP-N1融合表达载体。测序鉴定后,经Polyfect转染入HEK293细胞。G418筛选出稳定细胞株。100 nmol/LFTY720处理3、6、12小时后,荧光显微镜下观察S1P1在HEK293细胞上的表达情况。结果:HA-S1P1(R142N)-Myc-EGFP-N1载体被成功构建,S1P1(WT)和S1P1(R142N)蛋白表达在HEK293稳定细胞株的表面,FTY720能诱导S1P1(WT)内化,但不能诱导S1P1(R142N)内化。结论:FTY720诱导S1P1内化与ERY保守基序有关。

1-磷酸鞘氨醇受体2在LPS介导的内皮细胞高通透性中的作用

目的观察1-磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)在脂多糖(LPS)刺激后表达的变化,探讨其在LPS介导的内皮细胞高通透性中的作用。方法用不同浓度和时间的LPS刺激培养的ECV304细胞,采用RT-PCR方法检测S1PR2mRNA的变化,Western blot方法检测S1PR2蛋白的变化,TRITC荧光标记白蛋白漏出法测定单层内皮细胞的通透系数Pa值。结果与对照组相比,S1PR2mRNA和S1PR2蛋白在LPS(500ng/ml)刺激24h后以及在LPS(1000ng/ml)刺激12h显著增加(P<0.01);S1PR2拮抗剂JTE-013能显著降低LPS引起的内皮细胞通透性增高(P<0.05)。结论 S1PR2在LPS引起的内皮细胞通透性增高中起着重要的作用。

1-磷酸鞘氨醇2型受体调控衰老内皮细胞的功能变化

目的:通过上调和沉默1-磷酸鞘氨醇2型受体(S1P2)的表达,探讨其对体外培养的脐静脉内皮细胞的功能影响。方法:采用转染外源S1P2受体质粒上调年轻脐静脉内皮细胞S1P2受体表达;应用RT-PCR和Western印迹检测空白对照组、空载体组和过表达组细胞的S1P2受体表达;同时采用Matrigel胶种植法,观察3组脐静脉内皮细胞的体外管状样结构生成能力;划痕实验分析内皮细胞的损伤愈合能力;迁移实验分析内皮细胞的化学趋化能力。以及通过RNA干扰沉默衰老脐静脉内皮细胞S1P2受体的表达,观察细胞的功能改变。结果:上调年轻脐静脉内皮细胞S1P2受体表达后,过表达组内皮细胞的成管能力、损伤愈合能力和细胞迁移率均明显低于空白对照组和空载体组(P<0.05)。RNA干扰沉默衰老脐静脉内皮细胞S1P2受体后,干扰组内皮细胞的管状样结构生成能力、损伤愈合能力和趋化能力均明显恢复,显著高于衰老内皮细胞组和干扰对照组(P<0.05)。结论:S1P2受体调控体外衰老内皮细胞的趋化、形态发生和损伤愈合反应的功能变化。

1-磷酸鞘氨醇受体2抑制小鼠血管通透性研究

目的研究1-磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)对小鼠血管通透性的作用。方法将野生鼠和S1pr2-/-鼠(S1PR2基因缺乏)气管内滴注脂多糖(LPS)制备急性肺损伤模型(LPS组),以气管内滴注生理盐水为对照。通过检测肺伊文思蓝色素漏出,异硫氰酸荧光素(FITC)标记的葡聚糖肺血管渗漏,以及肺组织湿质量/干质量比值,观察S1PR2对血管通透性的影响,并通过Miles分析,观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)对皮肤血管内皮通透性亢进反应。结果与生理盐水组比较,LPS注射增加野生鼠和S1pr2-/-鼠伊文思蓝漏出(P均<0.01)、FITC标记葡聚糖肺血管外漏出(P均<0.01)和引起肺水肿。LPS组中S1pr2-/-鼠与野生鼠比较,伊文思蓝漏出量、FITC标记葡聚糖肺血管外漏出更多(P均<0.01),肺水肿更重(P<0.001);LPS组野生型和S1pr2-/-鼠均增加VEGF剂量依赖性的伊文思蓝漏出,在50、100ng的VEGF诱导下,与野生鼠比较,S1pr2-/-鼠伊文思蓝漏出量均较高(P均<0.01)。结论 S1PR2参与内皮细胞屏障保护,抑制血管通透性。

1-磷酸鞘氨醇通过提高心脏微血管密度缓解压力负荷诱导的小鼠心力衰竭

目的:探究1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate, S1P)通过调节心脏微血管密度对压力负荷诱导的小鼠心力衰竭的作用及相关机制。方法:将8周龄的雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:假手术(sham)组、sham+2-乙酰基-5-四羟基丁基咪唑(2-acetyl-5-tetrahydroxybutyl imidazole, THI;S1P裂解酶抑制剂)组、主动脉弓缩窄术(transverse aortic constriction, TAC)组和TAC+THI组。TAC手术后1周给予THI灌胃处理,实验终点检测各组小鼠血浆和心脏匀浆组织中S1P水平;心脏超声和Millar导管检测心功能;HE染色检测各组小鼠心脏肥大程度,Masson染色观察各组小鼠心脏间质和管周纤维化程度,CD31和麦胚凝集素免疫荧光染色观察各组小鼠心肌细胞横截面积和心脏微血管密度;RT-qPCR检测心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide, ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide, BNP)、I型胶原蛋白(collagen type I)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen type Ⅲ)、CD31、血管性血友病因子(von Willebrand factor, vWF)和血管生成素1(angiopoietin 1, Ang1)的mRNA表达水平;Western blot检测各组小鼠心脏组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、VEGF受体(VEGF receptor, VEGFR)、磷酸化VEGFR、蛋白激酶B(protein kinase B, PKB/Akt)和磷酸化Akt的蛋白水平。结果:TAC小鼠体内S1P水平明显降低,给予THI可显著升高小鼠血浆和心脏匀浆组织中S1P水平。S1P能显著改善心衰小鼠心功能,减轻心肌肥大和纤维化表型,抑制ANP、BNP、collagen type I和collagen type Ⅲ的表达,上调血管内皮标志物CD31、Ang1和vWF的表达,激活VEGF-VEGFR-Akt信号通路,促进心脏微血管生成。结论:S1P通过VEGF-VEGFR-Akt信号通路提高心衰小鼠心脏微血管密度,从而缓解压力负荷诱导的心力衰竭。

鞘氨醇-1-磷酸在肿瘤转移中的调控机制研究进展

鞘氨醇-1-磷酸(S1P)是鞘磷脂代谢产生的一种生物活性脂类,广泛存在于多种组织、血液及淋巴液中。作为一种分泌型的溶血磷脂,S1P在肿瘤发生时异常增高,通过结合其特定受体(S1P受体1~5)参与肿瘤的发生发展。S1P除可通过促进肿瘤细胞侵袭、迁移、上皮-间充质转化外,还可通过调控肿瘤微环境中诸多基质细胞促进肿瘤转移。因此,S1P可作为肿瘤转移的诊断标志物,并具有药物治疗靶点的潜能。未来,设计靶向S1P及其信号通路的方案将成为肿瘤治疗的新思路。

血清簇集蛋白、1-磷酸鞘氨醇水平对脓毒症急性肝损伤患者的预后价值

目的 探讨血清簇集蛋白(Clusterin)、1-磷酸鞘氨醇(S1P)水平对脓毒症急性肝损伤患者预后的评估价值。方法 选择2019年3月—2022年5月徐州医科大学附属连云港医院收治的脓毒症急性肝损伤患者127例,根据患者治疗28 d预后情况分为死亡组35例、存活组92例。计量资料两组间比较采用成组t检验,计数资料两组间比较采用χ^(2)检验,对可能影响患者预后的各因素进行单因素及多因素Logistic回归分析,相关性分析采用Pearson相关性分析,采用受试者工作特征曲线分析血清Clusterin、S1P对患者预后评估价值。结果 两组患者肝损伤程度、急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)、序贯器官衰竭评分(SOFA)、合并急性肾损伤、凝血酶原时间(PT)、国际标准化比值(INR)、Child-Pugh肝功能分级以及C反应蛋白比较差异均有统计学意义(P值均<0.05)。死亡组患者血清Clusterin、S1P水平均显著低于存活组(t值分别11.094、10.390,P值均<0.05)。重度肝损伤患者血清Clusterin、S1P水平显著低于轻、中度肝损伤患者(t值分别为9.825、11.418,P值均<0.05)。多因素回归分析显示,肝损伤程度(OR=1.260,95%CI:1.081~1.468)、APACHEⅡ评分(OR=1.031,95%CI:1.019~1.044)、SOFA评分(OR=1.066,95%CI:1.039~1.094)、Clusterin(OR=0.899,95%CI:0.859~0.940)和S1P(OR=0.824,95%CI:0.749~0.908)为影响脓毒症患者预后的独立危险因素(P值均<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Clusterin、S1P与二者联合对患者预后评估价值的曲线下面积分别为0.864、0.861、0.949。脓毒症急性肝损伤患者血清Clusterin、S1P与ALT、TBil、PT、INR均呈显著负相关关系(P值均<0.05)。结论 与存活组相比,脓毒症急性肝损伤死亡患者血清Clusterin以及S1P显著降低,且Clusterin以及S1P水平与患者肝损伤程度密切相关,二者联合对脓毒症急性肝损伤患者预后具有着较好的预测价值,有望成为脓毒症急性肝损患者预后预测的潜在标志物。

真武汤调节鞘氨醇激酶1-磷酸鞘氨醇信号通路抗阿霉素肾病大鼠肾损伤的作用研究

目的:研究真武汤对阿霉素肾病(Adriamycin Nephropathy,AN)模型大鼠鞘氨醇激酶1(Sphingosine Kinase 1,SphK1)-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)信号分子的影响,探讨真武汤治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿的机制。方法:常规检测各试验组动物血脂、血浆白蛋白、24小时尿蛋白含量;实时聚合酶链反应(Real-time Polymerase Chain Reaction,RTPCR)检测肾组织中SphK1基因表达;免疫印迹法(Western Blot)检测肾组织中SphK1蛋白表达;液相色谱-串联质谱法(Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS)检测SphK1、S1P活性。结果:模型组大鼠血脂水平、24小时尿蛋白含量显著升高,血浆白蛋白水平显著降低(P<0.05),肾脏SphK1酶活性、蛋白表达及S1P含量显著升高(P<0.05);与模型组相比,各给药组血脂水平、24小时尿蛋白含量明显降低,血浆白蛋白水平明显升高(P<0.05),肾脏SphK1酶活性、基因和蛋白表达及S1P含量明显下降(P<0.05),各治疗组之间差异无统计学意义。结论:真武汤可减少AN模型大鼠肾组织的SphK1酶活性、蛋白表达及S1P含量,改善其蛋白尿、血脂及血浆白蛋白水平。其作用可能与抑制SphK1、S1P信号分子的表达有关。