BRAF在10-姜酚抗黑色素瘤中作用的分子模拟及实验研究

目的:采用分子模拟技术及细胞实验研究BRAF蛋白在10-姜酚(10-G)抗黑色素瘤中的作用。方法:将10-G(10、20和40μmol/L)刺激人皮肤黑色素瘤A375细胞24 h,采用MTS法和细胞计数检测细胞活力。采用分子对接及分子动力学模拟分析10-G与BRAF蛋白之间的相互关系。采用Western blot技术检测p-BRAF、总BRAF、p-MEK1/2、p-ERK1/2和p-P38的蛋白水平。结果:10-G可剂量依赖性地降低A375细胞活力和数量,与对照组比较差异有统计学意义(P <0. 01)。10-G与野生型BRAF之间的结合能为-7. 358 kcal/mol,与V600E突变型的BRAF之间的结合能为-8. 255 kcal/mol。分子动力学模拟证实BRAF^(V600E)与10-G之间的结合是稳定的。10-G能显著抑制A375细胞中p-BRAF、p-MEK1/2和p-P38的蛋白水平(P <0. 01),对p-ERK1/2的蛋白水平没有影响。结论:10-G能够抑制黑色素瘤细胞的生长,其机制可能与抑制BRAF激活有关。

HPLC法测定母姜与子姜中的6-姜酚,8-姜酚和10-姜酚

利用高效液相色谱(HPLC)法测定母姜与子姜中6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚的含量。采用Inertsil ODS-SP色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分析,二元线性梯度洗脱,紫外检测器在280 nm波长下检测。结果表明本实验样品母姜中6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚含量分别是子姜的2倍、1.5倍和2倍。

麦芽糖基-β-环糊精与10-姜酚的包合作用研究

10-姜酚是生姜中有益于人体健康的生物活性成分,但其水溶性较低,化学稳定性较差,限制了其在食品工业中的应用。该研究采用溶剂法联合冷冻干燥技术制备10-姜酚/麦芽糖基-β-环糊精(Mal-β-CD)的包合物,并借助紫外光谱、红外光谱、X-射线衍射技术、热重及差示扫描量热联用分析、分子对接模拟等技术研究包合物结构特征。结果表明,Mal-β-CD对10-姜酚具有良好的包合能力,10-姜酚与Mal-β-CD包合物的化学计量比为1∶1;10-姜酚的苯环结构和非极性侧链进入到Mal-β-CD的疏水性空腔中,二者之间形成了4个氢键,氢键键长分别为2.5魡、2.0魡、2.4魡、2.5魡,结合能为-19.32 k J/mol。10-姜酚以无定形状态存在于包合物中,其热稳定性得到了明显提高。

10-姜酚的质谱分析

通过层析方法获得了１０－姜酚，并根据１０－姜酚的ＥＩ质谱图（ＭＳ）分析了其开裂过程。

10-姜酚对大鼠缺血性心律失常及其心肌组织miRNA-29表达的影响

目的探讨10-姜酚对大鼠缺血性心律失常及其心肌组织miRNA-29表达的影响。方法SPF级6周龄SD大鼠,按照体重随机分为对照组、模型组、阳性给药组(盐酸普萘洛尔2 mg·kg^(-1))、10-姜酚给药组(8、4、2 mg·kg^(-1))。除对照组之外,其余各组大鼠均尾静脉注射5μg·kg^(-1)的乌头碱生理盐水溶液,诱发大鼠缺血性心律失常模型。随后阳性给药组和10-姜酚组分别尾静脉给药,对照组和模型组尾静脉注射生理盐水,给药30 min内记录各组大鼠心电图变化,早搏早搏(VPB)次数以及首次出现时间,室速(VT)和室颤(VF)持续次数和时间。待实验结束后取大鼠心脏,测定心肌梗死面积,计算心肌梗死率。qRT-PCR检测各组大鼠心肌组织miRNA-29的表达。结果与对照组相比,乌头碱诱导模型组出现明显的缺血性心律失常,VPB、VT和VF频率明显增加(P<0.05),VPB首次出现时间显著缩短(P<0.05),VT和VF持续时间也显著增长(P<0.05),模型组大鼠心肌组织梗死面积明显增多(P<0.05),心肌组织miRNA-29表达降低(P<0.05);给药治疗后,与模型组相比,10-姜酚可以显著改善大鼠出现的缺血性心律失常,VPB、VT和VF频率明显降低(P<0.05);VPB首次出现时间推迟(P<0.05),VT和VF持续时间也显著降低(P<0.05),心肌组织梗死面积明显减少(P<0.05),心肌组织miRNA-29表达降低(P<0.05)。结论10-姜酚可以显著改善由乌头碱诱导大鼠缺血性心律失常,同时显著降低心肌组织中miRNA-29的表达水平。

10-姜酚对ABL1影响的分子模拟及实验研究

目的采用分子模拟技术以及细胞实验研究探索10-姜酚(10-G)对原癌基因酪氨酸激酶ABL1(ABL1)的作用。方法采用分子对接及分子动力技术分析10-G与ABL1蛋白之间的相互关系。将10-G(10、20、30μM)刺激肝癌HepG2细胞24小时,采用Western blot技术检测磷酸化ABL1(p-ABL1)的表达。结果 10-G与ABL1之间的结合力为-7.96 kcal/mol。分子动力学模拟证实ABL1与10-G之间的结合是稳定的。10-G能显著抑制肝癌HepG2细胞中p-ABL1的表达水平(P <0.01)。结论10-G具有抑制肝癌细胞ABL1激活的作用。

10-姜酚通过Src/STAT3信号通路抑制肝癌HepG2细胞增殖

目的研究10-姜酚通过Src/STAT3信号通路抑制肝癌Hep G2细胞增殖。方法使用SYBYL-X2.1软件对10-姜酚与Src之间的相互结合进行模拟。选择10-姜酚低、中、高浓度(1、3、10μmol/L)处理肝癌细胞Hep G2 24 h,同时设立正常对照组。MTT检测各组细胞活力;Ed U染色检测各组细胞增殖并计算阳性细胞数;Western blot检测Src(p-Src)及STAT3(p-STAT3)的表达水平;q PCR技术检测STAT3靶基因Cyclin D1和cmyc的表达。结果 10-姜酚可以与Src的氨基酸残基TRY-340、MET-341、MET-314、ASP404、ILE-336形成氢键连接。与对照组相比,MTT显示,10-姜酚(3、10μmol/L)显著降低Hep G2的细胞活性(P<0.001);Ed U染色显示,10-姜酚(1、3、10μmol/L)均能显著降低Hep G2细胞Ed U染色阳性细胞数(P<0.001);Western blot显示,10-姜酚(3、10μmol/L)显著降低Hep G2的细胞Src及STAT3的磷酸化表达水平(P<0.01);q PCR显示,10-姜酚(1、3、10μmol/L)显著降低STAT3靶基因Cyclin D1和cmyc的基因表达水平(P<0.01)。结论 10-姜酚能剂量依赖性的抑制肝癌Hep G2细胞的增殖,抑制Src及其下游的STAT3的激活。

生姜两种提取物的药效物质基础研究

目的 通过对比生姜水提和绞汁两种提取物药理作用和化学成分的差异,从而研究生姜的药效物质基础以及为指导生姜临床上的合理应用提供科学依据。方法 采用酵母致热的大鼠模型,比较生姜水提和绞汁两种提取物的解热作用差异;采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型,比较生姜水提和绞汁两种提取物的抗炎作用差异;通过对比生姜水提和绞汁两种提取物对DPPH自由基清除能力的大小,从而比较其抗氧化作用的差异。采用高效液相色谱法,测定生姜水提和绞汁两种提取物中6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚的含量;采用紫外分光光度法,测定生姜水提和绞汁两种提取物中总多糖的含量;采用BCA蛋白浓度检测法(bicinchoninic acid)测定生姜水提和绞汁两种提取物中总蛋白的含量。结果 生姜水提物对酵母致热的大鼠模型体温改善作用不明显(P>0.05),而生姜绞汁提取物能显著改善酵母致热的大鼠模型(P<0.05);生姜水提物对二甲苯导致小鼠耳肿胀的模型具有显著的改善作用(P<0.05),而生姜绞汁提取物的改善作用不明显(P>0.05);阳性对照药物维生素C、生姜水提物和生姜绞汁提取物对DPPH自由基清除率分别为79.68%、78.36%和76.52%;生姜水提物中的6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚含量分别为0.259 6 mg/g, 0.027 18 mg/g和0.026 79 mg/g,生姜绞汁中的6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚的含量分别为0.161 3 mg/g、0.020 82 mg/g和0.034 99 mg/g;生姜水提物和生姜绞汁提取物中总多糖含量分别为1.790 mg/g和1.390 mg/g;生姜水提物和生姜绞汁提取物中总蛋白含量分别为9.90 mg/g和7.840 mg/g。结论 生姜水提物的解热作用不及生姜绞汁提取物,但生姜水提物的抗炎作用要明显优于生姜绞汁提取物,生姜水提物和生姜绞汁提取物均具有明显的抗氧化作用。因此,生姜临床应用时,发挥其解热作用时应选用其绞汁提取物,发挥其抗炎作用时可选用其水提物,发挥其抗氧化作用时两种提取物均可。生姜水提物中6-姜酚、8-姜酚、总多糖和总蛋白的含量比生姜绞汁提取物相对较多,而10-姜酚的含量比生姜绞汁提取物相对较少,两种提取物化学成分含量的差异是其不同临床应用的物质基础。

干姜中3种姜酚类成分提取工艺研究

目的:建立干姜中姜酚的提取工艺。方法:采用超声辅助提取法考察乙醇浓度、提取时间、料液比3个因素对6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚总提取率的影响,并利用响应面法优选姜酚最佳提取工艺。结果:优化后最佳提取条件设定为乙醇浓度为61%,提取时间为41 min,料液比为1∶34(g/mL)。结论:本方法简便,具备可行性,可用于干姜中姜酚提取物的提取、分离及纯化。

HPLC法测定苏格木勒-10中5种成分

目的建立HPLC法测定苏格木勒-10(益智、干姜、荜茇等)中5种成分的含量。方法该药物75%甲醇提取液的分析采用Agilent C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相水(含0.2%磷酸)-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;柱温30℃;检测波长205、238 nm。结果6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚、圆柚酮、杨芽黄素分别在30.086~170.076μg/g(r=0.9999)、5.865~45.91μg/g(r=0.9999)、12.73~30.8μg/g(r=0.9998)、599.232~2592.0159μg/g(r=0.9999)、1.354~4.0178μg/g(r=0.9997)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.09%、88.72%、100.74%、96.80%、95.08%,RSD分别为0.84%、1.42%、1.11%、3.03%、1.12%。结论该方法准确可靠,专属性好,可用于苏格木勒-10的质量控制。

HPLC法测定不同产地生姜中姜酚类成分的含量

采用HPLC法测定不同产地生姜中姜酚类成分的含量,采用Agilent ZORBAX-SB C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长282 nm,用标准曲线法分别对6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚定量.结果显示,6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚分别在1.005~100.5μg/mL(r=1)、1.001~100.1μg/mL(r=0.999 9)和0.996 5~99.65μg/mL(r=0.999 9)范围内线性关系良好;平均回收率(n=6)分别为99.31%(RSD 1.26%)、98.69%(RSD 1.48%)、98.55%(RSD 1.44%).测定的14批不同产地的生姜及不同部位,6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚含量存在一定的差异.由此认为所建立的方法准确、可靠、重现性好,能快速有效地测定生姜及不同部位的含量.

高效液相色谱法同时测定干姜配方颗粒中5种成分含量

目的建立同时测定干姜配方颗粒中5种成分含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Thermo Syncronis C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为30℃,进样量为20μL。结果姜酮、6-姜酚、8-姜酚、6-姜烯酚、10-姜酚的质量浓度分别在0.5080~50.80μg/mL(r=0.9991)、2.0150~201.50μg/mL(r=0.9999)、0.5160~51.60μg/mL(r=0.9998)、0.6030~60.30μg/mL(r=0.9997)、0.5210~52.10μg/mL(r=0.9993)范围内与峰面积线性关系良好;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%;平均加样回收率分别为96.21%,99.64%,98.85%,98.15%,98.08%,RSD分别为1.61%,1.15%,1.34%,1.18%,1.28%(n=6)。结论所建立的方法操作简便,结果准确,重复性好,可用于同时测定干姜配方颗粒中5种成分的含量。

干姜和炮姜的质量比较及提高研究

目的:采用UPLC法比较干姜和炮姜的质量并加以提高。方法:采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相,乙腈-0.1%醋酸溶液;流速为0.25mL.min-1梯度洗脱,检测波长为280nm,同时测定6、8、10-姜酚的含量。结果:6、8、10-姜酚浓度分别在79.0～395.0、14.4～72.0和13.5～67.5μg/mL范围内,与峰面积成良好的线性关系(R2<0.9997);平均加样回收率99.74、99.28、99.13,RSD值分别为1.08、1.95、1.26。结论:干姜和炮姜中三种姜酚含量差异明显;所建立的质量控制提高方法快捷、准确、灵敏度高、重复性好,可用于干姜和炮姜的质量控制。

干姜HPLC指纹图谱建立及5种成分测定

目的建立干姜HPLC指纹图谱,并测定6-姜酚、8-姜酚、6-姜烯酚、10-姜酚、(E)-β-金合欢烯的含有量。方法干姜75%甲醇提取物的分析采用Waters SymmetryShieldTM RP18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量1 mL/min;柱温30℃。对结果进行聚类分析和主成分分析。结果 28批样品指纹图谱中有24个共有峰,相似度均大于0.837。6-姜酚、8-姜酚、6-姜烯酚、10-姜酚、(E)-β-金合欢烯在各自范围内线性关系良好(R2≥0.999 9),平均加样回收率97.47%~102.36%,RSD 1.35%~1.97%。结论该方法稳定可靠,可用于干姜的质量控制。

姜炙法中姜汁对辛温性药厚朴、草果化学组成的影响

目的:通过比较姜炙前后厚朴和草果化学成分的变化,初步探讨姜炙法中姜汁对辛温性药物的影响。方法:采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)和高效液相色谱法(HPLC)对姜炙前后厚朴、草果化学成分的变化进行对比研究。结果:姜炙后厚朴和草果的挥发油含量变化趋势不同,厚朴挥发油含量显著性降低,而草果略有上升。姜汁挥发油中所含α-姜黄烯、姜烯、β-没药烯和β-倍半水芹烯等被引入草果,但在厚朴中未发现类似现象。姜炙后厚朴、草果中均未检测到6-姜辣素、8-姜酚和10-姜酚。结论:姜炙过程中,姜汁中姜辣素类成分的迁移不是辛温性药化学成分变化的主要途径,厚朴和草果两味辛温药的挥发油组分迁移方式不同。

HPLC法同时测定姜枣祛寒颗粒中4种成份的含量

目的:建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定姜枣祛寒颗粒中4种成份(6-姜酚、8-姜酚、6-姜烯酚和10-姜酚)的含量。方法:Thermo Syncronis C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 ml/min,检测波长280 nm,柱温30℃,进样量20μl。结果:6-姜酚、8-姜酚、6-姜烯酚和10-姜酚分别在2.940~58.800μg/ml(r^(2)=0.9998)、3.648~72.960μg/ml(r^(2)=1.0000)、2.388~47.760μg/ml(r^(2)=0.9996)和2.024~40.480μg/ml(r^(2)=0.9991)浓度范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.13%、98.49%、98.70%和97.82%,相对标准偏差RSD(n=9)分别为1.44%、1.31%、1.46%和1.56%。结论:该方法操作简便、结果准确、专属性强、灵敏度高,可以为姜枣祛寒颗粒的质量控制提供参考。

RP-HPLC法测定干姜、炮姜和生姜中3种姜酚的含量

目的:建立测定干姜、炮姜和生姜3种药用姜中6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱为依利特Hypersil ODS 2(250 mm×4.6 mm,5 m),流动相为乙腈-水(72∶28),流速为1 mL·min-1,检测波长为280 nm,柱温为25℃,进样量为10μL。结果:6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚的进样浓度分别在1.156～231.200μg·mL-1(r=0.999 9)、1.072～214.400μg·mL-1(r=0.999 8)、1.031～206.200μg·mL-1(r=0.999 9)范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系;平均加样回收率分别为97.50%、98.06%、96.39%,RSD分别为1.18%、0.87%、1.37%(n均为6)。结论:本方法快速、准确、简便、高效,可为药用姜的质量控制和评价提供依据。

基于化学计量法和指纹图谱对生姜不同处理方法的成分差异研究

目的采用UPLC建立生姜Zingiber officinale在冷提、回流2种不同处理方法的指纹图谱,再利用化学计量学和灰度关联分析法对不同处理方法下的生姜进行成分差异研究,采用电子舌技术找寻与生姜风味相关的关键性成分。方法利用UPLC建立生姜不同处理方法的指纹图谱,筛选共有峰,以Orbitrap-Exploris质谱对共有峰成分进行鉴定,再运用SIMCA、SPSS等软件进行化学计量学分析,通过层次聚类分析(hierarchical clustering analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)和灰度关联分析评价不同处理方法下生姜的成分差异。结果从生姜指纹图谱中识别出10个共有峰,各批次的相似度在0.972~1.000;Orbitrap-Exploris质谱共鉴定出9个共有峰成分;HCA和PCA的结果显示,冷提法和回流法处理的生姜可以各自聚类,OPLS-DA确证了6-姜酚、8-姜酚、8-姜二酮、10-姜酚、1,4-去二氢-8-姜酚、1,4-去二氢-10-姜酚是不同处理方法下生姜差异性的关键性成分;灰度关联分析结果表明,冷提法处理生姜可以得到更多姜酚类,姜烯酚类成分;电子舌结果表明,处理方法对生姜的风味并无显著影响,而6-姜酚与生姜诸多味觉信息呈显著性相关。结论利用UPLC指纹图谱结合化学计量学可以评估生姜的质量和风味物质的含量,可有效区分冷提法和回流法处理的生姜并筛选出差异性成分,为生姜的处理方式的选择提供了可靠的方法,并且利用电子舌技术得出6-姜酚是生姜味觉信息变化的关键性成分。

不同品牌姜酒中5种姜辣素的RP-HPLC检测方法研究

试验采用RP-HPLC法比较不同干燥工艺对姜酒中姜酮、6-姜酚、8-姜酚、6-姜烯酚和10-姜酚五种姜辣素含量的影响。试验采用Agilent Grace Smart RP-C_(18)色谱柱(125 mm×4.6 mm×5μm),流动相A相为0.1%醋酸水溶液,流动相B相为乙腈,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,DAD检测波长为280 nm,柱温为40℃。检测结果表明,不同产地得到的姜酒中姜酮、6-姜酚、8-姜酚、6-姜烯酚和10-姜酚五种姜酒辣素的总含量以江西产姜酒(20%vol)最高。

基于近红外光谱分析技术的干姜质量快速评价研究

目的 采用近红外光谱分析技术建立干姜中多指标成分含量快速预测方法,对不同产地干姜进行快速无损的质量评价,提高干姜的质量控制水平。方法 建立同时测定干姜中6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和6-姜烯酚等4个主要活性成分的超高效液相色谱方法,并以其测定值为参比;采集不同产地干姜的近红外光谱,比较筛选出最优的光谱预处理方法,采用联合区间偏最小二乘法优选出最佳光谱区间,构建干姜各指标成分的最优偏最小二乘回归(partial least squares regression,PLSR)定量模型。结果 建立的干姜中6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和6-姜烯酚最佳PLSR定量模型的校正决定系数(R~2_(C))分别为0.973、0.980、0.979和0.938,预测决定系数(R~2_(P))分别为0.926、0.920、0.883和0.781,4个定量模型的预测相对分析误差(residual predictivedeviation,RPD)均大于2,表明建立的近红外光谱定量模型的预测值与测定值具有良好的线性关系,模型预测效果良好。结论 所建立近红外光谱定量模型,可以实现干姜中6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和6-姜烯酚等4个主要活性成分含量的快速预测,方法简便快捷,结果准确可靠,可为干姜质量的快速评价提供依据。