FOLFOX4与1-D-甲基色氨酸联合治疗对荷胃癌小鼠调节性T细胞的影响

目的:研究FOLFOX4与1-D-甲基色氨酸(1-D-methyl tryptophan,1-D-MT)联合应用是否有利于改善荷胃癌小鼠的免疫耐受状态。方法:用脂质体转染法,将pcDNA3.1-IDO质粒和pcDNA3.1(+)空质粒稳定转染MFC细胞,并设未转染组;用RT-PCR和Western blot法检测未转染组、空质粒转染组和pcDNA3.1-IDO转染组IDO mRNA和蛋白的表达;然后建立荷胃癌小鼠皮下移植瘤模型,并设未转染组、空质粒转染组,IDO+生理盐水(NS)组、FOLFOX4组、1-D-MT组和FOLFOX4+1-D-MT联合处理组,采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏中Treg细胞数量变化;RT-PCR检测FOXP3 mRNA表达量变化。结果:IDO mRNA与蛋白表达在稳定转染pcDNA3.1-IDO质粒组细胞较未转染组、空质粒转染组表达量明显增加(P<0.05)。IDO+NS组小鼠脾脏Treg细胞比例及FOXP3 mRNA含量较未转染组、空质粒组均明显增多(P<0.05)。FOLFOX4+1-D-MT组和1-D-MT组与FOLFOX4组相比,Treg细胞比例及FOXP3 mRNA含量均明显降低(P<0.05),且联合治疗组较1-D-MT组降低更明显(P<0.01)。结论:通过抑制Treg的增殖及降低FOXP3 mRNA表达,FOLFOX4与1-D-MT联合应用可降低机体免疫逃逸能力。

FOLFOX4与1-D-甲基色氨酸联合治疗对荷胃癌615小鼠细胞毒性淋巴细胞的影响

目的研究FOLFOX4化疗方案与1-D-甲基色氨酸（1-methyl—D—tryptophan，1-D—MT）联合应用对荷胃癌小鼠的免疫耐受的影响。方法用脂质体转染法，将IDO—peDNA3．1质粒和pcDNA3．1（＋）质粒稳定转染MFC细胞，设定空白对照组；用RT—PCR和Westernblot法检测吲哚胺2，3-双加氧酶（indoleamine-2，3-dioxygenase，IDO）mRNA和蛋白表达；建立荷胃癌615小鼠模型，分别给予生理盐水、FOLFOX4、1．D．MT和FOLFOX4＋1-D—MT治疗。利用抑瘤率检测小鼠成瘤情况，流式细胞术检测各组小鼠脾脏中细胞毒性淋巴细胞（cytotoxicity Tlymphocyte，CTL）数量的变化，RT—PCR检测颗粒酶B（granzymeBGZMB）mRNA表达量的变化。结果（1）与MFC和空质粒生理盐水组相比，IDO生理盐水组肿瘤体积大，生长快，差异有统计学意义（P〈0．05）；与IDO生理盐水组比较，FOLFOX4组、1-D—MT组和联合组肿瘤体积均变小，重量减轻，其抑瘤率分别为83．5％±0．4％、81．8％±0．4％、95．7％±0．8％，差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）给予生理盐水的IDO阴性对照组CTL及GZMBmRNA含量（22．1％±4．2％、0．370±0．019）较MFC组（46．9％±4．1％、0．450±0．017）、空质粒组（47．6％±4．8％、0．450±0．018）明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）；联合组（64．5％±2．5％、0．660±0．019）和1-D—MT组（55．3％±2．5％、0．560±0．015）与FOLFOX4组（34．2％±3．2％、0．330±0．012）相比，CTL及GZMBmRNA含量明显升高（P〈0．05），且联合治疗组较1—D—MT组升高更明显，差异均具有统计学意义（均P〈0．05）。结论FOLFOX4与1-D—MT联合应用提高CTL细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，降低肿瘤的免疫逃逸能力。

肺积方对IDO诱导Lewis肺癌小鼠模型免疫逃逸的影响

目的研究肺积方对吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)诱导Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LL/2)小鼠模型免疫逃逸的影响。方法采用C57BL/6小鼠建立LL/2-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)-IDO模型48只,将小鼠按随机数字表分为模型组(灌胃生理盐水)、中药组[灌胃肺积方水煎液100mg/(g·d)]、1-甲基-D-色氨酸(1-methyl-D-tryptophan,1-MT)治疗组[灌胃1-MT混合液100mg/(kg·d)]和紫杉醇组[腹腔注射紫杉醇15mg/(kg·d)],每组12只。造模后第2日开始干预,其中24只观察小鼠生存期,余24只在造模并干预28日后采用流式细胞术检测脾脏CD4^+CD25^+FoxP3^+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)比例。结果与模型组比较,中药组、1-MT组生存期延长(P<0.01),中药组、1-MT组、紫杉醇组Treg比例降低(P<0.01)。与紫杉醇组比较,中药组、1-MT组生存期延长(P<0.01),1-MT组Treg比例降低(P<0.05)。结论肺积方能抑制肺癌细胞的增殖,抑制免疫逃逸,改善免疫功能,延长荷瘤小鼠生存期。