RP-HPLC法同时测定血清中的卡马西平及其代谢产物环氧卡马西平

建立同时测定血清中卡马西平（CBZ）及10.11-环氧卡马西平（CBZE）血清浓度的反相高效液相色谱法;样本血清加入氯硝西泮（CZP）内标液,经乙腈直接沉淀蛋白,流动相为：乙腈：水=33：67,柱温30℃,经ZORBAX SB-C18（4.6×150mm,5μm）,流速1.0ml·min^-1,色谱柱洗脱、分离,于230nm紫外波长下检测;在一定浓度范围内（CBZ：0.4-80.0mg.L-1;CBZE：0.4-20.0mg·L^-1）各CBZ及CBZE与内标峰高之比与浓度比呈良好的线性关系,回收率高于95%（95%-99%,n=5）,日内和日间变异小于6%（2.37%-4.10%,2.81%-5.87%,n=5）;本方法作简便、迅速,血清用量少。方法回收率高,重线性好,专属性好,可用于常规治疗药物监测,也可用于卡马西平及其代谢产物环氧卡马西平的药动学研究。

高效液相色谱法同时测定人血浆中唑尼沙胺、苯妥英、卡马西平及环氧卡马西平的浓度

目的建立同时测定人血浆中抗癫癎药物唑尼沙胺（ZNS）、苯妥英（PHT）、卡马西平（CBZ）及其活性代谢物环氧卡马西平（CBZE）浓度的高效液相色谱法。方法以氯唑沙宗为内标,血浆样品经甲醇蛋白沉淀后,取上清液直接进样测定。色谱柱采用Phenomenex SynergiTMFusion-RP C18柱（250mm×4.6mm,4μm）,柱温：40℃;流动相为甲醇∶乙腈∶0.1%三氟乙酸水溶液（27∶15∶58,V/V/V）,流速为1.2mL/min,双波长双通道检测,215nm测定PHT和CBZE,235nm测定ZNS和CBZ。结果血浆内源性杂质和常用合并用药对样品测定无干扰,色谱峰分离良好。ZNS、PHT、CBZ和CBZE的最低定量限为1.0μg/mL,线性范围分别是1~80μg/mL,1~50μg/mL,1~25μg/mL和1~10μg/mL,相关系数（r）均大于0.999 1。平均方法回收率分别为94.77%~113.41%,各组分的日内、日间RSD均小于7.21%。样品在25℃放置4h,4℃放置24h,反复冻融3次均保持稳定。结论该方法具有良好的准确性、精密性和灵敏性,且操作快速、简便,适用于临床抗癫癎药物血药浓度的监测。

卡马西平及其代谢产物10,11—环氧卡马西平血药水平与临床疗效

动物试验证实卡马西平(CBZ)的中间代谢产物10,11-环氧卡马西平(E-CBZ)有止惊作用,国内尚未见有关血E-CBZ水平与临床关系的报道。本文对78例单用CBZ治疗的癫痫儿童血CBZ及E-CBZ水平测定的结果进行分析如下。

中国癫痫患者细胞色素P4503A亚家族基因多态性对卡马西平及环氧化卡马西平代谢率的影响

目的探讨不同CYP3A4基因型患者中卡马西平(CBZ)和环氧化卡马西平(CBZE)不同的代谢特点,以指导临床抗癫痫治疗中个体化用药。方法选取58例适用CBZ的癫痫患者血样本,运用多聚酶链式反应(PCR)及测序方法,检测CYP3A4基因的变异。按基因位点发生的杂合与纯合,患者可分为基因杂合子弱代谢者(M型)和基因纯合子快代谢者(w型)。运用高效液相色谱(HPLC)法及血药浓度监测仪测定外周血中CBZ和CBZE的血药浓度。比较M型和w型两组患者CBZ和CBZE血药浓度的差异。结果在58例样本测序后发现CYP3A4基因位于内含子10中的一个SNP(rs2242480),其中M型频率为32.76%(19例),未发现外显子的突变。w型携带者CBZ及CBZE血药浓度的平均值明显低于M型CBZ及CBZE血药浓度的平均值。CBZ血药浓度值基因型比较,差异有统计学意义(t=-5.566,P=0.000)。结论CYP3A4突变等位基因携带者CBZ代谢减慢,相应CBZ和CBZE血药浓度增高,应相对给予小剂量CBZ,提高临床用药的可靠性、安全性和有效性。

LC-MS/MS法测定血液中卡马西平及其代谢物

目的建立LC-MS/MS法测定血液样品中卡马西平及其代谢物10,11-二氢-10,11-环氧卡马西平和10,11-二氢-10-羟基卡马西平的方法。方法以1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐离子液体为萃取剂处理血液样品,通过超声辅助萃取,采用ZORBAX Eclipse Plus C18,95?色谱柱分离,流动相A为含0.1%甲酸、10 mmol/L乙酸铵的水溶液,流动相B为混合有机溶剂(V_(乙腈)∶V_(甲醇)=2∶3),梯度洗脱,流速1.00 mL/min,采用电喷雾离子源、正离子模式,多反应监测模式进行检测。结果血液样品中卡马西平及其代谢物10,11-二氢-10,11-环氧卡马西平和10,11-二氢-10-羟基卡马西平在相应范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.9956,检出限分别为3.00、0.40和1.30 ng/mL,定量限分别为8.00、1.00和5.00 ng/mL,提取回收率为76.00%~106.44%,日内和日间精密度均小于16%。采用本方法从死亡案件的血液样品中检出卡马西平和主要代谢产物10,11-二氢-10,11-环氧卡马西平成分,质量浓度分别为2.71μg/mL和252.14 ng/mL。结论本方法灵敏度高、选择性好,适用于血液样品中卡马西平及其代谢物的检测,可应用于卡马西平相关的法医学鉴定。

冰片对卡马西平在家兔体内药代动力学的影响

目的观察冰片对卡马西平(carbam azep ine,CBZ)及10,11-环氧化卡马西平(10,11-epoxide carbam azep ine,ECBZ)在家兔体内药动学过程的影响。方法CBZ和冰片灌胃给药,高效液相法检测家兔血浆和脑脊液中CBZ及ECBZ的浓度,并计算药动学参数。结果冰片和CBZ合用可使CBZ的药动学参数T12(ka)、Tpeak、AUC增大而Ka和CL减少;ECBZ的药动学参数T12(ke)和Tpeak增大而Ke减少;ECBZ的脑血比提高。结论冰片可提高CBZ的生物利用度,减慢代谢,并促进血脑屏障对ECBZ的通透性。

甘草对大鼠体内卡马西平药代动力学的影响

目的:研究甘草对卡马西平及其代谢产物10,11-环氧卡马西平在大鼠体内的药代动力学影响。方法:12只实验大鼠随机分为生理盐水对照组和甘草实验组,甘草提取物(0.5 g/kg,1次/d)连续给药7 d后,卡马西平灌胃给药后按时间点连续采样,采用HPLC法测定卡马西平及其代谢产物。计算并比较主要药动学参数。结果:对照组和实验组的卡马西平主要药动学参数Cmax、tmax、t1/2、AUC0→24 h、AUC0→∞、MRT差异均无统计学意义(P>0.05),而10,11-环氧卡马西平的Cmaxt、max和AUC0→24 h同样无统计学意义(P>0.05)。结论:甘草连续给药7 d后不影响卡马西平在大鼠体内的药代动力学。

冰片对卡马西平在小鼠体内分布的影响

目的:观察冰片对卡马西平(CBZ)及10,11-环氧化卡马西平(ECBZ)在小鼠体内分布的影响。方法:CBZ和冰片灌胃给药,高效液相色谱法检测小鼠血浆和脑、心、肾、肝、脾、肺、脂肪、骨骼肌等组织中CBZ及ECBZ的浓度,并计算有关的药动学参数。结果:合用冰片使CBZ在脑、肺、肝、脾等组织前60min内的含量明显增高,在血浆、脑、骨骼肌、脾、脂肪组织的相对摄取率(Re)和峰浓度比(Ce)均大于1。ECBZ在血浆、心、脑、肝、肾、脾、肌肉、脂肪组织前60min内的含量也明显增高,在脑、骨骼肌、脾、脂肪组织的Re和Ce均大于1。结论:冰片可提高CBZ和ECBZ在小鼠各组织中分布的靶向性。

HPLC-UV法同时测定卡马西平及其主要代谢物的血药浓度

目的建立同时测定卡马西平及其主要代谢物体内血药浓度的HPLC—UV法。方法以氯唑沙宗为内标，血样经乙醚-二氯甲烷（1：2）提取，流动相为甲醇-水（47：53），色谱柱为ZORBAX Plus C18（4．6mm×150mm，5μm），流速为1．0mL·min^-1，柱温为30℃，检测波长为215nm。结果卡马西平（CBZ）、10，11-环氧卡马西平（CBZE）和10，11-二羟基卡马西平（CBZ—diol）的线性范围分别为0．5—20．0，0．05—5．00和0．05—5．00μg·mL^-1，定量下限分别为0．50，0．05和0．05μg·mL^-1。CBZ，CBZE，CBZ—diol的低、中、高浓度回收率均约在80％，66％，60％，其日内、日间相对标准差均在±15％。210名单用CBZ患者体内CBZ，CBZE和CBZ—diol浓度范围分别为2．12～11．06，0．11～3．35和0．12～7．05μg·mL^-1；CBZ标准化血药浓度范围为0．17～2．26μg·kg·mL^-1·mg^-1。结论本方法稳定、快速、灵敏度高，专属性强，可用于常规治疗药物监测及卡马西平体内代谢研究。

盐酸小檗碱对大鼠体内卡马西平及其代谢产物药动学的影响

目的:研究盐酸小檗碱(BBR)与卡马西平(CBZ)合用对大鼠体内CBZ及其代谢产物10,11-环氧卡马西平(ECBZ)药动学的影响。方法:大鼠随机分为CBZ单用组和BBR低、中、高剂量合用组,经灌胃2周BBR后,HPLC法测定大鼠口服CBZ后CBZ及ECBZ的血药浓度,3P97药动学软件计算药动学参数。结果:与CBZ单用组相比,BBR合用组的CBZ与ECBZ的药动学参数差异无显著性(P>0.05)。结论:体内研究表明合用BBR对大鼠口服CBZ的药动学无显著影响。

高效液相色谱法同时测定人血浆中卡马西平、奥卡西平及其活性代谢产物的浓度和临床应用

目的:建立同时测定人血浆中卡马西平(CBZ)、10,11-环氧卡马西平(CBZE)、奥卡西平(OXC)和单羟基卡马西平(MHD)浓度的高效液相色谱法,并将其应用于临床中卡马西平、奥卡西平及其活性代谢产物血药浓度的测定。方法:以苯巴比妥为内标,血浆经乙醚-二氯甲烷(2∶1)提取。色谱柱为WondaSil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇∶水=50∶50,柱温30℃,流速1.0mL·min^(-1),检测波长215 nm,进样量20μL。结果:卡马西平、10,11-环氧卡马西平、奥卡西平和单羟基卡马西平标准曲线范围分别为0.1~20,0.05~10,0.05~20,0.2~50 mg·L^(-1),最低检测限分别为0.1,0.05,0.05,0.2 mg·L^(-1),日内、日间精密度均小于10%。结论:该方法灵敏准确,简便快速,适用于卡马西平、奥卡西平及其代谢产物血药浓度检测。

卡马西平及其主要活性代谢产物在大鼠体内的药动学研究

目的建立同时测定大鼠血浆中卡马西平(CBZ)及其主要活性代谢产物10,11-环氧化卡马西平(CBZ-E)浓度的方法,并研究大鼠口服卡马西平后二者的体内药动学特征。方法采用反相高效液相色谱法测定。色谱柱为Inertsil~ ODS-3 C18,流动相为甲醇-乙腈-0.05%三氟乙酸(27∶15∶58,V/V),流速为1.2 mL·min^(-1),柱温为38℃,紫外检测波长为210 nm。大鼠口服给药(30 mg·kg^(-1))后于不同时间点取血测定血浆中药物的量并计算其药动学参数。结果 CBZ、CBZ-E血药浓度在0.1～10.0μg·mL~(^(-1))范围内线性关系良好,且准确度、精密度满足生物样品分析的要求。大鼠口服给药后CBZ、CBZ-E的T_(max)为(2.07±0.45)、(4.00±0. 82) h,C_(max)为(3.60±1.03)、(2.24±0.84)μg·mL^(-1),AUC_(0-24)h为(20.39±3.89)、(27.80±7.57)μg·mL^(-1)·h。结论该方法简便、经济、准确、专属性强,为临床CBZ和CBZ-E治疗药物浓度监测及二者体内药动学研究提供了有效的技术支持。

柴贝止痫汤及其主要入血成分柴胡皂苷a对癫痫模型大鼠卡马西平脑内分布的影响

目的观察柴贝止痫汤及柴胡皂苷a治疗难治性癫痫的可能作用机制。方法 88只大鼠随机分为空白组12只及模型组、卡马西平组、柴贝止痫汤+卡马西平组、柴胡皂苷a+卡马西平组19只。除空白组外,其余各组采用侧脑室注射海人酸制备癫痫大鼠模型。卡马西平组给予卡马西平混悬液0.75 ml/(100 g·d),柴贝止痫汤+卡马西平组给予柴贝止痫汤0.5 ml/(100 g·d)和卡马西平混悬液0.75 ml/(100 g·d),柴胡皂苷a+卡马西平组给予柴胡皂苷a混悬液0.25 ml/100 g和卡马西平混悬液0.75 ml/100 g,模型组及空白组给予等量羧甲基纤维素钠混悬液。给药60天后比较各组海马P糖蛋白、Mdr1a mRNA表达及全脑卡马西平(CBZ)、1011-环氧化卡马西平(CBZE)含量。结果与空白组比较,模型组海马P糖蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,卡马西平组、柴胡皂苷a+卡马西平组海马P糖蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),柴贝止痫汤+卡马西平组海马P糖蛋白表达降低(P<0.05);与卡马西平组比较,柴贝止痫汤+卡马西平组和柴胡皂苷a+卡马西平组海马P糖蛋白表达均降低(P<0.05),柴贝止痫汤+卡马西平组和柴胡皂苷a+卡马西平组海马P糖蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。模型组Mdr1a mRNA表达较空白组升高。卡马西平组的Mdr1a mRNA表达高于空白组(P<0.05),空白组、模型组MDR1a mRNA表达分别为卡马西平组的0.36倍、0.87倍。柴贝止痫汤+卡马西平组较卡马西平组Mdr1a含量降低(P<0.01),为卡马西平组的0.14倍。与卡马西平组比较,柴贝止痫汤+卡马西平组CBZE含量升高(P<0.01),柴胡皂苷a+卡马西平组CBZE含量降低(P<0.01),且柴贝止痫汤+卡马西平组和柴胡皂苷a+卡马西平组CBZ差异无统计学意义(P>0.05);与柴贝止痫汤+卡马西平组比较,柴胡皂苷a+卡马西平组CBZ、CBZE含量均降低(P<0.01)。结论柴贝止痫汤联合卡马西平可降低癫痫模型大鼠海马Mdr1a/P糖蛋白表达,促进CBZ、CBZE入脑,对CBZE作用突出,柴胡皂苷a在其中不发挥主要作用。

高效液相色谱法同时测定人血浆中6种抗癫痫药物及两种活性代谢物的浓度

目的建立了同时测定人血浆中扑米酮（PRI）、拉莫三嗪（LTG）、苯巴比妥（PB）、苯妥英（PHT）、奥卡西平（OXC）、卡马西平（CBZ）压两种活性代谢物单羟奥卡西平（MHD）、环氧卡马西平（CBZE）浓度的HPLC方法。方法以盐酸普萘洛尔为内标，血浆样品经蛋白沉淀法处理后直接进样测定。色谱柱采用Agilent RX—C8柱（4．6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇-乙腈-体积分数0．1％三氟乙酸水溶液（20：13．5：66．5）。双波长双通道检测，在215nm测定PRI，LTG，MHD，PB和CBZE，235nm测定OXC，PHT和CBZ。结果PRI，LTG，MHD，PB，CBZE，OXC，PHT和CBZ的线性范围分别是5-50，1-25，1～50，5-100，1～10，0．5～25，1—50，1—25mg·L^-1。平均方法回收率分别为98．7％，97．0％，97．9％，102．9％，100．0％。99．2％，100．1％和101．7％。各待测组分的日内、日间RSD均小于11．6％。结论本法操作简便，结果准确，适用于临床治疗药物监测。

CBZ和CBZE血药浓度个体差异与CYP3A5~＊3基因多态性的相关性分析

目的探讨卡马西平(CBZ)药物代谢个体差异性的遗传学机制,从而指导临床抗癫痫治疗中的个体化用药。方法选取确诊为癫痫并适用CBZ的患者58例。首先利用PCR技术扩增患者外周血中包含等位基因CYP3A5*3(rs776746)的基因片段;其次采用基因测序法确定该等位基因各基因型的分布,将包含原始碱基(A)的基因序列归为A组,而将只含有突变碱基(C)的基因序列归为B组;最后,应用高效液相色谱法测定两组患者外周血中CBZ及其代谢产物10,11-环氧化卡马西平(CBZE)的血药浓度。采用t检验,比较A、B两组患者CBZ和CBZE血药浓度的差异。结果 A组患者CBZ的浓度明显低于B组(P<0.01);A组患者CBZE的浓度明显高于B组(P<0.05)。CYP3A5*3的基因多态性与CBZ及其代谢产物CBZE的血药浓度相关,CYP3A5*3突变纯合型CBZ代谢减慢,血药浓度相应增高,应给予相对小剂量的CBZ,以提高临床用药的安全性。结论 CYP3A5*3的基因多态性可能作为临床治疗中CBZ剂量个体化的一项重要参考依据。