甾体化合物RSA的11β-羟基化反应

Compound RSA 11β-Hydroxylation of %Curvularia lunata% was studied.The composition of hydroxylation products was analyzed.It was found that the conversion rate with protoplasts was increased conspicuously,the construction and quantity of hydroxylation products was not alteration,but the percentage was changed greatly.The 14α-OH percentage of protoplasts was 3.03 -fold than that of mycelia, the 11α-OH percentage was decreased 60%,and the conversion ratio of 11β-OH was more 1.29-fold than that of the mycelia.It affected the percentage of hydroxylation products when 2 mg/mL polyoxins were added into the mycelia conversion system.

甾体微生物转化C_(11)β-羟基化的研究进展

C11β-羟基化是甾体微生物转化中难以实现的一步反应。对甾体C11β-羟基化的机理及部分生理生化问题进行了讨论,对蓝色犁头霉和新月弯孢霉催化转化甾体C11β-羟基化的应用研究特点及其催化转化反应产物氢化可的松的工业生产现状及相关问题进行了评述,并对此技术开发前景进行了预测。

细胞稀释工艺转化甾体11β-羟基的研究

以相等溶氧速率系数KLa为基础将甾体 11β 羟基细胞稀释转化工艺由 2 5 0ml摇瓶放大到 2L、10L发酵罐。通过对通风量、接种量、种龄等发酵参数的研究 ,确定了细胞稀释转化工艺条件。在 10L发酵罐上 ,转化工艺为二级工艺 ,发酵温度 2 8℃ ,二级种子接种量 15 % ,罐压 0 .0 4～ 0 .0 5MPa ,搅拌转速 180～ 2 0 0r/min ,通风量 7L/min ,稀释比 1∶1,转化周期 2 4h ,氢化可的松转化率 74%～ 77%。测定了转化过程中底物和主产物

甾体C_(11)β-羟基生物转化菌株新月弯孢霉的筛选和鉴定

文章对甾体C11β－羟某化生物转化菌株－新月弯孢霉的生长和生物转化特征进行了研究。经过反复筛选，最终选出了一株氧化可的松转化率达30％的最优菌株。文中描述了新月弯孢霉菌体生长过程中，菌体干重与PH的变化情况，并通过正交实验确定了该菌株生长的最适培养基配方。经过研究，对新月弯孢霉菌株的生长和生物转化特性及其进行甾体C11β－羟基化生物转化过程有了初步的了解。

甾体11β-羟基生物转化新工艺的研究

通过分析 11β-羟基转化体系中反应介质和发酵液的影响 ,设计了一种将化合物 RS- 2 1醋酸酯转化为氢化可的松的新工艺。确定工艺条件为 :孢子接种浓度 1× 10 6/ m L ,2 8℃ ,摇床转速 (150～ 170 ) r/ min,培养 (17～ 2 1) h,培养液 p H值降至 3.8、菌体处于稳定期前期、菌丝干重达 7.2 mg/m L以上时 ,以 1∶ 1稀释比稀释 ,投料转化 2 4 h,β体转化率达 (75～ 76 ) %。

静息细胞连续两批次生物催化生产氢化可的松

以新月弯孢霉(Curvularia lunata)的Ⅱ级培养18 h的活菌丝作为C11β位羟基化生物催化剂,在选定的含有微粒结晶甾体底物(0.2%,质量分数)17α,21-二羟基孕甾-4-烯-3,20-二酮的磷酸缓冲液(0.05 mol/L,pH 6.0)介质体系中,在经过连续两批次约55 h的转化反应,底物转化率可维持在较高水平,产物氢化可的松净收率可达60%;从菌丝回收的底物RS可再利用。此工艺提高了生物催化剂的利用率,具有工业应用价值。

高效液相色谱测定甾体化合物的微生物转化过程

对甾体的几种典型微生物转化反应如11α-,11β-,16α-羟基化、1,2位脱氢、A环芳构化以及不对称还原等产物有效地进行反相高效液相色谱分离。同时还定量测定微生物1,2位脱氢所形成的16β-甲基-17α-羟基孕-1,4,9(11)-三烯-3,20-二酮。

新月弯孢霉转录组分析及甾体C_(11)β-羟化酶基因鉴定

[目的]分析新月弯孢霉转录组,对甾体C_(11)β-羟基化酶基因进行鉴定。[方法]结合生物信息学和蛋白结构学对转录组分析,利用AlphaFold2进行蛋白结构模拟,与已知人源醛固酮合酶hCYP11B 2进行结构比对。[结果]在转录组中,共获得24943条Unigenes,平均长度1915 bp。18792条(75.34%)可以匹配到蛋白数据库获得注释信息。Unigenes在各数据库中注释的基因数分别为:在COG数据库中有5615条(22.51%),在GO数据库中有4424条(17.74%),在KEGG数据库中有6322条(25.35%),在Swiss-Prot数据库中有11348条(45.50%)。通过初筛获得39个基因。经过AlphaFold2的结构模拟,与人的甾体醛固酮合酶(hCYP11B2)结构比对进行复筛,共26条甾体C_(11)β-羟基化酶相关基因被鉴定出来。[结论]该新月弯孢霉菌株具有甾体C_(11)β-羟基化的能力,通过对其转录组进行分析,共鉴定出26条甾体C_(11)β-羟基化酶相关基因。

甾体微生物转化:糖皮质激素氢化可的松生物转化的鲁棒性及其研究应用

结合作者所在实验室半个世纪从事的甾体微生物转化研究,聚焦国内外仅次于抗生素制药的甾体激素药物中的糖皮质激素药物氢化可的松(hydrokotisone,HC)生物转化研发过程,应用工业微生物鲁棒性理论,结合国内外HC半合成路线,评述工业生物转化产生HC的研究进展,特别是该过程所使用的2株具有较高鲁棒性、可以直接实现向甾体底物Reichstein’s化合物S(RS/RSA)引入C11β-羟基的丝状真菌,新月弯孢霉(Curvularia lunata)AS 3.4381和蓝色犁头霉(Absidia orchidis)AS 3.65的研究情况.本实验室近20年的研究重现了新月弯孢霉60%的HC得率的国外报道水平,具有在国内替换低效率蓝色犁头霉AS3.65工艺路线的可行性;8个研发案例充分说明提高我国糖皮质激素HC工业生产水平,无论是改良菌株,还是改进生物转化工艺的开发应用,实现微生物甾体转化工业的经济性鲁棒性是可行的.