11β-HSD1在炎性反应、肝癌的发生发展与免疫中作用的研究进展

11β-羟基类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)在与代谢有关的炎性疾病,以及免疫中可通过调节糖皮质激素(GC)的合成发挥抗炎或促炎作用。11β-HSD1的整体表达和活性可受促炎细胞因子的诱导,这一过程依赖于NF-κB信号通路并由其基因(HSD11B1)P1和P2启动子的利用水平最终决定。此外,11β-HSD1在肝细胞癌中通过降低葡萄糖摄入和糖酵解抑制肝细胞癌的增殖,并通过调节GC的水平参与胸腺中T细胞的发育和血管生成。了解11β-HSD1在炎性疾病、癌的发生发展、免疫中的分子调控机制有利于探究相关疾病的发生发展。

糖尿病大鼠内脏脂肪组织表达的11β-HSD1改变

目的:研究糖尿病大鼠内脏脂肪细胞11β羟类固醇脱氢酶(11β-HSD1)的表达与代谢特性。方法:34只6周龄雄性 180 g Wistar大鼠,随机分成3组:链脲左菌素合并高脂饮食构建糖尿病组(T2DM;18只)、高脂饮食组(FD;8只)和正常对照组(NC;8只)。T2DM组再设亚组:胰岛素增敏剂罗格列酮组(RDM,6只),11β-HSD1抑制剂生胃酮组(CDM,6只)和观察组(DM,6只)。各组行腹腔糖耐量试验(IPGTT),同时测定血糖、血脂(TG,TCh)、胰岛素和皮质酮。试验结束后处死大鼠并取腹腔网膜脂肪标本,液氮保存。RT-PCR、western-blotting和免疫组化分析11β-HSD1mRNA和蛋白表达;用近似梯型面积公式计算葡萄糖及其刺激下的胰岛素浓度曲线下面积(AUC-G,AUC-I)及与胰岛素的比值(AUC-I／G),评价胰岛素敏感性。结果:(1)FD组体重较其他各组明显增加,P<0．05。糖尿病老鼠成模前后体重明显降低,2种药物处理后对体重无大影响。DM组空腹胰岛素浓度(FINS)、BG、TG、TCh和皮质酮(F)均高于FD组和NC组,并高表达11β-HSD1, P<0．05。(2)CDM组和RDM组的血皮质酮(F)、FINS和TG明显低于用药前和DM组,且CDM组TG、TCh降低明显高于RDM组,均P<0．05。(3)IPGTT显示CDM组和RDM组的胰岛素分泌峰值较基础值增加高于DM组;2种药物对 11β-HSD1表达无影响。(4)DM、FD和NC组11β-HSD1表达与F、FINS、TG、TCh和(AUC-I／G)明显相关。结论:(1)高脂和小剂量STZ诱导的糖尿病大鼠内脏脂肪11β-HSD1高表达,伴胰岛素抵抗和血脂异常。(2)内脏脂肪11β-HSD1高表达可能是2型糖尿病和代谢综合征的发病机制之一。

小鼠11β-HSD1基因真核表达载体的构建及应用

目的构建小鼠11β-羟类固醇脱氢酶(11β-HSD1)基因的慢病毒真核表达载体PLJM1-11β-HSD1-GFP,建立小鼠前体脂肪细胞(3T3-L1)高表达11β-HSD1基因的稳定感染细胞株,为11β-HSD1基因的功能研究奠定基础。方法利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从小鼠肝脏c DNA中扩增11β-HSD1开放阅读框ORF,构建针对11β-HSD1基因的真核表达载体,转化感受态DH5α菌株,抽提质粒并进行测序鉴定。用测序成功的质粒和慢病毒包装质粒共同转染293T细胞,产生慢病毒并转染3T3-L1细胞。根据绿色荧光效率挑取单克隆细胞团筛选出稳定细胞株,通过Western blot鉴定PLJM1-11β-HSD1-GFP转染成功。结果经酶切、PCR及测序验证,PLJM1-11β-HSD1-GFP真核表达载体构建成功,并包装慢病毒,绿色荧光效率90%以上,并利用其慢病毒悬液成功感染3T3-L1细胞,筛选出的稳定感染细胞株的3T3-L1细胞成功高表达11β-HSD1蛋白。结论成功构建了11β-HSD1基因的真核表达载体,并建立高表达11β-HSD1的稳定感染细胞株PLJM1-11β-HSD1-GFP-3T3-L1,为进一步研究11β-HSD1基因的功能,特别是在肥胖中的研究奠定了基础。

雌性11β-HSD1敲除小鼠肠道类器官体外研究

目的:研究雌性11β-HSD1敲除小鼠肠道类器官功能改变。方法:分离年龄性别匹配的C57BL/6J小鼠和11β-HSD1敲除小鼠的肠道组织。细胞流式定量分析肠道上皮层干细胞、祖细胞、潘氏细胞分别所占比例。实时定量PCR检测干细胞和潘氏细胞的标志基因表达情况。分离小鼠肠上皮隐窝单位进行体外3D类器官培养,观察类器官增殖率及类器官分化程度。免疫荧光染色研究小肠类器官干细胞及潘氏细胞的定位和定量。结果:11β-HSD1敲除小鼠与野生组相比,其小肠上皮所含潘氏细胞数显著增高,干细胞数目无明显差异,祖细胞数目增多,肠道干细胞标志基因Lgr5在小肠上皮的表达有增高趋势。同时在大肠上皮组织中有类似的结果,11β-HSD1敲除组大肠干细胞、祖细胞数目及Lgr5基因表达均增高。体外研究结果显示,小肠隐窝成类器官比例有增高趋势,11β-HSD1敲除组增殖分化出的类器官对比野生组具有更复杂的结构及更多数目的类隐窝区域,但大肠隐窝类器官培养结果未见显著差异。对小肠类器官的干细胞及潘氏细胞染色发现,11β-HSD1敲除小鼠肠道类器官含有更多的潘氏细胞,干细胞数目亦有增多趋势。结论:11β-HSD1敲除后小鼠肠道细胞组成发生改变,在小肠上皮组织中,潘氏细胞数目显著增多;在大肠上皮组织中,干细胞、祖细胞数目及干细胞标志基因表达量均显著增加。体外研究显示,11β-HSD1敲除组小肠类器官包含更多的潘氏细胞,类器官具有更强的增殖及分化能力。

猪11β-HSD1真核过表达载体的构建及其在Hepa1-6细胞中的表达

11β-羟类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)可使无生物活性的皮质酮催化为有活性的皮质醇,本试验利用长白猪肝脏组织提取的RNA反转录出11β-HSD1基因的cDNA,通过反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术和DNA重组技术,将11β-HSD1基因构建到pcDNA3.1真核表达载体上,构建了11β-HSD1-pcDNA重组质粒。通过PCR扩增、酶切电泳和测序分析的方法对重组的质粒进行了鉴定,并将其转染了Hepa1-6细胞,通过RT-PCR检测了其过表达强度。试验结果表明,成功构建了猪11β-HSD1-pcDNA真核过表达载体,为转基因动物的研究奠定了基础。

肠上皮11β-HSD1特异性敲除小鼠的小肠上皮屏障功能的研究

目的:探究小鼠肠上皮11β-羟类固醇脱氢酶(11β-hydroxysteroid dehydrogenase,11β-HSD1)基因特异性敲除对小肠上皮屏障功能的影响。方法:在C57BL/6J小鼠构建肠上皮特异性11β-HSD1敲除模型,野生型对照组和11β-HSD1敲除组分别给予高脂饮食喂养(第6周开始,喂养8周)。通过免疫组化方法观察小鼠小肠上皮绒毛、隐窝、杯状细胞数量、紧密连接蛋白-1(zona occludens-1,ZO-1)和炎症标志物F4/80的变化。结果:11β-HSD1基因敲除能够改变高脂饮食肥胖小鼠的绒毛长度和杯状细胞数量,显著减轻高脂饮食肥胖小鼠的小肠上皮炎症,改变紧密连接蛋白表达。结论:高脂饮食导致的小鼠小肠上皮屏障功能变化与11β-HSD1的作用密切相关。

11β/HSD1与糖脂代谢异常的相关关系研究

目的:探讨11β-羟基类固醇脱氢酶1(11β-hydroxysteroid dehydrogenase,11β/HSD1)对机体糖脂代谢异常的影响及其在肥胖和胰岛素抵抗发生发展过程中的作用及机制。方法:首先构建脂肪组织特异性敲除11β/HSD1(Fabp-11β/HSD1-/-)小鼠。然后选择5周龄Fabp-11β/HSD1-/-小鼠和正常C57BL/6小鼠各5只,建立高脂饮食诱导的肥胖(DIO)小鼠模型,分别在喂食5周和6周时进行腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT)和胰岛素耐量试验(ITT),喂食12周后处死并称量皮下及内脏脂肪重量,采用HE染色方法观察脂肪组织内脂肪空泡改变程度,取血检测血糖、甘油三酯、胆固醇、尿素、肌酐等血清生化指标,同时应用Western blot与QRT-PCR方法检测脂肪组织中11β/HSD1表达和糖脂代谢相关转录因子的蛋白表达情况。结果:脂肪组织特异性敲除11β/HSD1小鼠构建成功。高脂喂养12周后两组小鼠体重、内脏脂肪湿重没有明显差异。Fabp-11β/HSD1-/-组小鼠血清空腹血糖明显低于正常组,其他生化指标没有明显改变,但Fabp-11β/HSD1-/-组小鼠脂肪组织HE染色可见脂肪空泡比正常组小,且糖耐量和胰岛素敏感性明显高于对照组,Western blot与QRT-PCR结果显示Fabp-11β/HSD1-/-小鼠脂肪组织中11β/HSD1、PPAR-γ、C/EPB-α的蛋白表达量明显低于正常组。结论:在高脂饮食下脂肪组织内11β/HSD1表达的下调可减少脂肪细胞内脂滴的沉积,一定程度上改善机体对胰岛素敏感性的下降。

11β-羟类固醇脱氢酶1型基因沉默对胰岛β细胞系NIT-1葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响

目的观察RNA干扰阻断胰岛β细胞系NIT-1中11β-羟类固醇脱氢酶1型(11β-HSD1)表达对细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)的影响。方法pSuper质粒为载体,构建针对11β-HSD1基因的质粒oligo886、oligo866和乱序对照质粒oligoScr886,转染NIT-1细胞,RT-PCR和蛋白印迹法检测11β-HSD1mRNA和蛋白表达。oligo886重组质粒转染25 mmol/L葡萄糖培养基中的NIT-1细胞,测GSIS。结果转染oligo886和oligo866质粒的NIT-1细胞11β-HSD1mRNA分别下降78.1%±2.9%和51.7%±2.7%,11β-HSD1蛋白的水平分别下降82.2%±2.1%和56.5%±2.0%。oligo866转染25 mmol/L葡萄糖培养基中的NIT-1细胞后,GSIS较对照组明显升高(P<0.01)。结论11β-HSD1基因沉默能改善NIT-1细胞的葡萄糖刺激胰岛素分泌能力,提示胰岛β细胞NIT-1通过11β-HSD1调节糖皮质代谢,参与葡萄糖刺激胰岛素分泌。

11β-羟类固醇脱氢酶在人肠癌中的表达

目的:观察11β-羟类固醇脱氢酶(11β-HSD)在肠癌中的表达。方法:12例确诊肠腺癌患者,术后立即取肿瘤组织和癌旁正常组织标本,采用半定量RT-PCR、Western-blotting等技术,以自身配对,研究11β-类固醇脱氢酶在肠癌中表达。结果:11β-羟类固醇脱氢酶(11β-HSD)两种同工酶在肠腺癌中表达不相同,在肿瘤组织中11β-HSD2表达明显减少,11β-HSD1在肿瘤与正常组织中表达无明显差异。结论:11β-HSD2可能与肠癌变有关。

腺病毒过表达及siRNA干扰人肝癌HepG2细胞对11β-羟基类固醇脱氢酶I表达的影响

目的观察腺病毒(Ad-11β-HSD1)过表达系统及特异性siRNA(siRNA-11β-HSD1)干扰人肝癌HepG2细胞对11β-羟基类固醇脱氢酶I(11β-HSD1)表达的影响。方法应用Ad-11β-HSD1以及siRNA-11β-HSD1转染人肝癌HepG2细胞,用实时荧光定量PCR及Western Blot检测11β-HSD1表达。结果转染72 h后,对照组及腺病毒过表达组细胞中均可见明显GFP荧光,且转染48 h后蛋白水平明显升高;siRNA干扰48 h后,mRNA及蛋白水平均明显降低。结论腺病毒转染可有效过表达11β-HSD1,而siRNA干扰可有效抑制11β-HSD1表达。

小鼠11β-羟类固醇脱氢酶敲除对肠道功能的影响

目的:探究小鼠11β-羟类固醇脱氢酶(11β-hydroxysteroid dehydrogenase,11β-HSD1)基因敲除对肠道功能的影响。方法:将C57/BL6为遗传背景的野生对照组及11β-HSD1基因敲除组各6只小鼠正常喂养至6~8周,观察小鼠及小肠组织大体变化,PCR及免疫组化确定其肠道功能及炎症变化。结果:11β-HSD1基因敲除能够显著改善肠道的炎症状态,减轻炎症,同时肠道黏膜通透性改变,肠道绒毛长度缩短,隐窝长度变长,杯状细胞数量增多,黏膜的屏障功能增强。结论:本研究成功建立了小鼠11β-HSD1基因敲除模型,证实了肠道在11β-HSD1基因敲除后炎症状态改善,为进一步11β-HSD1肠道组织特异性敲除提供了研究基础。

11β-羟基类固醇脱氢酶1在束缚应激大鼠下丘脑及海马的表达

目的观察应激大鼠下丘脑海马11β-羟基类固醇脱氢酶1（11β-HSD1）的表达变化,探讨11β-HSD1在HPA轴调节中的作用。方法将20只大鼠随机分为对照组、束缚应激组,用Western印迹杂交法观察二组大鼠下丘脑海马内11β-HSD1水平变化。结果束缚应激大鼠海马内11β-HSD1表达水平明显高于对照组（P〈0.05）,而下丘脑内11β-HSD1表达与对照组比较无统计学差异,但有增加趋势。结论束缚应激能够促进海马内11β-HSD1的表达,其表达增加可能与海马对HPA轴的负反馈调节有关。

利拉鲁肽对胰岛素抵抗大鼠模型胰腺11β-羟甾脱氢酶1表达的影响

目的探讨利拉鲁肽对胰岛素抵抗(IR)模型大鼠的胰腺糖皮质激素活化酶11β-羟甾脱氢酶1(11β-HSD1)与其相关酶己糖6磷酸脱氢酶(H6 PD)和糖皮质激素受体(GR)表达的影响。方法 40只大鼠随机分成空白对照组、利拉鲁肽组、饮食限制组、生理盐水组和生胃酮组,其中后4组先予10%果糖溶液造IR模型,然后各组继续果糖喂养并分别予皮下注射利拉鲁肽、生理盐水、饮食限制和生胃酮(非选择性11β-HSD抑制剂)灌胃干预,连续4周。每3 d记录大鼠体重、饮水和摄食量,饮食限制组根据利拉鲁肽组给予相应的饮食量。实验结束后比较体重增长比、空腹胰岛素(FIns)、三酰甘油(TG)和果糖胺,并分别通过荧光定量PCR和Western blot法检测胰腺11β-HSD1、H6PD、和GR的mRNA和蛋白表达。结果 10%果糖溶液喂养10周后IR模型各组与空白对照组相比,大鼠血清TG、FPG和FIns均升高,胰岛素敏感指数(ISI)降低(PF P G<0.05,PT G、PF Ins、PISI等均<0.01),体重差异无统计学意义。对IR模型各组干预4周后,与生理盐水组相比,利拉鲁肽组FIns、TG和体重增长比均降低,11β-HSD1、H6PD和GR蛋白表达均减少(均P<0.01);饮食限制组和生胃酮组虽然TG、体重增长比降低(均P<0.01)和FIns降低(P饮食限制组<0.01,P生胃酮组>0.05),但是11β-HSD1、H6PD和GR蛋白表达均无明显改变。IR模型各组比较mRNA表达均无显著变化。结论利拉鲁肽可改善IR大鼠模型高FIns血症、高TG血症和体重增长,同时减少该模型胰腺11β-HSD1、H6PD和GR的蛋白表达。

黄芪散及其拆方对T2DM大鼠胰岛素抵抗及肝组织11β-HSD1,PEPCK的影响

目的:通过糖皮质激素联合高脂喂养建立2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,观察黄芪散及其拆方对T2DM大鼠胰岛素抵抗及肝组织11β-羟基类固醇脱氢酶1(11β-HSD1),磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA与蛋白表达的影响。方法:SD大鼠适应性饲养1周后,将大鼠随机分为正常组,糖皮质激素组(GC),高脂饮食组(HFD),高脂+糖皮质激素复合模型组(HFD+GC),罗格列酮组,黄芪散处方1组(HQS-1,2.91 g·kg^(-1)),黄芪散处方2组(HQS-2,3.85 g·kg^(-1))和黄芪散原方组(HQS,2.96 g·kg^(-1)),每组8只。正常组和GC组大鼠喂以基础饲料,其他各组喂以高脂饲料。同时除正常组和HFD组给予等体积的生理盐水外,其他各组大鼠灌胃醋酸泼尼松龙(3.5 mg·kg^(-1),每天1次),并于1 h后灌胃相应受试药物。于给药10周后,测定各组大鼠空腹血糖(FBG)及胰岛素(FINS)含量,并计算胰岛素敏感指数(ISI);苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠肝脏病理变化;实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测肝组织中11β-HSD1,PEPCK mRNA和蛋白表达水平。结果:与正常组比较,HFD+GC复合模型组大鼠表现为高血糖、高胰岛素血症,肝细胞变性,肝11β-HSD1,PEPCK表达显著性升高(P<0.01),病理学检测发现大鼠肝脏组织的病变较为明显。与HFD+GC复合模型组比较,各受试药物均不同程度地降低糖尿病大鼠FBG,FINS水平,提高ISI水平(P<0.05,P<0.01),对肝组织病理学形态也有不同程度的改善。比较HQS-1,HQS-2和罗格列酮的作用幅度,黄芪散原方对FINS水平及肝组织病理形态的改善更明显。HQS及其拆方均可不同程度地降低肝11β-HSD1,PEPCK mRNA和蛋白水平(P<0.05,P<0.01),且黄芪散原方组对11β-HSD1的降低幅度优于其他各组。结论:黄芪散具有提高胰岛素敏感性、改善肝脏病理的作用,其发挥防治糖尿病及改善胰岛素抵抗的作用机制可能与降低11β-HSD1水平有关。

抑制11β-HSD1对滑膜成纤维细胞炎症因子表达的影响

目的观察体外在IL-1β诱导的炎症环境中,滑膜细胞中Ι型11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD1)活性在受到干预时,细胞中炎症因子及11β-HSD1表达受糖皮质激素的作用。方法采用SD大鼠原代滑膜细胞为研究对象,以IL-1β作为滑膜细胞炎症诱导因素。实验分为空白组;IL-1β组;IL-1β+皮质酮组;IL-1β+皮质酮+PF915275组;观察各组TNF-α、IL-1β、11β-HSD1表达变化,并分析培养基中活性皮质醇的含量,分析各指标间是否存在的调节关系。结果应用IL-1β诱导后滑膜细胞TNF-α、IL-1β表达显著升高,活性皮质醇转化小与对照无差异,11β-HSD1表达明显高于对照;同时存在皮质酮时,TNF-α、IL-1β表达受到明显抑制,炎症因子所诱发的11β-HSD1的表达升高也受到抑制,明显低于对照组;PF915275能够逆转皮质酮对炎症因子的表达抑制效应,表现为抑制后的TNF-α、IL-1β水平再度升高。11β-HSD1表达再度回升到单纯IL-1β诱导时的水平。结论前炎症因子可刺激滑膜细胞11β-HSD1表达上调,与糖皮质激素共存时可有效增强11β-HSD1转换活性,抑制炎症因子表达,同时下调炎症诱发的11β-HSD1表达升高,这可能是滑膜细胞内存在维持自稳的反馈性调节机制。

选择性抑制11β-HSD1的天然产物研究进展

11β-羟类固醇脱氢酶(11β-hydroxysteroid dehydrogenase,11β-HSD)是糖皮质激素的代谢酶。研究表明,抑制局部11β-HSD亚型11β-HSD1的高表达,降低糖皮质激素的局部效应,成为治疗糖尿病和代谢综合征的一种新策略,所以选择性11β-HSD1抑制剂的研究,将成为2型糖尿病新药开发的一个方向。天然产物是新药开发的宝库和源泉,综述近10年来关于选择性抑制11β-HSD1的天然产物的研究进展,以期为11β-HSD1抑制剂的研究开发提供参考。

11β-HSD1抑制剂改善db/db小鼠胰岛素敏感性的实验研究

目的探讨11β-HSD1抑制剂H8对db/db小鼠胰岛素敏感性的影响。方法实验动物40只分成5个组,每组8只,分别是db/db对照组(Dia组)、罗格列酮组(Ros组)、姜黄素组(Cur组)、姜黄素类似物H8组(H8组)、db/m对照组(Con组)。H8灌胃给药42 d后尾静脉采血检测葡萄糖耐量(OGTT)、胰岛素耐量(IPITT);在第0、1、3、6周尾静脉采血检测空腹血糖值;眼球取血检测胰岛素抵抗系数(HOM A-IR);酶学检测肝脏、脂肪中11β-HSD1活性;ELISA法检测血清中糖皮质激素水平。结果 OGTT结果显示,与Dia组相比较,Ros组和H8组各时间点血糖值均有所降低;IPITT结果显示,相对于Dia组,Ros组和H8组血糖值均有所下降;空腹血糖在给药后第1~6周,H8组与Dia组比较明显降低;与Dia组比较,Ros组、Cur组和H8组胰岛素抵抗指数(HOMA-RI)明显降低(P<0.001);与Dia组对比,H8组可以明显的抑制肝脏(P<0.01)和脂肪(P<0.01)中11β-HSD1的活性;与Dia组对比,H8组GC水平降低(P<0.001)。结论 11β-HSD1的抑制剂H8可以降低db/db小鼠肝脏GC水平,进而提高胰岛素的敏感性。

木樨草素等抗心肌缺血/再灌注损伤及抑制脂代谢和细胞凋亡作用研究

目的探讨香青兰中木樨草素、山奈酚和木樨草苷对大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)模型的保护作用及其抑制脂代谢相关酶11β-羟基类固醇脱氢酶1型(11β-HSD1)、溶血磷脂酸酰基转移酶(LPAATs)和细胞凋亡相关蛋白磷酸酯酶和张力蛋白同系物(PTEN)、蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHIP-2)的作用,探讨中药多成分、多靶点抗MIRI的机制。方法采用Langendorff装置,以洛-林二氏溶液为灌流液,通过停灌和复灌心脏建立MIRI模型,检测心率(HR)、左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、(-dp/dt)/(+dp/dt)、冠脉流量(CF)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌梗死面积。ELISA法测定LPAATβ和11β-HSD1活性。分光光度法测定PTEN和SHIP-2活性。结果木樨草素、山奈酚和木樨草苷保护HR,降低LDH过量释放,升高LVEDP、LVDP和(-dp/dt)/(+dp/dt),恢复CF,降低心肌梗死面积。LPAATβ、11β-HSD1、PTEN、SHP-2等蛋白活性受木樨草素等的抑制。结论木樨草素、山奈酚和木樨草苷具有通过抗脂代谢紊乱和抗细胞凋亡分子机制保护大鼠离体心脏MIRI的作用。

基于反向分子对接技术研究桂枝汤调和营卫的潜在作用靶点

目的:基于经方的"方证相应"关系和反向分子对接技术研究桂枝汤调和营卫的潜在作用靶点。方法:通过文献检索获得桂枝汤相关的活性成分,采用Pharm Mapper Server对活性成分进行反向分子对接,依据对接分数排序发现桂枝汤的潜在受体,通过Auto Dock Vina进行正向分子对接试验考察配体与受体分子之间的亲和力。然后选取75只大鼠随机分为正常组、模型组和桂枝汤高、中、低剂量组(12、8、4 g/kg),每组15只,除正常组外的其余各组大鼠均复制营卫不和模型;成模后,各组大鼠每天ig给药1次,连续5 d;结束给药后检测大鼠脂肪组织和肌肉组织中11β-羟类固醇脱氢酶1型(11β-HSD1)表达水平。结果:对桂枝汤的活性成分进行反向分子对接发现11β-HSD1为频繁出现的受体,正向对接试验证实乌拉尔甘草皂苷b、甘草次酸、生胃酮等活性成分与11β-HSD1有较高的亲和力。动物实验结果显示,模型组大鼠脂肪组织和肌肉组织中11β-HSD1的表达水平较正常组大鼠升高(P<0.05);桂枝汤高剂量组大鼠脂肪组织和肌肉组织中11β-HSD1的表达水平较模型组降低(P<0.05)。结论:桂枝汤调和营卫的机制与11β-HSD1有一定的相关性;应用反向分子对接技术可以为"方证相应"关系的研究提供一条可行的技术途径。

甘草次酸乳膏的制备及脂解作用研究

研究了甘草次酸乳膏(GAC)的制备及甘草次酸(GA)在体、体外的脂解作用。首先采用Franz扩散池筛选透皮吸收促进剂并制备GAC,然后进行GA在体、体外脂解作用实验,实验用Lee's指数和游离脂肪酸释放率评价脂解效果。体外释放实验表明GAC用3%尿素作为透皮吸收促进剂时释放量最大;在体实验中,GAC各剂量组中的Lee's指数增长率较空白组小;体外实验中,GA含量为0.1mg/mL时可使脂肪酸释放率增加502.7%,其他剂量组也不同程度的增加了脂肪酸释放率。结论是甘草次酸(GA)对脂肪在体和体外均有一定的分解作用。