MS1与MS1-HS两种选择方法在玉米群体ZZ4中的改良效果比较 Ⅰ .主要农艺性状的变化

对中综 4号 (ZZ4 )完成了 4轮改良S1 半同胞联合家系选择 (简称MS1 HS)和 4轮改良S1后代选择 (简称MS1 )。结果表明 ,以籽粒产量为主要目标的MS1 HS选择 ,每轮群体自身产量获得 3 .6 %的遗传增益 ,群体S1后代籽粒产量可获得 6 .6 %的增益 ;MS1选择每轮群体则可获得 4 .0 %的遗传增益 ,群体S1后代籽粒产量可获得 7.3 %的增益。单穗籽粒产量的提高 ,从穗部性状看 ,主要来自穗长和每行粒数的提高 ,其次是穗粗和穗行数的改良。两种方法对出籽率虽都有显著改良 ,但每轮遗传增益只有 0 .5 %。两种方法对千粒重均未明显改良。在产量性状得到改良的同时 ,抗倒伏性、抗青枯性、植株保绿度等性状也获得了极显著的相关改良 ,每轮倒伏率下降 1 5 .5 %(MS1 HS)和 1 4 %(MS1 ) ,青枯病株率下降8 3 %(MS1 HS)和 1 0 .4 %(MS1 ) ,保绿度均下降 5 %。在改良产量的同时 ,两种方法均伴随着株高。

MS1与MS1-HS两种选择方法的比较研究 Ⅱ.遗传方差、配合力及杂种优势

对ZZ4完成了 4轮MS1 HS和MS1选择。结果表明 ,经 4轮选择的群体 ,两种方法均有效地保留了各主要性状的遗传方差。MS1 HS选择的群体遗传方差下降速率更慢 ,C4群体的单株籽粒产量的遗传方差仅减少 3 7%。穗长、穗粗、粒行数、行粒数、出籽率、百粒重的遗传方差的变化与单株籽粒产量一致 ,MS1C4的遗传方差减少了 8%～ 15 % ,MS1 HSC4的遗传方差仅减少了 4 %～ 15 %。株高、穗位高、抽丝期、植株保绿度、抗倒性等相关选择性状的遗传方差的变化与产量性状基本一致。MS1 HS法对改良玉米群体籽粒产量与测验种间的特殊配合力十分有效 ,呈逐轮上升的趋势 ;改良群体与测验种综系 14 0间的杂交后代产量平均每轮提高 6 % ,杂种优势平均每轮提高 6 9%。两种方法在改良群体产量性状一般配合力方面 ,均得到了良好的效果。同时 ,穗部性状及株高、穗位、抽丝期、散粉期、抗性等田间农艺性状的一般配合力也获得了同步改良。通过ZZ4改良群体与 6个测验种间杂交组合产量及杂种优势的比较研究 ,得出ZZ4与黄早四类种质为杂种优势模式对。

胃癌患者组织SOCS-1和nm23-H1基因差异表达与临床参数的相关因素研究

目的 探讨细胞因子信号传导抑制因子1(suppressor of cytokine signaling 1, SOCS-1)、转移抑制因子23-H1(non-metastasis 23-H1, nm23-H1)表达与胃癌临床病理特征的关系。方法 采用随机数字表法在2020年6月-2023年6月我院诊治胃癌患者中选取100例,应用蛋白免疫印迹技术(western blotting, WB)检测SOCS-1、nm23-H1蛋白表达情况,并分析其与临床病理特征间的关系。结果 首先,SOCS-1和nm23-H1在人体胃癌组织的蛋白水平明显低于其在癌旁组织中的表达水平(P<0.05);其次,胃癌组织中SOCS-1和nm23-H1表达水平与其T分期、淋巴转移相关(P<0.05);同时,其中T3-T4期的水平低于T1-T2期,伴有淋巴转移患者的表达水平明显低于无淋巴转移患者(P<0.05);最后,SOCS-1和nm23-H1表达水平与年龄、性别、肿瘤大小及Lauren分型等临床参数无明显相关差异(P>0.05)。结论 SOCS-1和nm23-H1的表达水平与胃癌患者的T分期及淋巴结转移有一定相关性,其表达水平越低提示T分期越差,同时伴淋巴结转移。因此,nm23-H1和SOCS-1对胃癌的诊断与预后评估具有一定的参考价值。

砂仁挥发性成分及其对GES-1细胞保护作用的比较分析

目的:分析阳春砂、绿壳砂、海南砂及其伪品海南假砂的挥发性成分,比较四种砂仁挥发油对胃黏膜保护的活性。方法:采用顶空固相微萃取技术与气相色谱-质谱联用技术(HS-SPME-GC-MS),结合NIST08和NIST08s谱库对比定性色谱结果,分析4种砂仁的挥发性成分;采用面积归一化法,计算各挥发性成分的相对百分比含量,并进行主成分及热图分析;建立人胃黏膜上皮细胞(GES-1细胞)损伤模型,采用CCK-8法,对4种砂仁挥发油进行胃黏膜保护活性评价。结果:从阳春砂、绿壳砂、海南砂及其海南假砂中共检出114种化学成分,分别鉴定出57、58、58、58种成分,各占总挥发性成分相对百分比含量的93.23%、88.79%、90.87%、91.40%,其中总单萜烃类化合物各占总挥发性成分相对百分比含量的40.48%、37.77%、37.09%、33.39%,总倍半萜烃类化合物各占总挥发性成分相对百分比含量的52.53%、49.88%、31.22%、35.45%;阳春砂、绿壳砂、海南砂挥发油对乙醇致GES-1细胞损伤具有保护作用(P<0.05),海南假砂无明显活性。结论:阳春砂与绿壳砂的挥发性成分及含量差异较小,而海南砂、海南假砂与阳春砂、绿壳砂的挥发性成分及含量差异较大;阳春砂、绿壳砂、海南砂挥发油具有一定的胃黏膜保护活性。

血清hs-CRP、HMGB1、sTREM-1与革兰阴性菌肺部感染患者亚胺培南治疗效果的关系

目的 分析研究血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与可溶性人髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)与革兰阴性菌肺部感染患者亚胺培南治疗效果的关系。方法 选取2021年1月至2023年4月安徽省和县人民医院收治的100例革兰阴性菌肺部感染患者作为研究对象,对患者使用亚胺培南治疗7 d,根据治疗效果将患者分为有效组(n=71)与无效组(n=29)。比较两组治疗前后的hs-CRP、HMGB1与sTREM-1水平;采用多因素Logistic回归分析革兰阴性菌肺部感染患者亚胺培南治疗效果的影响因素,并绘制ROC曲线分析治疗前血清hs-CRP、HMGB1、sTREM-1水平对革兰阴性菌肺部感染患者亚胺培南治疗效果的预测价值。结果 有效组治疗前的血清hs-CRP、HMGB1、sTREM-1水平均低于无效组,差异均具有统计学意义(t=8.125、6.111、5.863,均P<0.05);有效组治疗后的血清hs-CRP、HMGB1、s TREM-1水平均低于无效组,差异均具有统计学意义(t=9.469、11.563、9.607,均P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,治疗前hs-CRP水平升高(OR=1.941)、HMGB1水平升高(OR=2.100)及sTREM-1水平升高(OR=1.972)均是革兰阴性菌肺部感染患者亚胺培南治疗效果的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,治疗前血清hs-CRP、HMGB1、sTREM-1水平及联合评估革兰阴性菌肺部感染患者亚胺培南治疗效果优于单一检测(P<0.05)。结论 血清hs-CRP、HMGB1、sTREM-1水平与革兰阴性菌肺部感染患者亚胺培南治疗效果密切相关。

血清hs-CRP、sFlt-1水平对妊娠期高血压疾病患者胎儿生长受限的预测价值

目的研究分析血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)水平在妊娠期高血压疾病(hypertensive disorder of pregnancy,HDP)患者胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)中血清水平的变化并评估其对FGR的预测价值。方法选取2021年12月-2023年5月在赣州市妇幼保健院产科收治的137名妊娠期高血压患者作为研究对象,根据超声影像法判读其胎儿是否发生生长受限。分为受限组(46例)和非受限组(91例)。收集患者的一般资料及血清hs-CRP、sFlt-1水平等因素进行单因素分析。采用多因素Logistic回归分析HDP患者胎儿发生生长受限的影响因素,并绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估血清血清hs-CRP、sFlt-1水平在HDP患者胎儿发生生长受限的预测价值。结果单因素结果提示受限组胎儿的血清叶酸(FA)、维生素B_(12)(VitB_(12))和胎盘生长因子(PIGF)水平低于非受限组,而血清hs-CRP、sFlt-1水平均高于非受限组,差异具统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果提示血清hs-CRP、sFlt-1和PIGF水平均是影响HDP患者胎儿发生生长受限的独立危险因素。模型H-L检验χ^(2)=7.014,P=0.535,拟合度较好;ROC曲线下面积(AUC)为0.932,95%Cl为0.889~0.975(P<0.05),灵敏度为93.50%,特异度为89.00%。结论血清hs-CRP、sFlt-1水平在HDP患者FGR中呈高表达状态,故其对FGR的发生具有良好的预测作用。

nm23-H1、p53、PCNA表达与大肠癌浸润转移的关系

目的：研究大肠癌中ｎｍ２３－Ｈ１、ｐ５３、ＰＣＮＡ的表达与浸润转移的关系。方法：应用ＬＳＡＢ免疫组织化学方法检测７４例大肠癌中ｎｍ２３－Ｈ１、ｐ５３、ＰＣＮＡ和Ⅳ型原的表达。结果：大肠癌中ｎｍ２３－Ｈ１、ｐ５３和ＰＣＮＡ的阳性率分别为７１．６％、５２．７％和８１．１％。大肠癌中ｎｍ２３－Ｈ１低表达与淋巴结转移有关（Ｐ＜０．０２５），ｎｍ２３－Ｈ１的表达在Ⅳ型胶原表达不同的肠癌中无明显差异（Ｐ＞０．０５）；ｐ５３和ＰＣＮＡ过表达与浸润程度和淋巴结转移有关（Ｐ＜０．０５），ｐ５３和ＰＣＮＡ的表达在Ⅳ型胶原表达不同的肠癌中有非常显著的差异（Ｐ＜０．００５）；大肠癌中ｐ５３过表达与ｎｍ２３－Ｈ１低表达有关（Ｐ＜０．０１）。结论：实验结果揭示ｐ５３基因突变对于ｎｍ２３－Ｈ１基因的失活有一定影响，其作用机制有待深入研究。ｎｍ２３－Ｈ１低表达可能仅在大肠癌转移过程中发挥作用，ｐ５３过表达可在大肠癌浸润转移过程及细胞增殖中起重要作用。

Nm23-H1/NDPK-A基因在大肠杆菌中的高效表达及产物纯化的研究

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增人二磷酸核苷激酶Ａ亚基（ＮＤＰＫ－Ａ）基因，即ｎｍ２３－Ｈ１／ＮＤＰＫ－Ｋ基因的编码序列，经序列分析后，定向克隆于表达质粒载体ｐＢＶ２２０，在大肠杆菌ＤＨ５α中高效表达出重组人ＮＤＰＫ－Ａ．表达产物为可溶性的非融合蛋白，占菌体总蛋白４２％．斑点ＥＬＩＳＡ法鉴定表明表达产物与ＮＤＰＫ－Ａ标准抗血清呈阳性反应．以ＤＥＡＥ纤维素弱阴离子交换层析、ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕｅ染料亲和层析结合高效液相排阻色谱技术纯化ｒＮＤＰＫ－Ａ，得纯度为９６．７％的目标蛋白．以反相高效液相色谱法进行酶活性分析，表明纯化的ｒＮＤＰＫ－Ａ能催化ＡＴＰ＋ＵＤＰ＝ＡＤＰ＋ＵＴＰ的反应，比活性为８００Ｕ／ｍｇ蛋白．

利用定点突变技术构建突变nm23-H_1和EGFP融合基因

背景与目的以前的研究已经证明nm23H1基因是肿瘤转移抑制基因,但其抑制肿瘤转移的分子机制目前还不完全清楚。基因定点突变技术可以精确地改变基因的特定碱基序列,获得突变蛋白质。本研究的目的是应用基因定点突变技术构建突变型nm23H1增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因,为进一步研究肿瘤抑制基因nm23H1的功能、生化作用机制提供理论基础和实验依据。方法以逆转录病毒PLXSN野生型nm23H1EGFP质粒为突变模板,应用QuikChangeTM定点突变方法,简单、快速、高效地引入nm23H1S44A、nm23H1P96S、nm23H1H118F、nm23H1S120G四个点突变和一个联合位点突变nm23H1P96SS120G,构建了突变型nm23H1EGFP融合基因。结果成功构建了nm23H1S44AEGFP、nm23H1P96SEGFP、nm23H1H118FEGFP、nm23H1S120GEGFP、nm23H1P96SS120GEGFP五个突变型nm23H1EGFP融合基因,经DNA序列分析突变的碱基序列与实验设计完全一致。结论成功构建了五个具有不同突变位点的突变型nm23H1EGFP融合基因。QuikChangeTM定点突变技术是一种简单、快速、高效的基因定点突变方法。

nm23-H1基因对Tca8113的转移能力及化疗敏感性影响的实验研究

目的 通过nm2 3_H1的转化及导入Tca81 1 3细胞株 ,建立稳定、高效、低毒的转染方法 ,观察nm2 3_H1对Tca81 1 3细胞株侵袭转移能力的影响。方法 利用基因转化技术 ,制备高纯度的nm2 3_H1真核表达质粒。利用阳离子脂质体介导的转染技术 ,完成转染方法的建立。利用免疫组化技术 ,检测转染前后的nm2 3_H1的蛋白产物核苷二磷酸激酶A (NDPKA)的表达。利用transwell小室和冲刷实验 ,观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。MTT法观察nm2 3_H1对Tca81 1 3化疗敏感性影响。结果 使用重组的pCMV_Neo_Bam真核表达载体 ,将nm2 3_H1转染口腔癌细胞 ,并获得稳定表达。Tca81 1 3细胞株nm2 3_H1基因转染前后表达水平有明显差异 ,转染后Tca81 1 3细胞侵袭、粘附、趋化运动能力均显著降低 ,转染前后Tca81 1 3细胞株对阿霉素 (ADM)、5_氟尿嘧啶 (5_FU)、甲氨喋呤 (MTX)的化疗敏感性无显著差异 ,转染后Tca81 1 3细胞株对顺铂 (CDDP)明显增敏。结论 nm2 3_H1对Tca81 1 3细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用 ,nm2

nm23-H1基因对口腔癌Acc-M细胞株的转移能力及化疗敏感性影响的体外研究

目的 通过 nm2 3- H1的转化及导入 Acc- M细胞株 ,建立稳定、高效、低毒的转染方法 ,观察 nm2 3- H1对 Acc- M细胞株侵袭转移能力及化疗敏感性的影响。方法 采用基因转化技术 ,制备高纯度的 nm2 3- H1真核表达质粒。用阳离子脂质体介导的转染技术 ,将 nm2 3- H1基因转染到口腔腺样囊性癌 Acc- M细胞株。用免疫组化技术检测转染前后的 nm2 3- H1的表达。并用 transwell小室和冲刷实验 ,观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。采用 MTT法观察 nm 2 3- H1对 Acc- M化疗敏感性影响。结果 1使用重组的 p CMV - Neo- Bam的真核表达载体 ,将 nm 2 3- H 1转染口腔癌细胞 ,并获得稳定表达。 2 Acc- M细胞株 nm2 3- H 1基因的转染前后表达水平有明显差异。 3转染后的 Acc- M细胞侵袭、粘附、趋化运动能力均显著降低。 4转染前后使用 C- DDP的 L D50 分别为2 .6 4± 0 .4 7,1.85± 0 .4 1(P<0 .0 1)。结论 nm2 3- H1对 Acc- M细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用 。

B7-H1蛋白在人胰腺癌组织中的表达及临床意义

背景与目的:恶性肿瘤细胞表达共刺激分子B7-H1来抑制T细胞功能,逃避机体的抗肿瘤免疫反应。本研究通过检测人胰腺癌组织中B7-H1蛋白的表达,探讨其与胰腺癌患者临床病理指标及预后之间的关系。方法:采用免疫组化法检测B7-H1在40例胰腺癌组织和10例癌旁正常胰腺组织中的表达情况,用卡方检验或确切概率法分析B7-H1的表达与胰腺癌患者各临床病理指标以及生存时间的关系。结果:40例胰腺癌组织中B7-H1阳性率为45.00%(18/40),高于癌旁正常胰腺组织(P<0.05);B7-H1表达与患者肿瘤分期、术前CA19-9有关(P<0.05)。多因素Cox回归模型显示,B7-H1表达是胰腺癌患者无复发生存期、总生存期的独立危险因素。结论:人胰腺癌组织中存在B7-H1蛋白表达,B7-H1表达与胰腺癌患者的预后有关。

nm23-H1基因在大肠癌中的表达与肝转移及预后的关系

目的：探讨ｎｍ２３－Ｈ１蛋白表达与大肠癌肝转移及预后的关系。方法：对１０１例大肠癌存档石蜡块进行重新切片，采用ｎｍ２３－Ｈ１单克隆抗体进行免疫组化染色（ＬＳＡＢ法）。结果：ｎｍ２３－Ｈ１蛋白表达与年龄、性别、肿瘤大小、部位、组织类型、浆膜侵犯无关；与Ｄｕｋｅｓ分期、淋巴结转移有关；手术时有肝转移组较无肝转移组低，手术后有肝转移复发组较无肝转移复发组低（Ｐ＜００１）。Ｃｏｘ模型分析显示ｎｍ２３－Ｈ１是大肠癌预后的一个保护性指标。结论：ｎｍ２３－Ｈ１基因对大肠癌肝转移和预后具有重要作用。

nm23-H1 基因产物在人鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的：ｎｍ２３是一种肿瘤转移抑制基因。它在某些人类肿瘤包括乳腺癌、结肠癌、胃癌、肝癌、膀胱癌等中的表达水平与肿瘤转移呈负相关。本研究检测ｎｍ２３－Ｈ１基因产物在鼻咽癌中的表达，探讨ｎｍ２３－Ｈ１基因的表达与鼻咽癌转移和预后的关系。方法：用ｎｍ２３－Ｈ１单克隆抗体通过免疫组化ＬＳＡＢ法，对９５例鼻咽低分化鳞癌蜡块标本进行研究，用Ｌｏｇｒａｎｋ检验分析ｎｍ２３－Ｈ１基因的表达与鼻咽癌转移、复发和预后的关系。Ｃｏｘ＇ｓ回归模型作多因素预后分析。结果：ｎｍ２３表达阴性组淋巴结转移率（８６．７％）比表达阳性组高（４８．６％，Ｐ＜０．０１），ｎｍ２３表达阴性组放疗后复发、远处转移较表达阳性组高（Ｐ＜０．０５），ｎｍ２３－Ｈ１基因产物的表达与鼻咽癌患者的预后呈正相关（Ｐ＜０．０１）。Ｃｏｘ＇ｓ回归模型多因素分析显示ｎｍ２３－Ｈ１是影响鼻咽癌预后的一个指标（Ｐ＜０．０５）。结论：本研究的结果提示ｎｍ２３－Ｈ１的阴性表达与鼻咽癌的淋巴结转移、复发、远处转移显著相关，ｎｍ２３－Ｈ１可作为预测鼻咽癌预后的一个重要指标。

B7-H1在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨B7-H1在人肝癌组织中的表达情况及其对肝癌Hep G2细胞增殖能力和凋亡水平的影响。方法采用组织化学染色方法观察肝癌组织和癌旁正常组织中B7-H1的表达情况。采用Lonza电转染的方法转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2进入肝癌Hep G2细胞,并通过RTPCR和Weatern印迹方法检测肝癌Hep G2细胞中B7-H1的表达情况。敲低肝癌Hep G2细胞中B7-H1的表达后,采用MTT方法检测肝癌Hep G2细胞的增殖情况,并采用Annexin V/7-AAD双染的方法检测肝癌Hep G2细胞的凋亡水平。结果与癌旁正常组织相比,肝癌组织中B7-H1的表达水平显著升高。采用Lonza电转染的方法转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2进入肝癌Hep G2细胞后,肝癌Hep G2细胞中-B7-H1的表达水平均显著降低。转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2敲低肝癌Hep G2细胞中B7-H1表达后,肝癌Hep G2细胞的增殖能力均显著降低,与对照组相比差异显著(P<0.01)。转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2敲低肝癌Hep G2细胞中B7-H1表达后,肝癌Hep G2细胞的凋亡均显著升高,与对照组相比差异显著(P<0.01)。结论肝癌组织中B7-H1的表达水平显著升高,且B7-H1可促进肝癌Hep G2细胞的增殖能力,并抑制肝癌Hep G2细胞的凋亡水平,提示肝癌组织中高表达的B7-H1与肝癌的发生和发展密切相关。

乳腺癌中bcl-2与nm23-h1基因表达情况及其临床意义

目的:探讨bcl-2与nm23-h1基因在乳腺癌中的表达情况及其相关性,并探讨其潜在临床意义。方法:采用免疫组化SP法观察85例乳腺癌手术切除标本及正常乳腺组织石蜡切片中bcl-2和nm23-h1的表达,并进行分析。结果:63.53%(54/85)肿瘤呈bcl-2阳性表达,bcl-2表达与肿瘤淋巴结转移及TNM分期有关(P值均<0.05)。40.00%(34/85)肿瘤呈nm23-h1阴性表达,nm23-h1阴性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期有关(P值分别为0.032、0.001和0.001)。单因素分析显示:bcl-2与nm23-h1表达为影响癌细胞淋巴转移的主要因素(OR值分别为6.985、0.014,P<0.001)。结论:bcl-2基因高表达与nm23-h1基因的低表达可能与乳腺癌的发生、转移密切相关,其联合检测可作为判断乳癌患者预后及指导制定治疗方案的手段之一。

负性协同刺激分子B7-H1和B7-H3在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨负性协同刺激分子B7-H1、B7-H3在乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理参数、预后及CD3+T淋巴细胞浸润程度的相关性。方法:选取2003年3月至2004年1月在苏州大学附属第三医院乳腺外科接受手术治疗的女性乳腺癌患者49例(均经病理诊断确认为浸润性导管癌)的乳腺癌组织标本,免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中协同刺激分子B7-H1、B7-H3的表达以及CD3+T淋巴细胞浸润程度。结果:(1)乳腺癌组织中B7-H1阳性表达率为53.06%(26/49),其表达水平与肿瘤大小呈正相关(P<0.05)、与Her2/neu表达水平呈正相关(P<0.05)、与CD3+T淋巴细胞浸润程度呈负相关(P<0.05);(2)乳腺癌组织中B7-H3阳性表达率为59.18%(29/49),其表达水平与病理分期呈正相关(P<0.05)、与患者预后呈负相关(P<0.05);(3)乳腺癌组织中B7-H1和B7-H3的表达水平呈正相关(r=0.3316,P<0.05)。结论:负性协同刺激分子B7-H1和B7-H3在乳腺癌中的表达水平与临床病理因素及预后密切相关,对该两分子的检测在乳腺癌诊断和预后判断中具有潜在的临床应用价值。

人肺癌细胞株L9981-nm23-H_1的建立

目的 建立转染野生型nm2 3 H1 基因的人大细胞肺癌细胞株L9981 nm2 3 H1 。方法 应用基因克隆技术构建逆转录病毒载体pLXSN nm 2 3 H1 EGFP。脂质体法转染PA3 17细胞 ,得到逆转录病毒 ,并将病毒感染L9981细胞 ,获得L9981 nm 2 3 H1 。应用PCR和Westernblot检测L9981 nm2 3 H1 细胞中nm2 3 H1基因及其蛋白表达。结果 成功构建了逆转录病毒载体pLXSN nm2 3 H1 EGFP。nm2 3 H1 cDNA导入到L9981细胞株中 ,并检测到L9981 nm 2 3 H1 细胞中有nm 2 3 H1 蛋白表达。结论 nm 2 3 H1 基因在细胞株L9981 nm2 3 H1 中能持续。

B7-H1阻断对未成熟树突状细胞免疫功能的影响

目的探讨B7-H1阻断对未成熟树突状细胞(DCs)的免疫刺激活性的影响。方法以细胞因子GM-CSF和IL-4体外诱导人单核细胞来源的树突状细胞,流式细胞仪检测在诱导过程中B7-H1的表达,并以B7-H1单抗阻断处理,分别以流式细胞仪、MTT法、ELISA、ELISPOT法检测B7-H1阻断对DCs的成熟和内吞能力、刺激淋巴细胞增殖、IL-12的分泌、诱导淋巴细胞分化的影响。结果DCs在诱导过程中B7-H1表达逐渐增强,第7d时的阳性表达率为54.12%,以TNF-α诱导成熟后阳性表达率为83.64%;B7-H1阻断对DCs成熟和内吞能力无影响,但可使未成熟DCs刺激淋巴细胞增殖的能力和IL-12的分泌明显增强,并诱导淋巴细胞向分泌IFN-γ的Th1/Tc1的分化。结论B7-H1阻断可增强未成熟DCs的免疫刺激活性,利用B7-H1阻断的DCs瘤苗激发抗肿瘤免疫的方案值得进一步探讨。

肿瘤转移抑制基因Nm23-H1融合蛋白的表达纯化及其功能的初步研究

目的利用人Nm23-H1基因原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白,并对蛋白其活性进行初步分析。方法将重组质粒pET28a-Nm23-H1转化入E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达并鉴定。用金属螯合层析技术进行蛋白纯化,得到Nm23-H1融合蛋白,用SDS-PAGE及Western blot鉴定纯化蛋白,并用RP-HPLC法、电泳迁移率变动分析实验检测Nm23-H1融合蛋白的核苷二磷酸激酶(NDPK)活性及核酸内切酶(AP)修复活性。结果转化溶原菌后能够表达目的蛋白,蛋白表达量高,为可溶性蛋白。Ni2+柱纯化后得到Nm23-H1融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确。RP-HPLC法就及电泳迁移率变动分析实验证明所纯化的Nm23-H1融合蛋白具有NDPK活性,不具有AP修复活性,但可以增加APE1蛋白的AP修复活性。结论利用原核表达载体pET28a-Nm23-H1在E.coliBL21(DE3)中高效表达和纯化得到具有NDPK活性,但无AP修复活性的Nm23-H1融合蛋白,此蛋白可以增强APE1蛋白的AP修复活性,共同参与细胞的DNA损伤修复。