ELISA测定蜂王浆中10-羟基-α-癸烯酸

将 1 0 羟基 α 癸烯酸 ( 1 0 HDA)结构中原有的羧基酯化加以保护 ,再将 1 0 HDA另一端的羟基与琥珀酸酐反应引进一个带有羧基的“桥”。应用混合酸酐法 ,通过“桥”将 1 0 HDA与载体蛋白偶联制备成人工合成抗原 ,并以此为免疫原 ,免疫兔获得特异性抗血清。经间接酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定其终点滴度大于 1∶32 7680。抑制试验表明其检测范围在 7 81 2～ 2 5 0 μg/g之间 ,可用于出口蜂王浆中 1 0 HDA的含量检测。经对 2 0个样品进行检测 ,与液相色谱法检测结果的符合率为 91 %～ 1 0 0 % ,平均为 95 0 3% ,回收试验平均回收率为 88 3%。以 5个样品各测定 7次 ,计算其批间误差为 5 9%～ 8 0 % ,平均为 6 5 0 %。

进出口蜂王浆及其制品中10-羟基-α-癸烯酸的分析与评估

目的 了解掌握蜂王浆及其制品中的主要营养成分质量情况,以确保蜂王浆在进出口贸易时得到相应的法律保障。方法 样品经乙醇提取,溶出10-羟基-α-癸烯酸(以下简称10-HDA),并沉淀蛋白质,加内标后用乙醇定容,经离心或放置过夜,上清液过滤,HPLC测定。结果 有代表性的进出口的蜂王浆及蜂王浆胶襄样品均含有一定量10-HDA。结论 蜂王浆含果糖、氨基酸、多种酶、乙酰胆碱及丰富的维生素、芸香甙、促进性腺样物质和抗菌素类物质等,而其中10-HAD由于具有一定稳定性,因此是检验蜂王浆营养品质的主要指标。

HPLC法测定蜂王浆及蜂王浆冻干粉中的10-羟基-α-癸烯酸

目的：摸索高效液相方法测定10-羟基-α-癸烯酸的检测条件和方法,补充国家标准中检测方法的不足。方法：蜂王浆及其冻干粉中的10-羟基-α-癸烯酸经不同有机相提取后,采用不同流动相经C18色谱柱分离,紫外检测器检测。结果：采用无水乙醇＋0.01 mol/L磷酸=5.5＋4.5的10 ml混合液作为提取液,经超声处理,放置冰霜过夜沉淀取上清液试验,用甲醇＋0.01 mol/L磷酸溶液=55＋45作为流动相,检出限为1.6 mg/kg,在0～0.2 mg/ml范围内,线性关系良好,r=0.9996,RSD〈2%,加标回收率98%～101%。结论：该方法前处理简单、结果稳定、操作方便,符合大多数国家标准的定量习惯,可用于蜂王浆及蜂王浆冻干粉中的10-羟基-α-癸烯酸的测定。

10-羟基-α-癸烯酸对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用

目的探讨10-羟基-α-癸烯酸(10-hydroxy-2-decenoic acid,10-HDA)对过氧化氢(H_(2)O_(2))损伤的人静脉血管内皮细胞株(EVC-304)的保护作用及其相关分子机制。方法采用H_(2)O_(2)作用人脐静脉血管内皮EVC304细胞株建立体外血管内皮细胞氧化应激模型,根据不同处理分成空白对照组、模型组、10-HAD高、中、低剂量共5组;利用CCK-8实验检测细胞存活率;利用流式细胞术实验检测活性氧(ROS)水平和细胞凋亡情况;利用ELISA法测定细胞上清液中NO、MDA的含量和SOD的活性;利用蛋白免疫印迹法检测细胞内凋亡相关蛋白(Caspase家族、Bcl-2家族)和Nrf2/HO-1信号通路蛋白表达变化情况。结果10-HAD对EVC-304细胞有一定的保护作用并降低细胞内ROS水平(P<0.01),10-HAD组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);ELISA实验结果显示10-HAD能提高细胞上清液中的NO含量和SOD活性,下调MDA活性,10-HAD组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);10-HAD处理后能够抑制H_(2)O_(2)诱导的血管内皮细胞凋亡;10-HAD能激活EVC-304细胞中的Nrf2/HO-1信号通路。结论10-HAD对H_(2)O_(2)所致血管内皮细胞氧化损伤具有明显的保护作用,其机制可能与改善细胞内ROS水平并调节Nrf2/HO-1信号通路相关。

10-羟基-2-癸烯酸功能与合成方法研究进展

蜂王浆是年轻工蜂上颚腺的浓稠的乳白色分泌物,作为一种天然的蜂产品,被广泛应用于食品和保健品等各个领域。10-羟基-2-癸烯酸(10-hydroxy-2-decenoic Acid,10-HDA)是蜂王浆中所特有的一种中链不饱和脂肪酸,具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、降低血糖、血脂和抗辐射等多种活性功能。利用物理吸附或有机溶剂处理,可以在蜂王浆中有效提取出10-HDA成分,此外,还可以利用8-羟基辛醛、1,8-辛二醇等物质,通过各种化学反应合成10-HDA。近年来,也出现了使用微生物生产10-HDA的方式,这种方法因其成本低、污染小的特性,迅速成为了研究热点。通过归纳总结10-HDA的理化性质、生理活性及生产10-HDA的各种方法,简要阐述了不同的生产方式的优缺点,并对其中存在的问题进行讨论和展望,旨在为10-HDA的深入研究提供借鉴与参考。

外源供给硬脂酸对工蜂10-羟基-2-癸烯酸合成的影响

本研究旨在探讨饲粮中添加硬脂酸对工蜂10-羟基-2-癸烯酸(10⁃HDA)合成的影响,为高品质蜂王浆的生产提供技术指导。选取群势相近的浙江浆蜂10群,随机分成2组,对照组和硬脂酸组,每个组5群。试验期间,对照组饲喂基础饲粮,硬脂酸组在基础饲粮中添加2%的硬脂酸。整个试验期为75 d。结果表明:1)与对照组相比,外源供给2%的硬脂酸显著降低了工蜂的总采食量和粉料采食量(P<0.05),显著降低了第24天蜂群群势(P<0.05),但对各时间点(第12天、第24天和第36天)蜂群封盖子数量没有显著影响(P>0.05)。2)与对照组相比,外源供给2%的硬脂酸显著提高了蜂王浆中10⁃HDA的含量(P<0.05),但对蜂王浆产量没有显著影响(P>0.05);外源供给2%的硬脂酸显著增加了9和18日龄工蜂头部10⁃HDA含量(P<0.05)。3)与对照组相比,外源供给2%的硬脂酸显著提高了18日龄工蜂上颚腺中10⁃HDA合成相关基因脂肪酸合成酶(FAS)、细胞色素P4506AS8(CYP6AS8)、酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)、酰基辅酶A氧化酶3(ACOX3)、肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)、电子转移黄素蛋白β肽(ETF⁃β)和蜂王浆主蛋白1(mrjp1)的表达(P<0.05),同时显著增加了18日龄工蜂血淋巴和9日龄工蜂中肠中三酰甘油的含量(P<0.05)。由此可见,外源供给硬脂酸有助于促进工蜂上颚腺对10⁃HDA的生物合成,提高蜂王浆中10⁃HDA含量。

高效液相色谱法测定化妆品中10-羟基-2-癸烯酸

建立高效液相色谱测定含有蜂王浆成分化妆品中10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)的方法。在1.000 g样品中加入8 mL甲醇,超声提取10 min,静置至室温,用甲醇定容至10 mL,以10000 r/min转速离心5 min,上清液经0.45μm滤膜过滤,在35℃柱温下,采用C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm)进行分离。以甲醇-0.12%磷酸溶液(体积比为55∶45)为流动相进行等度洗脱,流量为1.0 mL/min,进样体积为10μL,以二极管阵列检测器检测,检测波长为210 nm。10-HDA的质量浓度在0.22~54.19μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数为0.9999,方法检出限和定量限分别为0.65、2.17μg/g。样品加标回收率为96.59%~102.09%,测定结果的相对标准偏差为0.43%~1.33%(n=6)。该方法高效,灵敏度高,可用于含蜂王浆成分化妆品中10-HDA的含量检测。

23-羟基白桦酸通过抑制髓源性抑制细胞对小鼠结肠癌生长的影响

目的探讨23-羟基白桦酸(23-HBA)通过干预髓源性抑制细胞(MDSCs)抑制小鼠结肠癌生长的作用机制。方法体内实验,建立小鼠结肠癌CT-26皮下移植瘤模型,阳性对照组5-FU腹腔注射3 d(2次),实验组23-HBA尾静脉每日注射,连续给药18 d。末次给药后处死小鼠,检测小鼠体质量、移植瘤质量及体积、脏器指数、血常规的变化,流式细胞术检测肿瘤组织MDSCs、CD8^(+)T细胞比例,RT-qPCR法检测肿瘤组织MDSCs细胞免疫抑制功能相关细胞因子精氨酸酶1(Arg1)、一氧化氮合酶(iNOS),以及CD8^(+)T细胞杀伤功能相关细胞因子颗粒酶B(GZMB)、穿孔素1(PRF1)、干扰素-γ(IFN-γ)mRNA的表达。体外实验,CCK8法检测骨髓(BM)细胞、MDSCs细胞存活率,确定23-HBA的安全作用浓度;采用40 ng/mL粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和40 ng/mL白细胞介素-6(IL-6)诱导BM向MDSCs分化,同时加入不同浓度23-HBA(0、10.5、21、42μmoL/L)干预4 d,流式细胞术检测MDSCs细胞比例变化;BM体外诱导生成MDSCs后,将其分为对照组和23-HBA低、中、高剂量组(10.5、21、42μmoL/L),干预24 h,RT-qPCR法检测MDSCs细胞Arg1、iNOS mRNA表达;Western blot法检测MDSC细胞Arg1、iNOS蛋白表达。结果体内实验显示,与模型组比较,23-HBA干预后,小鼠移植瘤体积及质量均降低(P<0.05,P<0.01);肿瘤组织MDSCs细胞比例降低(P<0.05),CD8^(+)T细胞比例升高(P<0.05,P<0.01),Arg1 mRNA表达降低(P<0.05),GZMB、IFN-γmRNA表达升高(P<0.05,P<0.01)。体外实验显示,23-HBA剂量在10.5、21、42μmoL/L时,对BM、MDSCs细胞存活率没有显著影响(P>0.05);23-HBA高剂量可抑制BM向MDSCs分化(P<0.01);23-HBA呈剂量依赖性减少MDSCs细胞Arg1、iNOS mRNA表达(P<0.05,P<0.01),下调Arg1、iNOS蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论23-HBA可通过干预MDSCs分化下调肿瘤内MDSCs细胞比例,减弱MDSCs细胞的免疫抑制功能,从而恢复CD8^(+)T细胞抗肿瘤活性,发挥抗结肠癌作用。

色氨酸羟化酶2理性设计提高大肠埃希菌5-羟基色氨酸产量

色氨酸羟化酶(TPH)可催化色氨酸羟化为5-羟基色氨酸(5-HTP),是5-HTP生物合成过程中的关键酶。为了提高大肠埃希菌细胞工厂合成5-HTP的效率,通过酶的理性设计和定点突变技术构建了人色氨酸羟化酶2(TPH2)的系列突变体,并在高产L-色氨酸且含有TPH辅酶四氢生物蝶呤(BH_(4))合成与再生模块的大肠埃希菌中表达。发现适当降低酶和色氨酸、酶和BH_(4)间结合的氢键数目有助于提高5-HTP产量;酶和底物色氨酸结合情况不变,辅酶BH_(4)与酶间氢键数目越多,5-HTP产量越低。5-HTP产量最高的细胞工厂是由突变酶V195A/V197I构建的,5-HTP产量较野生酶构建的细胞工厂产量提高54%,1 L补料摇床发酵48 h,5-HTP产量达16.17 g/L。理性设计是提高TPH2酶活,突破5-HTP合成限速步骤的有效途径,TPH2和底物色氨酸、辅酶BH_(4)间氢键连接太多或太少都不利于其催化活性的发挥。

高效液相色谱法测定化妆品中14种α-羟基酸和羟基酸酯

采用高效液相色谱法(HPLC)建立同时测定化妆品中14种α-羟基酸和羟基酸酯含量的方法,并结合高效液相色谱-串联质谱联用法(HPLC-MS/MS)确证结果。采用高效液相色谱法,以0.05 mol/L的磷酸氢二铵水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱,采用Waters T3-C_(18)(4.6×250 mm,5μm)色谱柱分离,采用二极管阵列检测器检测,以214 nm为检测波长,外标法定量。采用高效液相色谱-串联质谱联用法,以0.1%甲酸水溶液和含0.1%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用Waters T3-C_(18)(2.1×100 mm,1.8μm)色谱柱分离,电喷雾电离,正、负离子多反应监测模式定性。14种化合物在各自质量浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数R2均大于0.999。4种基质样品,14种化合物平均加标回收率均在85%~115%范围内,相对标准偏差均小于5%,检出限为1~150μg/g,定量限为3~450μg/g。对7批含α-羟基酸和酯的样品进行液质确证,结果均为阳性。该方法操作简便、准确度好、灵敏度高,适用于化妆品中14种α-羟基酸及其酯的测定。

陶瓷超滤膜在5-羟基-L-色氨酸发酵产物提取中的应用

为提高5-羟基-L-色氨酸(5-hydroxy-L-tryptophan,5-HTP)提取分离效率,降低能耗和污染排放,选择陶瓷超滤膜应用于从发酵液中提取5-HTP的工艺,对陶瓷超滤膜的过滤条件进行优化.首先优选出适合的膜孔径为10 nm,进一步优化得到陶瓷超滤膜分离提取5-HTP的3个最优工艺参数:发酵液pH值3.5,跨膜压差0.75 MPa,料液过膜温度35℃.在此工艺条件下,5-HTP的透过率在92%以上,对游离蛋白质截留率达90%以上,满足进一步浓缩、结晶制备5-HTP的要求,达到了优化预期效果,为陶瓷超滤膜应用于从发酵液中工业化提取5-HTP提供了可靠依据.

蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸含量测定的不确定度评定

本文依据《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1—2012)评定高效液相色谱法测定蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸含量的不确定度。通过建立数学模型,分析测量不确定度与影响不确定度的因素。结果表明,蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸结果平均值为1.041%,相对扩展不确定度为0.0408%,得出标准溶液配制、标准曲线拟合、样品前处理过程和测量重复性等不确定度分量影响了最终结果。

ω-3脂肪酸联合辅酶Q10对轻度高脂血症人群血脂干预效果的临床随机对照研究

目的:观察ω-3脂肪酸联合辅酶Q10对轻度高脂血症人群血脂、抗氧化及炎症水平的影响。方法:筛选解放军总医院第一医学中心门诊轻度高脂血症患者90例,采用随机、对照前瞻性研究方法,随机分为ω-3脂肪酸联合辅酶Q10组(A组)和对照组(B组),每组45例干预3个月,两组均常规给予低盐低脂饮食和运动指导,A组补充ω-3脂肪酸2粒3次/日和辅酶Q10胶囊2粒2次/日(早、晚)。于干预前、后比较两组间三大营养素摄入量、人体测量指标、体成分变化、血生化、抗氧化及炎症水平的影响。结果:共有82例患者完成研究,A组42例、B组40例。干预前两组间一般情况均无统计学差异(P>0.05);干预前后两组营养素摄入量、人体测量及体成分均无显著性差异(P>0.05);干预结束后两组间肝、肾功能、蛋白水平、胆红素、血脂水平等指标未见显著差异(P>0.05),但比较两组间干预前后差值变化水平(∆=结束-开始),发现A组∆TC、∆LDL-C及∆非-HDL-C下降水平显著高于B组(P<0.05);抗氧化水平的影响,发现A组∆MDA水平显著高于B组(P<0.05),炎症指标水平未见显著性差异(P>0.05)。结论:轻度高脂血症人群补充ω-3脂肪酸和辅酶Q10,对其肝肾功能无不利影响,能改善其血脂及抗氧化水平,起到降低动脉粥样硬化性心血管疾病风险的作用。

10-羟基喜树碱对非小细胞肺癌上皮-间质转化的影响

目的研究10-羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)对人非小细胞肺癌细胞(A549)上皮-间质转化(EMT)的影响,为后续的分子水平研究奠定基础。方法实验组分为常氧组和低氧组,其中低氧组以100μmol·L^(-1) CoCl 2溶液,低氧诱导24 h,使A549细胞产生上皮-间质转化。通过MTT细胞毒性实验、划痕实验、transwell实验、形态学显微观察HCPT对A549细胞的形态、迁移能力、侵袭能力的影响。结果通过MTT实验测得HCPT作用于A549细胞24 h后的IC 50=75.284μmol·L^(-1);HCPT能够显著抑制A549细胞的迁移能力和侵袭能力,并且细胞的间质形态特征得到显著抑制甚至是逆转。结论10-羟基喜树碱对人非小细胞肺癌细胞的上皮-间质转化起抑制作用。

长链非编码RNA F-box富含亮氨酸的重复蛋白19反义RNA 1调节微小RNA-342-3p/自噬相关蛋白10轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和奥沙利铂耐药性的影响实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) F-box富含亮氨酸的重复蛋白19反义RNA 1(FBXL19-AS1)调节微小RNA(miR)-342-3p/自噬相关蛋白10(ATG10)轴对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移和奥沙利铂耐药性的影响。方法:实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测组织及正常肠上皮细胞(NCM460)、人CRC细胞系RKO、HCT-8细胞及HCT-8/L-OHP细胞中FBXL19-AS1、miR-342-3p、ATG10 mRNA表达水平。将HCT-8细胞分为shFBXL19-AS1组、shRNA组、shFBXL19-AS1+inhibitor NC组和shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组,并以未转染的细胞为空白组。将HCT-8/L-OHP细胞分为L-OHP+shFBXL19-AS1组、L-OHP+shRNA组、L-OHP+shFBXL19-AS1+inhibitor NC组和L-OHP+shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组,并以未转染的细胞为空白组。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测HCT-8、HCT-8/L-OHP细胞增殖及其耐药性。划痕实验检测细胞迁移能力。免疫印迹法(Western blot)检测P-糖蛋白(P-gp)、增殖蛋白(Ki-67)、迁移侵袭增强子因子1(MIEN1)、ATG10蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验分析miR-342-3p与FBXL19-AS1、ATG10靶向关系。结果:FBXL19-AS1、ATG10 mRNA表达在HCT-8/L-OHP细胞及CRC组织中增加,miR-342-3p表达则降低(均P<0.05)。shFBXL19-AS1组细胞增殖、细胞迁移、FBXL19-AS1和ATG10 mRNA表达以及Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较shRNA组和空白组降低,miR-342-3p表达则增加(均P<0.05)。shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组细胞增殖、细胞迁移、ATG10 mRNA以及Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较shFBXL19-AS1+inhibitor NC组增加,miR-342-3p表达则降低(均P<0.05)。L-OHP+shFBXL19-AS1组细胞增殖、细胞迁移、细胞耐药性及P-gp、Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较L-OHP+shRNA组和空白组降低(均P<0.05)。L-OHP+shFBXL19-AS1+miR-342-3p inhibitor组细胞增殖、细胞迁移、细胞耐药性及P-gp、Ki-67、MIEN1、ATG10蛋白表达较L-OHP+shFBXL19-AS1+inhibitor NC组增加(均P<0.05)。结论:干扰lncRNA FBXL19-AS1通过上调miR-342-3p/ATG10轴抑制CRC细胞的增殖、迁移,改善奥沙利铂耐药性。

基于表面增强拉曼光谱法的5-羟基色氨酸快速检测方法的研究

建立了一种基于表面增强拉曼光谱法快速测定食品中5-羟基色氨酸(5-hydroxytryptophan,5-HTP)的方法。本方法采用6次平行实验,样品使用乙腈提取,1 M硝酸反萃后与增强试剂混合上机检测,可以观测到良好的增强拉曼信号,线性范围在0~20 mg/kg,检出限为1 mg/kg。使用该方法检测市售的样品,并结合平行实验验证,检测结果和HPLC方法有较高的一致性。该方法具有操作简单、快速、高效的特点。

3-羟基-2-萘甲羟肟酸的合成

以硫酸羟胺与3-羟基-2-萘甲酸甲酯、氢氧化钠为原料,滴加氢氧化钠肟化,再滴加稀硫酸强酸制弱酸合成3-羟基-2-萘甲羟肟酸。通过屡次试验肟化作用过程中的温度、时长及各组分的配比,确认了合成过程参数对产物浓度的具体效应。之后,依据各个单变量对实验条件做了优化,得出结论在制备浮选稀土新药剂3-羟基-2-萘甲羟肟酸的过程中,最佳的3-羟基-2-萘甲酸甲酯与氢氧化钠的配比是1∶2.25,反应持续16小时,且需在27℃的环境下进行。

斯里兰卡瓦拉沉香中2个新的5,6,7-三羟基-2-(2-苯乙基)-5,6,7,8-四氢色酮

为了解斯里兰卡来源瓦拉(Aquilaria walla)沉香中的化学成分,采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱及半制备高效液相色谱法从其乙醇提取物中分离得到2个2-(2-苯乙基)色酮类化合物,通过质谱、核磁共振等现代波谱学方法分别鉴定为(5R,6S,7S)-5,6,7-三羟基-2-(2-苯乙基)-5,6,7,8-四氢色酮(1)和(5R,6S,7S)-5,6,7-三羟基-2-[2-(4-甲氧基)苯乙基]-5,6,7,8-四氢色酮(2),均为新化合物。化合物1和2对脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7产生NO无抑制作用,MTT法表明对5株人肿瘤细胞不具有体外生长抑制作用,200μg/m L的化合物2对酪氨酸酶具有弱抑制作用,抑制率为(21.67±1.67)%。

10-羟基-2-癸烯酸治疗实验性高脂血症大鼠的药理研究

目的:本实验研究蜂王酸即10-羟基-2-癸烯酸(10-Hydroxy-2-Decenoic Acid,10-HDA)对治疗实验性高脂血症大鼠的药理作用。方法:通过喂养高脂食物建立高脂血动物模型,测定10-HAD对高脂血动物预防给药及治疗给药的作用。结果:10-HAD具有明显降低实验性高脂血症大鼠血液中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、β-脂蛋白含量,同时升高高密度脂蛋白(HDL)含量,说明10-HDA对高脂血症具有良好的治疗作用。结论:10-HAD是蜂王浆治疗高脂血症中的功能因子。