重组结核分枝杆菌11kDa蛋白皮肤试验与体外干扰素γ检测方法的比较

目的对重组结核分枝杆菌11k Da蛋白(以下简称重组11k Da蛋白)皮肤试验与体外干扰素γ(interferonγ,IFNγ)检测方法进行比较。方法选取32名健康志愿者进行重组11k Da蛋白和TB-PPD的同体双臂皮肤试验,分别于不同前臂皮内注射0.1 ml重组11k Da蛋白(10μg/ml)和0.1 ml TB-PPD(50 IU/ml),注射后24、48、72 h测量志愿者皮肤反应(硬结和红晕)的两个直径(最大径和最大径的垂直径),并取其均值。于皮肤试验前采集32名志愿者的静脉血,分离外周血单个核细胞,采用T-SPOT.TB试剂盒进行检测。比较重组11k Da蛋白皮肤试验与体外IFNγ检测结果的一致性。结果以注射72 h后的硬结反应统计重组11k Da蛋白皮肤试验中阳性人数为8名,阳性率为25%,TB-PPD皮肤试验中阳性人数为24名,阳性率为75%,其中强阳性人数为8名;体外IFNγ检测(T-SPOT.TB)阳性人数为7名,阳性率为22%。重组11k Da蛋白皮肤试验结果和体外IFNγ检测结果一致性良好(Fleiss Kappa值=0.913),这两种检测方法的阳性率远低于TB-PPD皮肤试验(Fleiss Kappa值=0.266)。结论重组11k Da蛋白皮肤试验的检测结果与体外IFNγ检测结果基本一致,有潜力成为结核分枝杆菌潜伏感染者的新筛查方法。

B19病毒11kDa蛋白对Hela细胞内NF-κB信号通路的影响

11 kDa蛋白作为B19病毒的一个非结构蛋白,可能在病毒复制周期中发挥重要作用。为了研究11 kDa蛋白对细胞内NF-κB信号通路的影响,首先通过原核表达纯化获得GST-11 kDa融合蛋白,并制备免疫血清,利用免疫血清验证了11 kDa蛋白在Hela细胞呈胞浆定位。荧光素酶检测系统发现11 kDa蛋白能上调细胞内NF-κB转录活性,Western blotting进一步表明11 kDa蛋白能够引起细胞内IκB-α的降解。同时,11 kDa蛋白还能够上调细胞内炎性因子IL6启动子的活性,而该反应主要依赖于NF-κB通路。结果表明,11 kDa蛋白通过参与细胞内信号途径激活相关炎性因子的表达。

重组结核分枝杆菌ESAT6-CFP10和11kDa蛋白的动物效力分析

目的比较重组结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)ESAT6-CFP10(简称EC)和11kDa蛋白对Mtb感染豚鼠的皮试反应差异。方法将Mtb H37Ra和卡介苗(BCG)分别致敏豚鼠5周后,每只豚鼠皮内分别注射0.25、0.5和1μg重组EC、11kDa蛋白及5 IU纯蛋白衍生物(purified Protein Derivative,PPD),比较24和48 h后的皮试反应大小。结果对Mtb致敏豚鼠,0.25、0.5和1μg剂量的重组EC和11kDa在24和48 h均呈强阳性皮试反应,且剂量-效应关系明显;相同剂量的重组EC和11kDa的皮试反应强度相当。对BCG致敏豚鼠,PPD皮试反应为强阳性,而不同剂量EC和11kDa皮试反应均为阴性。结论豚鼠模型上,重组EC和11kDa结合PPD皮试,可区分Mtb感染和BCG接种,且前两者检测效果相当。

重组结核杆菌11kDa蛋白在生殖器结核中的诊断价值研究

目的:探讨重组结核杆菌11kDa蛋白对生殖器结核的诊断价值。方法:选择2009年以"盆腔包块性质待查"为入院诊断的患者共50例,患者入院后行术前常规检查和血清CA-125测定、胸片、盆腔B超检查和11kDa皮试,并行腹腔镜检查,术中取组织送常规病理。结果:经腹腔镜和病理检查,确诊为生殖器结核15例,子宫内膜异位症9例,卵巢恶性肿瘤8例,盆腔炎症性包块18例。11kDa皮试结果显示:15例生殖器结核中14例皮试结果为阳性,1例阴性;35例非结核病患者中仅2例皮试结果阳性,33例阴性;11kDa皮试法诊断生殖器结核的敏感度93.3%,特异度94.3%。常规胸片检查中15例生殖器结核中4例提示肺部见结核阳性病灶,35例非结核中无1例提示肺部占位。结论:11KDa在诊断盆腔结核的敏感度高特异性强,对生殖器结核术前有较好的鉴别诊断价值,联合胸片的检查结果诊断准确率更加提高。

重组11 kDa蛋白对结核分枝杆菌感染豚鼠皮肤试验的动态观察

目的探讨重组11 kDa蛋白(简称11 kDa)对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb,简称结核菌)感染豚鼠皮试反应的动态变化和意义。方法在攻毒Mtb H37Rv后将豚鼠分为治疗组和对照组。治疗组为潜伏感染的复发模型,在攻毒后2周开始抗生素治疗,结束后再注射地塞米松诱导结核复发。对照组为自然感染模型,所有动物不予药物干预。在攻毒后第2、3、4、6、10、14、22周,每组取若干豚鼠进行11 kDa和结核菌素纯蛋白衍生物(purified protein derivative of tuberculin,TB-PPD,简称PPD)皮试,记录24 h反应大小;同时将部分动物安乐死后解剖,检测脾肺脏器的活菌载量。结果对照组豚鼠的11 kDa皮试在感染后第2周阳性率达到87.5%(7/8),第3周全部转阳;PPD皮试则在第4周才全部转阳。豚鼠皮试反应大小与其体内结核菌载量在感染初期呈较一致的变化趋势。治疗组豚鼠的11 kDa皮试在抗生素停药后不同时间点的反应均大于PPD皮试,阳性率总体上也高于PPD皮试。结论重组11 kDa蛋白皮试对自然感染动物的诊断时间早于PPD皮试,对结核潜伏感染动物具有优于PPD的诊断敏感性,因此有望发展为结核病诊断和潜伏感染筛查的新方法。