M5-90△26株和A19-△VirB12株布病新型疫苗免疫效果评估

为了解新型布鲁菌病疫苗使用效果,试验设置试验组与对照组,试验组接种新型疫苗,即布鲁氏菌基因缺失活疫苗M5-90△26株、A19-△VirB12株;对照组接种布鲁氏菌病活疫苗M5株和A19株,开展免疫安全观察,并检测转阳率。试验结果表明,疫苗整体安全性较好;2种新型布病疫苗免疫14天后,转阳率均达到98%~100%,M5-90△26株在30~60天后开始转阳率出现加大幅度下降,建议M5-90△26株在免疫后15~30天内开展免疫抗体监测评估;A19-△VirB12株疫苗在同期抗体转阳率略高于布鲁氏菌病活疫苗A19株,建议A19-△VirB12株疫苗在免疫后15~60天内均可开展免疫抗体监测评估。

兔产气荚膜梭菌SD12株的分离与血清型鉴定

从山东某兔场病死兔中分离到一株致病菌,经厌氧培养、菌落形态学观察、培养特性、生化反应、小白鼠毒力试验、动物回归试验、分子生物学试验,结果表明,该病原菌为厌氧菌,对小白鼠和家兔具有强致病力,为A型产气荚膜梭菌,并命名为SD12株。

母源抗体对HuN4-F112株HPRRS活疫苗免疫的影响

目的:了解母源抗体对HuN4-F112株HPRRS活疫苗免疫的影响。方法:选择PRRS母源抗体阳性仔猪30头和PRRS母源抗体阴性仔猪30头,A组用PRRS母源抗体阳性仔猪20头进行HuN4株PRRS活疫苗免疫,B组用10头PRRS母源抗体阳性仔猪作不免疫对照,C组用PRRS母源抗体阴性仔猪20头进行HuN4-F112株PRRS活疫苗免疫,D组用10头母源抗体阴性仔猪作不免疫对照。免疫后14d、28d、60d,分别对各试验组猪采集血清样品进行PRRS免疫抗体监测。结果:免疫后14d、28d、60d,A组阳性率分别为90%、60%、100%,呈先降后升的变化特点,最终回升至100%。结论:HuN4-F112株PRRS活疫苗能够突破母源抗体干扰,有效刺激机体产生免疫抗体。

猪轮状病毒HeBei-12株在MA-104细胞上最适繁殖时间的摸索

本试验将He Bei-12株猪轮状病毒在MA-104细胞上培养,通过对病毒的细胞培养物进行核酸提取及RT-PCR检测证明,该病毒可以很好的适应细胞。为获得最佳的病毒培养量,本试验分别从间接免疫荧光,增殖动力学曲线以及病毒感染细胞后的超薄切片电镜对病毒的繁殖周期做了初步研究。结果表明,He Bei-12株猪轮状病毒在感染MA-104细胞时,病毒粒子是随着时间的变化而变化的,当病毒接种20 h时即可在细胞质中观察到病毒粒子。当病毒感染细胞64 h时,滴度达到最大值4.8 log TCID50/m L,此后滴度逐渐下降。本试验对猪轮状病毒地方流行株He Bei-12株在MA-104细胞上的最佳繁殖时间进行摸索,为进一步研究其生物学特性和疫苗研制奠定了基础。

一株猪圆环病毒2型SY-12株的分离鉴定

从吉林地区一发病猪场采集疑似猪圆环2型病毒病理变化的腹股沟淋巴结,经分子生物学、特异性免疫荧光染色和电镜观察等研究,证明该毒株为PCV2b型强致病性毒株,命名为SY-12株。该分离鉴定为研制猪圆环2型灭活疫苗奠定了基础。

深色有隔内生真菌S12菌株遗传转化体系的建立及GFP标记菌株的获得

【目的】建立深色有隔内生真菌(dark septate endophyte,DSE)的遗传转化体系,获得绿色荧光蛋白(GFP)标记的DSE转化子,为研究DSE在植物根系的侵染定殖行为和侵染定殖规律奠定基础。【方法】以前期从健康枸杞根系分离的1株DSE菌株枝状枝孢菌(Cladosporium cladosporioides)S12菌株为供试材料,确定潮霉素B对其的最低抑制质量浓度,然后研究菌龄(13,15,17,19和21 h)、酶解时间(1.0,1.5,2.0,2.5,3.0和3.5 h)、崩溃酶质量浓度(10,15,20,25,30和35 mg/mL)和渗透压稳定剂种类(NaCl、KCl、CaCl_(2)和MgSO_(4))对S12菌株原生质体制备的影响。采用聚乙二醇(PEG)介导原生质体转化法将PDL2质粒(含hph和gfp基因)转入S12菌株,对所获转化子进行表型、GFP荧光、PCR及拮抗活性(以尖孢镰刀菌枸杞专化型Fusarium oxysporum f.sp.Lycium barbarum LR-1菌株为靶标菌)检测,筛选与野生型S12菌株无明显差异且带有GFP标记的转化子。【结果】S12菌株在YPD液体培养基中培养17 h,以0.7 mol/L NaCl为稳渗剂,用30 mg/mL的崩溃酶酶解2.5 h,原生质体制备数量最多,为4.53×10^(6)mL^(-1)。通过PEG介导,将PDL2质粒(含hph和gfp基因)转入S12菌株,可得47株转化子,转化效率2.35株/μg,从中筛选出10株生长速度和产孢量与野生型S12菌株无明显差异的转化子。荧光观察、PCR和拮抗活性检测结果表明,外源基因已成功整合到S12菌株中,成功建立了S12菌株的遗传转化体系,并获得了GFP标记菌株,有6株转化子对LR-1菌株的抑菌率与野生型S12菌株无明显差异。【结论】成功建立了遗传稳定性良好的S12菌株遗传转化体系,筛选出了6株抑菌效果与野生型菌株相当的转化子。

禽流感H5亚型Re-12株免疫抗体监测及分析

为了有效防控禽流感疫情的发生,有关部门对昌平区养殖场鸡群进行了H5亚型禽流感免疫。为了检验免疫效果,笔者对鸡群进行了抗体跟踪监测试验,分别监测免疫后30d、31~60 d、61~120 d的蛋鸡群抗体。检测结果表明,30~120d的3个时间段AIVH5Re-12-HI抗体平均合格率分别为96.87%、91.23%和94.51%,均合格。

流产布鲁氏菌疫苗A19-ΔVirB12突变株生物学特性研究

目的为了开发布鲁氏菌病新型标记疫苗,对流产布鲁氏菌A19-ΔVirB12突变株生物学特性研究。方法以亲本A19菌株为参照,对A19-ΔVirB12突变株的菌落形态、生物学特性、毒力、遗传稳定性、免疫原性进行实验比较。结果 A19-ΔVirB12突变株形态及生化特性同亲本株A19基本一致,其毒力弱于A19。A19-ΔVirB12突变株遗传稳定性良好且与A19具有相似的免疫原性。结论流产布鲁氏菌A19-ΔVirB12株毒力较低、遗传性状稳定、并具有良好的免疫保护效力,可作为新型动物布鲁氏菌病标记疫苗研制的候选株。

中国根霉12菌株抗生物质产生条件和性质

中国根霉（ＲｈｉｚｏｐｕｓＣｈｉｎｅｓｉｓ）１２能产生一种对芽孢菌属细菌有独特抑制作用的抗生物质。其发酵条件研究结果表明：在以正交实验确定的最佳培养基（豆饼粉酶解液８０ｍｌ、玉米粉水解液２０ｍｌ、葡萄糖２ｇ、ｐＨ自然）和最适发酵工艺条件（种龄１８ｈ、接种量１％、发酵培养基初始ｐＨ６．０～６．５、装液量５０ｍｌ／２５０ｍｌ三角瓶，摇床转速１６０ｒ／ｍｉｎ、２８～３０℃培养４８ｈ）下，Ｒ．ｃｈｉｎｅｓｉｓ１２菌株产生的抗生物质的抑菌圈直径为２１．５ｍｍ，抑菌面积３０９．３６ｍｍ２，是对照少孢根霉（Ｒ．ｏｌｉｇｏｓｐｏｒｕｓ）ＩＦＯ８６３１菌株的６倍。该物质可被胰蛋白酶所破坏，由纸电泳和茚三酮反应等实验结果判定该抗生物质为碱性多肽或蛋白质性质的物质。

喜温嗜酸硫杆菌YN12菌株的鉴定及其镉抗性能

自云南酸性热泉水样中分离出一株中度嗜热硫氧化菌YN12。对其形态特征和生理生化特性以及16S rDNA序列分析结果证明,该菌株归属于喜温嗜酸硫杆菌(Acidithiobacillus caldus)。重金属抗性实验表明,YN12菌株对3CdSO4.8H2O具有超强抗性,其最高初始Cd2+耐受浓度达4.8 g/L。在此基础上,不断提升3CdSO4.8H2O浓度,其最终Cd2+耐受浓度可达31.5 g/L(相当于3CdSO4.8H2O 210 g/L)。在该最终Cd2+耐受浓度下,经过连续3代的适应性生长,YN12菌株的生长速度和硫氧化活性均能得到较好的恢复。

磷细菌PB12菌株的选育及培养条件的研究

以PB-1P为出发菌株,经紫外线诱变,获得1株解磷高产菌株PB12。在以磷酸三钙为惟一磷源的培养基中接种PB12菌株,28℃,振荡培养5d,培养基上清液中磷含量达61.21mg/L,是出发菌株的2.03倍。同时研究了各种理化因素对PB12菌株生长的影响,确定了最佳培养条件,即玉米粉1.0%,豆饼粉2.0%,pH7.0,装液量为100mL(500mL三角瓶),36℃培养42h,有效活菌数可达10.2×108cfu/mL。

海洋细菌1202菌株产胞外多糖的适宜条件

应用响应面法(ResponseSurfaceMethod,RSM)对海洋细菌1202菌株胞外多糖发酵培养基进行优化.结果表明,适宜的发酵培养基组成为:蔗糖4%,酵母膏0.05%,玉米浆1.5%,CaCO30.15%,KH2PO40.08%,MgSO4·7H2O0.05%,FeSO4·7H2O0.01%,NaCl0.1%,pH7.5.在装液量为50mL(500mL三角瓶),接种量5%时,于28℃摇瓶培养7d,胞外多糖的产量可达到8.3mg/mL,转化率为20.75%.

拮抗细菌TD-12菌株发酵条件的优化及鉴定

TD-12菌株是前期分离筛选得到的在防治马铃薯晚疫病中很有潜力的内生细菌。为加快对该菌株的深入研究和利用,本试验利用滤纸片法对其部分发酵条件进行了初步优化,结果表明,该菌株在37℃、150 r/min、初始p H值7.0、培养30 h得到的菌液抑菌效果最佳,抑菌率达到了93.12%,抑菌率比优化前提高了7.86%。并通过对该菌株的形态和培养特征观察、生理生化特性以及16 S rDNA序列分析,对该菌株进行了初步鉴定,该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。试验结果为深入研究该菌株的抑菌性能及开发利用提供了基础资料。

蜡质芽孢杆菌12-14菌株对苏云金杆菌增效作用的研究

从土壤中分离的Bc1 2 - 1 4菌株是一株对Bt具有明显增效作用的蜡质芽孢杆菌。对Bc1 2 1 4菌株发酵上清液进行增效性测定结果表明 ,该菌株对部分Bt菌株具有明显的增效作用。Bc1 2 1 4菌株上清液对BtHD 1 580菌株增效 ,可提高 82 % ;而Bc1 2 1 4 +Bt940 0 1组合 ,与Bt940 0 1纯培养相比 ,在培养基A上的发酵效价和晶体蛋白含量分别为 5 0 0 0IU·μl- 1 、5 4mg·ml- 1 ,提高 1 8%和 2 2 %。

乙型脑炎病毒减毒中间株SA_(14)-12-1-7基因组全序列的测定

本研究通过对乙型脑炎活疫苗减毒过程中间株SA14 12 1 7株进行全序列测定和分析 ,进一步了解乙脑活疫苗减毒及其稳定性的分子机制。根据已发表的SA14 14 2株及SA14 株的序列 ,设计 6对重叠引物 ,涵括整个乙脑病毒的基因组 ,通过RT PCR扩增出SA14 12 1 7株的各cDNA片段 ,分别克隆到pGEM T载体 ,转化至TG1受体菌中 ,挑取阳性克隆进行鉴定后测序。结果表明SA14 12 1 7株基因组全序列长 10 976个核苷酸 ,从 96到 10 394为一个长开放读码框 ,编码 3432个氨基酸。与野毒株SA14 和疫苗株SA14 14 2的核苷酸序列和氨基酸序列相比 ,同源性均在 99%以上 ,突变位点分散于各个区域 ,E区有 5个位点与疫苗株一致而与野毒株不同 ,3个位点与野毒株一致而与疫苗株不同 ,推测与其容易产生回复突变、恢复毒力有关。此外 ,NS3、NS5和 3′NTR的几个位点可能与病毒毒力稳定性相关。综上所述 ,乙脑病毒减毒中间株的基因组全序列基本类似于已发表的序列 ,若干突变位点影响病毒的弱毒性及毒力的稳定性。

金针菇新12号菌株的特性及栽培要点

金针菇新12号,是1998年2月从一栽培户种植的四川大面积推广种金针菇12号中自然选育的变异株,通过无性繁殖获得纯菌种.新12号菌株与原出发菌株产生轻度拮抗现象,经1998年秋至2002年夏3年多的栽培,遗传性状和农艺性状稳定,具有比原始菌株商品性优、产量相当的特点,现已成为四川金针菇的主栽品种.

全株玉米青贮中性洗涤纤维降解率的影响因素:以宁夏地区正大12为例

以宁夏地区不同产地的23份正大12全株玉米(Zea mays)青贮饲料为研究对象,应用灰色关联度方法分析30 h中性洗涤纤维降解率(NDFD30)与营养成分的关联程度,并建立由营养成分预测30 h中性洗涤纤维降解率的回归模型,从而探讨影响全株玉米青贮饲料30 h中性洗涤纤维降解率的关键因素,为改善粗饲料的利用效率及提高奶牛的生产性能提供依据。结果表明,全株玉米青贮饲料的营养成分与30 h中性洗涤纤维降解率的关联程度由大到小表现为粗蛋白质>粗脂肪>粗灰分>碳水化合物>中性洗涤纤维>酸性洗涤纤维>木质素>干物质>淀粉。全株玉米青贮饲料的30 h中性洗涤纤维降解率与干物质、粗蛋白质、酸性洗涤纤维、木质素、粗灰分呈负相关关系,与中性洗涤纤维、碳水化合物、淀粉、粗脂肪呈正相关关系。建立的30 h中性洗涤纤维降解率与营养成分之间的回归模型R2为0.912,有效影响因素由大到小依次是木质素、粗脂肪、粗蛋白质、中性洗涤纤维、粗灰分。综上所述,粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分及中性洗涤纤维是影响30 h中性洗涤纤维降解率的关键因素。

琯溪蜜柚黑斑病的拮抗菌株BC12的基本生物学特性研究

对拮抗琯溪蜜柚黑斑病的BC12菌株的基本生物学特性研究表明：BC12菌株培养12-16 h处于对数生长期,16-24 h到达稳定期;菌株在15~45℃时均能生长,最适温度为35℃;在初始pH值范围为5~10.5时,菌体生长良好,最适pH值为7.5;适宜的碳源为玉米粉、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖;最适的氮源为酵母膏。

基于数据挖掘探究兰艾双香方诱导大肠杆菌K12菌株铁死亡机制研究

目的 本研究旨在通过数据挖掘探究兰艾双香方在发挥抑菌作用过程中,常见致病菌—大肠杆菌诱使铁死亡发生的过程,为后续开展常见致病菌发生铁死亡的研究提供基础研究方向和理论基础。方法以兰艾双香方中的各种中药在中国知网、万方数据、维普以及中药系统药理学数据库等检索有效成分及对应蛋白。建立中药数据的Excel表格,对有效成分、分子蛋白等进行分析,并分析药物蛋白在大肠杆菌K12菌株不同样本起作用蛋白,最后对在大肠杆菌K12菌株中铁死亡蛋白进行分析。结果 兰艾双香方中共138个活性化学成分,共获得兰艾双香方蛋白265个,其中“MG1655”样品中共有17个作用蛋白,“W3110”样本中共有5个作用蛋白,fhuA是在大肠杆菌K12抑菌过程中诱导大肠杆菌发生铁死亡的关键蛋白。结论 通过数据发掘的方式,发现兰艾双香方中存在的铁色素外膜转运蛋白在大肠杆菌铁死亡进程中发挥作用,为后续开展诱导常见大肠杆菌等常见致病菌发生铁死亡从而发挥抑菌作用提供了基础。

细链格孢菌拮抗细菌枯草芽孢杆菌XL12菌株发酵产抗菌蛋白条件研究

为了提高细链格孢菌[Alternaria alternate（Fr）Keissler]拮抗细菌枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）XL12菌株的发酵产抗菌蛋白量,采用单因素法对XL12菌株的培养条件进行了优化,最终确定XL12最适宜的发酵条件为：基础培养基碳源和氮源（摩尔比）的比例为30∶1,接种量为0.5%,配制后灭菌前,培养液的pH调节在6.95~7.05,发酵温度为30~35℃,220 r.min-1摇床振荡培养72 h,用70%硫酸铵对XL12菌株发酵液上清液进行盐析,可以沉淀最多的抗菌蛋白。