t(6;11)染色体易位肾细胞癌中Alpha基因片段的克隆及启动子活性分析

目的：构建包含不同Alpha基因片段的重组报告质粒和Alpha1-TFEB融合基因表达质粒,并评价Alpha基因启动子活性。方法：利用软件对Alpha基因进行启动子预测;采用PCR技术扩增出5种不同长度的Alpha基因片段和正常TFEB基因启动子序列pTFEB,构建含Alpha基因片段和pTFEB的重组报告质粒;采用脂质体转染法将其分别转染至人胚肾293T细胞;通过荧光素酶活性检测确定Alpha基因的启动子活性。同时构建含Alpha1-TFEB融合基因表达质粒,转染293T细胞后,采用Western blot法检测转染前后TFEB蛋白的表达水平。结果：成功构建含不同Alpha基因片段和pTFEB的重组报告质粒。与pGL3-Basic质粒转染组进行比较,Alpha1、Alpha2、Alpha3、Alpha4、Alpha5质粒转染组的荧光素酶活性显著增高（P〈0.01）;与正常TFEB基因启动子进行比较,Alpha1、Alpha2、Alpha5的荧光素酶活性明显增高（P〈0.01）;与pGL3-Enhancer质粒转染组进行比较,pGL3-Enhanc-er-Alpha1-TFEB表达质粒组TFEB蛋白的表达明显升高。结论：t（6;11）染色体易位肾细胞癌中Alpha基因具有启动子活性,可促进TFEB表达,Alpha5片段最强活性区域位于643~693位碱基序列。