沉默CC型趋化因子受体5对人乳腺癌细胞黏附及迁移的影响

构建CC型趋化因子受体5(CCR5)基因shRNA的真核表达载体,探讨沉默CCR5对乳腺癌细胞黏附与迁移能力的影响。在多种人乳腺癌细胞中检测CCR5的基因表达,选择CCR5表达较高的MDA-MB-231细胞做为基因沉默的研究对象;设计并合成2对靶向人CCR5基因的RNA沉默序列,连入基因沉默载体pSilencer 2.1-U6中,构建沉默质粒shCCR5-1和shCCR5-2,定量PCR和蛋白印迹法检测CCR5基因沉默的效率;以细胞黏附实验和Transwell趋化小室实验分别检测沉默CCR5对MDA-MB-231细胞黏附和迁移能力的影响。结果表明,沉默CCR5可以抑制MDA-MB-231细胞的黏附能力,同时显著降低MDA-MB-231细胞的迁移和趋化。

单核细胞趋化蛋白-1小分子干扰RNA真核表达质粒的构建及意义

目的构建单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)小分子干扰RNA(siRNA)表达载体,为进一步研究其对动脉粥样硬化(AS)的防治作用提供手段。方法设计并合成两端含有酶切位点两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至载体pSi-lencer 2.0-U6中构建重组表达载体,转化DH-5α菌株,提取质粒行双酶切鉴定,并进行序列测定。结果双酶切证实MCP-1 siRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致。结论成功构建MCP-siRNA表达载体,为动脉粥样⒉化的防治奠定实验基础。