7β,10β-二甲氧基-10-DABⅢ的合成路线综述

卡巴他赛由FDA审核批准上市,临床上用于治疗激素难治性转移性前列腺癌。从结构上看,卡巴他赛是多西他赛7、10-OH甲醚化的衍生物,所以对7、10-OH进行选择性的甲醚化是卡巴他赛合成的关键技术点。7β,10β-二甲氧基-10-DABⅢ是卡巴他赛合成的关键中间体,本文对此中间体的合成路线进行综述,以期清晰地展示其合成研究现状,为卡巴他赛的合成研究及工业生产提供参考和借鉴。

MSPD-HPLC法分析云南红豆杉中的10-DAB Ⅲ和紫杉醇

为建立云南红豆杉(Taxus yunnanensis)中10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)和紫杉醇(Taxol)的分析方法,该研究采用基质固相萃取-高效液相色谱分析(MSPD-HPLC)对云南红豆杉中的10-DABⅢ及Taxol进行定量分析,探究硅胶、佛罗里硅土、酸性氧化铝、中性氧化铝、碱性氧化铝、C_(18)、C_(18)-ME、C_(18)-G1、C_(18)-HC、Diol、Xamide、Xion共12种样品预处理分散剂及各种分散剂的质量、洗脱剂的种类、洗脱剂的浓度、洗脱剂体积对两种成分分析的影响,并对优化后的条件进行方法学验证,同时与超声提取、热回流提取预处理方法进行比较分析证明其有效性。结果表明:(1)12种固相分散剂中,碱性氧化铝具有良好的目标化合物萃取物检出量,并且当碱性氧化铝与样品的质量比为3∶1、6 mL甲醇为洗脱剂洗脱时,10-DABⅢ和Taxol的萃取检出量较高。(2)建立的云南红豆杉枝叶中10-DABⅢ和Taxol的分析方法具有良好的线性关系(r≥0.9999),10-DABⅢ和Taxol的检出限和定量限分别介于0.0239~0.0301μg·mL^(-1)和0.142~0.178μg·mL^(-1)之间;各目标分析物平均加样回收率在93.6%~109.0%之间。(3)比较分析显示,3种方法对2种紫杉烷类化合物的萃取检出量基本无差别,但MSPD法溶剂消耗少、操作简单,分析时间短,净化效率高,可应用于云南红豆杉原料的快速分析。该研究以碱性氧化铝为分散剂应用于云南红豆杉紫杉烷类化合物的萃取,建立了快速、高效的云南红豆杉中10-DABⅢ和紫杉醇的分析方法,为云南红豆杉中的紫杉烷类化合物的定量分析提供了依据。

超临界CO_(2)萃取南方红豆杉中挥发油和10-DABⅢ的工艺优化

目的 优化超临界CO_(2)萃取法萃取南方红豆杉中挥发油和10-DABⅢ的工艺条件。方法 以萃取时间、萃取温度、萃取压力、分离温度、物料与夹带剂的比例和夹带剂浸泡时间等为考察因素,以红豆杉中挥发油的得率和10-DABⅢ的含量为评价指标,采用正交试验优选最佳工艺条件。结果 最佳工艺条件为以无水乙醇为夹带剂,物料与夹带剂比例为1:3,萃取压力270 bar、萃取温度35℃、分离温度40℃,萃取时间2.5 h。红豆杉挥发油的得率为23.422%,10-DABⅢ的含量0.546‰。结论 所用工艺稳定、可行,可用于红豆杉中挥发油和10-DABⅢ的提取。

反相高效液相色谱法测定曼地亚红豆杉中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量的研究

目的:建立测定曼地亚红豆杉中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)的反相高效液相色潜法。方法:采用硅胶层析柱(BUCHI,Φ12mm×75 mm,40～63μm),以甲醇-水(1:1)为洗脱剂对曼地亚红豆杉提取液进行初步分离制备供试品溶液;HPLC 检测条件:SHIM—PACK VP—ODS 色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-水(45:55)为流动相,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为40℃,检测波长为232 nm。结果:10-DABⅢ浓度在0.04～4.00μg·mL^(-1)范围(r=0.9974),与峰面积呈良好线性关系(n=6);回收率(n=9)为99.5%～104.9%,RSD 为1.0%～1.8%。结论:曼地亚红豆杉提取液用硅胶柱层析后,多数高含量非目标物被分离,消除了高含量非目标物对10—DABⅢ测定的影响,HPLC 检测条件简单,获得满意的效果。

南方红豆杉枝叶中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的分离与纯化

目的:以南方红豆杉的枝叶为原料,研究其中活性成分10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)的分离和纯化条件,并进行优化筛选。方法:综合运用浸提、萃取(包括液液萃取和反萃取)、色谱分离和重结晶技术得到10- DABⅢ晶体,并采用UV,HPLC法进行分析鉴定。结果:得到了用以合成高效抗癌药紫杉醇的前体——10-DABⅢ晶体,纯度可达91%,整个工艺收率达7．9%。结论:本实验为首次采用该工艺路线得到10-DABⅢ和紫杉醇,总收率达60%以上,可用于进一步的工业化研究。

四种不同品种红豆杉中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的含量测定

目的:测定国内主要4种不同品种红豆杉枝叶中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DABIII)的含量。方法:采用RP-HPLC法。色谱柱为C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(25∶75),检测波长为232 nm,柱温为32℃,流速为1.0 m L/min。结果:10-DABⅢ在进样0.1~5μg之间呈良好线性关系(r=0.999 8),平均回收率=99.10%,RSD=1.51%。结论:该法操作简便快速,准确度高,重复性好,可作为国内引种的不同品种红豆杉中10-DABⅢ的含量测定方法。

南方红豆杉菌根菌液体纯发酵培养产紫杉醇及10-去乙酰巴卡亭Ⅲ

从南方红豆杉菌根菌中筛选出产紫杉醇和紫杉烷类化合物10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DAB)的高产菌株,对分离获得的21株菌株进行了液体发酵培养实验,通过TLC、HPLC及LC-MS检测发现,有10株菌株具有产紫杉醇及紫杉烷类化合物的能力,其中4株菌株中产10-DAB分别为260.05、92.88、393.27、70.52μg/L,但未检出产紫杉醇;6株中产紫杉醇分别为434.94、1 242.19、200.65、360.77、317.90、29.82μg/L,但未检出产10-DAB,说明南方红豆杉的各种菌根真菌虽具有合成紫杉醇或紫杉烷类化合物的能力,但各自所合成化合物有差异,不同种类的菌根菌可能分别参与了紫杉醇生物合成的不同环节,即南方红豆杉菌根高含量紫杉醇的生物合成可能是多种菌根菌协同参与作用的结果,且其中的高产菌株具有发酵生产紫杉醇的潜力。

HPLC法测定东北红豆杉枝叶中10-脱乙酰巴卡亭的含量

目的 测定东北红豆杉枝叶中 10 -脱乙酰巴卡亭 (10 - deacetylbaccatin ,10 - DAB )的含量。方法 采用 RP- HPL C法。 C1 8色谱柱 (2 5 0 mm× 4 .6 mm ,5μm) ,甲醇 -乙腈 -水 (2 0∶ 30∶ 5 0 )作为流动相 ,检测波长为 2 33.9nm。结果 10 - DAB 在 0 .0 0 4 75～ 0 .0 38μg与峰面积线性关系良好 (r=0 .9990 ) ,平均回收率为 10 0 .5 % ,RSD为 2 .0 %。结论 方法操作简便、灵敏度高、专属性强 ,可用于红豆枝叶中 10 - DAB 的质量控制。

光照强度对南方红豆杉紫杉醇含量及相关酶基因表达的影响

[目的]研究光照强度对南方红豆杉中紫杉醇和10-脱乙酰基巴卡丁Ⅲ(10-deacetylbaccatin III,10-DABⅢ)含量变化,探讨其可能的环境适应机制。[方法]通过高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定不同遮光率(50%、70%和90%)分别遮光30、60、90d后紫杉醇和10-DABⅢ含量;通过PCR法测定相关酶基因表达量。[结果]光照强度能够影响紫杉醇的积累。遮光0~90d,空白组紫杉醇和10-DABIII含量呈下降趋势,各遮光组呈先升后降的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。其中50%和70%遮光组明显高于空白组及90%遮光组(P<0.01)。此外,光照对紫杉二烯5α-羟基化酶(taxane 5α-hydroxylase,TH5α)、紫杉烷7β-羟基化酶(taxane 7β-hydroxylase,7β)和紫杉烷14β-羟基化酶(taxane 14β-hydroxylase,14OH)基因表达也存在明显影响,70%遮光组TH5α基因表达量随遮光时间延长而增加,14OH基因则下降(P<0.01)。[结论]本研究初步得到光照因素可以影响南方红豆杉次生代谢产物的合成及相关酶基因的表达,适当的遮光(70%遮光)可以提高紫杉醇的含量,且遮光3月内紫杉醇含量稳定。

高速逆流分离红豆杉中紫杉烷类化合物及相关抗炎活性研究

目的 建立高速逆流色谱法分离纯化红豆杉中10-DABⅢ类和紫杉醇类部位化合物的方法,分析化合物相关抗炎活性.方法 通过调整分离系统中的流速和溶剂比例筛选出最佳的高速逆流分离系统.薄层色谱法和高效液相色谱法鉴定和检测10-DABⅢ和紫杉醇含量.通过CCK-8法测定化合物用药的安全浓度.并用化合物作用于脂多糖诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症模型,ELISA检测IL-10的分泌量.结果 高速逆流色谱最佳分离系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-乙醇-水=5:5:5:1:6.5,薄层色谱和高效液相色谱法测定化合物1为含量41.32%的10-DABⅢ类部位化合物,化合物2为48.70%的紫杉醇类部位化合物.化合物1和化合物2在浓度3.125~12.5μg/ml间无明显细胞毒性.ELISA结果显示浓度为12.5μg/ml的10-DABⅢ类部位化合物促进IL-10分泌,10-DABⅢ类部位为抗炎活性成分部位.结论 此方法稳定、高效、经济实用,为红豆杉有效部位的提取分离提供有效的研究依据.

红豆杉枝叶干燥及贮存工艺研究

研究了红豆杉(Taxus chinensis)鲜枝叶采收后的干燥、贮存方式及贮存期限对枝叶中有效产物10-DABⅢ和紫杉醇含量的影响,结果表明:(1)采用不同干燥方法处理时,红豆杉样品中10-DABⅢ、紫杉醇含量具有显著差异(P<0.05)。同一温度干燥时,干燥时间越长,样品中10-DABⅢ和紫杉醇含量下降越快;在一定温度范围内(约25～100℃)干燥时,干燥温度越高,则干燥时间越短。产物含量与枝叶干燥时间和温度呈负相关;(2)贮存期间发生霉变的红豆杉鲜枝叶和枝叶干粉其产物含量均会逐渐降低,且新鲜枝叶中产物含量降低较快;(3)贮存期间红豆杉枝叶中10-DABⅢ产物较紫杉醇不稳定,更易受环境条件影响而降解。(4)长期贮存的红豆杉枝叶的含水量应控制在10%以内,贮存环境应该阴凉、干燥,且贮存时间不宜超过1 a。

叶面施肥对红豆杉枝叶生长和枝叶中产物累积的影响

以5 a生同一无性系红豆杉Taxus chinensis原料林作为研究对象,在常规根系施肥的基础上,以提高红豆杉枝叶生物量为目的,开展叶面施肥试验,研究施用叶面肥种类及频数对红豆杉原料林枝叶生长和枝叶中产物累积的影响。结果表明:不同叶面肥处理对红豆杉枝条生长均具有促进作用。方差分析表明不同叶面肥处理的红豆杉分枝数量和枝条总长度具有显著差异,各处理对分枝数量和枝条总长度的促进作用大小依序均为:A2>A3>B3>A1>CK。相关性分析表明枝条总长度与主枝长度、分枝数量均具有极显著的线性正相关关系,增加主枝长度和增加分枝数量均能增加枝条总长度,即提高红豆杉枝叶产量。含量检测结果显示开展叶面施肥处理不会对红豆杉10-DABⅢ、紫杉醇量产生显著影响。

UPLC法同时测定曼地亚红豆杉中3个有效成分的含量

目的:建立UPLC法同时测定曼地亚红豆杉中10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)、三尖杉宁碱和紫杉醇的含量。方法:采用Acquity BEH Shield RP 18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为水(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0～8 min,78%A;8～11 min,78%A→65%A;11～44 min,65%A),流速为0.2 mL.min-1,检测波长为227 nm,柱温25℃。结果:本方法可在44 min内完成10-DABⅢ、三尖杉宁碱和紫杉醇3个成分的色谱分析,且各成分色谱峰之间具有良好的分离度;10-DABⅢ、三尖杉宁碱、紫杉醇的线性范围分别为0.010～0.100μg(r=0.9996)和0.003～0.030μg(r=0.9995),0.080～0.800μg(r=0.9992)和0.001～0.010μg(r=0.9997),0.020～0.200μg(r=0.9997)和0.004～0.040μg(r=0.9998);平均加样回收率(n=9)分别为99.8%,97.8%,100.4%。结论:以10-DABⅢ、三尖杉宁碱和紫杉醇为目标成分时,5月份为5年生曼地亚红豆杉的最佳采收期。该方法灵敏度高、准确、简便快速,可用于曼地亚红豆杉的质量控制。

采收季节与年龄对曼地亚红豆杉主要活性成分的影响

目的:揭示采收季节与年龄对曼地亚红豆杉枝叶中紫杉醇(taxol)和10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(10-deacetyl baccatin Ⅲ,10-DABⅢ)含量的影响,为曼地亚红豆杉适时采收提供依据。方法:2009年3月26日至2010年1月26日每隔2个月采集经标记的25株三年生植株和25株五年生植株枝叶,采用HPLC测定不同年龄与生长季节曼地亚红豆杉枝叶中紫杉醇和10-DABⅢ的含量。结果:不同采收年龄的曼地亚红豆杉紫杉醇和10-DABⅢ含量存在显著差异,五年生植株显著高于三年生植株;不同采收季节的曼地亚红豆杉紫杉醇和10-DABⅢ含量也存在显著差异,全年中5月份的含量最高,紫杉醇最高含量为0.56mg.g-1,10-DABⅢ最高含量为0.32mg.g-1。结论:曼地亚红豆杉枝叶在5月份采收最佳,而采收年龄尚需根据主要活性成分及生物量积累规律作进一步研究。