从生物转化液中分离提取11-α-羟基-坎利酮的工艺研究

[目的]考察了4种分离提取方法对生物转化液中转化产物11-α-羟基-坎利酮提取率的影响。[方法]4种分离提取方法分别为文献法、浸泡法、洗脱法和匀浆法。[结果]11-α-羟基-坎利酮主要游离于转化液或附着于菌丝体外表面,洗脱法和浸泡法对11-α-羟基-坎利酮具有较好的分离效果。采用400 ml乙酸乙酯洗脱,11-α-羟基-坎利酮提取率为96.0%;经乙酸乙酯浸泡90 min,11-α-羟基-坎利酮提取率达到98.8%。[结论]该方法简单高效,具有工业化应用潜力。

11β-羟基坎利酮的合成研究

报道了两条以11α-羟基坎利酮为原料制备11-位羟基构型反转的目标化合物路线。11α-羟基坎利酮经过DMSO-(Ms SO2)2O氧化,硼氢化钠还原得到目标化合物,收率26.5%。11α-羟基坎利酮经过Mitsunobu反应制备11β-对硝基苯甲酰氧基坎利酮,然后水解得到目标化合物,收率65.7%。

微生物转化法合成15-羟基坎利酮

目的:应用赭曲霉羟化酶系统对坎利酮进行生物转化,合成其羟基化衍生物。方法:应用赭曲霉对坎利酮进行生物转化,获得一个硫酸显红色的产物SIPI-CANR。结果:确定SIPI-CANR化合物结构为15-羟基坎利酮。结论:赭曲霉羟化酶系统对坎利酮进行生物转化,能够合成15-羟基坎利酮,其为一新化合物。

11α-羟坎利酮的高特异性生物转化合成

坎利酮是合成心血管疾病药物Eplerenone的重要中间体,其关键的C11α-羟化反应可以由微生物转化完成。本实验室保藏的根霉(Rhizopus sp.SIPI-0602)可特异性地将坎利酮转化为化合物SIPI-11。通过测定与分析SIPI-11的UV、MS和NMR图谱数据,确定化合物SIPI-11为11α-羟坎利酮。摇瓶转化工艺研究表明,底物投料浓度不高于6g/L时,11α-羟坎利酮的转化率可达到90%以上。

16α-羟基泼尼松龙的合成工艺改进

针对原16α-羟基泼尼松龙合成工艺原料成本高、消除反应选择性差等问题,开发了一种改进工艺。以21-羟基孕甾-1,4,9(11),16-四烯-3,20-二酮-21-醋酸酯为原料,经氧化、溴羟化、脱溴及水解等4步反应合成目标化合物16α-羟基泼尼松龙,降低了生产成本及三废排放量,并使反应总收率达到82.2%。产物结构经1H NMR、13C NMR和MS(ESI)等数据确证。改进后的合成工艺具有反应选择性好、成本低、总收率高等优点。

双液相体系下对黑根霉C_(11)α-羟基化16α,17α-环氧孕酮的研究

研究了双液相体系下黑根霉对16α,17α-环氧孕酮C11α-羟基化的生物转化能力.考察了8种有机溶剂对16α,17α-环氧孕酮和C11α-羟基-16α,17α-环氧孕酮的溶解度的差异,比较了它们对黑根霉细胞毒性的大小.结果表明,乙酸丁酯毒性最小,乙酸丁酯与水双液相体系对转化比较有利,达到了44.2%.同时考察了氧促进剂H2O2和外加电子受体维生素K3对提高该体系转化率的影响,分别提高了8%和6%.

11α,17-二羟基-及11β,17-二羟基-雄甾-1,4-二烯-3-酮-17-腈羟基保护的研究

11α ,17 二羟基 及 11β ,17 二羟基 雄甾 1,4 二烯 3 酮 17 腈以乙烯基正丁醚进行保护 ,得到双羟基和 11 及17 单羟基保护产物 ,对因保护基引入手性碳而产生的双羟基保护产物的立体异构体进行了分离纯化和波谱鉴定 ;

微生物合成11α-羟基-16α,17α-环氧孕酮的动力学

对耐温黑根霉菌丝体催化16α,17α-环氧孕酮生成11α-羟基-16α,17α-环氧孕酮的反应体系进行了研究,考察了不同反应时间、不同菌体量和底物质量浓度对11α-羟化反应的影响,建立了相应的动力学模型,其方程为r=0.031 5ST1.05+ST。结果表明:提高菌体质量浓度有利于提高反应速率;底物浓度与反应初速率的关系与米氏方程相似。

11α-羟基孕酮半琥珀酸酯合成方法的改进

11α-羟基孕酮半琥珀酸酯是制备免疫测定剂的一种重要化合物。本文报道了它的一种改进合成方法,即以DMAP为催化剂,11α-羟基孕酮和琥珀酸酐在二氯甲烷溶剂中回流反应5h,收率可达82.2％,产物的分离得以简化。

17β-羟基-3-甲氧基雌甾-1,3,5(10),8-四烯-11-酮的14位差向异构体转化条件初探

目的 探讨 17β -羟基 - 3-甲氧基雌甾 - 1,3,5 (10 ) ,8-四烯 - 11-酮的 14位差向异构体转化条件。方法 在不同酸性、碱性条件及不同温度下观察对 17β -羟基 - 3-甲氧基雌甾 - 1,3,5 (10 ) -四烯 - 11-酮的互变影响。结果 反应液酸碱性和反应温度与 17β -羟基 - 3-甲氧基雌甾 - 1,3,5 (10 ) ,8-四烯 - 11-酮互变有关。结论 在合成 17β羟基 - 3-甲氧基雌甾 - 1,3,5 (10 ) ,8-四烯 - 11-酮中 ,应选择适当的反应条件 。

11β,17α-二羟基-17-丙酰基-1,4-雄甾二烯-3-酮的合成

目的制备17-丙酰基功能化的甾体化合物11β,17α-二羟基-17-丙酰基-1,4-雄甾二烯-3-酮。方法以泼尼松龙为原料,经5步反应合成目标物。结果和结论总收率为67.4%,通过NMR、MS等确证了中间体和目标物的结构。

HPLC法同时测定消炎利胆片中4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮和迷迭香酸的含量

目的采用反相高效液相色谱法同时测定消炎利胆片中4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮和迷迭香酸的含量。方法使用Capcell C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（18∶82）,流速为0.8mL/min,检测波长230nm,柱温为30℃。结果 4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮和迷迭香酸进样量在0.02672-0.4008μg和0.05656-0.8484μg范围内,线性关系良好;平均回收率（n=6）分别为96.55%和97.88%,RSD分别为1.4%和2.7%。结论本法简便、准确,重复性好,可为消炎利胆片的质量控制提供实验依据。

皮质酮对大鼠股骨头微环境11β-HSD1表达及骨重建影响的初步实验研究

目的研究内源性糖皮质激素对大鼠股骨头微环境11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD1)表达的影响,并结合股骨头病理变化探讨相应的机制。方法将60只SD大鼠分成对照组、1月组、3月组(每组20只)。后两组分别于腹腔内注射醋酸皮质酮(8mg/kg),2次/周,各干预1个月及3个月。此后取股骨头标本免疫组织化学,实时定量PCR方法进行11β-HSD1含量测定,苏木素-伊红(HE)染色观察股骨头组织学表现。结果免疫组织化学,实时定量PCR方法检测出1月组及3月组11β-HSD1含量均高于对照组(P<0.05);HE染色结果表明,与对照组相比,1月组出现骨髓腔脂肪细胞比例升高(P<0.05),3月组出现软骨下骨小梁密度降低(P<0.05)。结论增加皮质酮可促进大鼠股骨头微环境11β-HSD1表达和出现软骨下骨小梁密度降低。

深层培养中赭曲霉菌球对坎利酮11α羟化反应影响的研究

菌球的松散程度和菌球直径通过调节发酵培养基的初始pH和接种量来实现。实验结果证明直径越小,结构越松散的菌球可以获得高11α羟基坎利酮转化率。7L罐可以形成颗粒小,且松散的菌球。终了转化率92%,且节省了发酵时间。

新月弯孢霉AS3·4381对新型甾体底物C_(11)β-羟基化

应用本实验室保藏的新月弯孢霉Curvularia lunataAS 3.4381对新型甾体化合物(Ⅰ)(16α,17β-二甲基-17-丙酰基雄甾-1,4-二烯-3-酮)作为底物进行生物转化C11β-羟基化反应的研究。实验研究结果表明,采用Ⅱ级发酵的工艺,收获新月弯孢霉菌丝体作为生物催化剂,在磷酸缓冲液介质体系中,对化合物Ⅰ的C11位实现β羟基化,生成皮质激素药物。测试数据TLC,MS,IR及1H NMR证明了该产物的化学结构,表明生物转化产物为C11β-羟基-16α,17β-二甲基-17-丙酰基雄甾-1,4-二烯-3-酮。

深层培养中赭曲霉菌球催化坎利酮11α羟化反应条件的研究

研究了氮源、碳源对11α羟基坎利酮转化率的影响。从赭曲霉菌球形态的角度解释了菌球直径、结构与11α羟基坎利酮转化率之间的关系。发现外部菌丝粗壮,分布均匀,内部菌丝虽有分化,但分化不明显的菌球能获得高11α羟基坎利酮转化率。

固定化赭曲霉NG0216细胞羟基化坎利酮

初步研究赭曲霉NG0 2 16固定化细胞的催化转化坎利酮11α羟基化的条件。实验表明优化的固定化方法为:4 %的海藻酸钠包埋15 %的湿菌体,在4 %的氯化钙溶液中固化1h。催化转化条件为:8g/L坎利酮,pH 6 0 ,2 8℃。连续转化3批,每批的转化率均超过85 %。转化获得的羟基化坎利酮粗品经乙酸乙酯提取分离,三次重结晶后,采用质谱、核磁共振、元素分析等手段对羟基化坎利酮进行结构表征。鉴定结果表明,得到结晶的羟基化坎利酮含量为99 7% ,结晶呈浅黄色针状,其表面光滑;结构表征结果确认所制备的物质为11α羟基化坎利酮,其熔点为2 4 0℃,在乙酸乙酯中的比旋光度为 12 8°。

黑根霉RN-M246催化甾体的11α-羟基化培养基研究

应用微生物转化法,以黑根霉RN-M246催化底物雄甾-4-烯-3,17-二酮的11α-羟基化反应,考察了发酵培养基对转化的影响,分别从碳源、速效有机氮源、迟效氮源、无机氮源及pH值5个方面优化了发酵培养基。确定优化的发酵培养基(g·L-1)为:葡萄糖30、蛋白胨20、冷榨豆粉10、柠檬酸三铵1、磷酸氢二钾5、pH值5.0,在优化条件下,可提高转化率约13%,最终转化率达48.4%。

根霉转化坎利酮的培养基优化

以坎利酮转化率为指标,优化了根霉转化坎利酮的营养需求。通过摇瓶培养和高效液相色谱分析等技术研究了不同碳源、氮源、无机盐以及一些重要因素的浓度对转化率的影响。通过L9(34)正交试验对培养基组合进行优化,优化后的培养条件为:葡萄糖30 g/L,玉米浆25 g/L,酵母膏12 g/L,KH2PO41.5 g/L。在优化后的条件下,坎利酮的转化率为87.68%,较优化前提高9.06%。