食品级商业酶转化人参皂苷Rb1制备人参皂苷Rd研究

在11种不同厂家食品级商业酶中筛选出转化人参皂苷Rb1制备Rd活性最佳的酶,并利用单因素实验考察反应时间、酶量、初始pH及温度对转化效率的影响。结果显示,β-葡聚糖酶(庞博)的转化活性最高,其最佳转化条件为反应时间2 h,酶量0.3 mg/1.5 mg Rb1,pH 5.5和55℃,Rd转化效率为98.01%±1.19%(n=3)。β-葡聚糖酶(庞博)酶转化法是一种高效、绿色、安全的人参皂苷Rd制备方法。

UPLC-MS/MS测定心悦胶囊中6个皂苷类成分的含量

目的:采用超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)建立心悦胶囊中主要成分人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_(1)、拟人参皂苷F_(11)、人参皂苷Rd和20(S)-人参皂苷F1的含量测定方法。方法:使用Waters ACQUITY BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^(–1),柱温为40℃,电喷雾电离源,多反应离子监测扫描方式进行检测。结果:6个成分分别在质量浓度为9.638~963.800、9.839~983.900、9.951~995.100、5.270~1054.000、9.608~960.800、4.905~981.000 ng·mL^(–1)时与峰面积线性关系良好(r>0.998),平均加样回收率(RSD)分别为96.9%(2.2%)、100.1%(1.5%)、97.2%(1.8%)、98.5%(2.3%)、96.6%(2.8%)、100.2%(3.5%)。结论:所建立的方法快速、准确、灵敏度高,可用于心悦胶囊中西洋参茎叶总皂苷的质量控制。

大鼠尿中人参皂苷Rd及其代谢物的LC-MS研究

目的 探讨人参皂苷Rd在大鼠体内的代谢产物及转化途径。方法 选择SD大鼠6只，单剂量口服和静脉给予人参皂苷Rd，分段收集给药前和给药后0～24h尿样，将尿样分时段合并后采用旋转薄膜蒸发浓缩，以固相萃取小柱纯化处理，采用高效液相色谱-串联飞行时间质谱进行检测。结果 通过比较给药前后的TOF总离子流图，对尿中推测的代谢物和标准物质的出峰时间及相关化合物选择离子扫描二级质谱图进行了比较分析，结果在尿中发现了7种代谢产物，系统分析了这些代谢产物的代谢转化规律及可能结构。结论 大鼠尿中人参皂苷Rd的主要转化途径为氧化、水解、结合及异构化代谢反应。

人参皂苷Rd高产突变株Paecilomyces bainier sp229-7的生长特性和生物转化

目的通过研究突变株拟青霉菌sp229-7(Paecilomyces bainiersp229-7)的生长及转化底物情况,探讨突变株转化三七茎叶总皂苷的高效性。方法在不同条件下,运用摇瓶转化法考查菌株生长和转化底物特性;分别采用静息态细胞、胞外酶以及粗酶液,测定其对底物转化情况。结果菌体12～48 h之间生长最旺盛,36 h加入底物转化率最高,加入底物后72 h转化基本结束,转化产物只有人参皂苷Rd,底物投料量至少可以达到20 mg/mL,克分子转化率达80%以上,转化温度27℃～32℃之间最佳。静息态细胞、胞外酶以及粗酶液都可以将人参皂苷Rb1转化为人参皂苷Rd。结论与文献报道相比,Paecilomyces bainiersp229-7突变株具有良好的底物耐受性和专一性,快速生长的后期是底物投料的最佳时机,Rb1转化为Rd的时间缩短为3 d,投料量至少增加20倍,显著提高了转化效率,可望应用于工业生产。突变株的高转化效率可能与转化酶由细胞内产生并部分分泌到胞外有关,增加了酶与底物接触机会,避免了产物在胞内过量积累。

应用洗脱-推挤逆流色谱法高效分离制备人参皂苷Rg_1、Rf及Rd

目的运用洗脱-推挤逆流色谱技术(EECCC)分离制备人参皂苷Rg1、Rf及Rd。方法以乙酸乙酯-正丁醇-0.1%甲酸水(2︰1︰3,v/v)为溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相,仪器转速为1 250 r/min,操作体积流量为40 mL/min,切换体积为2 400 mL。结果在此条件下,经一步纯化从300 mg样品中分离纯化得到71 mg人参皂苷Rg1、21 mg人参皂苷Rf及53 mg人参皂苷Rd,经高效液相色谱分析,纯度分别达到96.2%、94.3%和95.1%。结论 EECCC制备方法快速,简单。对于分离分配系数高的物质十分有效。

人参皂苷Rd-羟丙基-β-环糊精包合物的制备和表征

对人参皂苷Rd-羟丙基-β-环糊精包合物的制备和表征进行研究。采用溶剂-搅拌法制备包合物,然后用差示扫描量热法、红外光谱法以及显微镜法对得到的产物进行表征,3种表征方法均表明包合物已经形成。用高效液相色谱法测定包合物中人参皂苷Rd的含量为7.53%,包合物在25℃下的溶解度比人参皂苷Rd增大了24.3倍,在37℃下的溶解度增大了219倍。包合物水溶性良好,说明羟丙基-β-环糊精作为药物载体可以提高药物溶解度。

人参皂苷Rb1对4-羟基壬烯醛诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的影响

目的研究人参皂苷Rb1对4-羟基壬烯醛(4-HNE)诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)氧化损伤的保护作用及其机制。方法采用CCK-8法检测人参皂苷Rb1、4-HNE处理浓度。将ARPE-19细胞随机分为对照组、Rb1处理组、4-HNE组和4-HNE+Rb1处理组。采用光学显微镜观察各组细胞形态结构,同时采用荧光显微镜检测细胞内的活性氧自由基(ROS)含量。采用Western印迹检测细胞凋亡相关因子B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bax蛋白表达水平。结果CCK-8检测的结果显示人参皂苷Rb1浓度为100μmol/L时ARPE-19细胞的增殖率最高,具有较好的保护作用,因此选择100μmol/L人参皂苷Rb1进行后续实验。与4-HNE组比较,50.0μmol/L和100.0μmol/L人参皂苷Rb1组细胞活力明显升高(P<0.05)。与对照组比较,4-HNE组细胞内ROS含量明显增加(P<0.05),Bax蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量降低。与4-HNE组比较,4-HNE+Rb1处理组细胞内ROS含量显著减少(P<0.05),Bax蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量升高。结论人参皂苷Rb1能改善4-HNE诱导的视网膜色素上皮细胞氧化损伤,其机制可能与人参皂苷Rb1减轻细胞凋亡有关。

绞股蓝总皂苷中原2α-羟基人参二醇皂苷分离和鉴定

绞股蓝 [Gynostemmapentaphyllum (Thumb .)Marko]总皂苷经硅胶柱层分离得一结晶性成分 ,经化学分析及光谱测定 ,其化学结构为 3β 槐糖 ,2 0 β 芸香糖 原 2α 羟基人参二醇皂苷。

人参皂苷Rd的抗癌机制研究进展

人参皂苷Rd是二醇型人参皂苷在人体肠道内的主要代谢产物之一,是三七、人参、绞股蓝等的提取物,具有广泛的生物活性。对心脑血管、神经系统、免疫系统及抗肿瘤方面等作用独特。由于人参皂苷Rd的药理作用的多样性和安全性,已成为人们关注的焦点,但因人参皂苷Rd的结构复杂,化学合成至今尚未成功,需从植物药中提取以满足医疗和科研的需要,但因植物中人参皂苷Rd的量较低,从植物中提取的方法难以满足需要。因此,国内外着重对有效获取人参皂苷Rd方面进行了大量研究,而忽略了其本身的抗癌功效。肿瘤防治现已成为世界性难题,据专家预测,由于我国目前环境污染和吸烟问题仍然严重,在2025年前癌症总的发病率不大可能下降,所以癌症是一个必须面对的多发病、常见病,而人参皂苷Rd由于其天然、价廉、低毒性,且在诱导癌细胞凋亡方面疗效显著,为抗癌药物新药开发提供了新的道路。故本文对人参皂苷Rd的抗癌机制研究进行了详细综述,旨在为人参皂苷Rd防治肿瘤及放化疗毒副反应提供理论依据。

人参皂苷Rd对非家族性高血脂SD大鼠血管保护的作用机制

目的探讨人参皂苷Rd对非家族性高血脂SD大鼠血管保护作用及机制。方法采用全自动生化仪分析、病理学观察、实时荧光定量聚合酶链式反应、蛋白免疫印迹、酶联免疫吸附测定分别在生化、组织水平上检测。结果与高脂饲料组相比,人参皂苷Rd不同剂量组(30、35、40、45 mg/kg)大鼠血清中胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白含量下降、动脉粥样硬化指数改善、血管壁厚度降低、血管腔面积改善;人参皂苷Rd不同剂量组血管组织中一氧化氮合酶、卵磷脂胆固醇酰基转移酶、胆固醇7-羟化酶mRNA和蛋白表达均显著上调;血清中NO含量增加,而血浆内皮素、血管性血友病因子含量明显下降。结论人参皂苷Rd对非家族性高血脂SD大鼠血管具有保护作用,呈剂量依赖性。

Microbacteriu estmeraromaticum GS514菌株中一种人参皂苷β-葡萄糖苷酶的分离及其性质研究

人参土壤微生物Microbacterium esteraromaticum GS514显示出良好的人参皂苷转化能力.采用DEAE-cellulose DE-52阴离子交换树脂,从人参土壤微生物Microbacterium esteraromaticum GS514中分离一种使人参皂苷Rb1水解为人参皂苷Rd的β-葡萄糖苷酶,并进行酶性质研究.结果表明,该酶分子量约为58.7kDa,在pH值6.5和40℃时显示出最强酶活性.

人参皂苷元25-OH-PPD的修饰及结构研究

目的设计合成3β,12β,20,25-四羟基-达玛烷(25-OH-PPD)的衍生物,并确定其结构。方法以25-OH-PPD为原料,以DCC、DMAP为催化剂,在室温下与饱和脂肪酸进行酯化反应得到一系列不同位置取代的25-OH-PPD酯类衍生物,经IR、13C-NMR、HR-MS确证其结构。结果与结论设计并合成了8个未见文献报道的人参皂苷元25-OH-PPD衍生物。该工艺条件温和,易于操作,为原人参二醇型衍生物的构效关系研究奠定基础。

人参皂苷Rd通过下调Nrf2表达调控H460细胞的增殖和凋亡

核转录因子红细胞系-2p45相关因子-2(nuclear factor erythroid-2p45-related factor 2,Nrf2)是细胞应对外界应激的主要调控因子,通过调控一系列细胞保护酶,维持细胞稳态。然而,在许多肿瘤细胞中Nrf2过度激活,导致肿瘤细胞获得增殖优势并产生化疗耐药,因此,靶向抑制Nrf2是肿瘤增敏治疗的一种新思路。人参皂苷Rd是人参皂苷中的重要活性成分,具有显著的抗肿瘤作用。本研究以不同浓度的人参皂苷Rd处理人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)H460细胞,利用CCK-8法检测细胞活力;倒置显微镜观察H460细胞的形态变化;流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;RT-qPCR和Western印迹检测的Nrf2及其下游调控基因的表达情况;此外通过转染Nrf2-siRNA下调H460细胞中Nrf2的表达,观察其对人参皂苷Rd增敏的影响。结果显示,与对照组相比,人参皂苷Rd能够抑制H460细胞增殖活力,诱导细胞G0/G1期阻滞,促进细胞凋亡,具有剂量依赖性(P<0.05);此外,人参皂苷Rd能够下调Nrf2,醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinoneoxidoreductase,NQO1],谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate--cysteine ligase catalytic subunit,GCLC)和调节亚基(glutamate--cysteine ligase regulatory subunit,GCLM)的mRNA和蛋白质水平,同时增强H460细胞对化疗药的敏感性(P<0.05),而转染Nrf2-siRNA后,人参皂苷Rd的增敏作用减弱。表明人参皂苷Rd可以抑制非小细胞肺癌H460细胞活性并增敏化疗,其机制可能是通过抑制Nrf2信号通路来实现。

拟人参皂苷F_(11)在大鼠体内的药物代谢研究

目的 探讨拟人参皂苷F11在大鼠体内的药物代谢产物及其过程。方法 ip拟人参皂苷F11后 ,应用TLC分析排泄物中的代谢产物 ,并利用制备薄层分离制备代谢产物 ,通过波谱解析 (MS ,1HNMR ,13CNMR ,1H 1HCOSY)确定其结构。结果 从粪便中分离鉴定了 3种代谢产物 ,分别为拟人参皂苷RT5,ocotillol和 1个新的代谢产物F 3 1,并确定其结构为 6 O α L 吡喃鼠李糖基 ( 1- 2 ) β D 吡喃葡糖基 ( 2 0S ,2 3S ,2 4R) 达玛 2 0 ( 2 4 ) 环氧 3 β ,6α,12 β,2 3 ,2 5 五醇 ( 6 O α L rhamnopyranosyl ( 1- 2 ) β D glucopyranosyl ( 2 0S ,2 3S ,2 4R) dammar 2 0 ( 2 4 ) epoxy 3 β ,6α,12 β ,2 3 ,2 5 pentanol)。但在尿液和胆汁中并未发现任何代谢产物。 结论 拟人参皂苷F11不被肝脏代谢 。

人参总皂苷对伊立替康及其代谢产物在大鼠体内药动学的影响

目的研究人参总皂苷对伊立替康及其代谢产物在大鼠体内药动学的影响。方法将SD大鼠随机分成实验组与对照组,实验组灌胃人参总皂苷400 mg·kg^(-1),0.5 h后尾静脉注射伊立替康20 mg·kg^(-1);对照组同法给予0.9%氯化钠溶液与等剂量伊立替康。给药后不同时间点取血,采用超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆伊立替康及其活性代谢产物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)浓度,以DAS3.1版软件计算药动学参数,SPSS 21.0版软件行统计分析。结果实验组伊立替康主要药动学参数t_(1/2)(5.527±1.156)h、AUC_(0-t)(2.078±0.118)μg·h·L^(-1)、MRT_(0-t)(0.462±0.023)h、MRT_(0-∞)(1.405±0.212)h;对照组伊立替康主要药动学参数t_(1/2)(0.296±0.011)h、AUC_(0-t)(2.161±0.146)μg·h·L^(-1)、MRT0-t(0.360±0.026)h、MRT_(0-∞)(0.391±0.026)h;实验组SN-38主要药动学参数t_(1/2)(1.398±0.045)h、AUC_(0-t)(9.073±0.109)μg·h·L^(-1)、MRT0-t(2.337±0.081)h、MRT_(0-∞)(2.408±0.089)h;对照组SN-38主要药动学参数t_(1/2)(0.928±0.050)h、AUC_(0-t)(8.933±0.434)μg·h·L^(-1)、MRT0-t(1.869±0.061)h、MRT_(0-∞)(1.935±0.066)h。与对照组比较,实验组SN-38 t_(1/2)延长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论合用人参总皂苷后,大鼠体内伊立替康活性代谢产物SN-38血浆半衰期延长。

人参皂苷Rd通过中枢γ-氨基丁酸能神经对神经病理性疼痛的镇痛作用机制

目的探讨人参皂苷Rd(ginsenoside Rd,GSRd)对小鼠坐骨神经分支选择性损伤(spared nerve injury,SNI)所致神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)的镇痛作用及机制。方法建立SNI模型,检测行为学指标验证模型稳定性、GSRd对SNI所致神经痛的镇痛作用。GSRd与γ-氨基丁酸(gamma aminobutyric acid,GABA)系统工具药联用,分析GSRd治疗SNI所致神经痛与GABA能神经的关系。免疫荧光染色观察SNI所致神经痛小鼠腹外侧视前核(ventrolateral preoptic nucleus,VLPO)、中脑导水管周围灰质腹外侧区(ventrolateral periaqueductal gray,VLPAG)和脊髓背角(spinal dorsal horn,SDH)中c-Fos、c-Fos与GAT-1免疫阳性细胞共表达情况,分析GSRd镇痛作用与痛觉传导通路核团及核团神经元的关系。结果SNI神经痛小鼠术后第3天开始痛阈变化、产生痛敏,可持续至少14 d;GSRd 500、1000 mg·kg^(-1)使SNI所致神经痛小鼠痛阈升高。GABA系统工具药能协同或拮抗GSRd对SNI所致神经痛小鼠的镇痛作用;SNI所致神经痛小鼠VLPO、VLPAG和SDH的c-Fos免疫阳性细胞增加,GSRd 500 mg·kg^(-1)可减少SNI所致神经痛小鼠VLPO、VLPAG和SDH的c-Fos与GAT-1共表达免疫阳性细胞。结论SNI所致神经痛模型稳定,GSRd具有明显的镇痛作用,机制与下调VLPO、VLPAG、SDH中的GAT-1,减少其对突触间隙GABA的重摄取,增强中枢GABA能神经的抑制作用相关。

一个新颖的人参皂苷元衍生物及其抗肿瘤活性（英文）

目的研究人参皂苷元衍生物及其抗肿瘤活性.方法通过Smith降解法水解人参皂苷Rg1和Rb1,采用硅胶柱层析分离和纯化水解得到的产物,通过NMR的数据分析鉴定产物的结构.结果分离得到20(S)-原人参三醇、20(S)-原人参二醇、1,-羟基双氧乙基原人参三醇(1),1,-羟基双氧乙基原人参二醇(2).结论 smith降解法能得到人参皂苷元衍生物,化合物(2)为新颖的人参皂苷元衍生物,其能抑制细胞周期分裂蛋白25B,具有抗肿瘤的活性.

人参皂苷Rg1微球的制备及实验优化

目的:将聚乳酸-羟基乙酸共聚物[Poly(lactide-co-glycolide),PLGA]作为壳载体成膜材料包载人参皂苷Rg1,制备纳米微球并筛选实验条件以寻求最优制备条件。方法:复乳-溶剂法制备纳米微球,高效液相色谱仪测定包封率,激光粒度分析仪测量微球粒径。采用五因素四水平正交实验,对影响包封率及平均粒径的因素进行正交实验。结果:为达到最佳包封率,各因素水平依次为:在PLGA浓度20mg/ml,内水相:油相体积比为3:10,外水相与初乳体积比为2:1,第一次超声乳化时间10秒,第二次超声乳化时间90秒。若要获得最小平均粒径,PLGA浓度20mg/ml,内水相:油相体积比为2:5,外水相与初乳体积比为2:1,第一次超声乳化时间10S,第二次超声乳化时间120S。结论:以PLGA为外壳材料可制备PLGA-人参皂苷Rg1纳米微球,通过正交实验能获得其包封率及平均粒径制备的最优化条件。

皂角皂苷元化学成分研究

目的 研究皂角皂苷元的化学结构。方法 通过提取、完全水解、层析等方法 ,从皂角中获得 2种皂苷元 ,制备系列衍生物并进行红外、核磁共振、质谱和晶体衍射等分析。结果 2种皂角皂苷元分别为 3-羟基 - 12 -齐墩果烯 - 2 8酸和 3,16 -二羟基 - 12 -齐墩果烯 - 2 8-酸。结论 首次确定了

西洋参总皂苷碱降解产物的分离及结构鉴定

从西洋参总皂苷碱降解产物中分离得到了5种化合物,经理化方法鉴定为人参皂苷Rh1(1),人参皂苷Rh2(2),人参皂苷Rk2(3),达玛烷型-20(21),24-二烯-3β,12β-二醇(4),人参皂苷Rg3(5);本研究同时还提供了化合物更多的理化数据.化合物3、4为首次从碱降解物中获得.