1-磷酸鞘胺醇通过其受体3改善压力超负荷诱导的病理性心肌肥厚

目的研究1-磷酸鞘胺醇(S1P)与其受体3(S1PR3)在压力超负荷诱导的病理性心肌肥厚的作用及其机制。方法将10~12周龄的雄性C57BL/6野生型小鼠和S1PR3基因敲除纯合子(S1PR3-/-)小鼠分为4组:假手术(sham)组、sham+S1P裂解酶抑制剂(THI)组、胸主动脉缩窄术(TAC)组和TAC+THI组。各组小鼠检测血浆和心脏组织中S1P的水平;测量心脏重量和胫骨长度;心脏超声检测心功能;苏木素-伊红(HE)染色与麦胚凝集素(WGA)染色观察心肌细胞横截面积大小;二氢乙啶(DHE)染色检测心脏组织活性氧(ROS)水平;蛋白质印迹法(Western blot)和反转录聚合酶链反应(qPCR)检测心脏组织中心肌肥厚标志物和磷酸化STAT3的表达变化情况。AC16人心肌细胞处理分为4组:对照组、AngⅡ/H_(2)O_(2)组、AngⅡ/H_(2)O_(2)+S1P组和AngⅡ/H_(2)O_(2)+S1P+S3I-201(STAT3抑制剂)组。鬼笔环肽(Phalloidin)染色观察各组心肌细胞横截面积大小;Western blot检测各组心肌肥厚标志物的表达变化;DHE染色检测各组ROS水平。结果动物实验结果显示,THI显著提高小鼠血浆和心脏中S1P水平,差异有统计学意义(均为P<0.001)。与野生型小鼠相比,THI并不能改善S1PR3-/-小鼠的心功能和病理性心肌肥厚,以及减少心脏组织中的ROS生成。此外,在S1PR3-/-小鼠中,THI不能逆转压力超负荷诱导的心脏组织中的磷酸化STAT3水平的降低。细胞实验结果表明,S1P能显著抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大和心肌肥厚标志物的表达,且能显著减少H_(2)O_(2)诱导的ROS生成,差异有统计学意义(均为P<0.001)。但均可被S3I-201逆转,差异有统计学意义。结论S1P通过S1PR3改善压力超负荷诱导的病理性心肌肥厚并减少心脏组织中ROS的生成,可能是通过激活JAK/STAT3信号通路发挥该效应。

1-磷酸鞘胺醇与动脉瘤性蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的相关性研究

目的:探讨1-磷酸鞘胺醇(S1P)与颅内动脉瘤破裂所致的自发性蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛的相关性。方法:纳入部分动脉瘤破裂所致自发性SAH患者37例,分别在发病后第3、5、7、10、14天行TCD检测跟踪血管痉挛程度,其中27例纳入痉挛组,10例纳入无痉挛组。另选取我院收治未破裂颅内动脉瘤介入栓塞治愈术后半年复诊患者中,未见血管痉挛及血管狭窄的患者12例为对照组。采用高效液相色谱法测定3组患者血清及脑脊液的S1P水平。结果:与无痉挛组和对照组相比,痉挛组患者发病后3 d患者血清和脑脊液中S1P浓度升高,5 d时显著升高,至第7天达到高峰,至第14天时降至无明显差异。发病后第7天,痉挛组患者大脑中动脉流速增加与血清和脑脊液中S1P的浓度呈正相关(P<0.05)。结论:SAH后脑血管痉挛患者大脑中动脉流速明显增加,同时其血清及脑脊液中S1P显著升高。

体外缺血缺氧条件下人主动脉平滑肌细胞中1-磷酸鞘胺醇的表达变化

目的:探讨缺血缺氧条件下1-磷酸鞘胺醇(S1P)在人主动脉血管平滑肌细胞(T/G HA-VSMC)收缩中的作用机制。方法:将传代培养的T/G HA-VSMC分为正常对照组和缺血缺氧组。缺血缺氧组采用低氧条件培养T/G HA-VSMC细胞来模拟蛛网膜下腔出血(SAH)所致的缺血缺氧环境;采用QT-PCR检测人鞘胺醇激酶1(SphK1)基因的m RNA表达;Western-blot法检测人SphK1基因的蛋白表达;ELISA法测定T/G HAVSMC细胞上清液和细胞内S1P浓度;慢病毒载体shRNA介导的T/G HA-VSMC细胞内SphK1基因表达沉默;采用钙离子荧光探针Fluo-3/AM检测T/G HA-VSMC细胞内Ca2+浓度。结果:与正常对照组相比,缺血缺氧条件下人T/G HA-VSMC细胞内SphK1基因表达上调,且缺血缺氧组细胞培养液和细胞裂解液中S1P浓度均显著升高。缺血缺氧可诱导T/G HA-VSMC细胞内Ca2+离子浓度增加,并且外源性S1P显著上调T/G HA-VSMC细胞内Ca2+浓度;与正常对照组相比,shRNA干扰技术沉默SphK1基因表达和SphK1特异性抑制剂二甲基鞘胺醇(DMS)均显著抑制低氧诱导的T/G HA-VSMC细胞内S1P和Ca2+浓度上调。结论:缺血缺氧可导致T/G HA-VSMC细胞内SphK1基因表达上调,进而促进S1P的合成代谢,而高浓度的S1P通过某种机制导致细胞内Ca2+浓度水平增加导致血管收缩。

1-磷酸鞘胺醇受体3参与巨噬细胞迁移及脓毒症诱导的心肌损伤

目的探讨巨噬细胞中1-磷酸鞘胺醇受体(sphingosine 1-phosphate receptor,S1PR)的表达及其作用,观察干预S1PR3(S1P3)对脂多糖诱导的心肌损伤的影响。方法传代培养小鼠Ana-1巨噬细胞,给予脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,100 ng/ml)刺激或S1P3特异性抑制剂CAY-10444(10μmol/L)干预,细胞随机分为对照组、LPS组、CAY-10444组、CAY-10444预处理2h+LPS组,Transwell小室观测巨噬细胞迁移,蛋白免疫印迹检测巨噬细胞S1PR的表达,并检测p-Akt/Akt蛋白水平。在体实验,6~8周龄雄性C57/B6小鼠,随机分为对照组、LPS组、CAY-10444组、CAY-10444干预+LPS组,每组12只,LPS(10 mg/kg)腹腔注射,或CAY-10444 1 mg/kg于LPS诱导后30 min腹腔注射干预,24 h后取心脏组织HE染色观察病理改变,免疫组化染色观察巨噬细胞浸润程度以及炎症因子的表达情况,实时荧光定量PCR检测心肌损伤标记分子BNP、巨噬细胞表面分子F4/80、炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平。结果与对照组比较,LPS诱导巨噬细胞大量迁移S1P3蛋白表达增加(P<0.01),p-Akt Ser473/Akt表达上调(P<0.01);与LPS组相比,S1P3抑制剂CAY-10444干预后再给予LPS刺激,巨噬细胞迁移被抑制(P<0.01),p-Akt Ser473/Akt表达也降低(P<0.01);在体实验,LPS诱导小鼠后BNP mRNA水平明显上调(P<0.01),同时F4/80以及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平上调(P<0.01),HE染色可见心肌损伤及炎细胞浸润,免疫组化染色法显示F4/80及炎症因子的大量阳性表达(P<0.01);使用S1P3抑制剂后,与LPS组比较,心肌损伤减轻免疫组化中巨噬细胞减少(P<0.01),炎症因子表达降低(P<0.01),BNP mRNA水平降低(P<0.01),F4/80以及TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平也明显降低(P<0.01)。结论抑制巨噬细胞S1P3表达可抑制巨噬细胞的迁移并提示p-Akt/Akt与了这一过程,此外,S1P3抑制剂的干预可有效减轻LPS诱导的心肌损伤。

1-磷酸鞘胺醇与胰岛素抵抗

1-磷酸鞘胺醇（S1P）是神经酰胺代谢产生的一种生物活性脂质.它不仅是细胞外介质,也是细胞内第二信使,参与细胞的增殖、分化等生理过程.S1P与不同的受体结合产生的作用各异.研究表明其可以通过不同的途径参与胰岛素信号的调节,对胰岛素信号产生不同的影响,与肝脏、骨骼肌、胰岛等组织胰岛素抵抗的发生密切相关.

SphK/S1P信号通路与肾脏炎症研究进展

肾小球肾炎是慢性肾脏病发展到肾衰竭所经历的慢性的、逐步进展性的肾脏局部炎性反应,包括肾小球系膜细胞增殖、系膜基质合成增多、炎性因子合成增加等。抑制或减轻肾脏炎性反应可以延缓慢性肾炎发展到慢性肾衰竭的病程。近年来发现Sph K/S1P信号通路在肾脏炎性反应的过程中发挥了一定的作用,Sph K/S1P信号通路可能是临床干预以及治疗肾小球肾炎的另一靶点。

选择性鞘胺醇－1－磷酸受体1激动剂研究进展

鞘胺醇-1-磷酸(S1P)是调节细胞内外多种生物学功能的重要信号分子。S1P可通过结合5种G蛋白偶联受体亚型(S1PR1-5)介导多重下游信号通路产生相关的细胞生理功能,其中激动S1PR1可以达到调节免疫的作用。新型S1PR1激动剂芬戈莫德(Fingolimod,FTY-720)已完成临床研究成为自身免疫性疾病——多发性硬化症的治疗药物。选择性S1PR1激动剂的研究已成为发现免疫性疾病治疗药物的热点。本文总结了近年来该领域的研究进展,着重介绍S1PR1激动剂的结构类型和构效关系研究,并探讨了此类激动剂的发展方向。

寄生虫病中神经酰胺信号通路的研究进展

神经酰胺和鞘胺醇-1-磷酸是具有生物活性的鞘磷脂,它们不仅是构成细胞膜的重要组分,也可以作为第二信使在细胞信号转导中发挥重要的作用。神经酰胺具有诱导细胞凋亡、自噬及促进炎症反应等作用,而鞘胺醇-1-磷酸具有促进细胞生长、增殖、分化及诱导免疫细胞迁移等作用。由神经酰胺、鞘胺醇-1-磷酸及关键酶构成的神经酰胺信号通路参与癌症、急慢性炎症及寄生虫病等多种疾病病理生理过程的调节。本文对神经酰胺信号通路及其在寄生虫病中的作用的研究进展进行综述。