缬草提取物8-羟基松脂醇苷对Kv1.5钾通道电流的影响

目的探讨缬草提取物8-羟基松脂醇苷对Kv1.5钾通道电流的影响。方法以转基因Kv1.5HEK293细胞为受试对象,采用膜片钳技术观察10,30μmol.L-18-羟基松脂醇苷对转基因Kv1.5HEK293细胞电流的影响。结果 8-羟基松脂醇苷浓度依赖性减少Kv1.5HEK293细胞电流,电流值从(148.3±13.0)PA/PF分别降至(109.4±4.4)PA/PF和(78.6±11.3)PA/PF,抑制率分别为28.5%和37.1%。结论 8-羟基松脂醇苷对转基因Kv1.5 HEK293细胞电流有抑制作用,且呈浓度依赖性,可以部分解释缬草抗心律失常作用机制。

Kv1.5钾通道与心房颤动

心房颤动是最为常见的心律失常之一。尽管目前有很多药物正应用于心房颤动的治疗,如多非利特、胺碘酮、索他洛尔、普罗帕酮、氟卡尼等,但是人们仍然希望得到一种更为安全有效的抗心律失常药物。理想的治疗心房颤动的药物应是具有高度的心房肌细胞选择性,可以终止或延缓心房颤动的发生,而没有延长Q-T间期或负性肌力的作用。电压门控钾离子通道Kv1.5被认为是实现心房高度选择性理想的药物作用靶点。临床及动物研究证实,Kv1.5钾通道是心房电重构的基础,其阻滞剂可以选择性延长心房有效不应期而终止心房颤动。本文旨在对Kv1.5钾通道的历史、结构、功能和最新的一些阻滞剂做一综述。

丹参酮Ⅱ-A磺酸钠对房颤大鼠模型心房肌细胞Kv1.5钾通道表达影响的研究

目的:观察丹参酮Ⅱ-A磺酸钠对房颤大鼠心房肌细胞电重构及细胞膜钾离子通道的影响。方法:制备房颤动物模型,荧光定量PCR技术测定心房肌细胞Kv1.5钾通道基因表达,HE染色观察心房肌细胞超微结构变化。结果:丹参酮Ⅱ-A磺酸钠、胺碘酮能明显改善房颤大鼠心房肌细胞钾通道Kv1.5基因表达减低水平(P<0.05)及心房肌细胞组织超微结构。结论:丹参酮Ⅱ-A磺酸钠能够通过改善房颤大鼠钾通道Kv1.5基因表达下调所引发的心房电重构,从而预防和治疗房颤。

二十碳四烯酸对转基因中国仓鼠卵母细胞hKv1.5钾通道电流的作用

目的观察二十碳四烯酸对转基因中国仓鼠卵母细胞(CHO细胞)hKv1.5钾通道电流的影响。方法把hKv1.5钾通道基因转入CHO细胞膜中表达,给予不同浓度的ETYA,用全细胞膜片钳技术引出电流并观察不同电压条件下hKv1.5钾通道电流的变化情况。结果ETYA对hKv1.5稳态电流有明显的可逆性抑制作用,且具有浓度依赖性和电压依赖性。ETYA对hkv1.5通道电流的抑制系直接作用于通道而产生,并非影响脂氧合酶的活性而起作用。结论ETYA对hKv1.5钾通道电流有抑制作用。

心房颤动与Kv1.5钾通道阻滞剂及其研究进展

心房颤动是临床常见的心律失常,药物是心房颤动的主要治疗方法。胺碘酮和心律平等药物虽然可以治疗和转复心房颤动,但长期应用会引起恶性心律失常和心脏外的副作用。抑制Kv1.5钾通道电流,可选择性延长心房肌动作电位时程及有效不应期,改善心房肌的电重构和组织重构。近年来关于Kv1.5钾通道及其阻滞剂的研究迅速发展并引起广泛关注。为进一步探讨Kv1.5钾通道是否可能成为心房颤动的治疗靶点,我们对目前相关研究进展作一综述。

Kv1.5钾离子通道抑制剂抗心房纤颤研究进展

心房纤颤(AF)是常见室上性快速心律失常,可单独发病,亦可与心力衰竭、心肌梗死等伴发。胺碘酮与多非利特等临床常用药物,仅能减少AF发作次数与时间,很难使其恢复正常窦性节律,且因其选择性差,可诱发严重室性心律失常。因此,研发新型抗AF药物十分迫切。Kv1.5钾离子通道仅在心房肌表达,选择性强,可望成为抗AF药物设计的高选择性靶标。现综述Kv1.5钾离子通道抑制剂抗AF的应用与作用机制,以期为抗AF药物研发与临床应用提供参考。

KV1.5钾离子通道阻滞剂的研究

KV1.5?钾离子通道只在心房肌中存在,因此?KV1.5通道的阻滞剂对心房的选择性很强,不会引起房性心律不齐,因此有望作为今后AF的主要治疗手段。实验证明KV1.5阻断剂能明显改善阵发性、持续性和永久性三种心房颤动,其作用机理包括增加人体心肌细胞动作电位复极时长和有效不应期。文章通过对 KV1.5的结构特征和阻滞剂的最新研究成果进行了总结,以期对研制出更好的药物起到一些启发作用。

风湿性心脏瓣膜病患者钾离子通道特性变化的实验研究

目的:探讨风湿性心脏瓣膜病(简称风心病)患者心房组织细胞Kvl.5钾通道的变化。方法:将风心病患者分为窦性心律组(SR)、阵发性房颤组(PAF)和慢性房颤组(CAF)。应用全细胞膜片钳技术记录各组单个右心耳组织细胞超快速延迟整流钾电流(ultrarapid delayed rectifier current,IKur)的表达。结果:指令电压为+10^+50mV时,慢性房颤组(n=22)IKur密度较窦性心律组(n=25)明显降低。阵发性房颤组(n=23)IKur密度与窦性心律组差异无统计学意义(P>0.05);其中,在+50mV时,电流由窦性心律组(8.98+1.69)PA/pF降为房颤组的(4.17+1.82)PA/pF(P<0.01),降低幅度为(53.6+1.4)%。阵发性房颤组(8.21+1.54)PA/pF与窦性心律组差异无统计学意义(P>0.05),与慢性房颤组差异有统计学意义(P<0.01)。结论:Ikur密度在发生慢性房颤的风心患者心房肌细胞中密度明显下降,提示Kv1.5钾通道的变化与风心病房颤的发生有关。

Kv1.5对大鼠低氧高二氧化碳性PASMCs增殖、凋亡的影响及与MAPK通路的关系

目的:探讨电压依赖性钾离子通道Kv1.5对大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖、凋亡的影响及其与丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路的关系。方法:体外培养大鼠PASMCs,复制低氧高二氧化碳模型,随机分组如下:常氧组(N组);低氧高二氧化碳组(HH组);低氧高二氧化碳+溶剂DMSO对照组(HD组);低氧高二氧化碳+ERK1/2通路抑制剂U0126组(HU组);低氧高二氧化碳+p38 MAPK通路抑制剂SB203580组(HS组);低氧高二氧化碳+MAPK通路激动剂茴香霉素(anisomycin)组(HA组)。采用CCK-8法检测细胞活性,蛋白免疫印迹法检测Kv1.5、增殖细胞核抗原(PCNA)及Bax蛋白的表达水平。结果:与N组相比,HH组和HD组细胞活性增加(P<0.01),PCNA蛋白表达上调,Kv1.5及Bax蛋白表达均明显降低(P<0.01),HH组和HD组间各指标变化均无显著差异(均P>0.05);较之HD组,HU组、HS组及HA组细胞活性降低(P<0.05或P<0.01),PCNA蛋白表达下调,Kv1.5及Bax蛋白表达均明显增加,差异均显著(P<0.01),其中以HA组各指标变化最明显。结论:钾离子通道Kv1.5对低氧高二氧化碳性大鼠PASMCs增殖、凋亡的调节可能与MAPK通路的激活有关。

二氯醋酸钠对模拟高原肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv1.5亚型的作用研究

目的研究电压门控性钾通道亚型(Kv1.5)在高原低压低氧性肺动脉高压中的作用,观察二氯醋酸钠(DCA)对高原低压低氧性肺动脉高压大鼠肺小动脉平滑肌细胞(PASMCs)电压门控性钾通道Kv1.5亚型基因表达的影响和肺动脉高压的降压作用。方法24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(N组,8只)、高原低压低氧组(HA组,8只)及DCA干预组(DCA组,8只)。N组置于平原处室内喂养,HA组和DCA组均同时置于模拟的海拔5000m高原环境,DCA组大鼠予以DCA70mg·kg-1·d-1灌胃。21d后测量三组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、肺小动脉平滑肌和心脏壁厚度,用荧光定量PCR法检测三组大鼠PASMCs Kv1.5 mRNA,免疫组织化学和免疫印迹法观察大鼠PASMCsKv1.5蛋白的表达。结果模拟高原5000m21d后,HA组大鼠mPAP明显高于N组(P<0.01),其肺小动脉管壁增厚,管腔狭窄,表现为管壁厚度占外径的百分比(WT%)、管壁面积占总面积的百分比(WA%)和右心室与左心室加室间隔之比(RV/LV+S)较N组明显升高(P均<0.01)。与HA组相比,DCA组mPAP则明显降低(P<0.01),表现血管重构减弱,WT%和WA%明显下降(P<0.01),RV/LV+S下降(P<0.01)。HA组Kv1.5 mRNA明显低于N组(P<0.01),DCA组Kv1.5 mRNA则明显恢复表达(P<0.01)。HA组肺小动脉壁Kv1.5平均光密度低于N组(P<0.01),DCA组则明显高于HA组(P<0.01)。蛋白表达呈现相似结果。结论高原低压低氧性大鼠PASMCs Kv1.5表达明显受到抑制,DCA具有恢复Kv1.5表达、阻止肺小动脉重塑及降低肺动脉压的作用。

骨肉瘤Kv1.5钾离子通道表达意义的研究

目的研究表明,Kv1.5钾离子通道参与了多种肿瘤的生物学行为,但其在骨肉瘤中的表达和作用尚未明确。本研究拟检测Kv1.5钾离子通道在骨肉瘤中的表达,并探讨小干扰RNA(small interfering,siRNA)沉默Kv1.5表达后对骨肉瘤细胞增殖、周期和凋亡的影响及可能的调控机制。方法实验分组,Kv1.5-siRNA转染细胞为实验组,controlsiRNA转染细胞为对照组,未处理细胞为空白组。采用siRNA抑制Kv1.5的表达,并分别采用CCK-8法、克隆形成率、流式细胞仪和Tunel法检测MG-63细胞增殖、生长、周期和凋亡的变化。采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测骨肉瘤细胞中周期和凋亡相关基因的表达水平。结果 Kv1.5在骨肉瘤细胞和组织中均异常高表达。CCK-8法检测结果示,Kv1.5-siRNA组细胞增殖水平为(53.87±5.91)%,与control-siRNA组的(99.14±7.87)%相比差异有统计学意义,Z=-3.49,P<0.001;与空白组(100.00±8.37)%相比差异有统计学意义,Z=-3.57,P<0.001。克隆形成实验结果示,Kv1.5-siRNA组克隆形成数为164.00±7.66,与control-siRNA组(223.20±11.41)相比,Z=-2.61,P=0.008;与空白组(228.20±12.62)相比,Z=-2.40,P=0.016。流式细胞周期结果示,Kv1.5-siRNA组G0/G1期所占比例为(68.81±0.55)%,与control-siRNA组(41.22±0.61)%相比,Z=-2.15,P=0.031;与空白组(40.79±0.52)%相比,Z=-2.31,P=0.029。流式细胞凋亡结果示,Kv1.5-siRNA组(30.23±1.74)%与control-siRNA组(14.10±1.27)%相比,Z=-2.04,P=0.039;与空白组(12.85±1.02)%相比,Z=-2.09,P=0.035。Tunel法结果示,Kv1.5-siRNA组凋亡指数为(35.20±3.14)%,与control-siRNA组(8.03±1.50)%相比,Z=-2.41,P=0.015;与空白组(8.22±1.32)%相比,Z=-2.25,P=0.019。沉默Kv1.5表达可明显下调骨肉瘤中Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、Bcl-2和Bik基因的表达,同时上调p21、p27、Bax、Bcl-XL和Caspase-3基因的表达,与对照组相比,P值均<0.05。结论 Kv1.5钾离子通道参与了骨肉瘤细胞增殖、周期和凋亡的过程,其作用机制可能与调控周期依赖激酶和Bcl-2家族的相关因子有关。

电压门控钾离子通道Kv1.5与肿瘤

电压门控钾离子通道Kv1.5广泛表达于多种类型肿瘤并参与肿瘤细胞增殖、凋亡、周期等过程.某些抗肿瘤药物可通过影响Kv1.5通道的表达进而影响肿瘤的生物进程.Kv1.5通道是肿瘤治疗的新靶点,研究Kv1.5通道可以进一步了解肿瘤细胞发生、发展的机制,并有助于研制出新的抗肿瘤药物,为肿瘤治疗提供新的更好的方法.

Kv1.5钾离子通道阻滞剂的研究进展

钾离子的膜通道是心肌细胞膜中亚型最多、其表达受影响因素最多的离子通道,而超快速延迟整流钾电流(IKur)是仅在心房肌发现的钾通道电流,其离子通道的分子基础是Kv1.5钾离子通道。因此,抑制Kv1.5钾通道电流,可选择性延长心房肌动作电位时程及有效不应期,改善心房肌电重构和组织重构。本文就Kv1.5钾离子通道阻滞剂的结构类型及研究进展进行综述,旨在为新型房颤治疗药物的开发提供思路。

替米沙坦对电压依赖性的Kv1.3和Kv1.5通道电流阻断作用的实验研究

目的通过观察替米沙坦对电压依赖性的Kv1.3和Kv1.5的阻断作用，探讨替米沙坦对此类通道的阻断可能具有的临床作用。方法使用双电极电压钳技术记录表达于非洲爪蟾卵母细胞的Kv1.3和Kv1.5钾通道电流，不同浓度灌流观察其对电流影响。结果（1）替米沙坦浓度依赖性的阻断Kv1.3通道，其阻断的IC50是2.05μmol／L。替米沙坦对Kv1.3电流的阻断具有电压依赖性。（2）替米沙坦浓度依赖性的阻断Kv1.5通道，其阻断的IC50是2.37μmol／L。替米沙坦对Kv1.5电流的阻断具有更显著的电压依赖性。结论替米沙坦阻断开放状态的Kv1.3可能是其发挥免疫调节和抗动脉粥样硬化作用的机制之一。替米沙坦对开放状态的Kv1.5钾通道的阻断可能是其减少心房颤动发生率的作用机制之一。

维纳卡兰类似物的合成及活性研究

吡咯烷衍生物与环氧环戊烷开环反应后,与3,4-二甲氧基苯乙氧基中间体对接,再经钯碳加氢脱保护得维纳卡兰类似物,并通过全细胞膜片钳技术,探讨其对Kv 1.5钾通道电流的阻断效果。结果显示,类似物1a、1b和1c抑制Kv1.5钾通道的IC50分别为sustain current:37,77,30;peak current:89,389,157(μM),且呈浓度和时间依赖性。

心房重构与心房纤颤的病理学机制研究进展

目前,发生率最高的心率失常被认为是心房纤颤,且该病的发生率随着年龄的增长而上升。伴随着我国人口年龄结构的变化,心房纤颤在我国的发病率逐渐增加。了解该病的发生和发展的机制十分迫切。已经证明,心房重构是该病的重要发生机制。随着研究的加深,研究人员对心房重构与该病的病理学机制有了更加深刻的了解。现就心房纤颤和重构在发病中的机制进行回顾。

胎兔动脉导管平滑肌细胞氧敏感性钾通道mRNA的表达

目的:建立胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养方法,并检测其细胞膜氧敏感性钾通道亚型(Kv1.5)mRNA的表达。方法:采用组织块改良贴壁法(玻片压迫组织块贴壁方法)进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外原代培养,并行免疫组织化学法对培养的细胞进行鉴定,用RT-PCR的方法检测其细胞膜氧敏感性钾通道亚型(Kv1.5)的表达。结果:经10-14 d培养后,培养皿底及盖玻片上铺满梭状细胞,免疫组织化学法鉴定确认为胎兔动脉导管平滑肌细胞,其细胞膜存在Kv1.5基因表达。结论:植块改良贴壁法可以成功的进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养,且本法简便、可靠,短时间内可以获得大量细胞,从而为动脉导管未闭发病机制的研究奠定了实验基础。同时,动脉导管平滑肌细胞膜上存在氧敏感性钾通道mRNA的表达,从而为从氧敏感性钾通道层面来研究动脉导管未闭的发生机制提供了实验基础。

房颤患者心房肌细胞的原代培养与应用

探索成功培养房颤(atrial fibrillation,AF)患者原代心房肌细胞的方法,能够为房颤发病机制的研究奠定实验基础。取心胸外科行迷宫手术患者的左心耳,利用I型胶原蛋白酶消化法培养房颤患者的原代心房肌细胞,通过免疫组化进行鉴定,同时对培养的心房肌细胞进行初步研究。与动物实验相反,房颤患者心房肌细胞缝隙连接蛋白40(connexin40,Cx40)及Kv1.5钾离子通道蛋白的表达量均降低。由此可见直接研究成人房颤患者的心房肌细胞具有更高的可靠性,同时也证明了房颤患者心房肌细胞的培养是研究其发病机制的基础。

西地那非抑制高肺血流肺动脉高压大鼠肺血管重构和上调肺血管Kv1．5mRNA表达

目的观察高肺血流肺动脉高压大鼠肺血管结构重建和肺血管电压依从钾通道Kv1．5mRNA表达变化，探讨口服西地那非对高肺血流肺动脉高压大鼠肺血管重构及肺血管电压依从钾通道Kv1．5mRNA表达的影响。方法将27只雄性SD大鼠随机分为对照组（n=9）、分流组（n=9）、分流＋西地那非组（n=9）。后两组大鼠通过腹主动脉-下腔静脉分流术建立高肺血流肺动脉高压动物模型。对分流＋西地那非组大鼠每天灌胃枸橼酸西地那非10mg·kg^-1·d^-1，对照组和分流组每天灌胃等量生理盐水。11周后，测定肺动脉平均压（n1PAP）及肺动脉收缩压（sPAP）；观察右室肥厚程度，计算右室重量／（左室＋室间隔）重量比值，以[RV／（LV＋S）]表示；计算肺中、小血管肌型动脉相对中膜厚度（RMT）；采用实时荧光RT-PCR定量法观察大鼠肺血管电压依从钾通道Kv1．5mRNA表达。结果与对照组比较，分流组大鼠TnPAP、sPAP、RV／（LV＋S）比值显著增高（P〈0．01），RMT显著增加（P〈0．01），肺血管Kv1．5mRNA表达水平显著降低（P〈0．01）。与分流组相比，分流＋西地那非组H1PAP、sPAP、RV／（LV＋s）比值显著低于分流组（P〈0．01），RMT显著降低（P〈0．01），肺血管Kv1．5mRNA表达水平显著升高（P〈0．01）。分流＋西地那非组mPAP、sPAP、Rv／（LV＋S）比值和RMT与对照组比较，差异均无显著性意义（P〉0．05）；两组大鼠Kv1．5mRNA表达水平也无显著性差异（P〉0．05）。结论高肺血流肺高压大鼠肺血管发生重构并且其肺血管Kv1．5mRNA表达下降，而口服枸橼酸西地那非抑制高肺血流肺高压大鼠肺血管重构和上调肺血管Kv1．5mRNA表达。